本發(fā)明涉及藥物與化工
技術(shù)領(lǐng)域：
，更具體地，涉及一種4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉類衍生物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：阿爾茨海默病(alzheimer′sdisease,ad)，又稱為老年癡呆，是一種慢性、進(jìn)行性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。近年來(lái)，隨著社會(huì)的發(fā)展以及人們生活水平的提高，世界人口日趨老年化，因此ad的發(fā)病率逐年攀升，已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅老年人生命健康和生活質(zhì)量的主要疾病之一。研究表明，ad的病理學(xué)特征主要包括腦神經(jīng)細(xì)胞外出現(xiàn)β-淀粉樣蛋白聚集的老年斑(senileplaques,ap)，神經(jīng)元胞漿內(nèi)異常磷酸化的tau蛋白聚集而形成的神經(jīng)元纖維纏結(jié)，以及神經(jīng)元的變形、壞死等。迄今為止，關(guān)于ad的發(fā)病機(jī)制尚未明確，可能涉及基因缺陷、代謝紊亂、自由基損傷、免疫神經(jīng)炎癥、神經(jīng)元凋亡及環(huán)境毒素等多方面因素。針對(duì)這些因素，人們已經(jīng)提出了許多假說(shuō)，其中主要包括膽堿能學(xué)說(shuō)，淀粉樣蛋白級(jí)聯(lián)假說(shuō)，氧化應(yīng)激假說(shuō)等。并且針對(duì)這些假說(shuō)，也提出了相對(duì)應(yīng)的解決方法。首先是淀粉樣蛋白級(jí)聯(lián)假說(shuō)，針對(duì)aβ的代謝過程，科研工作者們提出了多種治療策略。其中之一就是設(shè)計(jì)和合成能夠抑制aβ聚集的小分子配體。其次是膽堿能學(xué)說(shuō),該假說(shuō)認(rèn)為，膽堿能神經(jīng)功能的降低是ad發(fā)病的主要原因。據(jù)此科學(xué)家們研發(fā)出了膽堿酯酶抑制劑(chei)。第三個(gè)是氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)，該假說(shuō)認(rèn)為腦組織中物質(zhì)和能量代謝異常導(dǎo)致自由基累積，產(chǎn)生氧化傷害，引起細(xì)胞凋亡和ad特征性神經(jīng)病理改變。對(duì)此，科研人員提出了設(shè)計(jì)和合成具有抗氧化能力的化合物來(lái)解決氧化應(yīng)激的問題。目前，這一策略已取得了較好的成效。另外，有研究表明，一些金屬離子如銅、鐵、鋅等與aβ結(jié)合并促進(jìn)其聚集過程，電鏡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，銅離子和鋅離子濃度在老年斑中比正常人高出一倍，而且金屬離子如銅、鐵等能夠促進(jìn)ros的生成導(dǎo)致氧化應(yīng)激上升，因此，金屬離子螯合劑也成為了一種治療ad的手段。大量實(shí)驗(yàn)證明，mao-b的活性會(huì)隨著年齡的增長(zhǎng)逐漸升高，尤其是在ad病人老年斑周圍濃度更高，其活性的升高會(huì)導(dǎo)致大腦中具有神經(jīng)毒性的自由基增多，氧化應(yīng)激增加，并同時(shí)進(jìn)一步加速腦內(nèi)aβ蛋白的聚集和tau蛋白的過度磷酸化，最終引起神經(jīng)損傷導(dǎo)致神經(jīng)元死亡，因此，mao-b的抑制劑近年來(lái)也可用于治療ad。由ad發(fā)病機(jī)理可知，ad的發(fā)病機(jī)制多，而且各個(gè)機(jī)制之間密切相關(guān)，相互影響。因此，針對(duì)單靶點(diǎn)的藥物治療效果并不理想。而越來(lái)越多的研究表明，同時(shí)作用于與疾病相關(guān)的多個(gè)靶點(diǎn)的藥物即多靶點(diǎn)藥物可能治療效果更好。多靶點(diǎn)藥物的設(shè)計(jì)是旨在利用生物結(jié)構(gòu)信息和藥效團(tuán)模型，獲得所需的多種生物活性。多靶點(diǎn)藥物作用的特點(diǎn)是針對(duì)疾病的不同病理和生理環(huán)節(jié)發(fā)揮作用而增強(qiáng)療效。因此設(shè)計(jì)合成具有抗aβ聚集活性，金屬離子絡(luò)合，抑制mao-b活性，以及抗氧化活性的多靶點(diǎn)藥物可能是治療ad的有效策略。喹啉環(huán)是一個(gè)很好抗ad藥物的活性藥效基團(tuán)，如他克林就是第一個(gè)上市的喹啉抗ad藥物。因此本專利設(shè)計(jì)和合成一系列新的4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉衍生物，并證實(shí)了這些化合物具有抗aβ聚集，抑制mao-b活性，金屬離子絡(luò)合和抗氧化活性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉類衍生物。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供上述衍生物的制備方法，以及該類化合物在制備預(yù)防和/或治療阿爾茨海默病、腦血管癡呆或重癥肌無(wú)力疾病的藥物。本發(fā)明的上述技術(shù)目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：本發(fā)明提供了一種4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉類衍生物，所述4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉類衍生物的結(jié)構(gòu)式如式(i)所示，其中，r為(ch3ch2)mn(ch2)nnh-、(ch3)mn(ch2)nnh-、(ch3)mch(ch2)nnh-、(ch3)m(ch2)nnh-或ch≡ch(ch2)nnh-；ar為4-二乙胺基苯基、4-二甲氨基苯基、吲哚-3-基或4-嗎啉基苯基；n代表1～5中任意一個(gè)整數(shù)，m代表1～5中任意一個(gè)整數(shù)。優(yōu)選地，所述r為(ch3ch2)2n(ch2)3nh-、(ch3)2n(ch2)3nh-、ch3(ch2)3nh-、(ch3)2n(ch2)2nh-、(ch3)2chch2nh、或ch≡ch(ch2)nh-。優(yōu)選地，所述4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉類衍生物的結(jié)構(gòu)式如下所示：本發(fā)明同時(shí)提供所述的4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉類衍生物的制備方法，包括以下步驟：s1.將與胺類化合物在堿性環(huán)境中進(jìn)行取代反應(yīng)，得到化合物s2.將與芳醛類化合物縮合反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物其中，r為(ch3ch2)mn(ch2)nnh-、(ch3)mn(ch2)nnh-、(ch3)mch(ch2)nnh-、(ch3)m(ch2)nnh-或ch≡ch(ch2)nnh-；ar為4-二乙胺基苯基，4-二甲氨基苯基，吲哚-3-基，4-嗎啉基苯基；n代表1～5中任意一個(gè)整數(shù)，m代表1～5中任意一個(gè)整數(shù)。優(yōu)選地，所述r為(ch3ch2)2n(ch2)3nh-、(ch3)2n(ch2)3nh-、ch3(ch2)3nh-、(ch3)2n(ch2)2nh-、(ch3)2chch2nh、或ch≡ch(ch2)nh-。優(yōu)選地，目標(biāo)產(chǎn)物通過柱層析或重結(jié)晶進(jìn)行純化。本發(fā)明同時(shí)提供所述的4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉類衍生物的應(yīng)用，具體地，是應(yīng)用于制備預(yù)防和/或治療阿爾茨海默病、腦血管癡呆或重癥肌無(wú)力疾病的藥物。所述的制備預(yù)防和/或治療阿爾茨海默病、腦血管癡呆或重癥肌無(wú)力疾病的藥物的劑型為片劑、丸劑、膠囊、注射劑、懸浮劑或乳劑。本發(fā)明提供的4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉衍生物對(duì)aβ的自聚集都有較好的抑制活性，在測(cè)試濃度20μm下，對(duì)aβ自聚集的抑制率均大于70％，其中化合物3b1表現(xiàn)出最強(qiáng)的抑制活性，達(dá)到95.3％；體外抗氧化測(cè)試結(jié)果表明本專利所述大部分化合物在體外具有較強(qiáng)的抗氧化作用，其中化合物3b1在5μm濃度下其orac值達(dá)到6.54；熒光光度法測(cè)試化合物對(duì)mao-b的抑制活性表明部分化合物對(duì)mao-b具有較好的抑制作用，其中化合物3f1、3f2和3b1具有最強(qiáng)的抑制作用，其活性強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照l(shuí)adostigil。mtt法測(cè)試化合物對(duì)sh-sy5y細(xì)胞的毒性表明本專利所述化合物具有較低的細(xì)胞毒性，其中化合物3b1對(duì)sh-sy5y細(xì)胞的ic50值為253.7μm，具有較高的安全性。另外，具有較強(qiáng)抑制aβ自聚集活性和mao-b抑制活性，較低細(xì)胞毒性的化合物3b1也具有較好的金屬絡(luò)合能力。因此本發(fā)明所述的4-柔性胺基-2-芳乙烯喹啉衍生物可作為多功能試劑用于制備抗阿爾茨海默癥的藥物。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：(1)本發(fā)明所述的化合物具有白藜蘆醇的二苯乙烯基部分，具有抑制aβ聚集和抗氧化能力。(2)本發(fā)明所述的化合物具有較好的抗氧化作用和一定的mao-b抑制活性，并且與銅離子顯示出較好的螯合作用。(3)本發(fā)明的4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉衍生物，其制備方法簡(jiǎn)單，步驟少，原料價(jià)廉，對(duì)多個(gè)阿爾茨海默癥的靶點(diǎn)均具有顯著作用，尤其是細(xì)胞毒性較小，安全性高，可以制成多種劑型的多靶點(diǎn)抗ad藥物，具有很高的醫(yī)學(xué)價(jià)值和廣闊的市場(chǎng)前景。附圖說(shuō)明圖1：化合物3b1與金屬離子作用的紫外光譜圖。具體實(shí)施方式以下通過具體的實(shí)施例和附圖進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明采用的試劑、設(shè)備和方法為本
技術(shù)領(lǐng)域：
常規(guī)市購(gòu)的試劑、設(shè)備和常規(guī)使用的方法。實(shí)施例1:4-(3-二乙胺基)-丙胺基-2-甲基喹啉(化合物2a)的合成將4-氯-2-甲基喹啉1.77g，3-二乙胺基丙胺10ml，對(duì)甲苯磺酸0.6g，置于20ml的微波反應(yīng)管中微波加熱反應(yīng)0.5h，tlc跟蹤直至反應(yīng)完全，冷卻，加入50ml水，并用氫氧化鈉水溶液調(diào)ph值為堿性，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，有機(jī)層合并，用40ml水洗一次，旋干，以二氯甲烷/甲醇(體積比50/1)作為洗脫劑通過硅膠層析純化，得到淺黃色油狀物2a；收率66％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.90(d,j＝8.3hz,1h),7.78(s,1h),7.71(d,j＝8.4hz,1h),7.57(t,j＝8.3hz,1h),7.32(t,j＝8.2hz,1h),6.23(s,1h),3.39(q,j＝10.1hz,2h),2.68(t,j＝8.3hz,2h),2.64(q,j＝16hz,4h),2.61(s,3h),1.91(m,2h),1.10(t,j＝7.1hz,6h).實(shí)施例2:化合物2b的合成合成方法與實(shí)施例一相同；所不同的是用3-二甲胺基丙胺代替3-二乙胺基丙胺，通過硅膠層析純化，得到淺黃色油狀物2b；收率64％。1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ7.89(d,j＝7.8hz,1h),7.64(d,j＝7.7hz,1h),7.53(s,1h),7.43(s,1h),7.30(s,1h),6.20(s,1h),3.31(s,2h),2.59(s,3h),2.47(s,2h),2.30(s,6h),1.84(s,2h).實(shí)施例3:化合物2c的合成合成方法與實(shí)施例一相同；所不同的是用2-二甲胺基乙胺代替3-二乙胺基丙胺，所得粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化得淺黃色液體2c；收率67％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.90(d,j＝8.3hz,1h),7.76(d,j＝8.3hz,1h),7.58(t,j＝8.3hz,1h),7.35(t,j＝8.3hz,1h),6.28(s,1h),5.84(s,1h),3.28(dd,j＝11.3,4.9hz,2h),2.66(t,j＝6.9hz,2h),2.61(s,3h),2.29(s,6h).實(shí)施例4:化合物2d的合成合成方法與實(shí)施例一相同；所不同的是用正丁胺代替3-二乙胺基丙胺，所得粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化得淺黃色液體2d；收率78％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.84(d,j＝8.4hz,1h),7.68(d,j＝8.3hz,1h),7.49(t,j＝7.5hz,1h),7.26(t,j＝7.5hz,1h),6.21(s,1h),5.27(s,1h),3.22(q,j＝12.2,6.7hz,2h),2.54(s,3h),1.70-1.61(m,2h),1.47-1.35(m,2h),0.91(t,j＝7.3hz,3h).實(shí)施例5:化合物2e的合成合成方法與實(shí)施例一相同；所不同的是用異丁胺代替3-二乙胺基丙胺，所得粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化得淺黃色液體2e；收率72％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.90-7.83(m,2h),7.53(t,j＝8.2hz,1h),7.28(t,j＝8.2hz,1h),6.28(s,1h),5.74(t,j＝5.3hz,1h),3.05(t,j＝6.9hz,2h),2.59(s,3h),2.04-1.96(m,1h),0.98(d,j＝6.7hz,6h).實(shí)施例6:化合物2f的合成合成方法與實(shí)施例一相同；所不同的是用炔丙胺代替3-二乙胺基丙胺，所得粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化得白色固體2f；收率75％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.96(d,j＝8.4hz,1h),7.74(d,j＝8.3hz,1h),7.64(t,j＝7.5hz,1h),7.41(t,j＝7.5hz,1h),6.45(s,1h),5.35(s,1h),4.16(s,2h),2.68(s,3h),2.35(s,1h).實(shí)施例7:化合物3a1的合成將化合物2a1.5mmol，4-二乙胺基苯甲醛1.5mmol，tmscl2ml，dmf5ml的混合物置于耐壓管中，加熱到100-160℃反應(yīng)，tlc跟蹤，大約反應(yīng)36h，冷卻，加水30ml，并用氫氧化鈉調(diào)ph值為堿性，有固體析出，抽濾，固體用二氯甲烷/甲醇(體積比50/3)作為洗脫劑通過硅膠層析純化，得黃色固體3a1，收率72％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.00(s,1h),7.70(d,j＝7.5hz,1h),7.60-7.53(m,2h),7.51(d,j＝8.8hz,2h),7.31(t,j＝7.6hz,1h),7.12(d,j＝8.8hz,1h),6.67(d,j＝8.9hz,2h),6.57(s,1h),3.49(dd,j＝10.0,5.5hz,2h),3.39(q,j＝7.1hz,4h),2.75-2.69(m,2h),2.66(q,j＝7.1hz,4h),1.99-1.93(m,2h),1.19(t,j＝7.1hz,6h),1.11(t,j＝7.1hz,6h).esi-msm/z:431.3[m+h]+。實(shí)施例8:化合物3a2的合成方法同實(shí)施例七，所不同的是用4-二甲氨基苯甲醛代替4-二乙胺基苯甲醛，粗產(chǎn)物通過硅膠柱層析純化，得到淡黃色固體3a2，收率74％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.96(d,j＝8.3hz,1h),7.70(d,j＝3.4hz,1h),7.59-7.57(m,1h),7.55-7.50(m,3h),7.31(t,j＝8.8hz,1h),7.12(d,j＝16.2hz,1h),6.72(d,j＝8.8hz,2h),6.57(s,1h),3.48(dd,j＝10.1,5.6hz,2h),3.00(s,6h),2.69(t,j＝3.4hz,2h),2.65(q,j＝4.4hz,4h),1.99-1.91(m,2h),1.11(t,j＝7.1hz,6h).esi-msm/z:403.5[m+h]+。實(shí)施例9:化合物3a3的合成方法同實(shí)施例七，所不同的是用吲哚-3-甲醛代替4-二乙胺基苯甲醛，粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化，得到橙黃色固體3a3，收率74％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.98(s,1h),8.08(d,j＝7.4hz,1h),8.02(d,j＝8.4hz,1h),7.88(d,j＝16.3hz,1h),7.71(d,j＝8.3hz,1h),7.58(t,j＝7.6hz,1h),7.47(s,1h),7.39(d,j＝7.6hz,1h),7.33-7.26(m,2h),7.22-7.15(m,2h),6.53(s,1h),3.48(t,j＝3.3hz,2h),2.70(t,j＝8.0hz,2h),2.67(q,j＝14.2hz,4h),1.98-1.91(m,2h),1.11(t,j＝7.1hz,6h).esi-msm/z:399.6[m+h]+。實(shí)施例10:化合物3a4的合成方法同實(shí)施例七，所不同的是用4-嗎啉基苯甲醛代替4-二乙胺基苯甲醛，粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化，得到棕黃色固體3a4，收率76％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.97(d,j＝8.4hz,1h),7.80(s,1h),7.73(d,j＝7.6hz,1h),7.61-7.52(m,4h),7.32(t,j＝11.1hz,1h),7.17(d,j＝16.2hz,1h),6.90(d,j＝8.8hz,2h),6.56(s,1h),3.89-3.83(m,4h),3.46(t,j＝5.5hz,2h),3.24-3.17(m,4h),2.71-2.63(m,6h),1.99-1.90(m,2h),1.10(t,j＝7.1hz,6h).esi-msm/z:445.4[m+h]+。實(shí)施例11:化合物3b1的合成將化合物2b1.5mmol，4-二乙胺基苯甲醛1.5mmol，tmscl2ml，dmf5ml的混合物置于耐壓管中，加熱到100-160℃反應(yīng)，tlc跟蹤，大約反應(yīng)36h，冷卻，加水30ml，并用氫氧化鈉調(diào)ph值為堿性，有固體析出。抽濾，固體用二氯甲烷/甲醇(體積比50/1)作為洗脫劑通過硅膠層析純化，得到橙黃色固體3b1，收率72％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.36(s,1h),7.71(d,j＝16.1hz,1h),7.64-7.57(m,2h),7.54(d,j＝8.9hz,2h),7.34(t,j＝4.0hz,1h),7.25(t,j＝16.1hz,1h),6.65(d,j＝8.9hz,2h),6.49(s,1h),3.57-3.50(m,2h),3.40(q,j＝8.0hz,4h),2.64(t,j＝8.0hz,2h),2.40(s,6h),2.34(s,1h),2.01-1.96(m,2h),1.20(t,j＝8.0hz,6h).esi-msm/z:403.6[m+h]+。實(shí)施例12:化合物3b2的合成方法同實(shí)施例十一，所不同的是用4-二甲氨基苯甲醛代替4-二乙胺基苯甲醛，粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化，得到棕黃色固體3b2，收率75％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.94(d,j＝8.3hz,1h),7.56-7.48(m,3h),7.45(d,j＝8.0hz,2h),7.24(t,j＝4.4hz,1h),7.05(d,j＝16.2hz,1h),6.63(d,j＝8.8hz,2h),6.49(s,1h),3.51-3.30(m,2h),2.92(s,6h),2.49(t,j＝8.0hz,2h),2.28(s,6h),2.05-1.68(m,2h).esi-msm/z:375.2[m+h]+。實(shí)施例13:化合物3b3的合成方法同實(shí)施例十一，所不同的是用吲哚-3-甲醛代替4-二乙胺基苯甲醛，粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化，得到黃色固體3b3，收率69％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ9.30(s,1h),8.03(t,j＝8.4hz,2h),7.85(d,j＝16.3hz,1h),7.71(s,1h),7.62-7.55(m,2h),7.44(s,1h),7.38(d,j＝8.4hz,1h),7.32(t,j＝8.4hz,1h),7.25(d,j＝16.3hz,1h),7.20-7.12(m,2h),6.51(s,1h),3.48-3.41(m,2h),2.57(t,j＝4.4hz,2h),2.37(s,6h),1.97-1.90(m,2h).esi-msm/z:371.3[m+h]+。實(shí)施例14:化合物3c1的合成將化合物2c1.5mmol，4-二乙胺基苯甲醛1.5mmol，tmscl2ml，dmf5ml的混合物置于耐壓管中，加熱到100-160℃反應(yīng)，tlc跟蹤，大約反應(yīng)36h，冷卻，加水30ml，并用氫氧化鈉調(diào)ph值為堿性，有固體析出，抽濾，固體用二氯甲烷/甲醇(體積比48/1)作為洗脫劑通過硅膠層析純化，得到橙黃色固體3c1，收率74％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.98(d,j＝8.4hz,1h),7.75(d,j＝8.1hz,1h),7.60-7.48(m,4h),7.36(t,j＝4.0hz,1h),7.10(d,j＝16.1hz,1h),6.75-6.59(m,3h),3.40(dd,j＝14.0,7.1hz,6h),2.73(t,j＝5.8hz,2h),2.33(s,6h),1.20(t,j＝7.0hz,6h).esi-msm/z:389.7[m+h]+。實(shí)施例15:化合物3c2的合成方法同實(shí)施例十四，所不同的是用4-二甲氨基苯甲醛代替4-二乙胺基苯甲醛，粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化，得到黃色固體3c2，收率68％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.02(d,j＝8.5hz,1h),7.76(t,j＝8.1hz,1h),7.60-7.53(m,2h),7.51(d,j＝8.7hz,2h),7.34(t,j＝7.6hz,1h),7.26(t,j＝4.3hz,1h),7.12(d,j＝16.4hz,1h),6.70(d,j＝8.2hz,2h),6.59(s,1h),3.39(s,2h),2.99(s,6h),2.71(t,j＝5.9hz,2h),2.32(s,6h).esi-msm/z:361.5[m+h]+。實(shí)施例16:化合物3d1的合成將化合物2d1.5mmol，4-二乙胺基苯甲醛1.5mmol，tmscl2ml，dmf5ml的混合物置于耐壓管中，加熱到100-160℃反應(yīng)，tlc跟蹤，大約反應(yīng)36h，冷卻，加水30ml，并用氫氧化鈉調(diào)ph值為堿性，有固體析出，抽濾，固體用二氯甲烷/甲醇(體積比55/1)作為洗脫劑通過硅膠層析純化，得到淡黃色固體3d1。收率75％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.13(s,1h),7.91(d,j＝8.2hz,1h),7.75(d,j＝8.0hz,1h),7.51(m,3h),7.29(t,j＝8.2hz,1h),7.07(d,j＝16.2hz,1h),6.64(d,j＝8.6hz,2h),6.53(s,1h),3.40-3.34(m,4h),3.27(q,j＝6.7hz,2h),1.54-1.43(m,2h),1.37-1.29(m,2h),1.17(t,j＝7.0hz,6h),0.89(d,j＝7.3hz,3h).esi-msm/z:374.6[m+h]+。實(shí)施例17:化合物3d2的合成方法同實(shí)施例十六，所不同的是用4-二甲氨基苯甲醛代替4-二乙胺基苯甲醛，粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化，得到黃色固體3d2，收率78％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.96(d,j＝2.3hz,1h),7.78-7.68(m,1h),7.61-7.50(m,3h),7.37-7.28(m,1h),7.24(d,j＝8.0hz,1h),7.10(d,j＝16.2hz,1h),6.70(d,j＝8.0hz,2h),6.55(s,1h),3.39(dd,j＝12.3,6.9hz,2h),3.02(s,6h),1.53-1.48(m,2h),1.35-1.28(m,2h),0.87(t,j＝7.3hz,3h).esi-msm/z:346.4[m+h]+。實(shí)施例18:化合物3e1的合成將化合物2e1.5mmol，4-二乙胺基苯甲醛1.5mmol，tmscl2ml，dmf5ml的混合物置于耐壓管中，加熱到100-160℃反應(yīng)，tlc跟蹤，大約反應(yīng)36h，冷卻，加水30ml，并用氫氧化鈉調(diào)ph值為堿性，有固體析出，抽濾，固體用二氯甲烷/甲醇(體積比60/1)作為洗脫劑通過硅膠層析純化，得到黃色固體3e1。收率68％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.96(d,j＝8.3hz,1h),7.66(t,j＝8.2hz,1h),7.61–7.55(m,2h),7.53–7.48(m,1h),7.35(t,j＝7.9hz,1h),7.22(d,j＝8.7hz,2h),7.08(d,j＝16.2hz,1h),6.79(d,j＝12.3hz,1h),6.67(d,j＝8.8hz,1h),5.00(s,1h),3.32(q,j＝7.0hz,4h),2.83(t,j＝6.2hz,2h),1.78-1.70(m,1h),1.13(t,j＝7.1hz,6h),0.86(d,j＝6.4hz,6h).esi-msm/z:374.7[m+h]+。實(shí)施例19:化合物3e2的合成方法同實(shí)施例十八，所不同的是用4-二甲氨基苯甲醛代替4-二乙胺基苯甲醛，粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化，得到橙黃色固體3e2，收率67％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.97(d,j＝8.3hz,1h),7.77(d,j＝7.7hz,1h),7.58-7.49(m,4h),7.32(t,j＝7.6hz,1h),7.14(d,j＝16.2hz,1h),6.68(d,j＝8.4hz,2h),6.55(d,j＝8.6hz,1h),3.21(t,j＝6.0hz,2h),2.98(s,6h),2.14-2.03(m,1h),1.08(d,j＝6.6hz,6h).esi-msm/z:346.5[m+h]+。實(shí)施例20:化合物3f1的合成將化合物2f1.5mmol，4-二乙胺基苯甲醛1.5mmol，tmscl2ml，dmf5ml的混合物置于耐壓管中，加熱到100-160℃反應(yīng)，tlc跟蹤，大約反應(yīng)36h，冷卻，加水30ml，并用氫氧化鈉調(diào)ph值為堿性，有固體析出，抽濾，固體用二氯甲烷/甲醇(體積比55/1)作為洗脫劑通過硅膠層析純化，得到黃色固體3f1，收率65％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.03(d,j＝8.5hz,1h),7.81(t,j＝8.1hz,1h),7.71-7.65(m,2h),7.59(d,j＝8.1hz,2h),7.30(t,j＝8.6hz,1h),7.22(t,j＝6.3hz,1h),7.15(d,j＝16.4hz,1h),6.68(d,j＝8.0hz,2h),6.55(s,1h),3.82(d,j＝7.6hz,2h),3.41(q，j＝8.0hz，4h)，3.05(s,1h),1.19(t，j＝7.6hz，6h).esi-msm/z:356.9[m+h]+。實(shí)施例21:化合物3f2的合成方法同實(shí)施例二十，所不同的是用4-二甲氨基苯甲醛代替4-二乙胺基苯甲醛，粗產(chǎn)物通過硅膠層析純化，得到橙黃色固體3f2，收率68％；1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.98(d,j＝8.1hz,1h),7.59-7.49(m,3h),7.42(d,j＝8.1hz,2h),7.22(t,j＝4.2hz,1h),7.09(d,j＝16.2hz,1h),6.68(d,j＝8.2hz,2h),6.50(s,1h),3.80(d,j＝7.6hz,2h),3.05(s,1h),2.97(s,6h).esi-msm/z:328.5[m+h]+。實(shí)施例22：本專利所述喹啉衍生物對(duì)aβ自聚集的抑制作用選擇實(shí)施例7～21制備的化合物，采用tht法進(jìn)行aβ自聚集抑制活性測(cè)定。1.溶液的配制：(1)20mmph7.4磷酸鹽緩沖溶液(pbs)：稱取3.618gna2hpo4和0.6027gkh2po4，加入100ml超純水，待固體完體溶解后，用超純水定容至200ml，調(diào)節(jié)溶液ph值至7.4即可。(2)aβ1-42蛋白溶液：將1mg蛋白溶解于100μl的1％nh4oh溶液中，溶液濃度為2300μm，貯存于-80℃冰箱備用。使用時(shí)用pbs緩沖液稀釋為40μm。(3)50mm甘氨酸-naoh緩沖液：稱取0.938g甘氨酸，溶解于250ml的超純水中，用1mol/lnaoh溶液調(diào)整ph至8.50，存于4℃冰箱。(4)5μm硫磺素t溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用)：稱取硫磺素t粉末2.2mg溶解于689μlph8.5的甘氨酸-naoh緩沖液中，超聲使固體完全溶解，避光放置。(5)化合物溶液的制備：用精密分析天平準(zhǔn)確稱取化合物適量,用dmso稀釋為濃度為10mm的透明溶液，使用時(shí)用磷酸緩沖液稀釋到測(cè)試濃度。2.抑制活性測(cè)試：分別取10μl40μm的aβ1-42蛋白與10μl濃度為40μm的化合物混勻，置于恒溫箱中，37℃孵育48h?？瞻讓?duì)照為10μl40μm的aβ1-42蛋白與10μl的ph7.4磷酸緩沖液混合共同孵育；陽(yáng)性對(duì)照為aβ1-42蛋白與白藜蘆醇共同孵育。72h后，將孵育液轉(zhuǎn)移至黑色96孔板中，加入180μl5μm的硫磺素t溶液，室溫下于暗處?kù)o置于反應(yīng)5min。最后，用多功能酶標(biāo)儀測(cè)量熒光吸收值，其中激發(fā)波長(zhǎng)為450nm，吸收波長(zhǎng)485nm，以陰性對(duì)照試驗(yàn)中aβ1-42與硫磺素t結(jié)合的熒光強(qiáng)度為對(duì)照，求出化合物對(duì)aβ1-42蛋白聚集的抑制率。結(jié)果如表1所示。結(jié)果表明本專利所述大部分化合物對(duì)aβ1-42具有較強(qiáng)的抑制作用，在20μm濃度下其抑制率均大于70％，其中化合物3b1表現(xiàn)出最強(qiáng)的抑制活性，達(dá)到95.3％。因此本發(fā)明所述的4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹唑啉類衍生物極具有開發(fā)前景，可用于制備抗阿爾茨海默癥的藥物。表14-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉衍生物對(duì)aβ1-42自聚集的抑制活性化合物aβ1-42自聚集抑制率化合物aβ1-42自聚集抑制率3a190.2±1.33c283.9±2.43a288.5±1.53d180.5±1.43a384.3±2.13d279.2±2.33a487.9±1.13e187.9±1.33b195.3±1.23e287.5±1.53b292.1±1.33f172.3±1.43b387.2±2.13f270.2±2.13c185.1±1.4resveratrol78.5±1.1實(shí)施例23:本專利所述4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉衍生物的體外抗氧化活性實(shí)驗(yàn)選擇實(shí)施例7～21制備的化合物，采用orac法進(jìn)行體外抗氧化活性測(cè)定。1.溶液的配制：(1)磷酸鹽緩沖液(pbs)的制備:量取適量磷酸,以超純水稀釋得到75mm磷酸溶液；稱取8.56g磷酸氫二鉀以超純水500ml溶解，以磷酸溶液調(diào)ph7.4，即得75mmph7.4的磷酸鹽緩沖液。(2)aaph溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用)精密稱取aaph0.0588g，用5.42ml磷酸鹽緩沖液溶解并定容，配置濃度為40.0mm的aaph溶液。(3)熒光素鈉溶液的制備：精密稱取熒光素鈉0.0650g以50ml高純水溶解，制成3.4mm的fl溶液，于4℃冰箱中保存，使用時(shí)吸取上述溶液2μl溶于50ml磷酸鹽緩沖溶液中，得到136nm的fl溶液。(4)trolox溶液的制備：精密稱trolox2.50mg，用移液槍量取1000μldmso溶解，即得10mmtrolox溶液。實(shí)驗(yàn)時(shí)用移液槍精密吸取troloxdmso溶液用磷酸緩沖液稀釋至測(cè)試濃度。(5)化合物溶液的制備：用精密分析天平準(zhǔn)確稱取化合物適量，用dmso稀釋為濃度為1mm的透明溶液，使用時(shí)用磷緩沖液稀釋到所用濃度。(6)抗氧化活性測(cè)試：分別吸取不同濃度的化合物或trolox20μl，fl稀釋液120μl于黑色96孔培養(yǎng)板中，用排槍混勻，37℃孵育15min后，快速加入aaph60μl，用多功能酶標(biāo)儀每隔1min進(jìn)行測(cè)定并記錄熒光值，激發(fā)波長(zhǎng)為485nm，發(fā)射波長(zhǎng)為535nm，共記錄240min。空白對(duì)照以20μlpbs代替化合物測(cè)試。曲線與坐標(biāo)間的面積(auc)通過origin軟件積分計(jì)算得到，樣品的保護(hù)面積計(jì)算公式：netauc＝aucantioxidant–aucblank，orac-fl值計(jì)算：[(aucsample-aucblank)/(auctrolox-aucblank)]/[trolox的濃度/樣品的濃度)]，樣品orac值以trolox值當(dāng)量表達(dá)。我們利用orac法測(cè)定了化合物的抗氧化活性，該法以aaph為過氧自由基來(lái)源，熒光素鈉(fl)為熒光指示劑來(lái)評(píng)價(jià)部分化合物的抗氧化能力，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以trolox的當(dāng)量來(lái)表達(dá)。結(jié)果如表2所示。結(jié)果表明本專利所述化合物在體外具有較強(qiáng)的抗氧化作用。其中化合3a1、3a2、3b1、3b2和3c1在5μm濃度下其orac值達(dá)到5以上，因此本發(fā)明所述的4-柔性胺基-2-芳乙烯喹啉衍生物可用于制備抗阿爾茨海默癥的藥物。表2orac法測(cè)試化合物的抗氧化活性實(shí)施例24:本專利所述4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉衍生物對(duì)單胺氧化酶-b的抑制作用選擇實(shí)施例7～21制備的化合物，采用熒光光度法進(jìn)行單胺氧化酶-b(mao-b)的抑制活性測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用ic50表示，以ladostigil作為陽(yáng)性對(duì)照。所有的測(cè)試均在powerwavexs2型全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀上進(jìn)行，在490nm下測(cè)定其吸光度值。數(shù)據(jù)分析利用軟件origin進(jìn)行處理。(1)藥物溶液的配制：稱取一定量的各種待分析樣品溶于二甲亞砜(dmso，dimethylsulfoxide)，配成10mm濃度，-20℃低溫冰箱保存，臨用時(shí)用磷酸鹽緩沖液(0.1mol/l，ph8.0)稀釋至所需濃度，使dmso終濃度小于或等于0.5％(v/v)。(2)酶儲(chǔ)備液的配制：?jiǎn)伟费趸竍從sigma公司購(gòu)買；稱取一定量的單胺氧化酶b，用去離子水稀釋至合適活力范圍。(3)底物儲(chǔ)備液的配制：酪胺從sigma公司購(gòu)買；稱取一定量酪胺，用磷酸鹽緩沖溶液(0.2mol/l，ph7.6)配制成2.5mm的溶液，4℃遮光保存。(4)顯色劑儲(chǔ)備液的配制：稱取一定量香草酸，4-氨基安替吡啉和辣根過氧化物酶，用磷酸鹽緩沖溶液(0.2mol/l，ph7.6)配制成顯色液(1mm香草酸，0.5mm4-氨基安替吡啉和4u/ml辣根過氧化物酶)，4℃遮光保存。(5)測(cè)試：在96孔板中，分別加入10μl酶溶液，以及0，5，10，20，35，50μl樣品溶液，在37℃孵育20min，立即加入30μl底物及10μl顯色液，37℃孵育60min后，用酶標(biāo)儀在λ＝490nm下測(cè)定其吸光度值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3所示,結(jié)果表明本專利所述的部分化合物對(duì)mao-b具有較好的抑制作用，其中化合物3f1、3f2、3b1和3a1具有最強(qiáng)的抑制作用，其活性強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照l(shuí)adostigil。因此本發(fā)明所述的4-柔性胺基-2-芳乙烯喹啉衍生物可用于制備抗阿爾茨海默癥的藥物。表34-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉衍生物對(duì)mao-b的抑制活性化合物抑制mao-b的ic50值(μm)化合物抑制mao-b的ic50值(μm)3a148.5±0.83c2113.2±1.23a266.3±1.83d1154.7±0.93a3143.5±1.13d2131.3±1.33a4132.6±1.53e1146.2±1.73b139.9±1.63e2142.7±1.13b265.6±1.43f121.6±1.23b399.8±1.23f239.5±1.73c1102.5±1.1ladostigil73.8±1.3實(shí)施例25:本專利所述喹啉衍生物3b1的金屬絡(luò)合實(shí)驗(yàn)選擇實(shí)施例11制備的化合物，采用uv-vis法進(jìn)行化合物的金屬絡(luò)合能力測(cè)定。1.溶液的配制：(1)化合物3b1溶液：稱取一定量化合物用無(wú)水乙醇配制到1mm。(2)金屬離子溶液：稱取一定量的znso4,cuso4，cacl2，kcl，nacl，mgso4，feso4用ddh2o配制成10mm，再用無(wú)水乙醇稀釋到1mm。2.化合物3b1與znso4,cuso4,cacl2，kcl，nacl，mgso4，和feso4的作用取7支1.5ml梨形管，分別加入20μl1mm3b1化合物溶液，再分別加入20μl1mmznso4,cuso4,cacl2，kcl，nacl，mgso4，和feso4溶液，最后補(bǔ)加入無(wú)水乙醇使總體積為1000μl，3b1與金屬離子的終濃度均為20μm?？瞻讓?duì)照為20μl1mm化合物溶液補(bǔ)加無(wú)水乙醇至與樣品中化合物濃度相同?；靹蚝笤谑覝叵路胖?0min，倒入石英皿用紫外-可見光譜儀掃描吸收曲線。測(cè)試溫度為室溫，測(cè)試范圍為200-600nm，波長(zhǎng)間隔為1nm，掃描速率為200nm/min，每個(gè)樣品測(cè)試三次，取平均值。結(jié)果如圖1所示。結(jié)果表明本專利所述化合物3b1具有較強(qiáng)的金屬絡(luò)合能力，并且對(duì)cu2+，fe2+具有較好的選擇性。因此本發(fā)明所述的4-柔性胺基-2-芳乙烯喹啉衍生物可絡(luò)合體內(nèi)過多的銅離子，可用于制備抗阿爾茨海默癥的藥物。實(shí)施例26:本專利所述化合物對(duì)神經(jīng)細(xì)胞毒性的研究選擇實(shí)施例7～21制備的化合物，采用mtt法進(jìn)行化合物對(duì)sh-sy5y細(xì)胞毒性測(cè)試。1.溶液配制(1)dmem培養(yǎng)基：用1000ml的燒杯將干粉培養(yǎng)基溶于300ml的超純水中，再用300ml的超純水沖洗包裝內(nèi)面兩次，合并溶液，磁力攪拌使之完全溶解。加入3.7g碳酸氫鈉，2.38ghepes，磁力攪拌使完全溶解。攪拌下用10m的氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph為7.5，于超凈臺(tái)中用0.22μm濾膜過濾除菌，于4℃冰箱中保存。使用時(shí)加入抗生素(最終濃度青霉素為100u/ml，鏈霉素100μg/ml)和血清(10％)。(2)pbs緩沖溶液：準(zhǔn)確稱取8gnacl、0.2gkh2po4和2.88gna2hpo4·12h2o，用超純水定容至1l，120℃高壓滅菌20min，4℃冰箱中保存。(3)mtt溶液：用pbs溶液配制成5g/l，用0.22μm濾膜過濾除菌，4℃冰箱中避光保存。2.神經(jīng)細(xì)胞sh-sy5y的培養(yǎng)取神經(jīng)細(xì)胞株sh-sy5y，用含有10％胎牛血清，100u/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的dmem培養(yǎng)基，在溫度為37℃、濕度飽和、環(huán)境為5％co2及95％空氣的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，2-3天傳代一次。3.神經(jīng)細(xì)胞毒性測(cè)定(1)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，用0.25％胰酶消化后，pbs洗滌兩次，使完全培養(yǎng)基重新懸浮，在顯微鏡下用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為5×104個(gè)/ml，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，100μl/孔，培養(yǎng)24h使細(xì)胞貼壁。(2)吸去原培養(yǎng)基，加入用培養(yǎng)基稀釋后的不同濃度的化合物溶液，每孔100μl，設(shè)5個(gè)復(fù)孔?？瞻准皩?duì)照組加入培養(yǎng)基代替化合物，置于37℃、5％co2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h。實(shí)驗(yàn)終止前4h加入含5mg/mlmtt的培養(yǎng)基至樣品組和對(duì)照組，100μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。(3)棄去上清，每孔加dmso100μl，振蕩使生成物formazan充分溶解，在全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀上測(cè)定每孔吸光度值(od值)，測(cè)定波長(zhǎng)570nm。各樣品中細(xì)胞存活率(％)＝(od樣品-od空白)/(od對(duì)照-od空白)×100％；各樣品細(xì)胞抑制率(％)＝100％-各樣品細(xì)胞存活率(％)再用抑制率對(duì)濃度作圖，抑制率為50％的濃度即為化合物ic50值。結(jié)果如表4所示。結(jié)果表明所測(cè)定的化合物對(duì)sh-sy5y細(xì)胞的ic50值均大于100μm，顯示出較低的神經(jīng)細(xì)胞毒性，其中對(duì)aβ1-42自聚集抑制活性最強(qiáng)的化合物3b1、3b2和3a1的ic50值分別為253.7μm，228.1μm和189.2μm。而我們前期申請(qǐng)的類似物的專利(申請(qǐng)?zhí)枺?01310268061.1)中所述的化合物對(duì)sh-sy5y細(xì)胞的ic50值均小于10μm，申請(qǐng)?zhí)枮?01410302130.0的專利中所述的化合物中，有部分化合物水溶性較差，而測(cè)定的化合物對(duì)sh-sy5y細(xì)胞的ic50值均小于60μm(測(cè)定方法同實(shí)施例26)，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5所示，可見前期專利中所述化合物具有一定的細(xì)胞毒性，尤其是2-取代芳乙烯基-n-甲基化喹啉衍生物(申請(qǐng)?zhí)枮?01310268061.1中所述的化合物)，其細(xì)胞毒很大。因此，本專利所述的化合物相對(duì)比較安全同時(shí)溶解性好，這為進(jìn)一步開發(fā)新藥提供了保障。表4mtt法測(cè)試化合物對(duì)sh-sy5y細(xì)胞的毒性表5mtt法測(cè)試申請(qǐng)?zhí)枮?01410302130.0專利中所述的化合物對(duì)sh-sy5y細(xì)胞的毒性anotdetermined結(jié)論：從表1數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)所有測(cè)試的4-柔性胺基-2-芳乙烯基喹啉衍生物對(duì)aβ的自聚集都有較好的抑制活性，在測(cè)試濃度20μm下，對(duì)aβ自聚集的抑制率均大于70％，其中化合物3b1表現(xiàn)出最強(qiáng)的抑制活性，達(dá)到95.3％；體外抗氧化測(cè)試結(jié)果表明本專利所述大部分化合物在體外具有較強(qiáng)的抗氧化作用，其中化合物3b1在5μm濃度下其orac值達(dá)到6.54；熒光光度法測(cè)試化合物對(duì)mao-b的抑制活性表明部分化合物對(duì)mao-b具有較好的抑制作用，其中化合物3f1、3f2和3b1具有最強(qiáng)的抑制作用，其活性強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照l(shuí)adostigil。mtt法測(cè)試化合物對(duì)sh-sy5y細(xì)胞的毒性表明本專利所述化合物具有較低的細(xì)胞毒性，其中化合物3b1對(duì)sh-sy5y細(xì)胞的ic50值為253.7μm，具有較高的安全性。另外，具有較強(qiáng)抑制aβ自聚集活性和mao-b抑制活性，較低細(xì)胞毒性的化合物3b1也具有較好的金屬絡(luò)合能力。因此本發(fā)明所述的4-柔性胺基-2-芳乙烯喹啉衍生物可作為多功能試劑用于制備抗阿爾茨海默癥的藥物。當(dāng)前第1頁(yè)12