[0068] 環(huán)氧根的檢測(cè):取2血的濾液,滴入1滴酪獻(xiàn),加入相同體積的1. 3moL/L的 NazSz化,振蕩使其反應(yīng),若溶液不變紅,則環(huán)氧基已洗干凈。氨氧根的檢測(cè):取2mL的濾液, 加入1滴酪獻(xiàn),若溶液不變紅,則氨氧根已洗干凈。
[0069] 該磁性殼聚糖微球的活化度結(jié)果在表2中示出。
[0070] 實(shí)施例9
[0071] 稱取0. 25g實(shí)施例5制備得到的磁性殼聚糖微球錐形瓶中,加入31血1. 8mol/L的 化0H溶液和50血25g/L的NaBH4,在恒溫水浴振蕩器中振蕩30min,反應(yīng)溫度為60°C,再W 體積分?jǐn)?shù)35 %的二甲基亞諷為活化溶劑,加入體積分?jǐn)?shù)45 %的環(huán)氧氯丙烷,繼續(xù)振蕩反應(yīng) 4.化后,抽濾,用蒸饋水沖洗至濾液中無(wú)環(huán)氧根和氨氧根,即可得到活化的磁性殼聚糖微 球。
[0072] 環(huán)氧根的檢測(cè):取2血的濾液,滴入1滴酪獻(xiàn),加入相同體積的1. 3moL/L的 NazSz化,振蕩使其反應(yīng),若溶液不變紅,則環(huán)氧基已洗干凈。氨氧根的檢測(cè):取2mL的濾液, 加入1滴酪獻(xiàn),若溶液不變紅,則氨氧根已洗干凈。
[0073] 該磁性殼聚糖微球的活化度結(jié)果在表2中示出。
[0074] 實(shí)施例10
[00巧]稱取0. 25g實(shí)施例5制備得到的磁性殼聚糖微球錐形瓶中,加入25血2. 5mol/L的化OH溶液和125血20g/L的NaBH4,在恒溫水浴振蕩器中振蕩45min,反應(yīng)溫度為70°C, 再W體積分?jǐn)?shù)30%的二甲基亞諷為活化溶劑,加入體積分?jǐn)?shù)60%的環(huán)氧氯丙烷,繼續(xù)振蕩 反應(yīng)4h后,抽濾,用蒸饋水沖洗至濾液中無(wú)環(huán)氧根和氨氧根,即可得到活化的磁性殼聚糖 微球。
[0076] 環(huán)氧根的檢測(cè):取2血的濾液,滴入1滴酪獻(xiàn),加入相同體積的1. 3moL/L的 NazSz化,振蕩使其反應(yīng),若溶液不變紅,則環(huán)氧基已洗干凈。氨氧根的檢測(cè):取2mL的濾液, 加入1滴酪獻(xiàn),若溶液不變紅,則氨氧根已洗干凈。
[0077] 該磁性殼聚糖微球的活化度結(jié)果在表2中示出。
[0078] 表2磁性殼聚糖微球的活化度測(cè)定結(jié)果
[0079]
[0080] 實(shí)施例11
[00引](1)磁性殼聚糖微球的偶聯(lián):取30mg的綠豆膜蛋白酶抑制劑溶于2血抑=6. 0的 巧樣酸鹽緩沖溶液(巧樣酸-憐酸二氨鋼)中得到蛋白酶緩沖液,將其添加至〇.2g按實(shí)施 例10活化的磁性殼聚糖微球中,45°C恒溫水浴振蕩偶聯(lián)化,取出,磁鐵分離,洗涂,得到偶 聯(lián)綠豆膜蛋白酶抑制劑的磁性殼聚糖微球。
[0082] 收集殘液,測(cè)定殘液的體積,根據(jù)BAPNA法測(cè)定殘液中膜蛋白酶抑制劑的量,并計(jì) 算得到偶聯(lián)率。該磁性微球的偶聯(lián)率結(jié)果在表3中示出。
[008引 似版蝴纖溶酶的固定化:將版蝴纖溶酶提取物用抑=8. 0的憐酸緩沖液溶解并 定容至50血,版蝴纖溶酶粗酶液的濃度為1萬(wàn)U/mU取1. 25血添加至0. 25g偶聯(lián)綠豆膜蛋 白酶抑制劑的磁性殼聚糖微球中,40°C恒溫水浴振蕩1.化,取出,用去離子水和憐酸緩沖液 反復(fù)洗涂固定化版蝴纖溶酶的磁性殼聚糖微球粗品,至洗涂液中檢測(cè)不出蛋白為止,磁鐵 分離收集即可得到固定化版蝴纖溶酶的磁性微球。
[0084] 收集洗涂液,用纖維蛋白平板法測(cè)定原液及洗涂液中版蝴纖溶酶的活性,利用固 定化前后酶活差算出固定化酶活力。
[0085] 固定化酶的酶活在表4中示出。
[008引 實(shí)施例12
[0087] (1)磁性殼聚糖微球的偶聯(lián):取40mg的綠豆膜蛋白酶抑制劑溶于6血抑=6. 5的 巧樣酸鹽緩沖溶液(巧樣酸-憐酸二氨鋼)中得到蛋白酶緩沖液,將其添加至0. 25g按實(shí) 施例10活化的磁性殼聚糖微球中,40°C恒溫水浴振蕩偶聯(lián)化,取出,磁鐵分離,洗涂,得到 偶聯(lián)綠豆膜蛋白酶抑制劑的磁性殼聚糖微球。
[0088] 收集殘液,測(cè)定殘液的體積,根據(jù)BAPNA法測(cè)定殘液中膜蛋白酶抑制劑的量,并計(jì) 算得到偶聯(lián)率。該磁性微球的偶聯(lián)率結(jié)果在表3中示出。
[0089] 似版蝴纖溶酶的固定化:將版蝴纖溶酶提取物用抑=7. 0的憐酸緩沖液溶解并 定容至25ml,蟲丘蝴纖溶酶粗酶液濃度為2萬(wàn)U/mU取2. 25血添加至0. 75g偶聯(lián)綠豆膜蛋白 酶抑制劑的磁性殼聚糖微球中,35°C恒溫水浴振蕩2.化,取出,用去離子水和抑為6-8的憐 酸緩沖液反復(fù)洗涂固定化版蝴纖溶酶的磁性殼聚糖微球粗品,至洗涂液中檢測(cè)不出蛋白為 止,磁鐵分離收集即可得到固定化版蝴纖溶酶的磁性微球。
[0090] 收集洗涂液,用纖維蛋白平板法測(cè)定原液及洗涂液中版蝴纖溶酶的活性,利用固 定化前后酶活差算出固定化酶活力。
[0091] 固定化酶的酶活在表4中示出。
[009引實(shí)施例13
[009引 (1)磁性殼聚糖微球的偶聯(lián):取35mg的綠豆膜蛋白酶抑制劑溶于4血抑=7的 巧樣酸鹽緩沖溶液(巧樣酸-憐酸二氨鋼)中得到蛋白酶緩沖液,將其添加至0. 35g按實(shí) 施例10活化的磁性殼聚糖微球中,50°C恒溫水浴振蕩偶聯(lián)5.化,取出,磁鐵分離,洗涂,得 到偶聯(lián)綠豆膜蛋白酶抑制劑的磁性殼聚糖微球。
[0094] 收集殘液,測(cè)定殘液的體積,根據(jù)BAPNA法測(cè)定殘液中膜蛋白酶抑制劑的量,并計(jì) 算得到偶聯(lián)率。
[0095] 該磁性微球的偶聯(lián)率結(jié)果在表3中示出。
[009引 似版蝴纖溶酶的固定化:將版蝴纖溶酶提取物用抑=7. 5的憐酸緩沖液溶解并 定容至50mL,版蝴纖溶酶粗酶液的濃度為1萬(wàn)U/mU取2mL添加至0. 5g偶聯(lián)綠豆膜蛋白酶 抑制劑的磁性殼聚糖微球中,30°C恒溫水浴振蕩2. 5h,取出,用去離子水和抑為6-8的憐 酸緩沖液反復(fù)洗涂固定化版蝴纖溶酶的磁性殼聚糖微球粗品,至洗涂液中檢測(cè)不出蛋白為 止,磁鐵分離收集即可得到固定化版蝴纖溶酶的磁性微球。
[0097] 收集洗涂液,用纖維蛋白平板法測(cè)定原液及洗涂液中版蝴纖溶酶的活性,利用固 定化前后酶活差算出固定化酶活力。
[0098] 固定化酶的酶活在表4中示出。
[009引 實(shí)施例14
[0100] (1)磁性殼聚糖微球的偶聯(lián):取30mg的綠豆膜蛋白酶抑制劑溶于5血抑=7. 5的 巧樣酸鹽緩沖溶液(巧樣酸-憐酸二氨鋼)中得到蛋白酶緩沖液,將其添加至〇.4g按實(shí)施 例10活化的磁性殼聚糖微球中,60°C恒溫水浴振蕩偶聯(lián)4.化,取出,磁鐵分離,洗涂,得到 偶聯(lián)綠豆膜蛋白酶抑制劑的磁性殼聚糖微球。
[0101] 收集殘液,測(cè)定殘液的體積,根據(jù)BAPNA法測(cè)定殘液中膜蛋白酶抑制劑的量,并計(jì) 算得到偶聯(lián)率。
[0102] 該磁性微球的偶聯(lián)率結(jié)果在表3中示出。
[010引 似蟲丘蝴纖溶酶的固定化:將蟲丘蝴纖溶酶提取物用抑=6. 5的憐酸緩沖液溶解并 定容至50ml,版蝴纖溶酶粗酶液的濃度為1萬(wàn)U/mU取1. 5血添加至0. 5g偶聯(lián)綠豆膜蛋白 酶抑制劑的磁性殼聚糖微球中,40°C恒溫水浴振蕩1.化,取出,用去離子水和抑為6-8的憐 酸緩沖液反復(fù)洗涂固定化版蝴纖溶酶的磁性殼聚糖微球粗品,至洗涂液中檢測(cè)不出蛋白為 止,磁鐵分離收集即可得到固定化版蝴纖溶酶的磁性微球。
[0104] 收集洗涂液,用纖維蛋白平板法測(cè)定原液及洗涂液中版蝴纖溶酶的活性,利用固 定化前后酶活差算出固定化酶活力。
[0105] 固定化酶的酶活在表4中示出。
[0106] 實(shí)施例15
[0107] (1)磁性殼聚糖微球的偶聯(lián):取40mg的綠豆膜蛋白酶抑制劑溶于4血抑=8. 0的 巧樣酸鹽緩沖溶液(巧樣酸-憐酸二氨鋼)中得到蛋白酶緩沖液,將其添加至〇.2g按實(shí)施 例10活化的磁性殼聚糖微球中,55°C恒溫水浴振蕩偶聯(lián)化,取出,磁鐵分離,洗涂,收集殘 液,測(cè)定殘液的體積,根據(jù)BAPNA法測(cè)定殘液中膜蛋白酶抑制劑的量,并計(jì)算得到偶聯(lián)率。 [010引該磁性微球的偶聯(lián)率結(jié)果在表3中示出。