本技術涉及多特異性分子，例如抗cldn6/抗4-1bb雙特異性抗體，及其用途，包括治療疾病或病癥。

背景技術：

1、claudin是形成細胞緊密連接的重要組分的一類蛋白質(zhì)。claudin-6(cldn6)是參與緊密連接形成的一種四跨膜蛋白。在成人正常組織中，cldn6?mrna和蛋白不存在。另一方面，在多種人實體癌(如睪丸癌、卵巢癌、子宮癌和肺腺癌)中頻繁檢測到高cldn6轉(zhuǎn)錄本水平。據(jù)報道，與mrna水平一致，cldn6蛋白在這些人癌癥中是高且均一的。

2、4-1bb(cd137，腫瘤壞死因子受體超家族9)是tnf受體超家族(tnfrsf)的成員，且是一種共刺激分子，其在免疫細胞(先天免疫細胞和適應性免疫細胞)激活后表達。4-1bb在調(diào)節(jié)各種免疫細胞的活性方面起著重要作用。4-1bb激動劑增強免疫細胞增殖、存活、細胞因子分泌和cd8?t細胞的細胞溶解活性。諸多其他研究表明，激活4-1bb會增強免疫反應以消除小鼠的腫瘤。因此，表明了4-1bb在癌癥免疫學中是有前景的靶標分子。

3、本文提及的所有出版物、專利、專利申請和已公布專利申請的公開內(nèi)容均通過引用全文并入本文。

技術實現(xiàn)思路

1、在一方面，本文提供了多特異性構建體，其包含：與腫瘤抗原特異性結合的第一抗體部分；和與4-1bb特異性結合的第二抗體部分，其中所述第一抗體部分與所述腫瘤抗原的結合觸發(fā)所述第二抗體部分激活4-1bb。在一些實施方案中，第二抗體部分與4-1bb的crd3/4區(qū)域特異性結合。

2、在一些實施方案中，本文提供了多特異性構建體，其包含與腫瘤抗原特異性結合的第一抗體部分；和與4-1bb特異性結合的第二抗體部分，其中所述第一抗體部分與所述腫瘤抗原的結合觸發(fā)所述第二抗體部分激活4-1bb。在一些實施方案中，在第一抗體部分與腫瘤抗原結合后，第二抗體部分對4-1bb的激活增強至少約2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍、100倍、200倍、500倍或1000倍中的任一種，包括這些值之間的任何范圍。在一些實施方案中，在不與腫瘤抗原結合的情況下，多特異性構建體確實激活了4-1bb信號傳導。在一些實施方案中，在不與腫瘤抗原結合的情況下，第二部分不激活4-1bb信號傳導。

3、在一些實施方案中，提供了多特異性構建體，其包含a)與claudin-6(“cldn6”)特異性結合的第一抗體部分；和b)與4-1bb特異性結合的第二抗體部分。在一些實施方案中，第一抗體部分包含全長抗體，所述全長抗體包含兩條重鏈和兩條輕鏈。

4、本文提供了多特異性構建體，其包含：(1)與claudin-6(“cldn6”)特異性結合的第一抗體部分；和(2)與4-1bb特異性結合的第二抗體部分。

5、在一些實施方案中，第一抗體部分選自全長抗體、fab、fab'、f(ab’)2、scfv和sdab。在一些實施方案中，其中所述第一抗體部分包含：(1)hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其在重鏈可變區(qū)(vh)內(nèi)分別包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述重鏈可變區(qū)包含seqid?no：7中所示的序列；和(2)lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其在輕鏈可變區(qū)(vl)內(nèi)分別包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述輕鏈可變區(qū)包含seq?id?no：8中所示的序列。在一些實施方案中，第一抗體部分包含重鏈可變區(qū)(vh)和輕鏈可變區(qū)(vl)，其中：(a)所述vh包含：(i)hc-cdr1，其包含seq?id?no：1的氨基酸序列，(ii)hc-cdr2，其包含seq?id?no：2的氨基酸序列，和(iii)hc-cdr3，其包含seq?id?no：3的氨基酸序列，并且(b)所述vl包含：(i)lc-cdr1，其包含seq?id?no：4的氨基酸序列，(ii)lc-cdr2，其包含seq?id?no：5的氨基酸序列，和(iii)lc-cdr3，其包含seq?id?no：6的氨基酸序列。在一些實施方案中，第一抗體部分包含重鏈可變區(qū)(vh)和輕鏈可變區(qū)(vl)，并且其中：(1)所述vh包含seq?id?no：7的氨基酸序列或其變體，所述變體與seq?id?no：7包含至少約80％的序列同一性；和/或(2)所述vl包含seq?id?no：8的氨基酸序列或其變體，所述變體與seq?id?no：8包含至少約80％的序列同一性。在一些實施方案中，第一抗體部分包含：(1)hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其在重鏈可變區(qū)(vh)內(nèi)分別包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述重鏈可變區(qū)包含seq?id?no：18中所示的序列；和(2)lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其在輕鏈可變區(qū)(vl)內(nèi)分別包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述輕鏈可變區(qū)包含seq?id?no：19中所示的序列。在一些實施方案中，第一抗體部分包含重鏈可變區(qū)(vh)和輕鏈可變區(qū)(vl)，其中：(1)所述vh包含：(i)hc-cdr1，其包含seq?id?no：12的氨基酸序列，(ii)hc-cdr2，其包含seq?id?no：13的氨基酸序列，和(iii)hc-cdr3，其包含seq?id?no：14的氨基酸序列，并且(2)所述vl包含：(i)lc-cdr1，其包含seq?id?no：15的氨基酸序列，(ii)lc-cdr2，其包含seq?id?no：16的氨基酸序列，和(iii)lc-cdr3，其包含seq?id?no：17的氨基酸序列。在一些實施方案中，第一抗體部分包含重鏈可變區(qū)(vh)和輕鏈可變區(qū)(vl)，并且其中：(1)所述vh包含seq?id?no：18的氨基酸序列或其變體，所述變體與seq?id?no：18具有至少約80％的序列同一性；和/或(2)所述vl包含seq?id?no：19的氨基酸序列或其變體，所述變體與seq?id?no：19具有至少約80％的序列同一性。在一些實施方案中，第一抗體部分與cldn6的結合觸發(fā)第二抗體部分激活4-1bb。

6、在一些實施方案中，所述第二抗體部分與4-1bb的crd?3/4區(qū)域特異性結合。在一些實施方案中，第二抗體部分選自全長抗體、fab、fab'、f(ab’)2、scfv和sdab。在一些實施方案中，第二抗體部分是sdab。在一些實施方案中，sdab在單個單體可變抗體結構域內(nèi)包含sdab-cdr1、sdab-cdr2和sdab-cdr3，其分別包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述單個單體可變抗體結構域包含seq?id?no：27中所示的氨基酸序列。在一些實施方案中，sdab包含：(1)sdab-cdr1，其包含seq?id?no：24的氨基酸序列；(2)sdab-cdr2，其包含seq?id?no：25的氨基酸序列；和(3)sdab-cdr3，其包含seq?id?no：26的氨基酸序列。在一些實施方案中，第二抗體部分包括seq?id?no：27的氨基酸序列或其變體，所述變體與seq?id?no：27具有至少約80％的序列同一性。

7、在一些實施方案中，多特異性構建體是雙特異性抗體或雙特異性結合片段。在一些實施方案中，(1)第一抗體部分包含：(a)hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其在重鏈可變區(qū)(vh)內(nèi)分別包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述重鏈可變區(qū)包含seq?id?no：7中所示的序列；(b)lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其在輕鏈可變區(qū)(vl)內(nèi)分別包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述輕鏈可變區(qū)包含seq?id?no：8中所示的序列，并且(2)第二抗體部分在單個單體可變抗體結構域內(nèi)包含sdab-cdr1、sdab-cdr2和sdab?cdr3，其分別包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述單個單體可變抗體結構域包含seq?id?no：27中所示的氨基酸序列。

8、在一些實施方案中，提供了藥物組合物，其包含本文所述的多特異性構建體和藥物可接受的載體。

9、在一些實施方案中，提供了核酸，其編碼本文所述的多特異性構建體。在一些實施方案中，提供了載體，其包含這種核酸。在一些實施方案中，提供了宿主細胞，其包含這種核酸或這種載體。

10、本文還提供了治療有需要的受試者的疾病或病癥的方法，其包括向所述受試者施用有效量的本文所述的多特異性構建體或本文所述的藥物組合物。本文還提供了本文所述的多特異性構建體在制備用于治療有需要的受試者的疾病或病癥的藥物中的用途。在一些實施方案中，疾病或病癥是癌癥。

11、在一些實施方案中，提供了多特異性構建體，其包含：(1)與腫瘤抗原特異性結合的第一抗體部分；和(2)與4-1bb特異性結合的第二抗體部分，其中所述第一抗體部分與所述腫瘤抗原的結合觸發(fā)所述第二抗體部分激活4-1bb。在一些實施方案中，在第一抗體部分與腫瘤抗原結合后，第二抗體部分對4-1bb的激活增強至少10倍。在一些實施方案中，所述第二抗體部分與4-1bb的crd?3/4區(qū)域特異性結合。在一些實施方案中，第二抗體部分是sdab。在一些實施方案中，sdab在單個單體可變抗體結構域內(nèi)包含sdab-cdr1、sdab-cdr2和sdab-cdr3，其分別包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述單個單體可變抗體結構域包含seq?id?no：27中所示的氨基酸序列。在一些實施方案中，sdab包含：(1)sdab-cdr1，其包含seq?id?no：24的氨基酸序列；(2)sdab-cdr2，其包含seq?id?no：25的氨基酸序列；和(3)sdab-cdr3，其包含seq?id?no：26的氨基酸序列。在一些實施方案中，腫瘤抗原是cldn6。

12、本文還提供了多特異性構建體，其包含兩個重鏈組分和兩個輕鏈組分，其中：(a)每個重鏈組分包含seq?id?no：28和/或seq?id?no：44中所示的序列，并且每個輕鏈組分包含seq?id?no：29中所示的序列；(b)每個重鏈組分包含seq?id?no：30中所示的序列，并且每個輕鏈組分包含seq?id?no：31中所示的序列；(c)每個重鏈組分包含seq?id?no：32中所示的序列，并且每個輕鏈組分包含seq?id?no：33中所示的序列；(d)每個重鏈組分包含seq?idno：34中所示的序列，并且每個輕鏈組分包含seq?id?no：35中所示的序列；(e)每個重鏈組分包含seq?id?no：36中所示的序列，并且每個輕鏈組分包含seq?id?no：37中所示的序列；或(f)每個重鏈組分包含seq?id?no：38中所示的序列，并且每個輕鏈組分包含seq?id?no：39中所示的序列。

13、本技術提供了試劑盒，其包含本文所述的多特異性構建體和/或本文所述的藥物以及包裝附頁或說明書，其用于使用所述多特異性構建體(或藥物組合物)治療疾病或病癥(例如癌癥)。

14、將理解的是，本文所述的各種實施方案中的一種、一些或全部特性可以被組合以形成本發(fā)明的其他實施方案。本發(fā)明的這些和其他方面對于本領域技術人員將變得顯而易見。本發(fā)明的這些和其他實施方案通過下面的詳細描述作進一步描述。