本發(fā)明涉及食品技術領域，尤其是涉及一種制備長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的方法。

背景技術：

磷脂是含磷酸根的類脂化合物總稱，是細胞膜的基本組成成分，是重要的生命物質(zhì)。多不飽和脂肪酸具有促進胎兒發(fā)育、提高兒童智商、預防心血管疾病、降血脂、延緩衰老、預防老年性癡呆等生理功能。最近的研究表明，二十二碳六烯酸(dha)的生理功能因其在脂肪中的分子形式不同而不同，dha等n-3多不飽和脂肪酸在磷脂分子中比在甘油三酯分子中更利于人體消化吸收。因此，人們重視dha等n-3系列多不飽和脂肪酸(n-3pufa)與磷脂的雙重作用。dha作為脂肪酸或其甲、乙酯及甘油酯容易氧化，而富含dha的磷脂則使其氧化穩(wěn)定性增強，且磷脂分子形態(tài)可以原封不動地被細胞攝取，在細胞內(nèi)分解為dha與磷脂，顯示出增效作用，所以可以作為食品、化妝品、藥品使用。

禽蛋蛋黃是一個非常復雜的體系，約占禽蛋重的26％-33％，蛋黃中含有豐富的脂肪，其中磷脂的組分占總脂的30％以上。與其它來源的磷脂相比，蛋黃不僅磷脂含量高，同時在組分組成和功能特性上表現(xiàn)出比大豆更好的特點，是優(yōu)良的醫(yī)用、食用的磷脂來源。蛋黃含有豐富的磷脂組分，在組成和功能上蛋黃磷脂比大豆磷脂有更多的優(yōu)勢。與大豆磷脂相比，蛋黃磷脂中的卵磷脂(pc)含量更高，達到了70％以上，為大豆磷脂的3倍，同時含有大豆磷脂中沒有的神經(jīng)鞘磷脂(sm)。已有研究表明，蛋黃磷脂中的高pc組成更有利于降低人體膽固醇含量。蛋黃磷脂含有較多的長鏈多不飽和脂肪酸(pufa)，研究顯示，蛋黃磷脂脂肪酸中，高營養(yǎng)價值的pufa占30-40％，單不飽和脂肪酸(mufa)占20-25％，飽和脂肪酸(sfa)占45％。

現(xiàn)有技術大都僅涉及卵磷脂的制備，而對于長鏈多不飽和脂肪酸磷脂提取和制備、尤其是高含量的長鏈多不飽和脂肪酸磷脂提取和制備涉及較少。

技術實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術問題在于提供一種制備長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的方法，本發(fā)明制備得到的產(chǎn)品中長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的含量高。

本發(fā)明提供了一種制備長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的方法，包括：

a)將禽蛋蛋黃經(jīng)超臨界co2萃取，得到脫去蛋黃油的脫油蛋黃粉；

所述萃取的溫度為45～50℃；所述萃取的壓力為26～50mpa；

b)將所述脫油蛋黃粉采用乙醇提取、濃縮、干燥，得到長鏈多不飽和脂肪酸磷脂。

優(yōu)選的，步驟a)所述超臨界co2萃取包括靜態(tài)萃取和動態(tài)萃??；所述靜態(tài)萃取的溫度為45～50℃；所述靜態(tài)萃取的壓力為26～50mpa；靜態(tài)萃取的時間為30～90min；所述動態(tài)萃取的溫度為45～50℃；所述動態(tài)萃取的壓力為26～50mpa；動態(tài)萃取的時間為15～60min。

優(yōu)選的，步驟a)所述超臨界co2萃取包括動態(tài)萃??；所述動態(tài)萃取的溫度為45～50℃；所述動態(tài)萃取的壓力為26～50mpa；動態(tài)萃取的時間為15～60min。

優(yōu)選的，步驟b)所述乙醇為體積百分含量為80％～100％的乙醇。

優(yōu)選的，所述脫油蛋黃粉與乙醇的質(zhì)量比為1：(5～30)。

優(yōu)選的，步驟b)所述提取為超聲提取；所述超聲的功率為50～900w。

優(yōu)選的，所述提取溫度為20℃～50℃；所述提取時間為1～3h。

優(yōu)選的，所述禽蛋蛋黃為dha和epa總量在3％以上的禽蛋蛋黃粉。

優(yōu)選的，步驟b)所述濃縮為減壓濃縮；所述濃縮的溫度為40～60℃；所述濃縮的真空度為-0.05～-0.1mpa；所述濃縮后的濃縮液為濃縮前濃縮液質(zhì)量的1/5～1/50。

優(yōu)選的，所述步驟b)所述干燥為真空干燥或真空冷凍干燥。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明提供了一種制備長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的方法，包括：a)將禽蛋蛋黃經(jīng)超臨界co2萃取，得到脫去蛋黃油的蛋黃粉；所述萃取的溫度為45～50℃；所述萃取的壓力為26～50mpa；b)將所述脫油蛋黃粉采用乙醇提取、濃縮、干燥，得到長鏈多不飽和脂肪酸磷脂。本發(fā)明先采用超臨界co2萃取脫除禽蛋蛋黃粉里面的蛋黃油，而后采用乙醇提取最后得到產(chǎn)品中總磷脂含量高，并且其中長鏈多不飽和脂肪酸磷脂含量高，本發(fā)明的方法簡單，效果好。

具體實施方式

甘油c1和c2上的羥基被脂肪酸酯化，c3上的羥基被磷酸酯化，磷酸又與一極性醇(x—oh)連接，這就構成甘油磷脂。分子的非極性尾含有兩個脂肪酸長鏈，甘油碳架上c1連接的常是飽和脂肪酸，其c2則常被不飽和脂肪酸占據(jù)。本發(fā)明所述的多不飽和脂肪酸磷脂，是指c1和c2上含有多不飽和脂肪酸的磷脂。

本發(fā)明提供了一種制備長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的方法，包括：

a)將禽蛋蛋黃經(jīng)超臨界co2萃取，得到脫去蛋黃油的蛋黃粉；

所述萃取的溫度為45～50℃；所述萃取的壓力為26～50mpa；

b)將所述脫油蛋黃粉采用乙醇提取、濃縮、干燥，得到長鏈多不飽和脂肪酸磷脂。

本發(fā)明首先將禽蛋蛋黃經(jīng)超臨界co2萃取，得到脫去蛋黃油的蛋黃粉。

本發(fā)明的禽蛋優(yōu)選為雞蛋，包括但不限于鴨蛋、鵝蛋等。本發(fā)明對于所述禽蛋蛋黃的具體狀態(tài)不進行限定，優(yōu)選為禽蛋蛋黃粉。

本發(fā)明所述禽蛋蛋黃粉的來源不進行限定，可以為市售，也可以按照本發(fā)明的方法制備，優(yōu)選具體為：

將禽蛋蛋黃殺菌后，噴霧干燥，得到禽蛋蛋黃粉；所述殺菌優(yōu)選為巴士殺菌。

本發(fā)明的方法適用于所有的禽蛋的蛋黃粉中多不飽和脂肪酸磷脂的提??；優(yōu)選采用禽蛋蛋黃粉為dha和epa總量在3％以上的禽蛋蛋黃粉。

本發(fā)明的禽蛋蛋黃經(jīng)超臨界co2萃取，優(yōu)選為：將禽蛋蛋黃粉經(jīng)超臨界co2靜態(tài)萃取和動態(tài)萃取，得到脫去蛋黃油的蛋黃粉。更優(yōu)選具體為：將禽蛋蛋黃粉裝入萃取釜中，通入壓縮co2，控制壓力，關閉萃取釜前后閥門，控制溫度進行靜態(tài)萃??；而后打開萃取釜閥門，通入壓縮co2，控制壓力，控制溫度進行動態(tài)萃取。

本發(fā)明對于所述超臨界co2萃取的萃取設備不進行限定，本領域技術人員熟知的即可，優(yōu)選在超臨界萃取儀即可。本發(fā)明的萃取反應優(yōu)選在所述超臨界萃取儀的萃取斧中進行。

本發(fā)明所述超臨界co2萃取包括靜態(tài)萃取和動態(tài)萃?。凰鲮o態(tài)萃取的溫度優(yōu)選為45～50℃；更優(yōu)選為46～50℃；最優(yōu)選為47～50℃；所述靜態(tài)萃取的壓力優(yōu)選為26～50mpa；更優(yōu)選為28～48mpa；所述靜態(tài)萃取的時間優(yōu)選為30～90min；更優(yōu)選為30～80min；最優(yōu)選為30～70min；

所述動態(tài)萃取的溫度優(yōu)選為45～50℃；更優(yōu)選為46～50℃；最優(yōu)選為47～50℃；所述動態(tài)萃取的壓力優(yōu)選為26～50mpa；更優(yōu)選為28～48mpa；所述動態(tài)萃取的時間優(yōu)選為15～60min。

本發(fā)明也可以根據(jù)待提取物料的多少采用動態(tài)萃取的方式，此時，

所述超臨界co2萃取包括動態(tài)萃??；所述動態(tài)萃取的溫度優(yōu)選為45～50℃；所述動態(tài)萃取的壓力優(yōu)選為26～50mpa；動態(tài)萃取的時間優(yōu)選為15～60min。

采用上述萃取方式可以很好的去除蛋黃中的蛋黃油，采用本發(fā)明的靜態(tài)萃取結合動態(tài)萃取的方式可以去除30％～45％的蛋黃油。

完成超臨界co2萃取，得到脫去蛋黃油的蛋黃粉后，將所述脫油蛋黃粉采用乙醇提取，過濾，得到提取液。

優(yōu)選具體為將所述蛋黃粉與乙醇混合，超聲提取，過濾，得到提取液。

在本發(fā)明中，所述乙醇為體積百分含量優(yōu)選為80％～100％的乙醇；更優(yōu)選為85％～100％的乙醇；最優(yōu)選為90％～100％的乙醇。

本發(fā)明對于所述乙醇的純度和來源不進行限定，分析純即可，市售即可。

所述蛋黃粉與乙醇的質(zhì)量比優(yōu)選為1：(5～30)；更優(yōu)選為1：(7～30)；最優(yōu)選為1：(10～30)。

混合后超聲提取，本發(fā)明對于所述超聲的具體儀器不進行限定，本領域技術人員熟知的即可；所述超聲的功率優(yōu)選為50～900w；更優(yōu)選為100～900w；最優(yōu)選為500～900w。

所述超聲提取的溫度優(yōu)選為20℃～50℃；更優(yōu)選為25℃～50℃；所述提取時間優(yōu)選為1～3h。

超聲提取后過濾，本發(fā)明對于所述過濾的具體方式不進行限定，本領域技術人員熟知的即可。

過濾后得到濾液，濾液經(jīng)減壓濃縮得到濃縮液。

本發(fā)明對于所述減壓濃縮的具體儀器規(guī)格不進行限定，本領域技術人員熟知的即可。

在本發(fā)明中，所述濃縮的溫度優(yōu)選為40～60℃；所述濃縮的真空度優(yōu)選為-0.05～-0.1mpa；所述濃縮后的濃縮液優(yōu)選為濃縮前濃縮液質(zhì)量的1/5～1/50。

得到濃縮液后，將濃縮液干燥，得到長鏈多不飽和脂肪酸磷脂。

在本發(fā)明中，所述干燥優(yōu)選為真空干燥或真空冷凍干燥；更優(yōu)選為真空冷凍干燥。

本發(fā)明對于所述真空干燥的具體參數(shù)和真空冷凍干燥的具體儀器和參數(shù)不進行限定，本領域技術人員熟知的即可。

本發(fā)明提供了一種制備長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的方法，包括：a)將禽蛋蛋黃粉經(jīng)超臨界co2萃取，得到脫去蛋黃油的蛋黃粉；所述萃取的溫度為45～50℃；所述萃取的壓力為26～50mpa；b)將所述脫油蛋黃粉采用乙醇提取、濃縮、干燥，得到長鏈多不飽和脂肪酸磷脂。本發(fā)明先采用超臨界co2萃取脫除禽蛋蛋黃粉里面的蛋黃油，而后采用乙醇提取最后得到產(chǎn)品中總磷脂含量高，并且其中長鏈多不飽和脂肪酸磷脂含量高，本發(fā)明的方法簡單，效果好。

本發(fā)明優(yōu)選采用如下方式對制備得到的長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的結構和收率進行測定：

1、蛋黃和磷脂提取物中磷脂含量的檢測方法：

標準曲線：以m(卵磷脂):m(腦磷脂)＝3:1配成混合脂標準品，(卵磷脂11.4mg、腦磷脂3.8mg用氯仿定容至50ml)，搖勻靜置備用，按不同的濃度進行檢測，得到硫氰亞鐵銨法測定磷脂的標準曲線與回歸方程，具體方法如下：分別取標準品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml用氯仿定容至3ml，加入2ml硫氰亞鐵銨顯色劑，充分震蕩混勻后，在30℃水浴中放置30min，取下相液在475nm處測定吸光值。以標準濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，作出標準曲線。

本發(fā)明制備得到的長鏈多不飽和脂肪酸磷脂產(chǎn)品檢測：取0.2g產(chǎn)品，用氯仿定容至50ml，取產(chǎn)品溶液0.1ml用氯仿定容至3ml，加入2ml硫氰亞鐵銨顯色劑，充分震蕩混勻后，在30℃水浴中放置30min，取下相液在475nm處測定吸光值，將吸光值代入混合標準品的標準曲線即可得到蛋黃磷脂濃度，通過產(chǎn)品稀釋倍數(shù)和樣品質(zhì)量換算，從而求得產(chǎn)品中磷脂含量。

2、磷脂中dha的測定

磷脂樣品中dha、epa等多不飽和脂肪酸的測定：制備得到的長鏈多不飽和脂肪酸磷脂產(chǎn)品采用gb5009.168-2016食品安全國家標準食品中脂肪酸的測定。

為了進一步說明本發(fā)明，以下結合實施例對本發(fā)明提供的制備長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的方法進行詳細描述。

實施例1

富含長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的雞蛋蛋黃(dha、epa等總含量大于3％)為原料，裝入超臨界萃取儀萃取釜中，通入壓縮co2，壓力升至26mpa，關閉萃取釜前后閥門，溫度控制至45℃，靜態(tài)萃取30min；

靜態(tài)萃取完成后，打開萃取釜前后閥門，通入壓縮co2，保持壓力26mpa，控制溫度45℃，動態(tài)萃取15min，可以除去占蛋黃粉質(zhì)量30.00％的蛋黃油；

完成超臨界co2去除蛋黃油后，將脫油蛋黃粉與100％乙醇按1:5比例混合均勻，超聲波(50w-900w)提取1小時，保持溫度20℃，過濾，得到提取液；

將過濾液經(jīng)減壓濃縮，溫度低于60℃，真空度為-0.05mpa～-0.1mpa，濃縮至提取液的1/50，得到濃縮液；

濃縮液進行真空干燥，得到長鏈多不飽和脂肪酸磷脂產(chǎn)品，含dha、epa等總長鏈多不飽和脂肪酸磷脂含量20.15％，總磷脂含量85.19％。

實施例2

富含長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的雞蛋蛋黃(dha、epa等總含量大于3％)為原料，裝入超臨界萃取儀萃取釜中，通入壓縮co2，壓力升至30mpa，關閉萃取釜前后閥門，溫度控制至50℃，靜態(tài)萃取60min；

靜態(tài)萃取完成后，打開萃取釜前后閥門，通入壓縮co2，保持壓力30mpa，控制溫度45℃，動態(tài)萃取60min，可以除去占蛋黃粉質(zhì)量40.38％的蛋黃油；

完成超臨界co2去除蛋黃油后，將脫油蛋黃粉與90％乙醇按1:20比例混合均勻，超聲波(600w)提取2小時，保持溫度30℃，過濾，得到提取液；

將過濾液經(jīng)減壓濃縮，溫度低于60℃，真空度為-0.05mpa～-0.1mpa，濃縮至提取液的1/5，得到濃縮液；

濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥，得到長鏈多不飽和脂肪酸磷脂產(chǎn)品含dha、epa等總長鏈多不飽和脂肪酸磷脂22.34％，總磷脂含量87.45％。

實施例3

富含長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的雞蛋蛋黃(dha、epa等總含量大于3％)為原料，裝入超臨界萃取儀萃取釜中，通入壓縮co2，壓力升至45mpa，關閉萃取釜前后閥門，溫度控制至50℃，靜態(tài)萃取90min；

靜態(tài)萃取完成后，打開萃取釜前后閥門，通入壓縮co2，保持壓力45mpa，控制溫度50℃，動態(tài)萃取60min，可以除去占蛋黃粉質(zhì)量44.98％的蛋黃油；

完成超臨界co2去除蛋黃油后，將脫油蛋黃粉與90％乙醇按1:30比例混合均勻，超聲波(900w)提取3小時，保持溫度50℃，過濾，得到提取液；

將過濾液經(jīng)減壓濃縮，溫度低于60℃，真空度為-0.05mpa～-0.1mpa，濃縮至提取液1/10，得到濃縮液；

濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥，得到長鏈多不飽和脂肪酸磷脂，含dha、epa等磷脂含量25.38％，總磷脂含量88.98％。

實施例4

富含長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的雞蛋蛋黃粉(dha、epa等總含量大于3％)為原料，裝入超臨界萃取儀萃取釜中，通入壓縮co2，壓力升至50mpa，關閉萃取釜前后閥門，溫度控制至50℃，靜態(tài)萃取90min；

靜態(tài)萃取完成后，打開萃取釜前后閥門，通入壓縮co2，保持壓力50mpa，控制溫度50℃，動態(tài)萃取60min，可以除去占蛋黃粉質(zhì)量44.48％的蛋黃油；

完成超臨界co2去除蛋黃油后，將脫油蛋黃粉與95％乙醇按1:10比例混合均勻，超聲波(800w)提取3小時，保持溫度40℃，過濾，得到提取液；

將過濾液經(jīng)減壓濃縮，溫度低于60℃，真空度為-0.05mpa～-0.1mpa，濃縮至提取液的1/8，得到濃縮液；

濃縮液真空冷凍干燥，得到長鏈多不飽和脂肪酸磷脂，含dha、epa等磷脂含量28.48％，總磷脂含量87.46％。

比較例1

富含長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的雞蛋蛋黃粉(dha、epa等總含量大于3％)為原料，裝入超臨界萃取儀萃取釜中，通入壓縮co2，壓力升至26mpa，關閉萃取釜前后閥門，溫度控制至45℃，靜態(tài)萃取30min；

靜態(tài)萃取完成后，打開萃取釜前后閥門，通入壓縮co2，保持壓力26mpa，控制溫度45℃，動態(tài)萃取15min，可以除去占蛋黃粉質(zhì)量30.00％的蛋黃油；完成超臨界co2去除蛋黃油后，將脫油蛋黃粉采用夾帶1％乙醇超臨界co2萃取，保持壓力30mpa，控制溫度45℃，動態(tài)萃取120min，萃取液進行真空冷凍干燥，得到長鏈多不飽和脂肪酸磷脂產(chǎn)品，含dha、epa等總長鏈多不飽和脂肪酸磷脂含量20.16％，總磷脂含量80.13％。

比較例2

富含長鏈多不飽和脂肪酸磷脂的雞蛋蛋黃粉(dha、epa等總含量大于3％)為原料，以料液比1:10的比例，加入95％乙醇水溶液，在45℃溫度下提取120min，提取液經(jīng)抽濾得到濾液，濾液經(jīng)真空旋轉蒸發(fā)(蒸發(fā)溫度為50℃)，采用1:10丙酮沖洗，收集沉淀，并將沉淀經(jīng)真空冷凍干燥，得到長鏈多不飽和脂肪酸磷脂產(chǎn)品，含dha、epa等總長鏈多不飽和脂肪酸磷脂含量19.38％，總磷脂含量78.56％。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。