1.一種對樣品中的靶標(biāo)分子進(jìn)行檢測的方法,所述方法包括:
2.一種對樣品中的靶標(biāo)分子進(jìn)行多重檢測的方法,所述方法包括:
3.如權(quán)利要求2所述的方法,其中,至少一個探針組中與第二鏈雜交的第三鏈的熔解溫度比至少一個另外的探針組中與第二鏈雜交的第三鏈的熔解溫度低至少5℃。
4.如權(quán)利要求2-3中任一項(xiàng)所述的方法,其中,至少一個探針組中的報(bào)告分子與至少一個另外的探針組中的報(bào)告分子不同。
5.如權(quán)利要求2-3中任一項(xiàng)所述的方法,其中,不同探針組中的報(bào)告分子相同。
6.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述靶標(biāo)結(jié)合劑選自于由以下組成的組:核酸、蛋白質(zhì)、肽、擬肽、氨基酸、二糖、三糖、寡糖、多糖、脂多糖、凝集素、核苷、核苷酸、維生素、類固醇、激素、輔因子、受體和受體配體。
7.如權(quán)利要求6所述的方法,其中,所述靶標(biāo)結(jié)合劑是核酸、抗體、抗體的抗原結(jié)合片段、抗體模擬物、受體或受體的配體。
8.如權(quán)利要求7所述的方法,其中,所述靶標(biāo)結(jié)合分子是核酸。
9.如權(quán)利要求7所述的方法,其中,所述靶標(biāo)結(jié)合分子是抗體或抗體的抗原結(jié)合片段。
10.如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法,其中,與所述第二鏈雜交的第三鏈的熔解溫度比與所述第一鏈雜交的第二鏈的熔解溫度低至少5℃。
11.如權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的方法,其中,與所述第二鏈雜交的第三鏈的熔解溫度比與所述靶標(biāo)分子結(jié)合的第一鏈的熔解溫度低至少5℃。
12.如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的方法,其中,與所述第一鏈雜交的第二鏈的熔解溫度比與所述靶標(biāo)分子結(jié)合的第一鏈的熔解溫度低至少5℃。
13.如權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述第一鏈、第二鏈或第三鏈中的至少一個包含核酸修飾。
14.如權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述第一鏈的第一雜交結(jié)構(gòu)域和/或所述第二鏈的第二雜交結(jié)構(gòu)域包含雙鏈體穩(wěn)定化修飾。
15.如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述第二鏈的第三雜交結(jié)構(gòu)域和/或所述第四雜交結(jié)構(gòu)域包含雙鏈體去穩(wěn)定化修飾。
16.如權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述報(bào)告分子和所述猝滅劑分子是fret對。
17.如權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述報(bào)告分子選自于由以下組成的組:熒光分子、放射性同位素、生色團(tuán)、酶、酶底物、化學(xué)發(fā)光部分、生物發(fā)光部分、回聲物質(zhì)、非金屬同位素、光學(xué)報(bào)告分子、順磁性金屬離子和鐵磁性金屬。
18.如權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述猝滅劑分子是暗猝滅劑。
19.如權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述第一鏈進(jìn)一步包含連接至所述靶標(biāo)結(jié)合結(jié)構(gòu)域的報(bào)告結(jié)構(gòu)域。
20.如權(quán)利要求19所述的方法,其中,所述探針組進(jìn)一步包含第四核酸鏈,其中,所述第四核酸鏈包含第五雜交結(jié)構(gòu)域,其中,所述第五雜交結(jié)構(gòu)域包含與所述第一鏈的報(bào)告結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列實(shí)質(zhì)上互補(bǔ)的核苷酸序列,并且任選地,所述第四鏈包含報(bào)告分子。
21.如權(quán)利要求1-20中任一項(xiàng)所述的方法,其中,分析探針組對靶標(biāo)的結(jié)合包括在第一溫度下和第二溫度下檢測可檢測信號,其中,所述第一溫度或第二溫度中的一個低于與所述第二鏈雜交的第三鏈的熔解溫度,并且所述第一溫度或第二溫度中的另一個高于與所述第二鏈雜交的第三鏈的熔解溫度。
22.如權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述靶標(biāo)分子選自于由以下組成的組:核酸、蛋白質(zhì)、糖、脂質(zhì)、小分子和抗原。
23.如權(quán)利要求22所述的方法,其中,所述靶標(biāo)分子是核酸。
24.如權(quán)利要求23所述的方法,其中,所述靶標(biāo)分子是rna。
25.如權(quán)利要求23所述的方法,其中,所述靶標(biāo)分子是dna。
26.如權(quán)利要求22所述的方法,其中,所述靶標(biāo)分子是蛋白質(zhì)。
27.如權(quán)利要求22所述的方法,其中,所述靶標(biāo)分子是初級代謝物或次級代謝物。
28.如權(quán)利要求1-27中任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述靶標(biāo)分子是生物分子。
29.如權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述靶標(biāo)分子處于細(xì)胞中。
30.如權(quán)利要求29所述的方法,其中,所述細(xì)胞是經(jīng)固定的細(xì)胞。
31.一種用于檢測靶標(biāo)分子的探針組,所述探針組包含:
32.一種用于靶標(biāo)分子的多重檢測的探針組,所述探針組包含多個檢測探針組,其中,各檢測探針組包含:
33.如權(quán)利要求32所述的探針組,其中,至少一個探針組中與第二鏈雜交的第三鏈的熔解溫度比至少一個另外的探針組中與第二鏈雜交的第三鏈的熔解溫度低至少5℃。
34.如權(quán)利要求32-33中任一項(xiàng)所述的探針組,其中,不同探針組中的報(bào)告分子相同。
35.如權(quán)利要求32-34中任一項(xiàng)所述的探針組,其中,至少一個探針組中的報(bào)告分子與至少一個另外的探針組中的報(bào)告分子不同。
36.如權(quán)利要求31-35中任一項(xiàng)所述的探針組,其中,所述靶標(biāo)結(jié)合劑選自于由以下組成的組:核酸、蛋白質(zhì)、肽、擬肽、氨基酸、二糖、三糖、寡糖、多糖、脂多糖、凝集素、核苷、核苷酸、維生素、類固醇、激素、輔因子、受體和受體配體。
37.如權(quán)利要求36所述的探針組,其中,所述靶標(biāo)結(jié)合劑是核酸、抗體、抗體的抗原結(jié)合片段、抗體模擬物、受體或受體的配體。
38.如權(quán)利要求37所述的探針組,其中,所述靶標(biāo)結(jié)合分子是核酸。
39.如權(quán)利要求37所述的探針組,其中,所述靶標(biāo)結(jié)合分子是抗體或抗體的抗原結(jié)合片段。
40.如權(quán)利要求31-39中任一項(xiàng)所述的探針組,其中,與所述第二鏈雜交的第三鏈的熔解溫度比與所述第一鏈雜交的第二鏈的熔解溫度低至少5℃。
41.如權(quán)利要求31-40中任一項(xiàng)所述的探針組,其中,與所述第二鏈雜交的第三鏈的熔解溫度比與所述第一鏈結(jié)合的第一鏈的熔解溫度低至少5℃。
42.如權(quán)利要求31-41中任一項(xiàng)所述的探針組,其中,所述第一鏈、第二鏈或第三鏈中的至少一個包含核酸修飾。
43.如權(quán)利要求31-42中任一項(xiàng)所述的探針組,其中,所述第一鏈的第一雜交結(jié)構(gòu)域和/或所述第二鏈的第二雜交結(jié)構(gòu)域包含雙鏈體穩(wěn)定化修飾。
44.如權(quán)利要求31-43中任一項(xiàng)所述的探針組,其中,所述第二鏈的第三雜交結(jié)構(gòu)域和/或所述第四雜交結(jié)構(gòu)域包含雙鏈體去穩(wěn)定化修飾。
45.如權(quán)利要求31-44中任一項(xiàng)所述的探針組,其中,所述報(bào)告分子和所述猝滅劑分子是fret對。
46.如權(quán)利要求31-45中任一項(xiàng)所述的探針組,其中,所述報(bào)告分子選自于由以下組成的組:熒光分子、放射性同位素、生色團(tuán)、酶、酶底物、化學(xué)發(fā)光部分、生物發(fā)光部分、回聲物質(zhì)、非金屬同位素、光學(xué)報(bào)告分子、順磁性金屬離子和鐵磁性金屬。
47.如權(quán)利要求31-46中任一項(xiàng)所述的探針組,其中,所述猝滅劑分子是暗猝滅劑。
48.如權(quán)利要求31-47中任一項(xiàng)所述的探針組,其中,所述第一鏈進(jìn)一步包含連接至靶標(biāo)結(jié)合結(jié)構(gòu)域的報(bào)告結(jié)構(gòu)域。
49.如權(quán)利要求31-48中任一項(xiàng)所述的探針組,其中,所述探針組進(jìn)一步包含第四核酸鏈,其中,所述第四核酸鏈包含第五雜交結(jié)構(gòu)域,其中,所述第五雜交結(jié)構(gòu)域包含與所述第一鏈的報(bào)告結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列實(shí)質(zhì)上互補(bǔ)的核苷酸序列,并且任選地,所述第四鏈包含報(bào)告分子。
50.用于檢測靶標(biāo)分子的試劑盒,所述試劑盒包含權(quán)利要求31-49中任一項(xiàng)所述的探針組。