區(qū)的相對位置的示意圖。
[0037] 圖6提供事件127序列兩代間穩(wěn)定性的DNA印跡雜交分析結(jié)果。圖6A提供用 5'UTR探針的結(jié)果。圖6B提供用AHAS探針的結(jié)果。圖6C提供用3'UTR探針的結(jié)果。圖 6D提供各個探針在事件127序列上的雜交區(qū)域的示意圖。
[0038] 圖7提供大豆事件127植物的一個實(shí)例中的插入物和側(cè)翼序列的圖示。亦標(biāo)明用 于實(shí)施例3中所述的序列測定的6個擴(kuò)增子。
[0039] 圖8提供大豆事件127插入物和側(cè)翼區(qū)的全長核酸序列（SEQ ID N0 :1)。1-1311 位代表5'側(cè)翼DNA，1312-6069位代表編碼經(jīng)修飾的AHASL蛋白的插入DNA，6070-10, 656 位代表3'側(cè)翼DNA。
[0040] 圖9提供實(shí)施例3中所述的大豆事件127植物的一個實(shí)例中AtSec 61 y亞基轉(zhuǎn) 錄的RT-PCR分析的凝膠電泳結(jié)果。
[0041] 圖10提供501bp開放閱讀框（0RF)轉(zhuǎn)錄的RT-PCR分析的凝膠電泳結(jié)果，所述開 放閱讀框通過在實(shí)施例3中所述的大豆事件127植物的一個實(shí)例的3'側(cè)翼連接處插入 csrl-2編碼序列的376bp重復(fù)來創(chuàng)建。
[0042] 圖11提供實(shí)施例3中所述的事件127-特異性PCR檢測方法實(shí)例的凝膠電泳結(jié)果。
[0043] 圖12提供用于產(chǎn)生事件127的DNA，即來自pAC321構(gòu)建體的6156bp的PvuII片 段（SEQ ID N0 :4)。
[0044] 詳述
[0045] 本發(fā)明提供表現(xiàn)出對抑制AHAS的除草劑有耐受性的大豆植物，所述抑制AHAS的 除草劑為例如咪唑啉酮除草劑、磺酰脲除草劑、三唑并嘧啶磺酰苯胺除草劑和/或嘧啶基 氧基苯甲酸酯除草劑。本發(fā)明大豆植物含有位于大豆基因組的特征位置的插入的核酸分 子。亦提供用于與所公開的大豆植物一起使用的方法和組合物。
[0046] 在進(jìn)一步詳述本發(fā)明之前，將首先定義以下術(shù)語。
[0047] I ?定義
[0048] 本文所用術(shù)語"大豆"和"大豆植物"意指大豆（Glycine max)植物，包括可產(chǎn)大 豆的所有植物品種。術(shù)語"大豆植物"包括植物部分。本文所用術(shù)語"植物部分"包括植物 細(xì)胞、植物器官、植物原生質(zhì)體、來自可再生植株的植物細(xì)胞組織培養(yǎng)、植物愈傷組織、植物 塊和在植物或植物部分（例如晶胚、花粉、胚珠、種子、種子莢果、葉、花、枝條、果實(shí)、莖、根、 根尖、花藥、子葉、胚軸等）中完整的植物細(xì)胞。谷物意指由商業(yè)栽培者為了除栽培或繁殖 物種外的目的生產(chǎn)的成熟的種子。再生植株的后代、衍生物、變體和突變體亦包括在本發(fā)明 范圍內(nèi)，前提是這些部分包含事件127核酸分子。
[0049] "事件127核酸分子（event 127nucleic acid molecule) "是指以下核酸分子，其 包含來自SEQ ID N0 :1的1312-6069位的核酸序列；通過傳統(tǒng)植物育種獲得的其變體，所述 變體提供用于表達(dá)AHAS酶的修飾形式，所述AHAS酶的修飾形式具有對應(yīng)于653位含有天 冬酰胺而不是天然絲氨酸（S653N)的AHASL蛋白，其中AHAS酶的修飾形式表現(xiàn)出耐受AHAS 抑制劑，所述AHAS抑制劑正常應(yīng)抑制野生型AHAS酶的酶活性；或這些中任一種的互補(bǔ)序 列。事件127核酸分子可含有在SEQ ID N0 :1的1312-6069位側(cè)翼的另外的序列（或?qū)τ?變體，在5'和3'位置側(cè)翼的另外的序列）。
[0050] "事件127區(qū)"是指包括至少事件127核酸分子片段并指示事件127植物的核酸 分子。事件127區(qū)可包括以下中一種或多種：5'和/或3'連接區(qū)、插入DNA或插入DNA的 csrl-2重復(fù)與插入DNA的其余部分的連接區(qū)。此外，其中可另外包括5'和/或3'側(cè)翼序 列 DNA。
[0051] 本文所用術(shù)語"事件127特異性核酸分子"是指區(qū)別地鑒別或能夠區(qū)別地鑒別樣 品中的事件127核酸分子的核酸分子序列。事件127特異性核酸分子可包括因轉(zhuǎn)化事件產(chǎn) 生的插入DNA的連接區(qū)及獨(dú)特突變或重復(fù)。例如，在PCR反應(yīng)中使用具有SEQ ID N0:37和 38核酸序列的PCR引物導(dǎo)致擴(kuò)增子的擴(kuò)增，這指示事件127核酸分子。
[0052] "事件127分子"是指源自事件127核酸分子、從其獲得或由其編碼的核酸分子、多 肽分子和其它生物分子。
[0053] "事件127診斷分子"是指可用于直接或間接檢測事件127核酸分子的分子。事件 127診斷分子包括可在檢測事件127核酸分子或由所述核酸分子表達(dá)的多肽的方法中使用 的核酸分子，例如引物和探針、抗體及其保留結(jié)合位點(diǎn)的片段（例如Fv、Fab、Fab'、F(ab'） 和缺失H-結(jié)構(gòu)域的抗體）、多肽及其衍生物、核酸類似物、適體等。
[0054] 本文所用"插入DNA"是指經(jīng)由轉(zhuǎn)化過程引入到植物材料中的異源DNA，包括與用 于本文所解釋的這類轉(zhuǎn)化中的初始DNA不同的DNA。"事件127插入核酸"和"事件127插 入DNA"是指具有SEQ ID N0 :1的1312-6069位核酸序列的核酸分子（其不同于用于產(chǎn)生 事件127的DNA，即來自圖12中提供的pAC321構(gòu)建體的6156bp的PvuII片段（SEQ ID N0 : 4))〇
[0055] "事件127"植物、細(xì)胞、種子、植物部分或植物組織是指含有事件127核酸分子的 任何植物、細(xì)胞、種子、植物部分或植物組織，其優(yōu)選含有至少一種事件127特異性核酸。事 件127植物包括含有具有SEQ IDN0:1序列的核酸分子的事件127-9大豆植物，例如稱為 BPS-CV127-9的大豆植物。
[0056] 術(shù)語"側(cè)翼DNA"是指天然存在于生物體例如植物中緊接插入核酸分子的上游或下 游并與之鄰接的基因組DNA。本文所用"側(cè)翼區(qū)"或"側(cè)翼序列"是指至少10、20、50、100、 200、300、400、1000、1500、2000、2500或5000個堿基對或更多的序列，其位于初始外來插入 DNA分子的緊接上游（5'）并與之鄰接或緊接下游（3'）并與之鄰接。事件127側(cè)翼區(qū)的 非限制性實(shí)例在SEQ ID N0:2和3和其變體及片段中提出，其中SEQ ID N0:2代表SEQ ID NO :1 的 1-1311 位，SEQ ID NO :3 代表 SEQ ID NO :1 的 6070-10, 656 位。
[0057] 導(dǎo)致外來插入DNA隨機(jī)整合的轉(zhuǎn)化程序，導(dǎo)致產(chǎn)生含有對每一轉(zhuǎn)化體特征性和獨(dú) 特性的不同側(cè)翼區(qū)的各個轉(zhuǎn)化體。當(dāng)通過傳統(tǒng)雜交將重組DNA引入到植物中時，其側(cè)翼區(qū) 通常與初始轉(zhuǎn)化體的側(cè)翼區(qū)沒有變化。各個轉(zhuǎn)化事件亦將含有在異源插入DNA和基因組 DNA片段之間或兩個基因組DNA片段之間或兩個異源DNA片段之間的獨(dú)特連接。
[0058] "連接點(diǎn)"是其中兩個特異性DNA片段連接的點(diǎn)，例如其中插入DNA連接側(cè)翼DNA 的點(diǎn)。連接點(diǎn)亦存在于轉(zhuǎn)化生物體中，其中兩個DNA片段以自天然生物體中發(fā)現(xiàn)的方式改 變的方式連接在一起。本文所用"連接DNA"或"連接區(qū)"是指包含連接點(diǎn)的DNA。來自大 豆事件127的DNA中的連接點(diǎn)的非限制性實(shí)例，包括例如SEQ ID N0 :5和6中提出的序列， 其中 SEQ ID N0 :5 代表 SEQ ID N0 :1 的 1311-1312 位，SEQ ID N0 :6 代表 SEQ ID N0 :1 的 6069-6070 位。
[0059] 應(yīng)該理解，本文所用術(shù)語"轉(zhuǎn)基因的"包括任何細(xì)胞、細(xì)胞系、愈傷組織、組織、植物 部分或植物，其基因型已通過存在異源核酸來改變，其包括最初如此改變的那些轉(zhuǎn)基因?qū)W 以及通過有性雜交或無性繁殖從初始再生事件產(chǎn)生的那些。本文所用術(shù)語"轉(zhuǎn)基因的"不 包括通過以下方法對基因組（染色體的或染色體外的）的改變：常規(guī)植物育種方法；或天 然存在的事件，例如隨機(jī)異花受精、非重組病毒感染、非重組細(xì)菌轉(zhuǎn)化、非重組轉(zhuǎn)座或自發(fā) 突變。
[0060] "轉(zhuǎn)化"是指將核酸片段轉(zhuǎn)移到宿主生物體基因組，導(dǎo)致遺傳上穩(wěn)定的遺傳。含有 轉(zhuǎn)化的核酸片段的宿主生物體稱為"轉(zhuǎn)基因的"生物體。植物轉(zhuǎn)化方法的實(shí)例包括本領(lǐng)域 已知和以下公開的那些方法。
[0061] "轉(zhuǎn)基因事件"如下產(chǎn)生：通過用一種或多種異源DNA構(gòu)建體轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，所述 異源DNA構(gòu)建體包括包含目的轉(zhuǎn)基因的核酸表達(dá)盒；因?qū)⑥D(zhuǎn)基因插入到植物基因組中所致 的植物群再生；和選擇特征為插入到特定基因組位置的特定的再生植物。事件的表型特征 為表達(dá)一種或多種轉(zhuǎn)基因。在遺傳水平，事件是植物遺傳組成的部分。
[0062] 本文所用"樣品"包括含有核酸分子或多肽的任何樣品，其源自植物、植物材料或 在產(chǎn)品中，所述產(chǎn)品為例如但不限于包含或源自植物材料的食物或飼料產(chǎn)品（新鮮的或經(jīng) 過加工的）。
[0063] 在轉(zhuǎn)化情境中的"引入"或"被引入"，意指以使構(gòu)建體獲得進(jìn)入植物細(xì)胞內(nèi)部這樣 的方式將異源DNA構(gòu)建體提呈給植物。本發(fā)明植物和方法不依賴將核酸構(gòu)建體引入到植物 的特定方法，只要核酸構(gòu)建體獲得進(jìn)入植物的至少一個細(xì)胞的內(nèi)部即可。用于將核酸構(gòu)建 體引入植物的方法為本領(lǐng)域已知，包括但不限于穩(wěn)定轉(zhuǎn)化方法、瞬時轉(zhuǎn)化方法和病毒介導(dǎo) 的方法。
[0064] 術(shù)語"后代"是指通過在事件127植物和另一品種之間有性雜交（例如異型雜交、 自交或回交）產(chǎn)生的植物。即使是在與回歸親本反復(fù)回交后，來自事件127親本的插入的 DNA和/或側(cè)翼DNA也在相同的染色體位置存在于雜交后代中，并可例如通過針對事件127 特異性區(qū)進(jìn)行篩選來鑒定。
[0065] 本文提及核酸分子所用的"異源的"為來源于外來物種的核酸分子，或若其來自同 一物種，則通過故意的人為干預(yù)在組成和/或基因組基因座方面自其天然形式進(jìn)行修飾。 [0066] "分離的"或"純化的"核酸分子或其生物學(xué)活性部分，大體上或基本上不含通常在 其天然存在的環(huán)境中發(fā)現(xiàn)的