一種鷹嘴豆低聚肽及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種鷹嘴豆肽，特別是涉及一種鷹嘴豆低聚肽及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鷹嘴豆為豆科草本植物，起源于亞洲西部和近東地區(qū)，因其種子形似鷹嘴而得名。 鷹嘴豆蛋白是一種低過(guò)敏性、高生物效價(jià)的優(yōu)質(zhì)植物蛋白質(zhì)。鷹嘴豆蛋白含量因品種的不 同而有較大差異，在15%~30%之間。
[0003] 在鷹嘴豆多肽的制備過(guò)程中首先需要提取蛋白，專(zhuān)利CN101962399A公開(kāi)了 "從鷹 嘴豆豆瓣中提取天然抗腫瘤活性蛋白和多肽的方法"，專(zhuān)利CN101602799A公開(kāi)了"一種鷹 嘴豆中原生抗菌多肽的快速制備方法"，這兩項(xiàng)制備方法的步驟中都有用磷酸鹽緩沖液提 取、硫酸銨沉淀，但都存在蛋白利用率低、制備多肽的效率偏低的缺點(diǎn)。
[0004] 有關(guān)鷹嘴豆多肽類(lèi)制備方法的研宄多采用了酶水解法。例如，專(zhuān)利CN102028036A 公開(kāi)了"一種以鷹嘴豆制備多肽飲料的方法"，主要是用木瓜蛋白酶酶解鷹嘴豆蛋白來(lái)生產(chǎn) 鷹嘴豆多肽，缺點(diǎn)是：僅僅用發(fā)酵、細(xì)磨制成豆粉，蛋白利用率低。專(zhuān)利CN103194517A公開(kāi) 了 "一種鷹嘴豆短肽混合物及其制備方法"，是用堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶直接酶解鷹嘴豆 粉，離心后冷凍干燥制成鷹嘴豆短肽粉。專(zhuān)利CN103168913A公開(kāi)了"鷹嘴豆短肽混合物及 其制備方法"，主要是用纖維素酶、堿性蛋白酶和風(fēng)味酶共同酶解鷹嘴豆粉，離心后冷凍干 燥制成鷹嘴豆短肽粉。這兩項(xiàng)現(xiàn)有技術(shù)中，沒(méi)有對(duì)鷹嘴豆蛋白進(jìn)行提純導(dǎo)致蛋白含量不高， 蛋白利用率低，還存在冷凍干燥能耗高、對(duì)設(shè)備要求高、不利于規(guī)?；a(chǎn)等缺點(diǎn)。
[0005][0006] 因此，本領(lǐng)域需要可以實(shí)現(xiàn)蛋白利用率高、成本較低、能規(guī)?；a(chǎn)的鷹嘴豆低聚 肽制備方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明提供一種鷹嘴豆低聚肽及其制備方法，用于解決現(xiàn)有技術(shù)鷹嘴豆肽的制備 方法中蛋白利用率低、成本較高、不能規(guī)?；a(chǎn)等技術(shù)缺陷。
[0008] 本發(fā)明提供的鷹嘴豆低聚肽的制備方法，包括如下步驟：
[0009] 1)將鷹嘴豆粉與水混合后，調(diào)節(jié)pH值至8~10,經(jīng)攪拌、離心，收取上清液；
[0010]2)調(diào)節(jié)所述上清液的pH值至4~6后，攪拌、離心，將沉淀與水混合后，再次攪拌、 離心，收取沉淀，得到鷹嘴豆蛋白；
[0011] 3)將所述鷹嘴豆蛋白制成pH值為8~10的蛋白溶液，加入堿性蛋白酶進(jìn)行第一 酶解，得到第一酶解液；
[0012] 4)調(diào)節(jié)所述第一酶解液的pH值為6~8,加入中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶進(jìn)行第二 酶解，滅酶后，制得低聚肽粗液；
[0013] 5)采用孔徑為50~1200nm的陶瓷膜對(duì)所述低聚肽粗液進(jìn)行過(guò)濾后，對(duì)濾液進(jìn)行 濃縮、脫色、干燥，制得鷹嘴豆低聚肽。
[0014] 在本發(fā)明具體方案中，將鷹嘴豆在30~50°C溫度下浸泡16~24小時(shí)，去皮，30~ 70°C烘干16~24小時(shí)，破碎成粉，過(guò)10~100目篩，制得所述鷹嘴豆粉。
[0015] 進(jìn)一步地，在步驟1)中，用堿水將蛋白溶出以除去不溶于水的支鏈淀粉等雜質(zhì)， 具體為：將鷹嘴豆粉與水混合，其中鷹嘴豆粉與水的質(zhì)量體積比為1 : (8~12)，即：1kg的 鷹嘴豆粉與8~12L的水進(jìn)行混合。調(diào)節(jié)pH值為8~10,優(yōu)選為9~10;加熱至30~ 80°C，優(yōu)選在30~50°C的溫度下進(jìn)行；保溫?cái)嚢?0~180min，優(yōu)選地30~120min ;冷卻 至室溫，離心分離，收取上清液。
[0016] 在本發(fā)明具體方案中，再用酸將蛋白沉淀以除去油脂和部分可溶性直鏈淀粉，包 括在步驟2)中，調(diào)節(jié)收取的上清液的pH值至4~6,優(yōu)選為4. 5~5. 5 ;加熱至30~80°C， 保溫?cái)嚢璧臅r(shí)間為20~60min，離心收集沉淀，將沉淀與水的質(zhì)量體積比為1 : (2~10)，優(yōu) 選為1 : (3~5);繼續(xù)混合后，再次攪拌，攪拌溫度控制在30~80°C，優(yōu)選在30~50°C的 溫度下進(jìn)行，攪拌的時(shí)間為20~60min，優(yōu)選地20~40min ;離心分離，收取沉淀，得到鷹嘴 ii蛋白。
[0017] 對(duì)比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明方案步驟1)和2)發(fā)明人采用堿溶酸沉工藝提取蛋白，通過(guò) 大量的優(yōu)化工藝參數(shù)的實(shí)驗(yàn)之后，蛋白提取率大為提升，得到鷹嘴豆蛋白溶液中的蛋白含 量達(dá)60~70%，其效果是非常明顯的。另外發(fā)明人實(shí)驗(yàn)研宄發(fā)現(xiàn)在堿溶酸沉法之后增加 水洗的步驟，可使鷹嘴豆蛋白溶液中的蛋白含量增加到70~80%，提高最終產(chǎn)品的蛋白純 度。
[0018] 本發(fā)明先采用堿性蛋白酶對(duì)鷹嘴豆蛋白進(jìn)行酶解，然后采用中性蛋白酶和風(fēng)味蛋 白酶對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)一步進(jìn)行酶解，兩者配合使用能夠達(dá)到較高的酶解效率，并且酶解液中 的活性肽、特別是小分子量的活性肽的含量高。
[0019] 在本發(fā)明中，各酶的用量是基于鷹嘴豆蛋白粉的重量。所述堿性蛋白酶的用量為 100~500U/g，g卩，在采用lg鷹嘴豆蛋白粉制備鷹嘴豆肽時(shí)，使用100~500U的堿性蛋白 酶。
[0020] 特別是，在本發(fā)明的第一酶解中，將所述鷹嘴豆蛋白與水按質(zhì)量體積比1 :(8~ 12)的比例攪拌均勾，制成pH值為8~10,優(yōu)選pH值為9~10的蛋白溶液，蛋白含量達(dá) 70~80%;將溫度升至40~60°C;加入堿性蛋白酶，進(jìn)行第一酶解，酶用量100~500U/g， 優(yōu)選用量為200~400U/g ;酶解時(shí)間30~180min，優(yōu)選在30~60min。堿性蛋白酶對(duì)鷹 嘴豆蛋白的酶解作用顯著高于木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶和菠蘿蛋白酶。
[0021] 由于中性蛋白酶與堿性蛋白酶的酶切位點(diǎn)不一致，對(duì)于完成了第一次酶解的鷹嘴 豆蛋白可以進(jìn)一步進(jìn)行有效的酶解。因此在本發(fā)明具體方案步驟4)中，將中性蛋白酶和 風(fēng)味蛋白酶聯(lián)合使用對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行第二次酶解。具體地，調(diào)節(jié)所述第一酶解液的pH值 為6~8,優(yōu)選pH值為6. 5~7. 5 ;順序加入中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶，其中中性蛋白酶的 用量為1〇〇~500U/g，優(yōu)選用量為200~400U/g ;風(fēng)味蛋白酶的用量為100~500U/g，優(yōu) 選用量為100~300U/g ;溫度維持在40~60°C;酶解時(shí)間240~480min，優(yōu)選時(shí)間240~ 360min ;滅酶后，制得低聚肽粗液。
[0022] 根據(jù)本發(fā)明提供的制備方法，最后的步驟為制備粉末狀的鷹嘴豆低聚肽。步驟5) 中，將低聚肽粗液溫度升至85~95°C，維持15~30min，然后冷卻至室溫，將低聚肽粗液 以1000~4000rpm，優(yōu)選地2000~4000rpm，更優(yōu)選地3000rpm的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心分離5~ 30min，收集離心上清液后，采用孔徑為50~1200nm的陶瓷膜對(duì)所述低聚肽粗液進(jìn)行過(guò)濾 后，收取濾過(guò)液。將濾過(guò)液蒸發(fā)濃縮后，向濃縮液中加入活性炭，添加量為蛋白總量的1~ 10%，攪拌脫色10~60min，過(guò)濾除去活性炭，最后用噴霧干燥器制成鷹嘴豆低聚肽粉。
[0023] 進(jìn)一步地，在步驟5)中，所述過(guò)濾包括粗濾和精濾，所述粗濾采用孔徑為200~ 1200nm的陶瓷膜進(jìn)行，所述精濾采用孔徑為50~200nm的陶瓷膜進(jìn)行。
[0024] 本發(fā)明采用兩步陶瓷膜過(guò)濾，是因?yàn)榘l(fā)明人發(fā)現(xiàn)直接進(jìn)行精濾處理時(shí)效果較差， 由于精濾采用的陶瓷膜膜孔徑較小，容易被鷹嘴豆低聚肽中的大分子所堵塞，因此發(fā)明人 在進(jìn)行精濾前加入了粗濾的步驟，這樣可以先除去鷹嘴豆低聚肽中的大分子，獲得較好的 精濾效果。
[0025] 在本發(fā)明具體方案中，粗濾采用孔徑為200~1200nm，更優(yōu)選地500nm的陶瓷膜 進(jìn)行，可以去除離心未除去的不溶性雜質(zhì)；而精濾采用孔徑為50~200nm，更優(yōu)選地50nm 的陶瓷膜進(jìn)行，可以進(jìn)一步將可溶性大分子雜質(zhì)去除