一種從甘薯葉提取黃酮的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從甘薯葉提取黃酮的方法，該方法包括預(yù)處理、提取、大孔樹脂吸附與洗脫等步驟。本發(fā)明方法能夠制備得到具有抗氧化作用的甘薯葉黃酮，它的DPPH自由基清除能力比傳統(tǒng)60％乙醇水提法提高1.35～1.77倍，比傳統(tǒng)水提法提高1.58～2.08倍，具有明顯高的DPPH自由基清除能力。在DPPH自由基體系中，甘薯葉黃酮的IC50為36.21～47.62μg/mL。本發(fā)明的方法是一種綠色環(huán)保、前景廣闊的生物活性成分提取技術(shù)，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】
一種從甘薯葉提取黃酮的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然活性物質(zhì)提取技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及一種從甘薯葉提取黃酮的方法。
【【背景技術(shù)】】
[0002]甘薯(Ipomoea batatas Lam.)又稱紅薯、番薯和地瓜，屬旋花科植物，原產(chǎn)于美洲中部和南美洲西北部熱帶地區(qū)，其葉子在香港被稱為“蔬菜皇后”，在美國、日本被列為“長壽食品”。據(jù)國外文獻(xiàn)報道甘薯葉中含有豐富的胡蘿卜素、VBl、VB2、Vc、鐵、鈣、鎂等礦質(zhì)元素及蛋白質(zhì)、粗纖維、氨基酸、氯原酸、多糖、黃酮類成分等。甘薯葉作為甘薯的副產(chǎn)品，其所含有的生物活性成分黃酮類化合物具有清除自由基、抗癌作用、抗突變作用、免疫增強(qiáng)等作用。
[0003]目前，我國年產(chǎn)甘薯葉700多億千克，如何充分利用這一資源大量制備生物活性黃酮將會具有十分重大的經(jīng)濟(jì)價值和現(xiàn)實意義。提取分離純化是天然產(chǎn)物生產(chǎn)中的重要環(huán)節(jié)。大孔樹脂法具有吸附容量大、吸附速度快、選擇性好、再生簡便等優(yōu)點，因而被廣泛用于天然產(chǎn)物的分離純化。雖然在中國南方部分地區(qū)，也有食甘薯藤葉的飲食習(xí)慣，但沒有對其所含的具有重要生理活性的有效成分進(jìn)行研究，使得這一資源被扔棄而造成極大資源浪費。
[0004]為了使甘薯資源得以綜合開發(fā)利用，為營養(yǎng)、保健價值的全面評價及其深層次加工成功能性綠色食品、藥品提供一定的依據(jù)，本發(fā)明人對其有效成分-黃酮類物質(zhì)進(jìn)行了提取和分析，在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0005][要解決的技術(shù)問題]
[0006]本發(fā)明的目的是提供一種從甘薯葉提取黃酮的方法。
[0007][技術(shù)方案]
[0008]本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)的。
[0009]本發(fā)明涉及一種從甘薯葉提取黃酮的方法。
[0010]該方法的步驟如下:
[0011]A、預(yù)處理
[0012]將甘薯葉在烘箱中在溫度42?450C下烘干，然后在恒溫恒濕干燥器中在溫度108?112°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到甘薯葉粉；
[0013]B、提取
[0014]按照以克計甘薯葉粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:20?50，把在步驟A得到的甘薯葉粉加到乙醇水溶液中，混合均勻，再在高壓脈沖電場下進(jìn)行處理，減壓過濾，濾渣經(jīng)洗滌后得到甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品；
[0015]C、大孔樹脂吸附
[0016]將步驟B得到的甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液通過大孔樹脂床進(jìn)行吸附，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在恒溫振蕩器里進(jìn)行振蕩吸附；
[0017]D、洗脫
[0018]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，用蒸餾水洗滌2?3次，濾干，接著用乙醇水溶液洗脫，洗脫液經(jīng)減壓濃縮與真空冷凍干燥，得到所述的甘薯葉黃酮。
[0019]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟A中，所述甘薯葉粉的粒度是100目以上。
[0020]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟B中，所述的乙醇水溶液濃度為以體積計60?80 %。
[0021]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟B中，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率100?500W的條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理I?6h。
[0022]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟B中，在高壓脈沖電場下處理的物料在壓力0.008?0.012MPa下過濾0.4?0.6h。
[0023]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟C中，所述的水溶液在吸附速度1.8?2.2BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比18?22:1的條件下吸附1.8?2.2h。
[0024]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟C中，在水浴溫度30°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振蕩吸附11?13h。
[0025]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟D中，洗滌時振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1:2?4。
[0026]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟D中，使用濃度為以體積計45?55%的乙醇水溶液在洗脫速度1.8?2.2BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比18?22:1的條件下進(jìn)行洗脫。
[0027]根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，在步驟D中，洗脫液在壓力0.08?0.12MPa下濃縮1.6?2.4h，接著在壓力0.08?0.12MPa與溫度-20°C下進(jìn)行真空冷凍干燥。
[0028]下面將更詳細(xì)地描述本發(fā)明。
[0029]—種從甘薯葉提取黃酮的方法。該方法的步驟如下:
[0030]A、預(yù)處理
[0031]將甘薯葉在烘箱中在溫度42?45°C下烘干，然后在恒溫恒濕干燥器中在溫度108?112°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到甘薯葉粉；
[0032]在本發(fā)明中，甘薯葉在溫度42?45°C下烘干的主要作用是除去甘薯葉中的水分。本發(fā)明使用的烘箱是一種常規(guī)的干燥設(shè)備，例如由上海一恒科技有限公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱。
[0033]根據(jù)本發(fā)明，烘干的甘薯葉再在恒溫恒濕干燥器中烘干的主要作用是除去可能殘留的水分。本發(fā)明使用的恒溫恒濕干燥器是一種目前市場上銷售的干燥設(shè)備，例如由上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器。
[0034]在步驟A中，使用的烘干甘薯葉研磨設(shè)備是本技術(shù)領(lǐng)域里在研磨時通常使用的設(shè)備，是目前市場上銷售的研磨設(shè)備。
[0035]在本發(fā)明中，所述甘薯葉粉的粒度是100目以上。如果所述甘薯葉粉的粒度小于100目，則會使原料料層過厚，物料粒子能量吸收不均，作用效果不均衡，得率小。
[0036]B、提取
[0037]按照以克計甘薯葉粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:20?50，把在步驟A得到的甘薯葉粉加到乙醇水溶液中，混合均勻，再在高壓脈沖電場下進(jìn)行處理，減壓過濾，濾渣經(jīng)洗滌后得到甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品；
[0038]在本發(fā)明中，乙醇水溶液提取劑從甘薯葉中提取黃酮的基本機(jī)制是極性相近的體系相近相溶的原理。
[0039]根據(jù)本發(fā)明，所述的乙醇水溶液濃度為以體積計60?80%。選擇這個乙醇水溶液濃度范圍主要在于此濃度條件的體系與提取目標(biāo)對象極性更近，提取效率更高。
[0040]根據(jù)本發(fā)明，如果甘薯葉粉與乙醇水溶液的固液比大于1:20，則有效組分無法在乙醇水溶液中完全溶出；如果甘薯葉粉與乙醇水溶液的固液比小于1:50，則溶劑量達(dá)到一定程度之后，有效組分已經(jīng)基本完全溶出，得率變化不明顯，此時處理成本明顯提高；因此，甘薯葉粉與乙醇水溶液的固液比為1:20?50，是合理的，優(yōu)選地是1:28?42，更優(yōu)選地是1:32 ?38。
[0041]高壓脈沖電場法是利用細(xì)胞膜電穿孔原理在瞬間使細(xì)胞破壁，造成細(xì)胞膜電位混亂，細(xì)胞壁和細(xì)胞膜發(fā)生可逆或小可逆的破壞，細(xì)胞組分流出，因此具有處理時間短、能耗低、不易引起目標(biāo)產(chǎn)物變性等優(yōu)點。
[0042]在本發(fā)明中利用了高壓脈沖電場法處理甘薯葉粉。有甘薯葉粉的乙醇水溶液在脈沖寬度為2ys、脈沖頻率為200Hz與功率100?500W的條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理I?6h。
[0043]在本發(fā)明中，如果高壓脈沖電場的脈沖寬度與脈沖頻率為其它值時，溶出的有效組分太低或者溶出的雜質(zhì)成分太高。
[0044]高壓脈沖電場的脈沖寬度為2ys與脈沖頻率為200Hz時，如果高壓脈沖電場的功率小于100W，則高壓脈沖電場對植物細(xì)胞破壞的程度和數(shù)量均不夠;如果高壓脈沖電場的功率大于500W，則造成有效組分的降解，提取率降低；因此，高壓脈沖電場的功率為100?500W
是可行的。
[0045]這種高壓脈沖電場是由目前市場上銷售的美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備提供的。
[0046]根據(jù)本發(fā)明，對經(jīng)高壓脈沖電場處理的物料使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-D(111)循環(huán)水式真空栗在壓力0.008?0.012MPa下進(jìn)行減壓過濾0.4?0.6h。
[0047]得到的濾渣使用本發(fā)明提取溶劑乙醇水溶液洗滌2?4次，洗滌的濾渣是所述的甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品。采用下面將描述的硝酸鋁顯色法可以測定得到該甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品的黃酮含量。
[0048]C、大孔樹脂吸附
[0049]將步驟B得到的甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液通過大孔樹脂床進(jìn)行吸附，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在恒溫振蕩器里進(jìn)行振蕩吸附；
[0050]所述的大孔樹脂吸附的基本作用是純化有效的黃酮成分。
[0051]本發(fā)明使用的大孔樹脂是目前市場上銷售的各種大孔樹脂產(chǎn)品，例如南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Da1n HP-20大孔樹脂等。
[0052]本發(fā)明使用的大孔樹脂需要進(jìn)行預(yù)處理，首先，篩分收集有效粒徑為0.5mm的大孔樹脂。然后，這種大孔樹脂在2倍體積的無水乙醇中浸泡10h，分離乙醇，用去離子水洗滌，直至洗滌液無白色混濁，無醇味。接著，這種大孔樹脂在2倍體積、濃度為以重量計5%的NaOH水溶液中浸泡3h，再分離NaOH水溶液，用去離子水洗滌至洗滌液呈中性。然后，在2倍體積、濃度為以重量計5%的HCl水溶液中浸泡3h;分離HCl水溶液，再用去離子水洗滌至洗滌液呈中性。
[0053]在這個步驟中，所述的甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品水溶液在吸附速度1.8?2.2BV/h、水溶液與大孔樹脂的體積比18?22:1的條件下吸附1.8?2.2h。
[0054]在大孔樹脂床吸附后，在恒溫振蕩器里，讓這種大孔樹脂在水浴溫度30°C與振蕩頻率1000r/min的條件下在所述的水溶液中振蕩吸附11?13h。
[0055]本發(fā)明使用的恒溫振蕩器是目前市場上銷售的產(chǎn)品，例如上海一恒WSZ-1OA恒溫振蕩器。
[0056]D、洗脫
[0057]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，用蒸餾水洗滌2?3次，濾干，接著用乙醇水溶液洗脫，洗脫液經(jīng)減壓濃縮與真空冷凍干燥，得到所述的甘薯葉黃酮。
[0058]在這個步驟中，用蒸餾水洗滌的基本作用是除去樹脂表面雜質(zhì)。用蒸餾水洗滌時，振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1:2?4。
[0059]根據(jù)本發(fā)明，使用乙醇水溶液洗脫的基本作用是洗脫出有效的黃酮類物質(zhì)。使用濃度為以體積計45?55%的乙醇水溶液在洗脫速度1.8?2.2BV/h、乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比18?22:1的條件下進(jìn)行洗脫，收集洗脫液。
[0060]收集的洗脫液進(jìn)行濃縮的目的在于得到濃縮的有效黃酮類產(chǎn)品。收集洗脫液在壓力0.08?0.12MPa下濃縮1.6?2.4h，接著在壓力0.08?0.12MPa與溫度-20°C下進(jìn)行真空冷凍干燥。
[0061]本發(fā)明使用的真空冷凍干燥器是目前市場上銷售的產(chǎn)品，例如由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名FD-1A-50真空冷凍干燥器銷售的產(chǎn)品。
[0062]本發(fā)明制備得到的甘薯葉黃酮固體樣品采用常規(guī)紫外分光光度法進(jìn)行了分析。
[0063]硝酸鋁絡(luò)合分光光度法測定總黃酮是在中性或弱堿性環(huán)境與亞硝酸鈉的存在下，黃酮類化合物與鋁鹽生成螯合物，加入氫氧化鈉后其溶液則顯紅橙色，在波長510nm處有吸收峰且符合定量分析的比爾定律。因此，可以硝酸鋁絡(luò)合分光光度法測定其甘薯葉黃酮純度與得率。
[0064]本發(fā)明采用常規(guī)硝酸鋁絡(luò)合分光光度法，使用UV2000紫外可見分光光度計測定在波長510nm處的吸光值，由這個吸光值測得本發(fā)明甘薯葉黃酮的純度。按照下述公式計算得到甘薯葉黃酮的得率:
[0065]得率(mg/g)=提取黃酮產(chǎn)品質(zhì)量(mg)/甘薯葉原料總量(g)
[0066]DPPH自由基有單電子，在波長517nm處有一個強(qiáng)吸收峰，其醇溶液呈紫色特性。當(dāng)有自由基清除劑存在時，由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受電子數(shù)量成定量關(guān)系，因而可以采用分光光度計進(jìn)行快速定量分析。
[0067]本發(fā)明采用分光光度法測定517nm處的吸光值變化計算甘薯葉黃酮清除DPPH自由基的能力。
[0068]采用本發(fā)明方法制備得到的甘薯葉黃酮產(chǎn)品DPPH自由基清除能力比傳統(tǒng)60%乙醇水提法提高1.35?1.77倍，比傳統(tǒng)水提法提高1.58?2.08倍，具有明顯提高的DPPH自由基清除能力。如圖1所顯示的，在DPPH自由基體系中，甘薯葉黃酮的IC5Q為36.21?47.62ug/mLo
[0069][有益效果]
[0070]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明從甘薯葉提取黃酮的方法能夠制備得到具有抗氧化作用的甘薯葉黃酮，它的DPPH自由基清除能力比傳統(tǒng)60 %乙醇水提法提高1.35?1.77倍，比傳統(tǒng)水提法提高1.58?2.08倍，具有明顯高的DPPH自由基清除能力。在DPPH自由基體系中，甘薯葉黃酮的IC5q為36.21?47.62yg/mL。本發(fā)明的方法是一種綠色環(huán)保、前景廣闊的生物活性成分提取技術(shù)，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)。
【【附圖說明】】
[0071]圖1是本發(fā)明提取甘薯葉黃酮的純度、得率與清除DPPH自由基能力結(jié)果示意圖。
【【具體實施方式】】
[0072]通過下述實施例將能夠更好地理解本發(fā)明。
[0073]實施例1:從甘薯葉提取黃酮
[0074]該實施例的實施步驟如下:
[0075]A、預(yù)處理
[0076]將甘薯葉在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱中在溫度42°C下烘干，然后在由上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器中在溫度110°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到粒度100目甘薯葉粉；
[0077]B、提取
[0078]按照以克計甘薯葉粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:30，把在步驟A得到的甘薯葉粉加到濃度以體積計70%的乙醇水溶液中，混合均勻，再使用美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率300W的條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理4h，再使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-D(III)循環(huán)水式真空栗，在壓力0.0OSMPa下減壓過濾0.4h，濾渣使用所述提取溶劑乙醇水溶液洗滌2次，經(jīng)洗滌后得到甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品;采用本說明書中描述的方法測定得到甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品的黃酮含量為2.09g/100g。
[0079]C、大孔樹脂吸附
[0080]南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Da1nHP-20大孔樹脂預(yù)處理，首先進(jìn)行篩分收集有效粒徑為0.5mm的大孔樹脂。將收集的大孔樹脂在2倍體積的無水乙醇中浸泡10h，分離乙醇，用去離子水洗滌，直至洗滌液無白色混濁，無醇味。接著再在2倍體積、濃度為以重量計5%的NaOH水溶液中浸泡3h，再分離NaOH水溶液，用去離子水洗滌至洗滌液呈中性。然后，在2倍體積、濃度為以重量計5%的HCl水溶液中浸泡3h;分離HCl水溶液，再用去離子水洗滌至洗滌液呈中性。
[0081]將步驟B得到的甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液通過大孔樹脂床在吸附速度1.8BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比21:1的條件下吸附
1.8h，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在上海一恒WSZ-10A恒溫振蕩器里在水浴溫度30°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振蕩吸附12h;
[0082]D、洗脫
[0083]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，按照振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1: 2用蒸餾水洗滌2次，濾干，接著使用濃度為以體積計45 %的乙醇水溶液在洗脫速度2.lBV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比18:1的條件下進(jìn)行洗脫，洗脫液在壓力0.08MPa下濃縮1.6h，接著使用由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名Π)-1Α-50銷售的真空冷凍干燥器，在壓力0.0SMPa與溫度-20°C下進(jìn)行真空冷凍干燥，得到所述的甘薯葉黃酮。采用本說明書中描述的方法測定得到甘薯葉黃酮純度、得率與清除DPPH自由基的能力，其結(jié)果列于附圖1中。
[0084]實施例2:從甘薯葉提取黃酮
[0085]該實施例的實施步驟如下:
[0086]A、預(yù)處理
[0087]將甘薯葉在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱中在溫度43°C下烘干，然后在由上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器中在溫度108°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到粒度100目甘薯葉粉；
[0088]B、提取
[0089]按照以克計甘薯葉粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:50，把在步驟A得到的甘薯葉粉加到濃度以體積計60%的乙醇水溶液中，混合均勻，再使用美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率500W的條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理2h，再使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-D(III)循環(huán)水式真空栗，在壓力0.012MPa下減壓過濾0.6h，濾渣使用所述提取溶劑乙醇水溶液洗滌3次，經(jīng)洗滌后得到甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品;采用本說明書中描述的方法測定得到甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品的黃酮含量為I.79g/100g。
[0090]C、大孔樹脂吸附
[0091]使用南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Da1n HP-20大孔樹脂，其預(yù)處理與實施例1的相同。
[0092]將步驟B得到的甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液通過大孔樹脂床在吸附速度2.0BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比18:1的條件下吸附2.0h，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在上海一恒WSZ-10A恒溫振蕩器里在水浴溫度30°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振蕩吸附11h;
[0093]D、洗脫
[0094]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，按照振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1: 3用蒸餾水洗滌2次，濾干，接著使用濃度為以體積計50 %的乙醇水溶液在洗脫速度2.0BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比22:1的條件下進(jìn)行洗脫，洗脫液在壓力0.1OMPa下濃縮2.4h，接著使用由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名Π)-1Α-50銷售的真空冷凍干燥器，在壓力0.1OMPa與溫度-20°c下進(jìn)行真空冷凍干燥，得到所述的甘薯葉黃酮。采用本說明書中描述的方法測定得到甘薯葉黃酮純度、得率與清除DPPH自由基的能力，其結(jié)果列于附圖1中。
[0095]實施例3:從甘薯葉提取黃酮
[0096]該實施例的實施步驟如下:
[0097]A、預(yù)處理
[0098]將甘薯葉在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱中在溫度45 °C下烘干，然后在由上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器中在溫度112°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到粒度100目甘薯葉粉；
[0099]B、提取
[0100]按照以克計甘薯葉粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:40，把在步驟A得到的甘薯葉粉加到濃度以體積計80 %的乙醇水溶液中，混合均勻，再使用美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率300W的條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理lh，再使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-D(I II)循環(huán)水式真空栗在壓力0.0lOMPa下減壓過濾0.5h，濾渣使用所述提取溶劑乙醇水溶液洗滌4次，經(jīng)洗滌后得到甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品;采用本說明書中描述的方法測定得到甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品的黃酮含量為2.03g/100g。
[0101]C、大孔樹脂吸附
[0102]使用南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Da1nHP-20大孔樹脂，其預(yù)處理與實施例1的相同。
[0103]將步驟B得到的甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液通過大孔樹脂床在吸附速度2.2BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比19:1的條件下吸附2.1h，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在上海一恒WSZ-1OA恒溫振蕩器里在水浴溫度30°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振蕩吸附11.5h;
[0104]D、洗脫
[0105]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，按照振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1: 4用蒸餾水洗滌3次，濾干，接著使用濃度為以體積計55 %的乙醇水溶液在洗脫速度1.8BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比20:1的條件下進(jìn)行洗脫，洗脫液在壓力0.12MPa下濃縮1.8h，接著使用由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名Π)-1Α-50銷售的真空冷凍干燥器，在壓力0.12MPa與溫度-20°c下進(jìn)行真空冷凍干燥，得到所述的甘薯葉黃酮。采用本說明書中描述的方法測定得到甘薯葉黃酮純度、得率與清除DPPH自由基的能力，其結(jié)果列于附圖1中。
[0106]實施例4:從甘薯葉提取黃酮
[0107]該實施例的實施步驟如下:
[0108]A、預(yù)處理
[0109]將甘薯葉在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱中在溫度44 °C下烘干，然后在由上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器中在溫度IirC的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到粒度100目甘薯葉粉；
[0110]B、提取
[0111]按照以克計甘薯葉粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:30，把在步驟A得到的甘薯葉粉加到濃度以體積計70%的乙醇水溶液中，混合均勻，再使用美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率500W的條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理3h，再使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-D(III)循環(huán)水式真空栗在壓力0.012MPa下減壓過濾0.6h，濾渣使用所述提取溶劑乙醇水溶液洗滌3次，經(jīng)洗滌后得到甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品;采用本說明書中描述的方法測定得到甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品的黃酮含量為1.86g/100g。
[0112]C、大孔樹脂吸附
[0113]使用南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Da1nHP-20大孔樹脂，其預(yù)處理與實施例1的相同。
[0114]將步驟B得到的甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液通過大孔樹脂床在吸附速度2.lBV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比20:1的條件下吸附2.2h，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在上海一恒WSZ-1OA恒溫振蕩器里在水浴溫度30°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振蕩吸附13h;
[0115]D、洗脫
[0116]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，按照振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1: 3用蒸餾水洗滌3次，濾干，接著使用濃度為以體積計52 %的乙醇水溶液在洗脫速度2.2BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比19:1的條件下進(jìn)行洗脫，洗脫液在壓力0.1OMPa下濃縮2.0h，接著使用由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名Π)-1Α-50銷售的真空冷凍干燥器，在壓力0.1OMPa與溫度-20°c下進(jìn)行真空冷凍干燥，得到所述的甘薯葉黃酮。采用本說明書中描述的方法測定得到甘薯葉黃酮純度、得率與清除DPPH自由基的能力，其結(jié)果列于附圖1中。
[0117]實施例5:從甘薯葉提取黃酮
[0118]該實施例的實施步驟如下:
[0119]A、預(yù)處理
[0120]將甘薯葉在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063銷售的烘箱中在溫度43°C下烘干，然后在由上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠公司以商品名LRHS-150B銷售的恒溫恒濕干燥器中在溫度110°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到粒度100目甘薯葉粉；
[0121]B、提取
[0122]按照以克計甘薯葉粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:20，把在步驟A得到的甘薯葉粉加到濃度以體積計80 %的乙醇水溶液中，混合均勻，再使用美國俄亥俄州州立大學(xué)生產(chǎn)的0SU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設(shè)備，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率10W的條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理6h，再使用上海子期實驗設(shè)備有限公司銷售的SHZ-D(I II)循環(huán)水式真空栗在壓力0.0lOMPa下減壓過濾0.5h，濾渣使用所述提取溶劑乙醇水溶液洗滌3次，經(jīng)洗滌后得到甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品;采用本說明書中描述的方法測定得到甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品的黃酮含量為I.73g/100g。
[0123]C、大孔樹脂吸附
[0124]使用南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的Da1nHP-20大孔樹脂，其預(yù)處理與實施例1的相同。
[0125]將步驟B得到的甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液通過大孔樹脂床在吸附速度1.9BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比22:1的條件下吸附2.0h，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在上海一恒WSZ-1OA恒溫振蕩器里在水浴溫度30°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振蕩吸附12.5h；
[0126]D、洗脫
[0127]讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，按照振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1: 4用蒸餾水洗滌3次，濾干，接著使用濃度為以體積計48 %的乙醇水溶液在洗脫速度
2.0BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比21:1的條件下進(jìn)行洗脫，洗脫液在壓力0.09MPa下濃縮2.2h，接著使用由北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司以商品名Π)-1Α_50銷售的真空冷凍干燥器，在壓力0.09MPa與溫度-20°c下進(jìn)行真空冷凍干燥，得到所述的甘薯葉黃酮。采用本說明書中描述的方法測定得到甘薯葉黃酮純度、得率與清除DPPH自由基的能力，其結(jié)果列于附圖1中。
【主權(quán)項】
1.一種從甘薯葉提取黃酮的方法，其特征在于該方法的步驟如下: A、預(yù)處理 將甘薯葉在烘箱中在溫度42?45°C下烘干，然后在恒溫恒濕干燥器中在溫度108?112°C的條件下烘干直至達(dá)到恒重，再研磨得到甘薯葉粉； B、提取 按照以克計甘薯葉粉與以毫升計乙醇水溶液的固液比為1:20?50，把在步驟A得到的甘薯葉粉加到乙醇水溶液中，混合均勻，再在高壓脈沖電場下進(jìn)行處理，減壓過濾，濾渣經(jīng)洗滌后得到甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品； C、大孔樹脂吸附 將步驟B得到的甘薯葉黃酮粗產(chǎn)品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后讓所述水溶液通過大孔樹脂床進(jìn)行吸附，接著轉(zhuǎn)移到水浴中在恒溫振蕩器里進(jìn)行振蕩吸附； D、洗脫 讓步驟C振蕩吸附大孔樹脂過濾，用蒸餾水洗滌2?3次，濾干，接著用乙醇水溶液洗脫，洗脫液經(jīng)減壓濃縮與真空冷凍干燥，得到所述的甘薯葉黃酮。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟A中，所述甘薯葉粉的粒度是100目以上。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟B中，所述的乙醇水溶液濃度為以體積計60?80 %。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟B中，在脈沖寬度2ys、脈沖頻率200Hz與功率100?500W的條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理I?6h。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟B中，在高壓脈沖電場下處理的物料在壓力0.008?0.012MPa下過濾0.4?0.6h。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟C中，所述的水溶液在吸附速度.1.8?2.2BV/h、所述水溶液與大孔樹脂的體積比18?22:1的條件下吸附1.8?2.2h。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟C中，在水浴溫度30°C與振蕩頻率1000r/min的條件下振蕩吸附11?13h。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟D中，洗滌時振蕩吸附的大孔樹脂與蒸餾水的體積比是1:2?4。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟D中，使用濃度為以體積計45?.55%的乙醇水溶液在洗脫速度1.8?2.2BV/h、所述乙醇水溶液與大孔樹脂的體積比18?.22:1的條件下進(jìn)行洗脫。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于在步驟D中，洗脫液在壓力0.08?.0.12MPa下濃縮1.6?2.4h，接著在壓力0.08?0.12MPa與溫度-20°C下進(jìn)行真空冷凍干燥。
【文檔編號】A61P39/06GK105998139SQ201610520498
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年7月5日
【發(fā)明人】郭亞勤, 張靜, 盧樂華, 鄭新濤, 谷向春
【申請人】華寶食用香精香料（上海）有限公司