積雪草酸衍生物、其制備方法及其在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種化合物，尤其涉及一種積雪草酸衍生物 及其制備方法及其在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 積雪草酸，又名亞細(xì)亞酸，是從藥用傘形科植物積雪草（Centella asiatica(L.) Urban)中提取的烏蘇烷型五環(huán)三萜類化合物，其結(jié)構(gòu)式為：
[0003]
[0004] 由于積雪草酸具有廣泛的生物學(xué)活性，因此被廣泛應(yīng)用于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，對(duì) 抗腫瘤、改善認(rèn)知、抗糖尿病、抗炎、抑菌、促進(jìn)傷口愈合等方面具有很好的效果。
[0005] 抑郁癥是一種常見而易被忽略的精神疾病，以顯著而持久的心境低落為主要臨床 特征，是心境障礙的主要類型。臨床可見心境低落與其處境不相稱，情緒的消沉可以從悶悶 不樂到悲痛欲絕，自卑抑郁，甚至悲觀厭世，可有自殺企圖或行為；甚至發(fā)生木僵；部分病 例有明顯的焦慮和運(yùn)動(dòng)型激越；嚴(yán)重者可出現(xiàn)幻覺、妄想等精神病性癥狀。每次發(fā)作持續(xù) 至少2周以上、長者甚至數(shù)年，多數(shù)病例有反復(fù)發(fā)作的傾向，每次發(fā)作大多數(shù)可以緩解，部 分可有殘留癥狀或轉(zhuǎn)為慢性。據(jù)世界衛(wèi)生組織公布，各種抑郁癥患病占全球人口 3% -5%。 預(yù)計(jì)到2020年，抑郁癥將成為全球的第二大常見疾病。因此，迫切需要安全、高效、低廉的 抗抑郁藥。
[0006] 目前臨床上一線的抗抑郁藥主要包括選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑（SSRI，代表 藥物氟西汀、帕羅西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普蘭和艾司西酞普蘭）、5_羥色胺和去甲腎 上腺素再攝取抑制劑（SNRI，代表藥物文拉法辛和度洛西汀）、去甲腎上腺素和特異性5-羥 色胺能抗抑郁藥（NaSSA，代表藥物米氮平）等。傳統(tǒng)的三環(huán)類、四環(huán)類抗抑郁藥和單胺氧化 酶抑制劑由于不良反應(yīng)較大，應(yīng)用受到限制。
[0007] 發(fā)明人經(jīng)多年研宄發(fā)現(xiàn)積雪草酸具有較好的抗抑郁作用，例如在CN1256090C中 詳細(xì)提供了積雪草酸的抗抑郁作用，但是其生物利用度較差，因此需要尋找一種抗抑郁活 性好、生物利用度更優(yōu)的積雪草酸衍生物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述問題提出的。
[0009] 本發(fā)明提供了一類新的積雪草酸衍生化合物。
[0010] 本發(fā)明還提供了一種上述積雪草酸衍生化合物的制備方法及其在制備抗抑郁藥 物中的應(yīng)用。
[0011] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0012] 本發(fā)明的第一個(gè)方面是提供一種符合通式（I)的積雪草酸衍生化合物或其藥學(xué) 上可接受的鹽或酯，或其任何光學(xué)異構(gòu)體，或任何互變異構(gòu)體：
[0013]
[0014] 其中，Rp R2、R3、R4、R5、R6、R 7、R8、R9、R1(l、R11可獨(dú)立地相同或不同地為氫，羥基，羧 基，幾基，（^_6燒羥基，（^_6燒幾基，（^_6烷氧基，未取代或由（^_ 6烷基、|??素、羥基或(^_6燒氧 基一取代或多取代的c3_6環(huán)烷基，或未取代或由鹵素一取代或多取代的C H烷基、C 2_6鏈烯 基或C2_6鏈炔基。
[0015] 上述化合物中，優(yōu)選地，其中R6為甲羥基，1?9為-C00M，R ltl為羥基，為式（II)化合 物：
[0016]
[0017] 其中，
[0018] R1、R2、R3、R4、R5、R 7、R8、R1 i可獨(dú)立地相同或不同地為氫，羥基，羧基，羰基，C ^烷羥 基，Cp6燒幾基，C K烷氧基，未取代或由C K烷基、鹵素、羥基或C K烷氧基一取代或多取代 的c3_6環(huán)烷基，或未取代或由鹵素一取代或多取代的C H烷基、C 2_6鏈烯基或C 2_6鏈炔基；
[0019] M為氫或堿金屬。
[0020] 上述化合物中，更優(yōu)選地，其中R1為羰基，R2為氫，R3為羥基。
[0021] 上述化合物中，更優(yōu)選地，其中R1為羥基，R2為羥基，R 3為氫。
[0022] 本發(fā)明的第二個(gè)方面是提供一種上述任一所述積雪草酸衍生化合物的制備方法， 通過微生物對(duì)積雪草酸進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾得到的。
[0023] 上述制備方法中，優(yōu)選地，所述微生物為粉紅粘帚霉和/或刺孢小克銀漢霉原變 種。
[0024] 上述制備方法中，優(yōu)選地，所述制備方法的具體包括：
[0025] 步驟1 :積雪草酸的微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)：將積雪草酸溶解于有機(jī)溶劑中，配成濃度為 5_25g/l的底物溶液，加入到經(jīng)培養(yǎng)的微生物菌種中進(jìn)行微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)；
[0026] 步驟2 :產(chǎn)物的提取分離純化：用有機(jī)萃取劑對(duì)步驟1得到的產(chǎn)物進(jìn)行萃取，然后 濃縮、分離純化得到權(quán)利要求1所述化合物。
[0027] 上述優(yōu)選制備方法中，更優(yōu)選地，所述步驟1中轉(zhuǎn)化反應(yīng)溫度為20_30°C，更優(yōu)選 為25-28°C，反應(yīng)時(shí)間為至少5天，更優(yōu)選為7-10天。
[0028] 本發(fā)明的第三個(gè)方面是提供一種如上述任一所述積雪草酸衍生化合物或由上述 任一所述制備方法制備的積雪草酸衍生化合物用于制備抗抑郁藥物的應(yīng)用。
[0029] 本發(fā)明的第四個(gè)方面是提供一種抗抑郁藥物組合物，所述藥物組合物包括具有抗 抑郁作用的上述任一所述積雪草酸衍生化合物或由上述任一所述方法制備的積雪草酸衍 生化合物，或它們的藥學(xué)上可接受的鹽或酯，或其任何光學(xué)異構(gòu)體，或任何互變異構(gòu)體，和 一種或多種可藥用載體或賦形劑。
[0030] 本發(fā)明采用上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下技術(shù)效果：
[0031] 通過小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)研宄表明本發(fā)明的積雪草酸衍生化合物 具有較高的抗抑郁活性。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 本發(fā)明提供一種符合通式（I)的積雪草酸衍生化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或 酯，或其任何光學(xué)異構(gòu)體，或任何互變異構(gòu)體：
[0033]
[0034] 其中，Rp R2、R3、R4、R5、R6、R 7、R8、R9、R1(l、R11可獨(dú)立地相同或不同地為氫，羥基，羧 基，幾基，（^_6燒羥基，（^_6燒幾基，（^_6烷氧基，未取代或由（^_ 6烷基、|??素、羥基或(^_6燒氧 基一取代或多取代的c3_6環(huán)烷基，或未取代或由鹵素一取代或多取代的C H烷基、C 2_6鏈烯 基或C2_6鏈炔基。
[0035] 上述化合物中，優(yōu)選地，其中R6為甲羥基，1?9為-C00M，R ltl為羥基，為式（II)化合 物：
[0036]
[0037] 其中，
[0038] R1、R2、R3、R4、R5、R 7、R8、R1 i可獨(dú)立地相同或不同地為氫，羥基，羧基，羰基，C η烷羥 基，CV6燒幾基，C i_6烷氧基，未取代或由C i_6烷基、鹵素、羥基或C i_6烷氧基一取代或多取代 的C3_6環(huán)烷基，或未取代或由鹵素一取代或多取代的C H烷基、C 2_6鏈烯基或C 2_6鏈炔基；
[0039] M為氫或堿金屬。
[0040] 上述化合物中，更優(yōu)選地，其中R1為羰基，R 2為氫，R3為羥基，其結(jié)構(gòu)式優(yōu)選為：
[0041]
[0042] 化學(xué)名稱為：2-氧代-3 β，21 β，23-二羥基-12-條-28-烏蘇酸。
[0043] 上述化合物中，更優(yōu)選地，其中R1為羥基，R 2為羥基，R 3為氫，其結(jié)構(gòu)式優(yōu)選為：
[0044]
[0045] 化學(xué)名稱為：2 α，3 β，7 β，23-四羥基-12-烯-28-烏蘇酸。
[0046] 下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)和具體的介紹，以使更好的理解本發(fā)明， 但是下述實(shí)施例并不限制本發(fā)明范圍。
[0047] 實(shí)施例1
[0048] 化合物1的制備及提取分離：
[0049] 在10瓶1000ml (每瓶400ml培養(yǎng)基）的三角瓶中以2%的接種量接入粉紅粘帚霉 Gliocladium roseum CGMCC 3. 3657菌種，置恒溫振蕩器中，180rpm、27°C培養(yǎng)72小時(shí)后加 入300mg底物積雪草酸（溶于20ml乙醇中，每瓶加入2ml)，繼續(xù)培養(yǎng)10天。發(fā)酵完成后， 過濾菌絲體，濾液用等體積的乙酸乙酯萃取3次，菌絲體用500ml乙酸乙酯超聲提取三次， 每次30min，合并萃取液及提取液，將乙酸乙酯萃取液置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至小體積，干燥， 分別得轉(zhuǎn)化反應(yīng)提取物（I. 8g)。
[0050] 將轉(zhuǎn)化反應(yīng)提取物用少量乙醇溶解，于三倍重硅膠拌樣，25g硅膠分離，氯仿/甲 醇梯度洗脫（從97:3到90:10，共3000ml)，收集到3個(gè)流分：A (537. 7mg)，B (48. 6mg)， C(268.9mg)。流分A用半制備型高效液相色譜儀制備，流動(dòng)相：甲醇/水/甲酸 (60:40:0. 05, V/V/V)，流速 3ml/min，檢測(cè)波長：210nm，得到一個(gè)化合物 1(117. 4mg)，保留 時(shí)間為11. 72min。
[0051] 化合物2的制備及提取分離：
[0052] 在15瓶1000 ml (每瓶400ml培養(yǎng)基）的三角瓶中以2%的接種量接入刺孢小克 銀漢霉原變種Cunninghamella echinulata CGMCC 3. 2000菌種，置恒溫振蕩器中，180rpm、 27°C培養(yǎng)72小時(shí)后加入500mg底物積雪草酸（溶于30ml乙醇中，每瓶加入2ml)，繼續(xù)培養(yǎng) 10天。發(fā)酵完成后，過濾菌絲體，濾液用等體積的乙酸乙酯萃取三次，菌絲體用500ml乙酸 乙酯超聲提取三次，每次30min，合并乙酸乙酯萃取液及提取液，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至小 體積，干燥，得轉(zhuǎn)化反應(yīng)提取物3. 5g。
[0053] 將轉(zhuǎn)化反應(yīng)提取物用少量乙醇溶解，于兩倍重硅膠拌樣，40g硅膠分離，氯仿/甲 醇梯度洗脫（從 99:1 到 92:8,共 5450ml)，收集到 9 個(gè)流分：A(1673. lmg)，B(189. 6mg)， C(65. Omg)，D(228. 2mg)，Ε(85· 6mg)，F(xiàn)(23. 7mg)，G(212. 7mg)，Η(34· Omg)，I (200. 4mg)。其 中流分G用半制備型高效液相色譜儀制備，流動(dòng)相：甲醇/水/甲酸（69:31:0. 05, V/V/V)， 流速3ml/min，檢測(cè)波長：210nm，得到一個(gè)化合物2(115. 3mg)，保留時(shí)間為12. 63min。
[0054] 實(shí)施例2
[0055] 化合物1的結(jié)構(gòu)鑒定：
[0056] 化合物 1 為白色固體，HR-ESI-MS 給出 501. 3243 ([M-H]-)，結(jié)合 IH-NMR和 13C-NMR 推斷確定分子式為C30H4606。IH-NMR (600MHz, pyridin