本發(fā)明涉及抗vegf-a/抗il6抗體及其使用方法。

背景技術(shù)：

1、與vegf結(jié)合的抗體(例如，蘭尼單抗)用作用于治療眼部血管疾病如年齡相關(guān)性黃斑變性的治療劑。與il6結(jié)合的抗體(例如，如wo2014/074905中公開的)已建議用于治療眼部疾病。

2、wo2012/163520公開了在一對vh和vl結(jié)構(gòu)域(“dutafab”)中包含兩個互補(bǔ)位的雙特異性抗體。wo2012/163520的雙特異性抗體的每個互補(bǔ)位包含來自重鏈和來自輕鏈cdr的氨基酸，其中重鏈cdr-h1和cdr-h3以及輕鏈cdr-l2促成第一互補(bǔ)位，而輕鏈cdr-l1和cdr-l3以及重鏈cdr-h2促成第二互補(bǔ)位。包含各個互補(bǔ)位的單特異性抗體是從不同的fab文庫中獨(dú)立分離的，fab文庫在第一或第二互補(bǔ)位中均多樣化。鑒定所述單特異性抗體的氨基酸序列，并合并成雙互補(bǔ)位的vh和vl對。wo2012/163520中公開了一種與vegf和il-6特異性結(jié)合的示例性fab片段作為概念證明實(shí)例，該片段稱為“vh6l”，其具有seq?id?no:01的vl序列和seq?id?no:02的vh序列。

3、的確需要改善的與vegf和與il6結(jié)合的治療性抗體以用于眼部疾病的臨床應(yīng)用，例如，通過改善與標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理相比的療效以及通過改善作用的持續(xù)時間并繼而降低玻璃體內(nèi)注射的頻率以使針對患者的施用負(fù)擔(dān)減小來實(shí)現(xiàn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明涉及雙特異性抗vegf-a/抗il6抗體及其使用方法。

2、在一方面，本發(fā)明涉及一種與人vegf-a和與人il6結(jié)合的抗體，該抗體包含：vh結(jié)構(gòu)域，該vh結(jié)構(gòu)域包含：(a)包含seq?id?no:18的氨基酸序列的cdr-h1，(b)包含seq?id?no:19的氨基酸序列的cdr-h2和(c)包含seq?id?no:20的氨基酸序列的cdr-h3；以及vl結(jié)構(gòu)域，該vl結(jié)構(gòu)域包含：(d)包含seq?id?no:15的氨基酸序列的cdr-l1，(e)包含seq?id?no:16的氨基酸序列的cdr-l2和(f)包含seq?id?no:17的氨基酸序列的cdr-l3；該抗體包含：可變重鏈結(jié)構(gòu)域，該可變重鏈結(jié)構(gòu)域包含具有至多5個氨基酸取代的seq?id?no:22的氨基酸序列；以及可變輕鏈結(jié)構(gòu)域，該可變輕鏈結(jié)構(gòu)域包含具有至多5個氨基酸取代的seq?id?no:21的氨基酸序列。

3、本發(fā)明的一個實(shí)施例涉及一種與人vegf-a和與人il6結(jié)合的抗體，該抗體包含seqid?no:22的vh序列和seq?id?no:21的vl序列。

4、本發(fā)明的一個實(shí)施例涉及一種抗體，其包含seq?id?no:24的重鏈氨基酸序列和seq?id?no:23的輕鏈氨基酸序列。

5、本發(fā)明的一個實(shí)施例涉及一種與人vegf-a和與人il6結(jié)合的抗體fab片段。

6、本發(fā)明的一個實(shí)施例涉及一種與人vegf-a和與人il6結(jié)合的雙特異性抗體fab片段。

7、在另一方面，本發(fā)明提供了一種與il6結(jié)合的抗體，該抗體與根據(jù)本發(fā)明的抗體結(jié)合至il6上的相同表位。

8、在另一方面，本發(fā)明提供了一種與人il6結(jié)合的抗體，該抗體包含：

9、a)基于人vh3框架的vh結(jié)構(gòu)域，其中il6互補(bǔ)位包含氨基酸殘基

10、y1、i2、q3、y26、e27、f28、t29、h30、q31、d32、p52a、r94、i96、d97、f98、d101、t102，以及基于人vκ1框架的vl結(jié)構(gòu)域，其中il6互補(bǔ)位包含氨基酸殘基y49、d50、s53、n54、y55、p56、s57、y91、y96；或者

11、b)基于人vh3框架的vh結(jié)構(gòu)域，其中il6互補(bǔ)位包含氨基酸殘基y1、p2、q3、v26、l27、f28、k29、h30、q31、d32、p52a、r94、l96、d97、f98、d101、e102，以及基于人vκ1框架的vl結(jié)構(gòu)域，其中il6互補(bǔ)位包含氨基酸殘基y49、d50、d53、r54、y55、p56、e57、y91、y96(根據(jù)kabat編號)。

12、在另一方面，本發(fā)明提供了一種與il6結(jié)合的抗體，該抗體與具有seq?id?no:35的vl結(jié)構(gòu)域和seq?id?no:36的vh結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合至il6上的相同表位。在一個實(shí)施例中，抗體包含：具有人vh3框架的vh結(jié)構(gòu)域，其中il6互補(bǔ)位包含氨基酸殘基1、2、3、26、27、28、29、30、31、32、52a、94、96、97、98、101、102；以及具有人vκ1框架的vl結(jié)構(gòu)域，其中il6互補(bǔ)位包含氨基酸殘基49、50、53、54、55、56、57、91、96。

13、在一方面，本發(fā)明提供了一種編碼本發(fā)明的抗體的經(jīng)分離的核酸。

14、在一方面，本發(fā)明提供了一種包含本發(fā)明的核酸的宿主細(xì)胞。在一個實(shí)施例中，宿主細(xì)胞為cho細(xì)胞。在一個實(shí)施例中，宿主細(xì)胞為大腸桿菌細(xì)胞。

15、在一方面，本發(fā)明提供了一種包含本發(fā)明的核酸的表達(dá)載體。

16、在一方面，本發(fā)明提供了一種產(chǎn)生與人vegf-a和與人il6結(jié)合的抗體的方法，該方法包括培養(yǎng)本發(fā)明的宿主細(xì)胞，從而產(chǎn)生抗體。

17、在一方面，本發(fā)明提供了通過本發(fā)明的方法產(chǎn)生的抗體。

18、在一方面，本發(fā)明提供了一種包含本發(fā)明的抗體和藥用載體的藥物制劑。

19、在一方面，本發(fā)明提供了一種包含本發(fā)明的抗體和藥用載體的預(yù)填充注射器。

20、在一方面，本發(fā)明提供了一種包含本發(fā)明的抗體和藥用載體的眼部植入物。在一個實(shí)施例中，本發(fā)明包括一種輸液港(port)遞送裝置，其包括本發(fā)明的抗體。

21、在本發(fā)明的一個方面，輸液港遞送裝置施用抗體或藥物制劑。

22、在一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的抗體，其用于作為藥物使用，在一個實(shí)施例中，其用于在治療血管疾病中使用。

23、在一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的抗體或本發(fā)明的藥物組合物在制備藥物、在一個實(shí)施例中為用于治療血管疾病的藥物中的用途。

24、在一方面，本發(fā)明提供了一種治療患有血管疾病的個體的方法，該方法包括向該個體施用有效量的本發(fā)明的抗體或本發(fā)明的藥物組合物。

25、在一方面，本發(fā)明提供了一種抑制個體的血管生成的方法，該方包括向該個體施用有效量的本發(fā)明的抗體或本發(fā)明的藥物組合物以抑制血管生成。

26、根據(jù)本發(fā)明，提供了一種治療性抗vegf-a/抗il6抗體，即使當(dāng)以抗體fab片段形式提供時，該抗體也能夠獨(dú)立地結(jié)合其靶抗原。它表現(xiàn)出優(yōu)異的在藥理學(xué)相關(guān)范圍內(nèi)的與食蟹猴靶標(biāo)的kd和物種交叉反應(yīng)性。本發(fā)明的抗體適用于眼部血管疾病的治療。本發(fā)明的抗體提供了幾種有價(jià)值的特性，包括允許其治療應(yīng)用的良好可表達(dá)性和可開發(fā)性(例如，高結(jié)合效力、高生物物理和生物化學(xué)穩(wěn)定性、高濃度制劑)，特別是支持低有效劑量的對兩個靶標(biāo)的高親和力，以及有利于長持續(xù)時間的高穩(wěn)定性。與非抗體方法相比，本發(fā)明的抗體由于其高度人性化和缺乏人工結(jié)構(gòu)域和接頭而傾向于更容易接受。此外，本發(fā)明的抗體有利于以高濃度液體制劑提供，其粘度適合于眼部應(yīng)用。因?yàn)槠淠芤愿邼舛忍峁?，所以利用本發(fā)明的抗體進(jìn)行治療對于患者而言更容易接受，因?yàn)樵谝淮沃委熤锌梢詰?yīng)用更高劑量的治療劑，從而允許更長的治療周期。雙特異性fab片段諸如本發(fā)明中描述的雙特異性fab片段由于分子量低得多而具有優(yōu)于雙特異性全長igg抗體的額外優(yōu)點(diǎn)。而在提供相同數(shù)量的結(jié)合位點(diǎn)時，fab的分子量為約50kda，全長抗體的重量是fab的分子量的三倍(約150kda)。因此，對于給定量的藥物，雙特異性fab片段將含有為全長igg抗體三倍的結(jié)合位點(diǎn)。