本發(fā)明涉及一種人參三醇皂苷的制備方法，屬于植物提取物制備領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

三七、人參、西洋參是我國(guó)名貴中藥材，主要成分為人參皂苷，目前為止，已從三七的不同部位（根、莖葉、花蕾、種子等）分離得到70余種單體皂苷，這些單體皂苷成分按其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)可分為達(dá)瑪烷型的20（s）-原人參二醇（panaxadiolsaponin,pds）和20（s）-原人參三醇anaxtriolsaponin,pts)兩種類型。三七、人參、西洋參中的原人參二醇型皂苷主要由人參皂苷rb1和rd組成，原人參三醇型皂苷主要由人參皂苷re、rg1，三七則還包括三七皂苷r1組份。

以rg1為主要成分的人參三醇皂苷能夠抑制血小板聚集，降低腦血管阻力，改善微循環(huán)及腦功能障礙，降低血粘度等作用；其作用機(jī)理是能提高血小板內(nèi)camp的含量，減少血栓素a2的生產(chǎn)，從而抑制鈣離子、5-ht等促血小板聚集的活性物質(zhì)釋放，發(fā)揮抗血小板凝集作用。人參三醇皂苷還可抑制中樞交感神經(jīng)系統(tǒng)，能顯著抑制大鼠內(nèi)臟交感神經(jīng)傳出放電，同時(shí)減慢心率。

專利、文獻(xiàn)報(bào)道中三七、人參、西洋參根類藥材中人參三醇皂苷分離主要通過(guò)大孔樹(shù)脂吸附獲得總皂苷，總皂苷再經(jīng)廣普樹(shù)脂大量洗脫液梯度洗脫得低含量二醇、三醇粗品，或采用硅膠柱、凝膠柱分離純化得到人參三醇皂苷。這些文獻(xiàn)中，吸附樹(shù)脂采用的大多為大孔徑低選擇性的廣普苯乙烯非極性大孔吸附樹(shù)脂，該類樹(shù)脂平均孔徑在120μm左右，脫糖功能較強(qiáng)，然而這類樹(shù)脂用于分離化學(xué)結(jié)構(gòu)差別不大，分子量差距200左右的人參三醇皂苷、人參二醇皂苷就算采用梯度洗脫分離效果也較差，二醇皂苷中經(jīng)常夾帶三醇皂苷，三醇皂苷中經(jīng)常夾帶二醇皂苷，所得人參三醇皂苷產(chǎn)品含量?jī)H能到達(dá)60-70%含量，達(dá)不到較好的分離去除人參二醇皂苷效果；精細(xì)分離制備高純度三醇皂苷則主要通過(guò)硅膠柱層析法或制備色譜法，該類方法雖能得到較高純度產(chǎn)品，然硅膠很難重復(fù)利用，有機(jī)溶劑洗脫使用成本較高，硅膠死吸附量不低于20%，所得產(chǎn)品雖純度可達(dá)95%以上，但存在收率低，生產(chǎn)成本高、生產(chǎn)周期長(zhǎng)等弊端很難應(yīng)用于工業(yè)化；總之，現(xiàn)有人參三醇皂苷提取分離技術(shù)普遍存在選擇性差、分離純度低，成本高，收率低、不適于工業(yè)化生產(chǎn)的缺點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種針對(duì)性強(qiáng)、分離效果好、收率高，純度高的人參三醇皂苷的制備方法。

本發(fā)明方法具體步驟如下：

（1）以三七、西洋參或人參為原料，粉碎后采用質(zhì)量百分比濃度60-80%的乙醇溶液冷浸提取，過(guò)濾藥液后濾渣再提取2次，合并提取液，減壓濃縮回收有機(jī)溶劑，濃縮液用純凈水稀釋后硅藻土過(guò)濾，收集濾液；

（2）將步驟（1）濾液過(guò)50-70μm孔徑大孔吸附樹(shù)脂柱吸附人參三醇皂苷，上樣完水洗至流出液為無(wú)色，然后用質(zhì)量百分比濃度60-80%的乙醇溶液解析人參三醇皂苷，收集解析液，濃縮干燥得人參三醇皂苷粗品；

（3）向步驟（2）人參三醇皂苷粗品中加入其質(zhì)量3-4倍的質(zhì)量百分比濃度95-100%的甲醇或95-100%乙醇溶液，溶解后在溶液中加溶液質(zhì)量4-5倍的乙酸乙酯或乙腈，攪拌混勻后靜置2-4小時(shí)，棄沉淀收集上清液，濃縮回收有機(jī)溶劑，加純凈水稀釋濃縮液得人參三醇皂苷粗品溶液；

（4）取5-10倍人參三醇皂苷粗品質(zhì)量的色譜樹(shù)脂填料濕法裝柱，水洗至流出液為無(wú)色，用質(zhì)量百分比濃度35-45%的乙醇溶液洗脫人參三醇皂苷，收集洗脫液，tlc檢測(cè)洗脫到無(wú)人參三醇皂苷結(jié)束洗脫，收集合并洗脫液得人參三醇皂苷溶液；

（5）在步驟（4）人參三醇皂苷溶液中加入乙醇使得人參三醇溶液中乙醇含量為質(zhì)量百分比50%后，備用；

（6）將步驟（5）溶液過(guò)聚酰胺樹(shù)脂柱或陰離子交換樹(shù)脂柱脫去黃酮類雜質(zhì)，收集流出液；流出液濃縮回收乙醇后，加入濃縮物質(zhì)量0.1-0.5%的活性炭加熱煮沸半小時(shí)脫色，濃縮干燥即得白色人參三醇皂苷粉末。

所述步驟（1）中第一次提取添加生藥質(zhì)量7-8倍的乙醇溶液，第二次提取添加生藥質(zhì)量5-6倍的乙醇溶液，第三次提取添加生藥質(zhì)量3-4倍的乙醇溶液，每次提取時(shí)間12h。

所述步驟（1）中濃縮液用純凈水稀釋到4-5倍生藥量。

所述步驟（2）中大孔吸附樹(shù)脂用量為生藥量的1.5-2倍，上柱流速為2.5-3柱體積/h。

所述步驟（2）中50-70μm孔徑大孔吸附樹(shù)脂型號(hào)為zgcad45、iiz-803或d4006。

所述步驟（3）中濃縮液用純凈水稀釋到人參三醇皂苷粗品質(zhì)量的4-5倍。

所述色譜樹(shù)脂為r型樹(shù)脂chroma-r204或prp樹(shù)脂（型號(hào)512a、512b、512c、0831）。

所述陰離子交換樹(shù)脂型號(hào)為d941或d900。

本發(fā)明采用孔徑合理的大孔吸附樹(shù)脂粗分人參皂苷三醇、人參皂苷二醇，事辦功倍，人參二醇皂苷分子量大于人參三醇皂苷，選用均粒的50-70μm孔徑的均粒非極性吸附樹(shù)脂則具有較好分離功能，這類樹(shù)脂能較好的完全吸附小分子量的人參三醇皂苷，人參二醇皂苷分子量較大不易吸附，上柱洗脫時(shí)易隨水流出，該方法克服傳統(tǒng)方法采用廣普樹(shù)脂梯度解析分離人參三醇皂苷時(shí)大體積洗脫劑的使用、耗時(shí)耗力等問(wèn)題；二醇皂苷和三醇皂苷由于化學(xué)結(jié)構(gòu)式差異導(dǎo)致三醇皂苷在一定比例的乙腈水、乙腈甲醇、乙腈乙醇、乙酸乙酯甲醇、乙酸乙酯乙醇溶液中能溶解，而人參二醇皂苷則不溶，運(yùn)用此法可進(jìn)一步純化分離人參三醇皂苷；本發(fā)明采用的色譜樹(shù)脂填料價(jià)格較低，通常200-400元/公斤，且具有一定c-18色譜柱分離功能，其上柱量大，使用低級(jí)醇即可洗脫得到高純度人參三醇皂苷，可反復(fù)使用，大大降低生產(chǎn)成本。

通過(guò)本發(fā)明方法的實(shí)施可克服現(xiàn)有技術(shù)收率低、生產(chǎn)成本高、純度低、生產(chǎn)周期長(zhǎng)等弊端，獲得高純度的人參三醇皂苷，且本發(fā)明方法簡(jiǎn)單易操作，成本低，適于工業(yè)化生產(chǎn)，環(huán)保無(wú)污染。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于所述內(nèi)容。

實(shí)施例1：人參三醇皂苷的制備方法如下：

（1）以人參為原料粉碎至60目后，在原料中添加生藥質(zhì)量7倍質(zhì)量百分比濃度60%的乙醇溶液在室溫下冷浸提取12h，過(guò)濾后在濾渣添加生藥質(zhì)量5倍質(zhì)量百分比濃度60%的乙醇溶液提取12h，過(guò)濾后在濾渣添加生藥質(zhì)量3倍質(zhì)量百分比濃度60%的乙醇溶液提取12h；

合并3次提取液減壓濃縮回收溶劑，濃縮液用純凈水稀釋到5倍生藥量后硅藻土過(guò)濾，收集濾液；

（2）將步驟（1）濾液過(guò)50-60μm孔徑大孔吸附樹(shù)脂（zgcad45）柱吸附人參三醇皂苷，上樣完水洗到流出液無(wú)色，然后用質(zhì)量百分比濃度60%的乙醇溶液解析人參三醇皂苷，收集解析液，濃縮干燥得人參三醇皂苷粗品，其中大孔吸附樹(shù)脂用量為生藥量的1.5倍，上柱流速為2.5柱體積/h；

（3）向步驟（2）人參三醇皂苷粗品中加入其質(zhì)量3倍的質(zhì)量百分比濃度95%的甲醇溶液溶解，然后在溶液中加溶液質(zhì)量4倍的乙酸乙酯，攪拌混勻后靜置2小時(shí)，棄沉淀收集上清液，濃縮回收有機(jī)溶劑，加純凈水稀釋濃縮液到人參三醇皂苷粗品的5倍質(zhì)量得人參三醇皂苷粗品溶液；

（4）取質(zhì)量6倍三醇皂苷粗品質(zhì)量的色譜樹(shù)脂填料（r型樹(shù)脂chroma-r204，400目）濕法裝柱，水洗至流出液為無(wú)色，用質(zhì)量百分比35%的乙醇溶液洗脫人參三醇皂苷，收集洗脫液，tlc檢測(cè)洗脫到無(wú)人參三醇皂苷斑點(diǎn)結(jié)束洗脫，收集合并洗脫液得人參三醇皂苷溶液；

（5）將步驟（4）所得色譜樹(shù)脂解析液加入乙醇使得人參三醇皂苷溶液中乙醇含量為質(zhì)量百分比50%后，備用；

（6）將步驟（5）三醇皂苷溶液過(guò)聚酰胺樹(shù)脂柱脫去黃酮類雜質(zhì)，收集流出液；流出液濃縮回收乙醇后，加入濃縮物質(zhì)量0.1%的針劑用脫色活性炭加熱煮沸半小時(shí)脫色，濃縮干燥即得白色人參三醇皂苷粉末，收率91%，人參三醇皂苷純度98.6%（以re、rg1計(jì)）。

實(shí)施例2：人參三醇皂苷的制備方法如下：

（1）以西洋參為原料粉碎至60目后，在原料中添加生藥質(zhì)量8倍質(zhì)量百分比濃度70%的乙醇溶液在室溫下冷浸提取12h，過(guò)濾后在濾渣添加生藥質(zhì)量6倍質(zhì)量百分比濃度70%的乙醇溶液提取12h，過(guò)濾后在濾渣添加生藥質(zhì)量4倍質(zhì)量百分比濃度70%的乙醇溶液提取12h；

合并3次提取液減壓濃縮回收溶劑，濃縮液用純凈水稀釋到4倍生藥量后硅藻土過(guò)濾，收集濾液；

（2）將步驟（1）濾液過(guò)50-65μm孔徑大孔吸附樹(shù)脂（iiz-803）柱吸附人參三醇皂苷，上樣完水洗到流出液無(wú)色，然后用質(zhì)量百分比濃度80%的乙醇溶液解析人參三醇皂苷，收集解析液，濃縮干燥得人參三醇皂苷粗品，其中大孔吸附樹(shù)脂用量為生藥量的2倍，上柱流速為3柱體積/h；

（3）向步驟（2）人參三醇皂苷粗品中加入其質(zhì)量4倍的質(zhì)量百分比濃度100%的乙醇溶解，然后在溶液中加溶液質(zhì)量5倍的乙酸乙酯，攪拌混勻后靜置3小時(shí)，棄沉淀收集上清液，濃縮回收有機(jī)溶劑，加純凈水稀釋濃縮液到人參三醇皂苷粗品的4倍質(zhì)量得人參三醇皂苷粗品溶液；

（4）取質(zhì)量8倍人參三醇皂苷粗品質(zhì)量的色譜樹(shù)脂填料（prp512b、400目）濕法裝柱，水洗至流出液為無(wú)色，用質(zhì)量百分比40%的乙醇溶液洗脫人參三醇皂苷，收集洗脫液，tlc檢測(cè)洗脫到無(wú)人參三醇皂苷斑點(diǎn)結(jié)束洗脫，收集合并洗脫液得人參三醇皂苷溶液；

（5）將步驟（4）所得色譜樹(shù)脂解析液加入乙醇使得人參三醇皂苷溶液中乙醇含量為質(zhì)量百分比50%后，備用；

（6）將步驟（5）溶液過(guò)陰離子交換樹(shù)脂柱（d941）脫去黃酮類雜質(zhì)，收集流出液；流出液濃縮回收乙醇后，加入濃縮物質(zhì)量0.2%的針劑用脫色活性炭加熱煮沸半小時(shí)脫色，濃縮干燥即得白色人參三醇皂苷粉末，收率92%，人參三醇皂苷純度98.1%（以re、rg1計(jì)）。

實(shí)施例3：人參三醇皂苷的制備方法如下：

（1）以三七為原料粉碎至60目后，在原料中添加生藥質(zhì)量7.5倍質(zhì)量百分比濃度75%的乙醇溶液在室溫下冷浸提取12h，過(guò)濾后在濾渣添加生藥質(zhì)量5倍質(zhì)量百分比濃度75%的乙醇溶液提取12h，過(guò)濾后在濾渣添加生藥質(zhì)量3倍質(zhì)量百分比濃度75%的乙醇溶液提取12h；

合并3次提取液減壓濃縮回收溶劑，濃縮液用純凈水稀釋到5倍生藥量后硅藻土過(guò)濾，收集濾液；

（2）將步驟（1）濾液過(guò)65-70μm孔徑大孔吸附樹(shù)脂（d4006）柱吸附人參三醇皂苷，上樣完水洗到流出液無(wú)色，然后用質(zhì)量百分比濃度70%的乙醇溶液解析人參三醇皂苷，收集解析液，濃縮干燥得人參三醇皂苷粗品，其中大孔吸附樹(shù)脂用量為生藥量的1.7倍，上柱流速為2.7柱體積/h；

（3）向步驟（2）人參三醇皂苷粗品中加入其質(zhì)量3倍的質(zhì)量百分比濃度100%的甲醇溶解，然后在溶液中加溶液質(zhì)量4倍的乙腈，攪拌混勻后靜置4小時(shí)，棄沉淀收集上清液，濃縮回收有機(jī)溶劑，加純凈水稀釋濃縮液到人參三醇皂苷粗品的5倍質(zhì)量得人參三醇皂苷粗品溶液；

（4）取質(zhì)量6倍三醇皂苷粗品質(zhì)量的色譜樹(shù)脂填料（prp-0831、600目）濕法裝柱，水洗至流出液為無(wú)色，用質(zhì)量百分比45%的乙醇溶液洗脫人參三醇皂苷，收集洗脫液，tlc檢測(cè)洗脫到無(wú)人參三醇皂苷斑點(diǎn)結(jié)束洗脫，收集合并洗脫液得人參三醇皂苷溶液；

（5）將步驟（4）所得色譜樹(shù)脂解析液加入乙醇使得人參三醇皂苷溶液中乙醇含量為質(zhì)量百分比50%后，備用；

（6）將步驟（5）溶液過(guò)陰離子交換樹(shù)脂柱（d900）脫去酸性色素和黃酮類雜質(zhì)，收集流出液；流出液濃縮回收乙醇后，加入濃縮物質(zhì)量0.4%的針劑用脫色活性炭加熱煮沸半小時(shí)脫色，濃縮干燥即得白色人參三醇皂苷粉末，收率95%，人參三醇皂苷純度96.6%（以r1、re、rg1計(jì)）。

實(shí)施例4：人參三醇皂苷的制備方法如下：

（1）以三七為原料粉碎至60目后，在原料中添加生藥質(zhì)量7倍質(zhì)量百分比濃度80%的乙醇溶液在室溫下冷浸提取12h，過(guò)濾后在濾渣添加生藥質(zhì)量5倍質(zhì)量百分比濃度80%的乙醇溶液提取12h，過(guò)濾后在濾渣添加生藥質(zhì)量3倍質(zhì)量百分比濃度80%的乙醇溶液提取12h；

合并3次提取液減壓濃縮回收溶劑，濃縮液用純凈水稀釋到4倍生藥量后硅藻土過(guò)濾，收集濾液；

（2）將步驟（1）濾液過(guò)65-70μm孔徑大孔吸附樹(shù)脂（d4006）柱吸附人參三醇皂苷，上樣完水洗到流出液無(wú)色，然后用質(zhì)量百分比濃度80%的乙醇溶液解析人參三醇皂苷，收集解析液，濃縮干燥得人參三醇皂苷粗品，其中大孔吸附樹(shù)脂用量為生藥量的1.5倍，上柱流速為3柱體積/h；

（3）向步驟（2）人參三醇皂苷粗品中加入其質(zhì)量4倍的質(zhì)量百分比濃度98%的乙醇溶液溶解，然后在溶液中加溶液質(zhì)量5倍的乙腈，攪拌混勻后靜置3小時(shí)，棄沉淀收集上清液，濃縮回收有機(jī)溶劑，加純凈水稀釋濃縮液到人參三醇皂苷粗品的5倍質(zhì)量得人參三醇皂苷粗品溶液；

（4）取質(zhì)量10倍三醇皂苷粗品質(zhì)量的色譜樹(shù)脂填料（prp512a、400目）濕法裝柱，水洗至流出液為無(wú)色，用質(zhì)量百分比40%的乙醇溶液洗脫人參三醇皂苷，收集洗脫液，tlc檢測(cè)洗脫到無(wú)人參三醇皂苷斑點(diǎn)結(jié)束洗脫，收集合并洗脫液得人參三醇皂苷溶液；

（5）將步驟（4）所得色譜樹(shù)脂解析液加入乙醇使得人參三醇皂苷溶液中乙醇含量為質(zhì)量百分比50%后，備用；

（6）將步驟（5）溶液過(guò)聚酰胺樹(shù)脂柱脫去黃酮類雜質(zhì)，收集流出液；流出液濃縮回收乙醇后，加入濃縮物質(zhì)量0.5%的活性炭加熱煮沸半小時(shí)脫色，濃縮干燥即得白色人參三醇皂苷粉末，收率94%，人參三醇皂苷純度97.1%（以r1、re、rg1計(jì)）。