)溶于20mL甲酰胺中，在氮?dú)鈿夥罩谢亓鬟^(guò)夜，TLC顯 示反應(yīng)完成。反應(yīng)混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mLX 3CH2C12萃取，合并萃 取相，用鹽水（lOOmLX 3)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸 干，得到化合物 111-1，白色固體。ESI-MS，m/z = 235([M+H]+)。
[0032] 步驟2.化合物IV-1的合成
[0033] 化合物III-1 (1. 64g，7mmol)溶于20mL重蒸的P0C13*，而后升溫回流5小時(shí)，TLC 顯示反應(yīng)完成。反應(yīng)混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mLX 3CH2C12萃取，合并萃 取相，依次用飽和NaHC03溶液和用鹽水（lOOmLX3)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥 劑，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，得到化合物IV-1，白色固體。ESI-MS，m/z = 253([M+H]+)。
[0034] 步驟3.化合物VI-1的合成
[0035]化合物 IV-1 (1. Olg，4mmol)、化合物 V-1 (0. 52g，4mmol)和二異丙基乙基胺 (DIPEA，1. 29g，lOmmol)溶于15mL甲苯中，在氮?dú)鈿夥障律郎鼗亓鳎钡椒磻?yīng)完成（約5小 時(shí)）。反應(yīng)混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mLX 3CH2C12萃取，合并萃取相，依 次用1 %稀鹽酸和鹽水（lOOmLX3)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀上蒸干，得到化合物VI-1，白色固體。ESI-MS，m/z = 346([M+H]+)。
[0036] 步驟4.化合物VII-1的合成
[0037] 化合物VI-1 (1. 04g, 3mmol)和丙稀酸異丙酯（1. 14g, lOmmol)溶于10mL干燥的 DMF中，攪拌，加入固體CuCl2 (0. 40g，3mmol)，而后在氮?dú)鈿夥障律郎鼗亓?，直到反?yīng)完成為 止（通常12小時(shí)）。反應(yīng)混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mLX 3CH2C12萃取， 合并萃取相，依次用0. 5%稀鹽酸、0. 5% EDTA溶液和鹽水（100mLX3)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干 燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，得到化合物VII-1，白色固體。ESI-MS，m/ z = 460 ([M+H]+) 〇
[0038] 步驟5.化合物1-1的合成
[0039] 化合物 VII-1 (0? 92g, 2mmol)和輕乙基哌嗪 VIII-1 (1. 30g, lOmmol)溶于 10mL二 甲苯中，在氮?dú)鈿夥罩猩郎鼗亓?，直到反?yīng)完成（通常6小時(shí)）。反應(yīng)混合物小心傾倒入 200mL冰水中，攪拌，用50mL X 3CH2C12萃取，合并萃取相，用鹽水（100mL X 5)洗滌，無(wú)水硫酸 鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，得到化合物1-1，白色固體。ESI-MS，m/ z = 530 ([M+H]+) 〇
[0040] 實(shí)施例2-8
[0041] 參照實(shí)施例1的方法，合成了下表所列化合物。
[0042]

[0043] 實(shí)施例9化合物體外抑制EGFR和HER2分析
[0044] 使用以下實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定本發(fā)明所述化合物在體外對(duì)erbB家族酪氨酸激酶（EGFR和 HER2)的活性抑制作用。
[0045] 體外激酶分析用 Cell Signaling Technology 公司的 HTScan EGFReceptor Kinase Assay Kit 和 HTScan HER2/ErbB2KinaseAssay Kit 檢測(cè)。操作步驟參照試劑盒說(shuō) 明書(shū)，該方法在體外檢測(cè)待測(cè)化合物對(duì)EGFR或Her2受體酪氨酸激酶對(duì)底物肽磷酸化的抑 制作用。室溫下激酶反應(yīng)緩沖液中溫育ATP和底物肽以及待測(cè)化合物，孵育一段時(shí)間后，加 入終止液終止反應(yīng)并將樣品轉(zhuǎn)移到鏈霉親和素包被的96孔板中，洗板并用HRP標(biāo)記的抗底 物磷酸化抗體檢測(cè)底物肽上的磷酸化水平，用TMB顯色，2M硫酸中止反應(yīng)。檢測(cè)450nm吸收 波長(zhǎng)，計(jì)算IC 5。值（nM)。結(jié)果見(jiàn)下表。
[0046]
[0047] 從上表結(jié)果可以看出，本發(fā)明的化合物對(duì)EGFR和HER2具有很強(qiáng)的抑制作用，可以 作為制備抗腫瘤的藥物。
[0048] 實(shí)施例10化合物對(duì)細(xì)朐增葙的抑制作用
[0049] 細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)采用人乳腺癌細(xì)胞BT474、人胃癌細(xì)胞系NCI-N87、人肺癌細(xì)胞 Calu-3和人皮膚癌細(xì)胞A431，其中BT474高表達(dá)Her2受體，N87高表達(dá)EGFR和Her2受體。 在含10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺和非必需氨基酸的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基（DMEM) 中，在37°C、5% 0)2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞，應(yīng)用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸（EDTA)從細(xì)胞 培養(yǎng)瓶中收獲細(xì)胞。細(xì)胞以4000/孔（0. lmL培養(yǎng)基）加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板貼壁過(guò)夜，加 入0. lmL待測(cè)化合物的稀釋液，DMS0的最終濃度為0. 25 %，將細(xì)胞培養(yǎng)板在37°C，5 %的C02 條件下溫育72h。然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，然后每孔加入50% (質(zhì)量/體積） 的三氯乙酸（TCA)50 y L固定細(xì)胞。TCA的終濃度為10%，靜置5min后在4°C冰箱中放置 lh，培養(yǎng)板各孔用去離子水沖洗5遍，以去除TCA，甩干，空氣干燥至無(wú)濕跡。每孔加0. 4% (質(zhì)量/體積）的SRB 100 y L，室溫放置lOmin，棄去各孔內(nèi)液體后用1 %乙酸沖洗5遍，空 氣干燥后用pH為10. 5，10mM Tris (三羥甲基氨基甲烷）150yL萃取，檢測(cè)540nm的吸收波 長(zhǎng)。結(jié)果IC5。值（nM)見(jiàn)下表。
[0050]
[0051] 由上表可以看出，本發(fā)明的化合物對(duì)EGFR和HER2高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞具有很高的 抑制活性，可以作為制備抗腫瘤的藥物。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 具有通式I結(jié)構(gòu)的化合物，其中，R1選自鹵素取代基； R2選自鹵素取代基。2. 權(quán)利要求1所定義的通式I化合物， 其中，R1選自F、C1、Br取代基。； R2選自F、Cl取代基。3. 權(quán)利要求2所定義的通式I化合物，選自下列化合物，4. 合成權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所定義的屬于通式I的化合物的方法： CN 105153046 A f乂 利安氷"fb 2/2 頁(yè)化合物II與甲酰胺在加熱的條件下反應(yīng)，得到化合物III ;化合物III使用三氯氧磷 處理，得到化合物IV ;化合物IV在堿存在下與化合物V反應(yīng)，得到化合物VI ;化合物VI在 CuCl2催化下與丙烯酸異丙酯加成，得到VII ;化合物VII與VIII在高溫下反應(yīng)，得到化合 物I ;&、R2的定義如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述。5.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所定義的通式I化合物在制備治療腫瘤疾病藥物方面的應(yīng)用。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及腫瘤疾病領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及一類(lèi)雙鹵素取代的乙氧基苯并喹唑啉類(lèi)酪氨酸激酶抑制劑、其制備方法物以及在制備治療腫瘤疾病中的應(yīng)用。其中，R1選自鹵素取代基；R2選自鹵素取代基。
【IPC分類(lèi)】A61P35/00, C07D239/94
【公開(kāi)號(hào)】CN105153046
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510528658
【發(fā)明人】蔡子洋
【申請(qǐng)人】佛山市賽維斯醫(yī)藥科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年12月16日
【申請(qǐng)日】2015年8月25日