本發(fā)明涉及一種玉米低聚肽保健品的制備方法，醫(yī)藥保健領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

隨著社會(huì)物質(zhì)文明的進(jìn)步，人們的生活方式和行為習(xí)慣發(fā)生了巨大變化，工作壓力大、生活節(jié)奏快、缺乏體力鍛煉等現(xiàn)象日益普遍，導(dǎo)致現(xiàn)代人出現(xiàn)失眠、乏力、無(wú)食欲、易疲勞、心悸，抵抗力差、易激怒、經(jīng)常性感冒或口腔潰瘍、便秘等“亞健康”狀態(tài)。長(zhǎng)期處于“亞健康”狀態(tài)，會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的免疫力下降。另一方面，我國(guó)已經(jīng)進(jìn)入老齡化社會(huì)，由于機(jī)體的衰老，老年人的免疫力大幅度降低，導(dǎo)致免疫相關(guān)疾病的發(fā)病率急劇增高，很大程度上影響了老年人的生活質(zhì)量。對(duì)于免疫力低下人群，提高免疫力對(duì)維持機(jī)體健康具有重要意義。

玉米是我國(guó)重要的農(nóng)作物之一，種植歷史早，種植面積大，年產(chǎn)量超過(guò)2.2億噸。玉米曾是人類最重要的一種食物來(lái)源，隨著人們生活水平的不斷提高，玉米的主食地位已經(jīng)逐漸被其它種類繁多的食品所取代，致使玉米的主要用途從食用轉(zhuǎn)向了工業(yè)利用。

玉米低聚肽粉是以玉米蛋白粉為原料，經(jīng)調(diào)漿、蛋白酶酶解、分離、過(guò)濾、噴霧干燥等工藝生產(chǎn)而成的。玉米低聚肽粉特殊的氨基酸組成結(jié)構(gòu)，決定了它除具有肽類物質(zhì)的優(yōu)良特性——優(yōu)于氨基酸或蛋白質(zhì)的直接吸收、溶解性強(qiáng)(在大范圍的ph值下均能完全溶于水，無(wú)渾濁和沉淀物產(chǎn)生)、穩(wěn)定性強(qiáng)(對(duì)熱穩(wěn)定，組分不改變，功能不喪失)、安全性高(天然食品蛋白，安全可靠，無(wú)毒副作用)等特性以外，還具有自己所獨(dú)有的特殊功能。玉米低聚肽具有多種生物活性，如抗氧化、抗高血壓、增強(qiáng)免疫力、抗疲勞、保護(hù)肝臟等。

當(dāng)前玉米肽的制備大多采用酶解的方式，特定的酶來(lái)水解玉米蛋白粉中的抗原蛋白，其作用效果受到酶的種類、水解前處理方式、水解程度等諸多因素的影響，現(xiàn)有技術(shù)采用的方法均存在效率低下，制備的玉米肽口感差等問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種玉米低聚肽保健品的制備方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明通過(guò)物理方法對(duì)玉米蛋白粉進(jìn)行預(yù)處理，然后通過(guò)酶解制備玉米低聚肽，有效提升了玉米低聚肽的生成效率以及品質(zhì)，在此基礎(chǔ)上，將制得玉米低聚肽，并配以其他保健成分協(xié)同作用，制得的產(chǎn)品具有增強(qiáng)免疫力的作用，能有效改善人體的健康狀況。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的一種玉米低聚肽保健品的制備方法，包括如下方法，包括如下步驟：

(1)對(duì)玉米蛋白粉進(jìn)行物理預(yù)處理

玉米蛋白粉與水的混合物在110℃以上的溫度下加熱，并將加熱所得產(chǎn)物進(jìn)行雙螺桿擠壓，得到預(yù)處理玉米蛋白粉；

(2)酶解反應(yīng)得到玉米低聚肽

(21)使用一種或多種微生物蛋白酶酶解所述預(yù)處理玉米蛋白粉，滅酶后得到酶解液；

(22)將酶解液解液離心后，對(duì)離心上清液進(jìn)行膜過(guò)濾，得到濾液；

(23)在膜過(guò)濾后，對(duì)濾液進(jìn)行脫色和濃縮；

(24)在濃縮后可進(jìn)行滅菌和干燥，從而制得玉米低聚肽粉；所述干燥為噴霧干燥；

(3)配制玉米低聚肽保健品原料

按照如下重量組分進(jìn)行配料：

(4)將上述原料混合均勻，經(jīng)過(guò)殺菌處理后，真空包裝得到產(chǎn)品。

優(yōu)選的，在所述步驟(1)中，玉米蛋白粉與水的質(zhì)量比為80：20-60：40，加熱溫度為150-170℃。

優(yōu)選的，在所述步驟(1)中，將加熱所得產(chǎn)物進(jìn)行雙螺桿擠壓的步驟，其中，擠壓機(jī)末端機(jī)筒溫度為150-170℃，擠壓機(jī)前三段機(jī)筒的溫度可分別為30-50℃，50-70℃，70-90℃。

優(yōu)選的，在所述步驟(21)中，優(yōu)選的，所用的微生物蛋白酶的量為預(yù)處理玉米蛋白粉質(zhì)量的0.5-1.5％；所用的微生物蛋白酶為堿性蛋白酶、中性蛋白酶和酸性蛋白酶中的一種或多種；酶解溫度為45-55℃。

優(yōu)選的，在所述步驟(22)中，所述離心的轉(zhuǎn)速為3000-5000r/min，離心可采用常規(guī)設(shè)備進(jìn)行，例如臥螺離心機(jī)、管式離心機(jī)等。此外，可采用孔徑為50-100nm的濾膜進(jìn)行所述膜過(guò)濾；膜過(guò)濾時(shí)，可控制膜過(guò)濾的絕對(duì)壓力為0.1-0.3mpa，溫度為50-70℃。

優(yōu)選的，在所述步驟(23)中，優(yōu)選的，可以采用常規(guī)脫色劑進(jìn)行脫色，脫色劑為活性碳粉，脫色劑與濾液的質(zhì)量配比可以為(10-15)：100，脫色的溫度可控制在60-80℃，脫色時(shí)間為10-30min，脫色可在攪拌下進(jìn)行，在脫色后，可通過(guò)過(guò)濾去除脫色劑。

優(yōu)選的，采用雙效降膜蒸發(fā)器進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，并且可控制蒸發(fā)時(shí)的蒸汽壓為0.05-0.08mpa，蒸發(fā)溫度為50-70℃，經(jīng)濃縮后，濃縮液的體積可降至原體積的1/4-1/2。

優(yōu)選的，所述杭白菊粉是以干燥杭白菊為原料，經(jīng)粉碎、浸泡、水煮、過(guò)濾、濃縮、滅菌、干燥處理而制得，其總黃酮含量達(dá)5.0wt％以上；

優(yōu)選的，所述粟米粉是以粟米為原料，經(jīng)粉碎、酶解、過(guò)濾、濃縮、干燥處理而制得。

其中，余甘子為大戟科植物余甘子的干燥成熟果實(shí)，味甘、酸、澀，性涼，歸肺、胃經(jīng)，具有清熱涼血，消食健胃，生津止咳功效，其維生素c、鞣酸等抗氧化物質(zhì)含量豐富，尤其是富含的天然維生素c，能促進(jìn)機(jī)體膠原蛋白的合成。

其中，杭白菊性味辛、甘、苦，微寒，具有疏散風(fēng)熱、平肝明目、清熱解毒功效，其富含黃酮、酚酸等活性成分，具有抗氧化、抗炎、保護(hù)心腦血管等作用，其所含的黃酮類化合物與余甘子中的維生素c能發(fā)揮協(xié)同作用，增加活性物質(zhì)的生物利用度。

本發(fā)明相對(duì)現(xiàn)有技術(shù)，具備以下特點(diǎn)和顯著效果：

(1)物理方法對(duì)玉米蛋白粉進(jìn)行預(yù)處理，可提高玉米蛋白粉的酶解效率、縮短酶解時(shí)間，并可提高谷酶解產(chǎn)物中分子量小于1000da的組分；

(2)選用微生物蛋白酶，并配以優(yōu)化的酶解工藝，有效提升了玉米低聚肽的生成效率以及品質(zhì)；

(3)本法在制備玉米低聚肽粉時(shí)，取酶解液離心上清液進(jìn)行膜過(guò)濾，可進(jìn)一步地截留分子量較大的成分，從而最大限度地去除酶解液中的大分子蛋白組分，使得短肽含量高；

(4)本發(fā)明將玉米低聚肽粉與松花粉、余甘子粉、杭白菊粉、粟米粉、紫薯粉和葡萄糖成分組合，通過(guò)各組分間的協(xié)同作用，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明能增加小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)的能力，能提高小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力和nk細(xì)胞活性，具有增強(qiáng)免疫力的作用，可用于改善機(jī)體的健康狀況。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述。

實(shí)施例1

玉米蛋白粉與水的混合物在110℃以上的溫度下加熱，并將加熱所得產(chǎn)物進(jìn)行雙螺桿擠壓，得到預(yù)處理玉米蛋白粉；玉米蛋白粉與水的質(zhì)量比為80：20，加熱溫度為150℃。將加熱所得產(chǎn)物進(jìn)行雙螺桿擠壓的步驟，其中，擠壓機(jī)末端機(jī)筒溫度為150℃，擠壓機(jī)前三段機(jī)筒的溫度可分別為30℃，50℃，70℃。

使用微生物蛋白酶酶解所述預(yù)處理玉米蛋白粉，滅酶后得到酶解液；所用的微生物蛋白酶的量為預(yù)處理玉米蛋白粉質(zhì)量的0.5％；所用的微生物蛋白酶為堿性蛋白酶；酶解溫度為45℃。

將酶解液解液離心后，對(duì)離心上清液進(jìn)行膜過(guò)濾，得到濾液；其中，所述離心的轉(zhuǎn)速為3000r/min，離心可采用常規(guī)設(shè)備進(jìn)行，例如臥螺離心機(jī)、管式離心機(jī)等。此外，可采用孔徑為50nm的濾膜進(jìn)行所述膜過(guò)濾；膜過(guò)濾時(shí)，可控制膜過(guò)濾的絕對(duì)壓力為0.1mpa，溫度為50℃。

在膜過(guò)濾后，可對(duì)濾液進(jìn)行脫色和濃縮；采用的脫色劑為活性碳粉，脫色劑與濾液的質(zhì)量配比可以為10：100，脫色的溫度可控制在60℃，脫色時(shí)間為10min，脫色可在攪拌下進(jìn)行。在脫色后，可通過(guò)過(guò)濾去除脫色劑。優(yōu)選的，采用雙效降膜蒸發(fā)器進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，并且可控制蒸發(fā)時(shí)的蒸汽壓為0.05mpa，蒸發(fā)溫度為50℃，經(jīng)濃縮后，濃縮液的體積可降至原體積的1/4。

在濃縮后可進(jìn)行滅菌和干燥，從而制得玉米低聚肽粉；所述干燥為噴霧干燥。

按照如下重量組分配制玉米低聚肽保健品原料：

其中，所述杭白菊粉是以干燥杭白菊為原料，經(jīng)粉碎、浸泡、水煮、過(guò)濾、濃縮、滅菌、干燥處理而制得，其總黃酮含量達(dá)5.0wt％以上；其中，所述粟米粉是以粟米為原料，經(jīng)粉碎、酶解、過(guò)濾、濃縮、干燥處理而制得。

將上述原料混合均勻，經(jīng)過(guò)殺菌處理后，真空包裝得到產(chǎn)品。

實(shí)施例2

玉米蛋白粉與水的混合物在110℃以上的溫度下加熱，并將加熱所得產(chǎn)物進(jìn)行雙螺桿擠壓，得到預(yù)處理玉米蛋白粉；玉米蛋白粉與水的質(zhì)量比為70：30，加熱溫度為160℃。將加熱所得產(chǎn)物進(jìn)行雙螺桿擠壓的步驟，其中，擠壓機(jī)末端機(jī)筒溫度為160℃，擠壓機(jī)前三段機(jī)筒的溫度可分別為40℃，60℃，80℃。

使用微生物蛋白酶酶解所述預(yù)處理玉米蛋白粉，滅酶后得到酶解液；所用的微生物蛋白酶的量為預(yù)處理玉米蛋白粉質(zhì)量的1％；所用的微生物蛋白酶為堿性蛋白酶、和酸性蛋白酶；酶解溫度為40℃。

將酶解液解液離心后，對(duì)離心上清液進(jìn)行膜過(guò)濾，得到濾液；其中，所述離心的轉(zhuǎn)速為4000r/min，離心可采用常規(guī)設(shè)備進(jìn)行，例如臥螺離心機(jī)、管式離心機(jī)等。此外，可采用孔徑為100nm的濾膜進(jìn)行所述膜過(guò)濾；膜過(guò)濾時(shí)，可控制膜過(guò)濾的絕對(duì)壓力為0.2mpa，溫度為60℃。

在膜過(guò)濾后，可對(duì)濾液進(jìn)行脫色和濃縮；采用的脫色劑為活性碳粉，脫色劑與濾液的質(zhì)量配比可以為12：100，脫色的溫度可控制在70℃，脫色時(shí)間為20min，脫色可在攪拌下進(jìn)行。在脫色后，可通過(guò)過(guò)濾去除脫色劑。優(yōu)選的，采用雙效降膜蒸發(fā)器進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，并且可控制蒸發(fā)時(shí)的蒸汽壓為0.06mpa，蒸發(fā)溫度為60℃，經(jīng)濃縮后，濃縮液的體積可降至原體積的1/3。

在濃縮后可進(jìn)行滅菌和干燥，從而制得玉米低聚肽粉；優(yōu)選的，所述干燥為噴霧干燥。

按照如下重量組分配制玉米低聚肽保健品原料：

其中，所述杭白菊粉是以干燥杭白菊為原料，經(jīng)粉碎、浸泡、水煮、過(guò)濾、濃縮、滅菌、干燥處理而制得，其總黃酮含量達(dá)5.0wt％以上；其中，所述粟米粉是以粟米為原料，經(jīng)粉碎、酶解、過(guò)濾、濃縮、干燥處理而制得。

將上述原料混合均勻，經(jīng)過(guò)殺菌處理后，真空包裝得到產(chǎn)品。

實(shí)施例3

玉米蛋白粉與水的混合物在110℃以上的溫度下加熱，并將加熱所得產(chǎn)物進(jìn)行雙螺桿擠壓，得到預(yù)處理玉米蛋白粉；玉米蛋白粉與水的質(zhì)量比為60：40，加熱溫度為170℃。將加熱所得產(chǎn)物進(jìn)行雙螺桿擠壓的步驟，其中，擠壓機(jī)末端機(jī)筒溫度為170℃，擠壓機(jī)前三段機(jī)筒的溫度可分別為50℃，70℃，90℃。

使用微生物蛋白酶酶解所述預(yù)處理玉米蛋白粉，滅酶后得到酶解液；所用的微生物蛋白酶的量為預(yù)處理玉米蛋白粉質(zhì)量的0.5-1.5％；所用的微生物蛋白酶中性蛋白酶；酶解溫度為55℃。

將酶解液解液離心后，對(duì)離心上清液進(jìn)行膜過(guò)濾，得到濾液；其中，所述離心的轉(zhuǎn)速為5000r/min，離心可采用常規(guī)設(shè)備進(jìn)行，例如臥螺離心機(jī)、管式離心機(jī)等。此外，可采用孔徑為100nm的濾膜進(jìn)行所述膜過(guò)濾；膜過(guò)濾時(shí)，可控制膜過(guò)濾的絕對(duì)壓力為0.3mpa，溫度為70℃。

在膜過(guò)濾后，可對(duì)濾液進(jìn)行脫色和濃縮；采用的脫色劑為活性碳粉，脫色劑與濾液的質(zhì)量配比可以為15：100，脫色的溫度可控制在60-80℃，脫色時(shí)間為30min，脫色可在攪拌下進(jìn)行。在脫色后，可通過(guò)過(guò)濾去除脫色劑。優(yōu)選的，采用雙效降膜蒸發(fā)器進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，并且可控制蒸發(fā)時(shí)的蒸汽壓為0.08mpa，蒸發(fā)溫度為70℃，經(jīng)濃縮后，濃縮液的體積可降至原體積的1/2。

在濃縮后可進(jìn)行滅菌和干燥，從而制得玉米低聚肽粉；優(yōu)選的，所述干燥為噴霧干燥。

按照如下重量組分配制玉米低聚肽保健品原料：

其中，所述杭白菊粉是以干燥杭白菊為原料，經(jīng)粉碎、浸泡、水煮、過(guò)濾、濃縮、滅菌、干燥處理而制得，其總黃酮含量達(dá)5.0wt％以上；其中，所述粟米粉是以粟米為原料，經(jīng)粉碎、酶解、過(guò)濾、濃縮、干燥處理而制得。

將上述原料混合均勻，經(jīng)過(guò)殺菌處理后，真空包裝得到產(chǎn)品。

實(shí)施例產(chǎn)品性能測(cè)試：

將實(shí)施例1-3的產(chǎn)品為研究對(duì)象，對(duì)小鼠進(jìn)行為期20天的喂養(yǎng)試驗(yàn)。參照衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)技術(shù)與評(píng)價(jià)規(guī)范》中“增強(qiáng)免疫力”功能評(píng)價(jià)方法，評(píng)價(jià)各組合物的增強(qiáng)免疫力功能。

1試驗(yàn)材料與主要儀器

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

spf級(jí)昆明種雌性小鼠，6-8周齡，體重18-22g。

1.2主要儀器與試劑

olympus光學(xué)顯微鏡，紫外分光光度計(jì)，thermo酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，二氧化碳培養(yǎng)箱等。小牛血清，綿羊紅細(xì)胞(srbc)、氧化型輔酶i、瓊脂糖。

2試驗(yàn)方法

2.1劑量選擇與受試物給予方式

實(shí)驗(yàn)樣品的推薦用量為每人每日5g，每人按65kg體重計(jì)，相當(dāng)于0.08g/日/kg·bw。將小鼠隨機(jī)分組，每組20只，組間體重?zé)o顯著差異。將實(shí)施例1-3的組合物樣品各設(shè)低、高兩個(gè)劑量組，即各組小鼠每日劑量分別為0.4g/kg·bw、1.2g/kg·bw，另設(shè)一個(gè)陰性對(duì)照組(純凈水)，各試驗(yàn)組均按上述劑量每天經(jīng)口給予受試物1次(20ml/(kg·bw)灌胃容量)，陰性對(duì)照組給予等體積蒸餾水。所有動(dòng)物按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)灌胃20天后，測(cè)定各項(xiàng)免疫指標(biāo)。

2.2測(cè)定方法

小鼠抗體生成細(xì)胞測(cè)定、血清溶血素測(cè)定、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)等按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版)規(guī)定的方法進(jìn)行。

2.3數(shù)據(jù)分析

用spss軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，p<0.05表示有顯著性差異，p<0.01表示有極顯著性差異。

3.結(jié)果與分析

表1實(shí)施例樣品對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)及血清溶血素水平的影響

由表1可知，實(shí)施例1-3各劑量組小鼠的抗體生成細(xì)胞數(shù)均高于陰性對(duì)照組，并且中、高劑量組與陰性對(duì)照組比較具有顯著性差異(p＜0.05)或極顯著性差異(p＜0.01)，表明受試樣品具有增加小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)的能力。小鼠血清溶血素實(shí)驗(yàn)中，實(shí)施例1-3高劑量組的抗體積數(shù)與對(duì)照組相比具有顯著性差異(p＜0.05)，表明受試樣品具有提高小鼠血清溶血素水平的作用。

表2實(shí)施例樣品對(duì)對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的影響

由表2可知，與對(duì)照組比較，實(shí)施例1-3產(chǎn)品各劑量組對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力均具有明顯增加的趨勢(shì)。

根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》中增強(qiáng)免疫力保健功能的判定標(biāo)準(zhǔn)：“細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞功能、nk細(xì)胞活性四方面任兩個(gè)方面結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有增強(qiáng)免疫力功能。”按照此判定規(guī)則，實(shí)施例1-3產(chǎn)品的體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞功能兩項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，可以判定實(shí)施例1-3的產(chǎn)品具有增強(qiáng)免疫力的作用。

以上所述的本發(fā)明實(shí)施方式，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。任何在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的修改、等同替換和改進(jìn)等，均包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。