物，所述混合物包含含有DNA的生物學(xué)樣品和能夠擴(kuò)增事件127特異性核 酸分子的第一和第二核酸引物； (b) 在允許所述第一和第二核酸引物擴(kuò)增包含事件127特異性核酸分子的核酸分子的 條件下，讓所述混合物反應(yīng)；和 (c) 檢測(cè)是否存在所述擴(kuò)增的核酸分子，其中存在所述事件127特異性核酸分子表明 所述生物學(xué)樣品含有事件127核酸分子。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中所述生物學(xué)樣品自大豆植物獲得。
3. -種用于檢測(cè)生物學(xué)樣品中的事件127核酸分子的方法，所述方法包括： (a) 形成混合物，所述混合物包含含有DNA的生物學(xué)樣品和能夠與事件127特異性核酸 分子雜交的核酸探針； (b) 在允許所述探針與事件127特異性核酸分子雜交的條件下，讓所述混合物反應(yīng)；和 (c) 檢測(cè)雜交的核酸分子的存在情況，其中存在所述事件127特異性核酸分子表明所 述樣品含有事件127核酸分子。
4. 權(quán)利要求3的方法，其中所述生物學(xué)樣品自大豆植物獲得。
5. -種用于鑒定事件127大豆植物的方法，所述方法包括： (a) 形成混合物，所述混合物包含含有大豆DNA的生物學(xué)樣品和能夠擴(kuò)增事件127特異 性核酸分子的第一和第二核酸引物； (b) 在允許所述第一和第二核酸引物擴(kuò)增事件127特異性核酸分子的條件下，讓所述 混合物反應(yīng)；和 (c) 檢測(cè)擴(kuò)增的片段核酸分子的存在情況，其中存在所述大豆事件127特異性核酸分 子表明所述大豆植物為事件127大豆植物。
6. -種用于鑒定具有事件127核酸分子的大豆植物的方法，所述方法包括： (a) 形成混合物，所述混合物包含含有大豆DNA的生物學(xué)樣品和能夠與事件127特異性 核酸分子雜交的核酸分子探針； (b) 在允許所述核酸分子探針與事件127特異性核酸分子雜交的條件下，讓所述混合 物反應(yīng)；和 (c) 檢測(cè)所述探針與所述DNA的雜交情況，其中存在所述核酸分子探針與所述大豆DNA 的雜交表明存在事件127核酸分子。
7. -種用于使大豆種子發(fā)芽的方法，所述方法包括： (a) 提供（i)包含事件127核酸分子的大豆種子、（ii)生長(zhǎng)培養(yǎng)基和（iii)咪唑啉酮 除草劑、磺酰脲除草劑、其組合或其與至少一種其它活性成分的組合； (b) 使所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基與咪唑啉酮除草劑、磺酰脲除草劑、其組合或其與至少一種其它 活性成分的組合接觸；和 (c) 讓所得生長(zhǎng)培養(yǎng)基與大豆種子在允許所述種子發(fā)芽的條件下接觸。
8. -種分離的核酸引物對(duì)，其包含： 能夠擴(kuò)增事件127核酸分子的第一和第二分離的核酸分子。
9. 權(quán)利要求8的分離的核酸引物對(duì)，其中所述第一分離的核酸分子選自SEQID N0:37、39、41、43 和 67。
10. 權(quán)利要求8的分離的核酸引物對(duì)，其中所述第二分離的核酸分子選自SEQID N0:38、40、42、44 和 68。
11. 權(quán)利要求8的分離的核酸引物對(duì)，其中所述第一分離的核酸分子包含SEQID N0:41的序列，所述第二分離的核酸分子包含SEQIDNO:42的序列。
12. 權(quán)利要求11的分離的核酸引物對(duì)，其中所述引物對(duì)能夠擴(kuò)增具有SEQIDNO: 1核 酸序列的核酸分子。
13. -種用于鑒定生物學(xué)樣品中的事件127核酸分子的試劑盒，所述試劑盒包括：第 一和第二核酸引物，其中所述第一和第二核酸引物能夠擴(kuò)增事件127核酸分子。
14. 權(quán)利要求13的試劑盒，其中所述第一和第二核酸引物能夠擴(kuò)增具有SEQIDNO: 1 核酸序列或其片段的核酸分子。
15. -種用于提高包含事件127核酸分子的大豆植物的產(chǎn)量的方法，所述方法包括： 將有效量的抑制AHAS的除草劑施用于一種或多種包含事件127核酸分子的大豆植物 和周圍區(qū)域，其中所述抑制AHAS的除草劑減少所述周圍區(qū)域的雜草生長(zhǎng)；和 從所述一種或多種大豆植物收獲種子。
16. -種用于對(duì)耐受抑制AHAS的除草劑的大豆植物進(jìn)行育種的方法，所述方法包括： (a) 讓包含事件127核酸分子的大豆植物與第二種大豆植物雜交； (b) 從步驟（a)的雜種獲得種子； (c) 從所述種子獲得DNA樣品；和 (d) 檢測(cè)所述樣品中事件127核酸分子的存在情況，其中存在所述事件127核酸分子表 明所述種子能夠產(chǎn)生耐受抑制AHAS的除草劑的大豆植物。
17. -種用于栽培大豆植物的方法，所述方法包括： (a) 提供包含事件127核酸分子的大豆種子； (b) 在允許所述種子發(fā)芽以產(chǎn)生生長(zhǎng)中的包含事件127核酸分子的大豆植物的條件 下，將所述大豆種子種植于生長(zhǎng)培養(yǎng)基中；和 (c) 讓生長(zhǎng)培養(yǎng)基、種子或植物與除草劑組合物接觸，所述除草劑組合物包含至少一種 選自以下的組分：咪唑啉酮除草劑、磺酰脲除草劑、其彼此的組合及其與至少一種其它活性 成分的組合。
18. 權(quán)利要求17的方法，其中步驟（c)在步驟（b)之前實(shí)施，并包括讓所述生長(zhǎng)培養(yǎng) 基與所述除草劑組合物接觸。
19. 權(quán)利要求17的方法，其中步驟（c)在步驟（b)后實(shí)施，并包括在所述植物已從所 述生長(zhǎng)培養(yǎng)基萌發(fā)后接觸所述植物或生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
20. 權(quán)利要求17的方法，其中所述除草劑組合物包含（1)至少一種咪唑啉酮除草劑或 至少一種磺酰胺除草劑或二者與（2)至少一種其它活性成分的組合，所述其它活性成分選 自殺真菌劑、殺細(xì)菌劑、有機(jī)磷除草劑、磺酰胺除草劑、苯并噻二嗪酮除草劑及其組合。
21. 權(quán)利要求17的方法，其中所述除草劑組合物包含滅草煙、甲基咪草煙或以下組合 中的任何一個(gè)： (A) 滅草煙和甲基咪草煙； (B) 滅草煙、甲基咪草煙和苯達(dá)松； (C) 滅草煙、甲基咪草煙和吡唑醚菌酯； (D) 滅草煙、甲基咪草煙和苯嘧磺草胺； (E) 滅草煙、甲基咪草煙、苯嘧磺草胺和草甘膦； (F) 滅草煙和苯達(dá)松； (G) 滅草煙和吡唑醚菌酯； (H) 滅草煙和苯嘧磺草胺； (I) 滅草煙、苯嘧磺草胺和草甘膦； (J) 滅草煙和草甘膦； (K) 甲基咪草煙和草甘膦； (L) 甲基咪草煙、苯嘧磺草胺和草甘膦；和 (M) 苯嘧磺草胺和草甘膦。
22. 權(quán)利要求17的方法，其中所述事件127核酸分子具有SEQIDNO: 1的核苷酸 1302-6069的核酸序列。
23. -種檢測(cè)生物學(xué)樣品中事件127多肽的方法，所述方法包括： (a) 從大豆植物獲得生物學(xué)樣品；和 (b) 對(duì)所述樣品實(shí)施至少一種免疫學(xué)測(cè)定，其中所述測(cè)定能夠檢測(cè)事件127多肽。
24. 權(quán)利要求23的方法，其中所述免疫學(xué)測(cè)定選自：ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）、免 疫染色測(cè)定、免疫組織化學(xué)測(cè)定、蛋白質(zhì)芯片測(cè)定、放射免疫沉淀測(cè)定、快速膜免疫色譜測(cè) 定、快速條免疫色譜測(cè)定及其組合。
25. -種用于檢測(cè)生物分子的裝置，所述裝置包含： 具有表面的固相支持體；和 與所述固相支持體的表面連接的至少一種事件127診斷分子。
26. 權(quán)利要求25的裝置，其中所述固相支持體：㈧選自玻璃、凝膠、聚合物、塑料、彈 性物質(zhì)、陶瓷、金屬及其組合；或（B)選自板、芯片、膜、棒、條、珠粒、纖維、墊、格柵、織物、容 器壁及其組合；或（C)選自（A)及（B)二者。
27. 權(quán)利要求25的裝置，其中所述事件127診斷分子選自核苷堿基寡聚物探針、適體、 抗體及其組合。
28. 權(quán)利要求27的裝置，其中所述核苷堿基寡聚物探針包含核酸類似物。
29. 權(quán)利要求27的裝置，其中所述抗體選自單克隆抗體、單鏈抗體和保留對(duì)事件127 多肽的結(jié)合特異性的免疫反應(yīng)性抗體片段。
30. 權(quán)利要求25的裝置，其中所述一種或多種診斷分子通過(guò)選自共價(jià)結(jié)合、配位結(jié)合 和非共價(jià)結(jié)合的方法固定到所述表面。
31. 權(quán)利要求25的裝置，其中所述固相支持體包含免疫色譜條。
32. 權(quán)利要求25的裝置，其中所述裝置包含多個(gè)限定區(qū)域的陣列，每一區(qū)域包括：(a) 所述固相支持體表面的部分和與其連接的（b)至少一種事件127診斷分子。
33. 權(quán)利要求25的裝置，其中所述事件127診斷分子選自事件127核酸分子、事件127 多肽、其特異性抗體、前述物質(zhì)的可檢測(cè)標(biāo)記的形式、任何這些的衍生物及其組合。
【專利摘要】本發(fā)明提供涉及耐受抑制AHAS的除草劑的轉(zhuǎn)基因大豆植物的組合物和方法。提供具有賦予對(duì)抑制AHAS的除草劑的耐受性的突變的AHAS編碼序列的事件127大豆植物。在經(jīng)鑒定的染色體位置處具有事件127核酸分子的事件127大豆植物，可包含具有至少SEQ ID NO:5和/或6核酸序列的基因組/轉(zhuǎn)基因連接。事件127的基因組插入位點(diǎn)的特征提供提高的育種效率，并使得能夠利用分子標(biāo)記來(lái)跟蹤繁殖種群及其后代中的轉(zhuǎn)基因插入物。提供用于鑒定、檢測(cè)及使用事件127大豆植物的各種方法和組合物。NCIBM4160320081222
【IPC分類】A01G13-00, A01G1-00, C12N15-82, C12M1-34, C12Q1-68, C12N15-11, A01H5-10, G01N33-577
【公開號(hào)】CN104789649
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510010560
【發(fā)明人】D.卡爾森, F.J.L.阿拉高, C.A.A.阿里亞斯, L.羅扎諾, B.M.盧茲, T.梅爾費(fèi)特, E.L.R.菲爾霍, S.譚, A.烏爾布里奇, T.約特蘇莫托, U.萊恩曼
【申請(qǐng)人】巴斯夫農(nóng)化產(chǎn)品有限公司, 巴西農(nóng)業(yè)研究公司-恩布拉帕
【公開日】2015年7月22日
【申請(qǐng)日】2010年1月6日
【公告號(hào)】CA2748973A1, CN102368903A, EP2385756A1, US9024114, US20120117676, US20150250129, WO2010080829A1