一種稀佛堿錳配合物及其制備方法
【技術領域】：
[0001] 本發(fā)明涉及一種對臨床分離金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果的含錳化合物及 其制備方法，屬于醫(yī)學技術領域。
【背景技術】：
[0002] 感染性疾病是一種嚴重危害人類健康的疾病，也是多器官疾病晚期的主要并發(fā)癥 和致死原因之一。抗感染藥物的使用為治療感染性疾病發(fā)揮了重要的作用。但隨著抗感染 藥物的廣泛應用，各種抗菌藥物的耐藥性發(fā)生率逐年增加，例如耐甲氧西林金黃色MRSA、產(chǎn) ESBLS肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、熱帶念珠菌等菌株，細菌的多重耐藥問題已成為全球 關注的熱點。細菌耐藥性情況的不斷加劇，為此類疾病的治療加深了難度，細菌耐藥性的傳 播與蔓延將導致多種耐藥菌感染無藥可醫(yī)的嚴峻局面。為了尋求解決辦法，致力于研究新 型抗耐藥菌藥物刻不容緩。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0003] 針對上述問題，本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種稀佛堿錳配合物及其制備方 法。
[0004] 本發(fā)明的一種稀佛堿錳配合物及其制備方法，它為黃色塊狀晶體，其化學名為 N，N'-二（鄰羥亞芐基）-4,5_二甲基鄰苯二胺縮聯(lián)胺合錳（II)，簡稱[Mn(C3qH24N2O3)],其 分子式C30H24MnN2O3,其分子量FW= 514. 94,其特征結(jié)構(gòu)參數(shù)（％)的理論值為：C，69. 91 ; H，4. 66 ;N，5. 44,實驗值為：69. 85 ;H，4. 56 ;N，5. 41。
[0005] 作為優(yōu)選，其制備方法為：1、稱取4,5_二甲基鄰苯二胺（2mmol，0. 3085g)溶解在 IOml無水乙醇溶液中，再稱取2-羥基-1-萘醛（5mmol，0. 8609g)溶解在15ml無水乙醇 溶液中，在60°C恒溫油浴中將4, 5-二甲基鄰苯二胺逐滴加入到2-羥基-1-萘醛中，混合 均勻后，回流攪拌4個小時，冷卻靜止一夜后過濾用無水乙醇洗滌三次，烘干可得到配體 (0? 7122g，產(chǎn)率：80%);
[0006] 2、稱取MnC12 ? 4H20(0.Immol, 0. 01899g)溶解在3ml無水甲醇中，取上述得到配 體（lmmol，0. 383g)溶解在6ml二氯甲烷和2mlDMF中，將MnC12 ? 4H20逐滴加到配體中， 常溫攪拌30min，過濾靜置十天后得到可測的黑色塊狀晶體，適合X-射線單晶衍射，產(chǎn)率為 60%〇
[0007] 本發(fā)明的有益效果為：它可用于抗菌治療中，具有明顯的抑菌活性，解決了多種細 菌耐藥性無藥可醫(yī)的問題。
【附圖說明】：
[0008] 為了易于說明，本發(fā)明由下述的具體實施及附圖作以詳細描述。
[0009] 圖1為本發(fā)明中稀佛堿錳配合物制備過程的反應流程圖，
[0010] 圖2為本發(fā)明中稀佛堿錳配合物的化學結(jié)構(gòu)式。
【具體實施方式】：
[0011] 為使本發(fā)明的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚明了，下面通過附圖中示出的具體 實施例來描述本發(fā)明。但是應該理解，這些描述只是示例性的，而并非要限制本發(fā)明的范 圍。此外，在以下說明中，省略了對公知結(jié)構(gòu)和技術的描述，以避免不必要地混淆本發(fā)明的 概念。
[0012] 本【具體實施方式】采用以下技術方案：它為黃色塊狀晶體，其化學名為N，N'_二 (鄰羥亞芐基）-4,5_二甲基鄰苯二胺縮聯(lián)胺合錳（II)，簡稱[Mn(C3l3H24N2O3)],其分子式 C30H24MnN2O3,其分子量FW= 514. 94,其特征結(jié)構(gòu)參數(shù)（％)的理論值為：C，69. 91 ;H，4. 66 ; N，5. 44,實驗值為：69. 85 ;H，4.56 ;N，5. 41。其化學結(jié)構(gòu)式如圖2所示。
[0013] 進一步的，如圖1所示，其制備方法為：1、稱取4,5_二甲基鄰苯二胺 (2mmol，0. 3085g)溶解在IOml無水乙醇溶液中，再稱取2-羥基-1-萘醛（5mmol，0. 8609g) 溶解在15ml無水乙醇溶液中，在60°C恒溫油浴中將4, 5-二甲基鄰苯二胺逐滴加入到2-羥 基-1-萘醛中，混合均勻后，回流攪拌4個小時，冷卻靜止一夜后過濾用無水乙醇洗滌三次， 烘干可得到配體（〇? 7122g，產(chǎn)率：80%);
[0014] 2、稱取MnC12 ? 4H20(0.Immol, 0. 01899g)溶解在3ml無水甲醇中，取上述得到配 體（lmmol，0. 383g)溶解在6ml二氯甲烷和2mlDMF中，將MnC12 ? 4H20逐滴加到配體中， 常溫攪拌30min，過濾靜置十天后得到可測的黑色塊狀晶體，適合X-射線單晶衍射，產(chǎn)率為 60%〇
[0015] 實施例：
[0016] 耐藥菌株鑒定
[0017] 耐藥菌株分離自本院臨床感染性標本，常法增菌培養(yǎng)。金葡菌株耐藥性按抗菌素 藥敏常規(guī)測試方法（K-B紙片法）進行，以CLSI2007版（第17版）推薦的頭孢西丁藥敏紙 片操作方法及判據(jù)確認。
[0018] 耐藥菌藥敏測試
[0019] 耐藥菌藥敏測試按照CLSI2007版（CLSI，2007)抗生素藥敏常規(guī)測試方法（紙片 法）進行。
[0020] 粗篩
[0021] 按照美國臨床實驗試標準委員會（CLSI)上的方法和標準進行測定[15]，實驗 前一天，待測標準細菌接種于MH培養(yǎng)基、真菌接種于沙保培養(yǎng)基，在35°C恒溫箱中培養(yǎng) 18-24h，使活化。以5 %DMSO為溶劑，使配合物1晶體溶解并配制成30mg/mL的濃度，放 置待用。再以無菌棉簽蘸取已制備好的標準細菌濃度為I. 5*10~8CFU/ml和標準真菌濃度 為I. 0*l(T6CFU/mL的菌懸液，均勻涂抹相應的培養(yǎng)基，用微量移液器將50uL配好的藥液 (30mg/mL)加入在培養(yǎng)基平板上打好的孔中中，置35°C恒溫箱中培養(yǎng)18-24h，測量抑菌圈 大小。用5 %DMSO作空白對照。
[0022] 耐藥菌篩選與藥敏紙片對比實驗
[0023] 選取6株金葡萄球菌的臨床耐藥菌株，藥敏紙片取米諾環(huán)素、頭孢西丁、青霉素G、 萬古霉素、左氧沙星、利福平、妥布霉素；選取4株大腸產(chǎn)ESBLS埃希菌的臨床耐藥菌株，藥 敏紙片取依替米星、環(huán)丙沙星、氨芐西林、氨曲南、頭孢他啶、泰能、左氧沙星、頭孢他啶/克 拉維酸鉀，平板涂抹法同I. 4. 1，配制藥液濃度為30mg/mL，分別進行抗菌活性實驗，測量抑 菌圈大小。5 %DMSO作為對照組。
[0024] 最低抑菌濃度MIC值的測定
[0025] 選取對耐藥菌株敏感（抑菌圈直徑不小于IOmm)的配合物，根據(jù)美國臨床和實驗 室標準協(xié)會（CLSI)推薦的微量稀釋法來測定不同菌株對不同配合物的MIC值（細菌用M-H 肉湯培養(yǎng)液，真菌用沙保氏液體培養(yǎng)液），每組平行操作3次，得出濃度平均值。選擇無菌 96孔平底微量培養(yǎng)板，在每排第一孔中加入200uL培養(yǎng)液作為陰性對照；在每排第二孔中 加入IOOuL菌液和IOOuL培養(yǎng)液作為陽性對照；在每排第3-12各孔中加入培養(yǎng)液100uL， 然后于每排第3孔加入受試藥物100uL，混合均勻，并取出IOOuL移至第4孔中，以此類推直 至第12孔混勻后吸取IOOuL棄去，最后于各孔中加入混勻后的細菌（5*l(T5CFU/mL)及真 菌（l*l(T4CFU/mL)的菌懸液100ul。將培養(yǎng)板置于35°C恒溫箱中培養(yǎng)18h觀察結(jié)果，測定 其MIC值。選擇黑色背景觀察，以溶液清晰透亮的最低濃度孔中的藥物濃度為MIC。
[0026] 最低殺菌濃度MBC值的測定
[0027] 當確定MIC值后，取MIC值前3-5個孔的培養(yǎng)物，轉(zhuǎn)種在MH瓊脂平板上，置35°C 的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)22h左右后取出觀察，細菌菌落數(shù)平均小于5個的最低藥物濃度即確定為 該化合物的MBC。
[0028] 配合物的抗菌活性分析
[0029] 判斷標準：抑菌圈小于IOmm表示抑菌作用弱或無抑菌活性；等于IOmm為輕度敏 感；為中度敏感；大于16mm為高度敏感。金屬配合物對標準菌的抑菌結(jié)果見表1。
[0030] 表1配合物體外抑菌試驗的抑菌圈直徑數(shù)據(jù)表
[0031]
[0032] 根據(jù)表1結(jié)果可判斷，配合物對標準金黃色葡萄球菌敏感。
[0033] 配合物對金黃色葡萄球菌臨床分離株的抑菌活性分析
[0034] 體外抑菌實驗采用紙片擴散法，所用菌種為：臨床分離耐甲氧西林金黃色葡萄球 菌。測試結(jié)果如表2及其對常用抗生素藥敏敏紙片抑菌結(jié)果如表3。
[0035] 表2配合物對金黃色葡萄球菌臨床分離株的抑菌圈直徑數(shù)據(jù)表
[0036]
[0037] 表3金黃色葡萄球菌臨床分離株對臨床常用抗生素藥敏紙片抑菌圈直徑數(shù)據(jù)表
[0038]
[0039] 基于標準菌的粗篩結(jié)果，選取相應標準菌株的臨床耐藥菌株進行進一步的試驗， 結(jié)果分別見表1，表2，表3。表2表明，配合物對大多數(shù)金黃色葡萄球耐藥菌株敏感，進一 步分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，配合物的抗菌活性優(yōu)于青霉素G和利福平。
[0040] 配合物對金葡菌和大腸的MIC/MBC的測定結(jié)果
[0041] 通過抑菌圈結(jié)果的篩選，選取抑菌圈直徑大于12mm的配合物對其進行MIC及MBC 的測定，其測定結(jié)果見表4:
[0042] 表4配合物對金葡的MIC及MBC的測定數(shù)據(jù)表。
[0043]
[0044] 在本實驗中，配合物對金黃色葡萄球菌的MIC值為125~250ug/ml，MBC值為 250~500ug/ml;表明配合物對金黃色葡萄球菌有一定的抑菌效果。
[0045] 以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術 人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本 發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變 化和改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權利要求書及其 等效物界定。
【主權項】
1. 一種稀佛堿錳配合物，其特征在于：它為黃色塊狀晶體，其化學名為N，N' -二（鄰 羥亞芐基)-4,5_二甲基鄰苯二胺縮聯(lián)胺合錳（II)，簡稱[Mn(C3QH24N203)]，其分子式C3。H24 MnN203，其分子量FW=514. 94,其特征結(jié)構(gòu)參數(shù)（%)的理論值為：C，69. 91 ;H，4. 66 ;N，5. 44， 實驗值為：69. 85 ;H，4. 56 ;N，5. 41。2.根據(jù)權利要求1所述的一種稀佛堿錳配合物的制備方法，其特征在于：（1)稱取4， 5-二甲基鄰苯二胺（2mmol，0.3085g)溶解在10ml無水乙醇溶液中，再稱取2-羥基-1-萘 醛（5mmol，0.8609g)溶解在15ml無水乙醇溶液中，在60°C恒溫油浴中將4,5_二甲基鄰苯 二胺逐滴加入到2-羥基-1-萘醛中，混合均勻后，回流攪拌4個小時，冷卻靜止一夜后過濾 用無水乙醇洗滌三次，烘干可得到配體（0.7122g，產(chǎn)率：80%); (2)稱取MnC12*4H20(0.lmmol，0. 01899g)溶解在3ml無水甲醇中，取上述得到配體（1mmol，0. 383g)溶解在6ml二氯甲烷和2mlDMF中，將MnC12*4H20逐滴加到配體中，常溫攪 拌30min，過濾靜置十天后得到可測的黑色塊狀晶體，適合X-射線單晶衍射，產(chǎn)率為60 %。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種稀佛堿錳配合物及其制備方法，它涉及醫(yī)學技術領域，它為黃色塊狀晶體,其化學名為N,Nˊ-二(鄰羥亞芐基）-4，5-二甲基鄰苯二胺縮聯(lián)胺合錳(I)，簡稱[Mn(C30H24N2O3)]，其分子式C30H24MnN2O3，其分子量FW=514.94，其特征結(jié)構(gòu)參數(shù)(%)的理論值為：C，69.91；H，4.66；N，5.44，實驗值為：69.85；H，4.56；N，5.41。它可用于抗菌治療中，具有明顯的抑菌活性，解決了多種細菌耐藥性無藥可醫(yī)的問題。
【IPC分類】C07C249/02, C07F13/00, C07C251/24, A61P31/04
【公開號】CN105085577
【申請?zhí)枴緾N201510489847
【發(fā)明人】謝明進, 余巍, 趙琦華, 盧春梅, 唐宜芳
【申請人】云南大學
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2015年8月11日