快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法、引物對(duì)及試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法、 引物對(duì)及試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 物種識(shí)別技術(shù)是現(xiàn)今的DNA條形碼技術(shù)（DNA Barcoding)。DNA條形碼是指生物 體內(nèi)能夠代表該物種的DNA片段，具有通用穩(wěn)定、不易變異、易擴(kuò)增且相對(duì)較短等特點(diǎn)。DNA 條形碼技術(shù)有效地補(bǔ)充了傳統(tǒng)物種鑒定方法，不但對(duì)物種鑒定和分類學(xué)等基礎(chǔ)研究具有重 要意義，而且在環(huán)境和食品等領(lǐng)域也已發(fā)揮廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
[0003] 目前，一系列DNA條形碼計(jì)劃正在世界各地進(jìn)行。在加拿大丘吉爾的北極圈附近 地區(qū)，科學(xué)家對(duì)6000種物種進(jìn)行編目，包括數(shù)量驚人的昆蟲；在新幾內(nèi)亞，DNA條形碼用于 了解蝴蝶的進(jìn)化。這些DNA條形碼技術(shù)研究熱點(diǎn)主要集中在進(jìn)化樹最底層的物種分辨。
[0004] 但是，上述研究理念對(duì)物種區(qū)分精度較高，合格DNA條形碼序列并不易尋找；在實(shí) 際環(huán)境和食品檢測(cè)應(yīng)用中，對(duì)物種的精度時(shí)常并無具體要求，只需區(qū)分進(jìn)化樹上較大分支 (如動(dòng)物與植物、細(xì)菌與真菌等）即可；因此上述研究無法實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)樣本中是否含有進(jìn) 化樹上較大分支的物種。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法、引物對(duì)及 試劑盒，能夠快速檢測(cè)樣本中是否含有動(dòng)物源性成分。
[0006] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是：提供一種快速檢測(cè)動(dòng)物源 性核酸的方法，包括：通過引物對(duì)，對(duì)樣本的DNA序列進(jìn)行PCR反應(yīng)，獲得PCR反應(yīng)產(chǎn)物，其 中，所述引物對(duì)是根據(jù)四條動(dòng)物源性DNA序列中的一條或一條以上進(jìn)行設(shè)計(jì)的，所述四條 動(dòng)物源性DNA序列分別是：SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:4;對(duì)所述PCR反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢 測(cè)；根據(jù)所述電泳檢測(cè)的結(jié)果，預(yù)測(cè)所述樣本中是否含有動(dòng)物源性核酸。
[0007] 其中，所述引物對(duì)包括第一正向引物和第一反向引物，所述第一正向引物是 5' TTCTCCAGGGTACTGTACACGC3'，所述第一反向引物是 5' CTCAAAAGAGGGCAGACGCA3'。
[0008] 其中，所述引物對(duì)包括第二正向引物和第二反向引物，所述第二正向引物是 5' GAAGTCTGTTCTGCTCAAGC3'，所述第二反向引物是 5' GGATGCATGAAAACCACTTG3'。
[0009] 其中，所述引物對(duì)包括第三正向引物和第三反向引物，所述第三正向引物是 5' CAAAAAGTCCAGTCCCCCCAGC3'，所述第三反向引物是 5' AAGGTAAAAAGCAGGAACGC3'。
[0010] 其中，所述引物對(duì)包括第四正向引物和第四反向引物，所述第四正向引物是 5' ATGCTGITTAAGAAAAGGGGGA3'，所述第四反向引物是 5' TGCCACTGCCTGAAGATAAC3'。
[0011] 其中，所述通過引物對(duì)，對(duì)樣本的DNA序列進(jìn)行PCR反應(yīng)，獲得PCR反應(yīng)產(chǎn)物的步 驟之前，包括：通過文獻(xiàn)資料收集動(dòng)物固有且保守的DNA序列，獲得第一 DNA序列集合；利 用植物基因數(shù)據(jù)庫篩查所述第一 DNA序列集合，獲得第二DNA序列集合，其中，所述第二DNA 序列集合與所述植物基因數(shù)據(jù)庫中的DNA序列完全不匹配；利用動(dòng)物基因數(shù)據(jù)庫篩查所述 第二DNA序列集合，獲得第三DNA序列集合，所述第三DNA序列集合與所述動(dòng)物基因數(shù)據(jù)庫 中的DNA序列完全匹配；對(duì)所述第三DNA序列進(jìn)行引物設(shè)計(jì)并經(jīng)過驗(yàn)證試驗(yàn)，獲得第四DNA 序列集合，所述第四DNA序列集合即為包括所述四條動(dòng)物源性DNA序列中的一條或一條以 上的DNA序列；根據(jù)所述四條動(dòng)物源性DNA序列中的一條或一條以上動(dòng)物源性DNA序列，進(jìn) 行引物對(duì)的設(shè)計(jì)。
[0012] 其中，所述動(dòng)物源性DNA序列所對(duì)應(yīng)的物種至少為豬、牛、雞或鴨。
[0013] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的另一個(gè)技術(shù)方案是：提供一種引物對(duì)，所述引 物對(duì)是如上所述任一項(xiàng)所述的引物對(duì)。
[0014] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的又一個(gè)技術(shù)方案是：提供一種快速檢測(cè)動(dòng)物 源性核酸的試劑盒，所述試劑盒包括如上所述任一項(xiàng)所述的引物對(duì)。
[0015] 本發(fā)明的有益效果是：區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)的情況，本發(fā)明通過根據(jù)四條動(dòng)物源性 DNA序列中的一條或一條以上進(jìn)行設(shè)計(jì)的引物對(duì)，對(duì)樣本的DNA序列進(jìn)行PCR反應(yīng)；對(duì)PCR 反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)；根據(jù)電泳檢測(cè)的結(jié)果，確定樣本中是否含有動(dòng)物源性核酸。由于引 物對(duì)是根據(jù)四條動(dòng)物源性DNA序列中的一條或一條以上進(jìn)行設(shè)計(jì)的，通過這種方式，能夠 快速檢測(cè)樣本中是否含有動(dòng)物源性成分。
【附圖說明】
[0016] 圖1是本發(fā)明快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法一實(shí)施方式的流程圖；
[0017] 圖2是本發(fā)明快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法另一實(shí)施方式的流程圖；
[0018] 圖3是本發(fā)明快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法質(zhì)控組電泳檢測(cè)圖；
[0019]圖4是本發(fā)明快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法第一引物對(duì)PCR反應(yīng)后產(chǎn)物的電泳檢 測(cè)圖；
[0020]圖5是本發(fā)明快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法第二引物對(duì)PCR反應(yīng)后產(chǎn)物的電泳檢 測(cè)圖；
[0021]圖6是本發(fā)明快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法第三引物對(duì)PCR反應(yīng)后產(chǎn)物的電泳檢 測(cè)圖；
[0022] 圖7是本發(fā)明快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法第四引物對(duì)PCR反應(yīng)后產(chǎn)物的電泳檢 測(cè)圖；
[0023] 圖8是本發(fā)明快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法第五引物對(duì)PCR反應(yīng)后產(chǎn)物的電泳檢 測(cè)圖；
[0024] 圖9是本發(fā)明快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法第六引物對(duì)PCR反應(yīng)后產(chǎn)物的電泳檢 測(cè)圖；
[0025] 圖10是本發(fā)明快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法第七引物對(duì)PCR反應(yīng)后產(chǎn)物的電泳 檢測(cè)圖；
[0026] 圖11是本發(fā)明快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法第八引物對(duì)PCR反應(yīng)后產(chǎn)物的電泳 檢測(cè)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0028] 參閱圖1，圖1是本發(fā)明快速檢測(cè)動(dòng)物源性核酸的方法一實(shí)施方式的流程圖，包 括：
[0029] 步驟S101 :通過引物對(duì)，對(duì)樣本的DNA序列進(jìn)行PCR反應(yīng)，獲得PCR反應(yīng)產(chǎn)物，其 中，引物對(duì)是根據(jù)四條動(dòng)物源性DNA序列中的一條或一條以上進(jìn)行設(shè)計(jì)的，四條動(dòng)物源性 DNA 序列分別是：SEQ ID N0 :1 至 SEQ ID N0 :4。
[0030]弓丨物是一小段單鏈DNA或RNA，是DNA或RNA復(fù)制的起始點(diǎn)。一對(duì)引物對(duì)包括正向 引物和反向引物，正向引物和反向引物分別和DNA雙鏈的正向鏈和反向鏈結(jié)合。
[0031] 四條動(dòng)物源性DNA序列SEQ ID N0 :1至SEQ ID N0 :4是經(jīng)過多重篩選驗(yàn)證過的、 植物中沒有且是動(dòng)物固有保守的序列。引物對(duì)根據(jù)四條動(dòng)物源性DNA序列中的一條或一條 以上進(jìn)行設(shè)計(jì)，即可以根據(jù)一條動(dòng)物源性DNA序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物對(duì)，可以根據(jù)兩條動(dòng)物源 性DNA序列設(shè)計(jì)兩對(duì)引物對(duì)，可以根據(jù)三條動(dòng)物源性DNA序列設(shè)計(jì)三對(duì)引物對(duì)，可以根據(jù)四 條動(dòng)物源性DNA序列設(shè)計(jì)四對(duì)引物對(duì)，因此引物對(duì)可以是一對(duì)或一對(duì)以上，利用該一對(duì)或 一對(duì)以上引物對(duì)與樣本的DNA序列進(jìn)行PCR反應(yīng)，通過檢測(cè)該P(yáng)CR反應(yīng)產(chǎn)物，即可預(yù)測(cè)樣本 中是否含有動(dòng)物源性核酸。
[0032] SEQ ID N0 :1 至 SEQ ID N0 :4 的 DNA 序列如下：
[0033] SEQ ID NO：1
[0034] tcactgtgcc attttttcat gtgtttctcc agggtactgt acacgctaaa aggcatctta60
[0035] caaatttcac atttgtaaac gtccttcccc acctggccat gcgttttcat gtgcctggtgl20
[0036] agcttgctac tctgggcaca ggcatagttg cacagctcgc atttataagg cctttcgcccl80
[0037] gtgtggcttc tcctgtggac agtgagattg ctacagttct tgaagacttt cccacagtac240
[0038] tcacaagtgt cgctgcgtct gccctctttt gagctgggcc tgcccgggcc cggaccacta300
[0039] atatggggcg tgctccctcc acttcc326
[0040] SEQ ID NO ：2
[0041] tctctgaatg gcagaagtct gttctgctca agcacaaagt atacacagat gtctatatta60
[0042] cattcttata ggtttgacag caactgcatg ttgtatctat aaactgtcct ttagcagtgal20
[0043] cacttcctca atgatgataa gctaatttat gcaactaaat ctcctttgtg cagaaatgaal80
[0044] agctaattga gtcattacaa agtaattcag gaaggaatac cttgtataaa ttggcttact240
[0045] ttataaatcc ttctcaagtg gttttcatgc atcctaaatg ggactaagca g291
[0046] SEQ ID NO ：3
[0047] cgagatgaaa ttgagacatg gaagaattta ttgcccagaa aattccattc tgctatctga60
[0048] ttcaaaaagt ccagtccccc cagcttcgga aaatctattt tccacatttt aataccctgcl20
[0049] agaacagtcc tcataactca tccgagtgtg ttaagcacag ttttattaga tctgaaacaal80
[0050] attttggtgg ggagatacta taggtcatta accatggagt aattttatcc ttgtttccct240
[0051] aatgatgcca taatggcgag cgaatttctt aactaaagac caaagaacat tttgaaggtc300
[0052] agtttcatct gtgagctcct tcaagcgctt ctcagagaag attggaaaac