本發(fā)明涉及全蛋白提取工藝，特別是一種能從細(xì)胞組織中快速、高效提取全蛋白，且能防止細(xì)胞裂解過程中DNA沉淀導(dǎo)致的部分蛋白丟失的一種細(xì)胞和組織全蛋白提取方法。

背景技術(shù)：

目前，公知的方法，從細(xì)胞組織中提取全蛋白主要是采用RIPA裂解液作為提取試劑，采用RIPA裂解液作為提取試劑提取全蛋白存在速度慢的缺點，細(xì)胞經(jīng)PBS細(xì)胞洗滌溶液洗滌處理后，一般需要20到30分鐘才能完成所有后續(xù)提取全蛋白流程，由于提取時間過長，會因為細(xì)胞裂解過程中DNA沉淀導(dǎo)致部分蛋白丟失。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了克服目前采用RIPA裂解液作為從細(xì)胞組織中提取全蛋白試劑，存在速度慢、全蛋白丟失的弊端，本發(fā)明提供了采用變性裂解液和非變性裂解液作為提取試劑，采用離心機、1.5ml離心試管和中部具有一道隔膜的50ml柱形聚乙烯離心試管作用提取工具，采用新工藝從細(xì)胞組織中提取全蛋白，變性裂解液作為提取試劑，經(jīng)過PBS細(xì)胞洗滌溶液洗滌、離心機離心工序后，整個后續(xù)全蛋白提取時間只需要1分鐘左右，非變性裂解液作為提取試劑，經(jīng)過PBS細(xì)胞洗滌溶液洗滌、離心機離心工序后，整個全蛋白提取時間只需要6分鐘左右，有效提高了提取速度，并能防止細(xì)胞裂解過程中時間過長導(dǎo)致DNA沉淀、部分蛋白丟失的一種細(xì)胞和組織全蛋白提取方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：

一種細(xì)胞和組織全蛋白提取方法，其特征在于分別采用變性裂解液以及非變性裂解液作為提取試劑，采用離心機、多只1.5ml離心試管和多只中部具有一道隔膜的50ml柱形聚乙烯離心試管作用提取工具，在采用變性裂解液作為提取試劑提取細(xì)胞組織中全蛋白時，采用以下幾個步驟制得，第一步，把1ml具有0.5至2之間×107個數(shù)的細(xì)胞放于1.5ml離心試管中， 1.5ml離心試管內(nèi)加入1ml預(yù)先冷卻的PBS細(xì)胞洗滌溶液，然后把1.5ml離心試管用離心重力加速度1,000xg的離心機離心3分鐘，停止離心后，棄除1.5ml離心試管內(nèi)上層清液，離心、棄除上清流程共重復(fù)操作三次，第二步，將重復(fù)三次離心、棄除上清后細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞沉淀體積加入同體積的預(yù)先冷卻的PBS細(xì)胞洗滌溶液，進(jìn)行細(xì)胞重懸操作，接著將重懸后細(xì)胞用離心機離心棄出上層清液，第三步，根據(jù)離心試管內(nèi)細(xì)胞量加入對應(yīng)量的變性裂解液，劇烈震蕩15s，第四步，將震蕩后裂解液轉(zhuǎn)移于50ml柱形聚乙烯離心試管內(nèi)，采用轉(zhuǎn)速14,000 rpm 離心機離心30s 后，收集50ml柱形聚乙烯離心試管管底的裂解液即為全細(xì)胞蛋白提取液，第五步，將全細(xì)胞蛋白提取液內(nèi)加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解，即完成采用變性裂解液作為提取試劑提取細(xì)胞組織中全蛋白工序。

所述的采用非變性裂解液作為提取試劑提取細(xì)胞組織中全蛋白時，采用以下幾個步驟制得，第一步，把1ml具有0.5至2之間×107個數(shù)的細(xì)胞放于1.5ml離心試管中，1.5ml離心試管內(nèi)加入1ml預(yù)先冷卻的PBS細(xì)胞洗滌溶液，然后把1.5ml離心試管用離心重力加速度1,000xg的離心機離心3分鐘，停止離心后，棄除1.5ml離心試管內(nèi)上層清液，離心、棄除上清流程共重復(fù)操作三次，第二步，將重復(fù)三次離心、棄除上清后細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞沉淀體積加入同體積的預(yù)先冷卻的PBS細(xì)胞洗滌溶液，進(jìn)行細(xì)胞重懸操作，接著將重懸后細(xì)胞用離心機離心棄出上層清液，第三步，根據(jù)離心試管內(nèi)細(xì)胞量加入對應(yīng)量的非變性裂解液，并劇烈震蕩15s，將震蕩后裂解液轉(zhuǎn)移于冰上孵育5min，并每隔一分鐘震蕩一次，第四步，將震蕩后裂解液轉(zhuǎn)移于50ml柱形聚乙烯離心試管內(nèi)，采用轉(zhuǎn)速14,000 rpm 離心機離心30s 后，收集50ml柱形聚乙烯離心試管管底的裂解液即為全細(xì)胞蛋白提取液，第五步，將全細(xì)胞蛋白提取液內(nèi)加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解，即完成采用變性裂解液作為提取試劑提取細(xì)胞組織中全蛋白工序。

所述采用變性裂解液作為提取試劑提取細(xì)胞組織中全蛋白，進(jìn)行根據(jù)離心試管內(nèi)細(xì)胞量加入對應(yīng)量的變性裂解液工序時，細(xì)胞量體積和加入的變性裂解液體積比例在1:7至1：12.5之間，比例隨細(xì)胞量體積增大比例逐漸增大。

所述采用非變性裂解液作為提取試劑提取細(xì)胞組織中全蛋白，進(jìn)行根據(jù)離心試管內(nèi)細(xì)胞量加入對應(yīng)量的非變性裂解液工序時，細(xì)胞量體積和加入的非變性裂解液體積比例在1:7至1：12.5之間，比例隨細(xì)胞量體積增大比例逐漸增大。

本發(fā)明有益效果是：本發(fā)明采用變性裂解液和非變性裂解液作為提取試劑，變性裂解液和非變性裂解液具有裂解效果好以及裂解速度快的優(yōu)點，結(jié)合采用離心機、1.5ml離心試管和中部具有一道隔膜的50ml柱形聚乙烯離心試管作用提取工具，采用新工藝從細(xì)胞組織中提取全蛋白，實際操作中，變性裂解液作為提取試劑，經(jīng)過PBS細(xì)胞洗滌溶液洗滌、離心機離心預(yù)處理工序后，整個后續(xù)全蛋白提取時間只需要1分鐘左右，非變性裂解液作為提取試劑，經(jīng)過PBS細(xì)胞洗滌溶液洗滌、離心機離心預(yù)處理工序后，整個全蛋白提取時間只需要6分鐘左右，有效提高了提取速度。由于提取速度快，效果好，防止了目前采用RIPA裂解液作為從細(xì)胞組織中提取全蛋白試劑，速度慢、效果不好，全蛋白丟失的缺點?；谝陨?，所以本發(fā)明具有好的應(yīng)用前景。

附圖說明

下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。

圖1是本發(fā)明操作流程框圖。

具體實施方式

圖1中所示，一種細(xì)胞和組織全蛋白提取方法，分別采用變性裂解液以及非變性裂解液作為提取試劑，采用離心機、多只1.5ml離心試管和多只中部具有一道隔膜的50ml柱形聚乙烯離心試管作用提取工具，在采用變性裂解液作為提取試劑提取細(xì)胞組織中全蛋白時，采用以下幾個步驟制得。第一步：把1ml具有0.5至2之間×107個數(shù)的細(xì)胞放于1.5ml離心試管中，1.5ml離心試管內(nèi)加入1ml預(yù)先冷卻的PBS細(xì)胞洗滌溶液，然后把1.5ml離心試管用離心重力加速度1,000xg的離心機離心3分鐘，停止離心后，棄除1.5ml離心試管內(nèi)上層清液，離心、棄除上清流程共重復(fù)操作三次；第二步：將重復(fù)三次離心、棄除上清后細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞沉淀體積加入同體積的預(yù)先冷卻的PBS細(xì)胞洗滌溶液，進(jìn)行細(xì)胞重懸操作，接著將重懸后細(xì)胞用離心機離心棄出上層清液；第三步，根據(jù)離心試管內(nèi)細(xì)胞量加入對應(yīng)量的變性裂解液，劇烈震蕩15s，細(xì)胞量體積和加入的變性裂解液體積比例在1:7至1：12.5之間，比例隨細(xì)胞量體積增大比例逐漸增大；第四步，將震蕩后裂解液轉(zhuǎn)移于50ml柱形聚乙烯離心試管內(nèi)，采用轉(zhuǎn)速14,000 rpm 離心機離心30s 后，收集50ml柱形聚乙烯離心試管管底的裂解液即為全細(xì)胞蛋白提取液，第五步，將全細(xì)胞蛋白提取液內(nèi)加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解，即完成采用變性裂解液作為提取試劑提取細(xì)胞組織中全蛋白工序。

圖1中所示，采用非變性裂解液作為提取試劑提取細(xì)胞組織中全蛋白時，采用以下幾個步驟制得。第一步：把1ml具有0.5至2之間×107個數(shù)的細(xì)胞放于1.5ml離心試管中，1.5ml離心試管內(nèi)加入1ml預(yù)先冷卻的PBS細(xì)胞洗滌溶液，然后把1.5ml離心試管用離心重力加速度1,000xg的離心機離心3分鐘，停止離心后，棄除1.5ml離心試管內(nèi)上層清液，離心、棄除上清流程共重復(fù)操作三次；第二步：將重復(fù)三次離心、棄除上清后細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞沉淀體積加入同體積的預(yù)先冷卻的PBS細(xì)胞洗滌溶液，進(jìn)行細(xì)胞重懸操作，接著將重懸后細(xì)胞用離心機離心棄出上層清液；第三步：根據(jù)離心試管內(nèi)細(xì)胞量加入對應(yīng)量的非變性裂解液，并劇烈震蕩15s，將震蕩后裂解液轉(zhuǎn)移于冰上孵育5min，并每隔一分鐘震蕩一次，細(xì)胞量體積和加入的非變性裂解液體積比例在1:7至1：12.5之間，比例隨細(xì)胞量體積增大比例逐漸增大；第四步：將震蕩后裂解液轉(zhuǎn)移于50ml柱形聚乙烯離心試管內(nèi)，采用轉(zhuǎn)速14,000 rpm 離心機離心30s 后，收集50ml柱形聚乙烯離心試管管底的裂解液即為全細(xì)胞蛋白提取液；第五步：將全細(xì)胞蛋白提取液內(nèi)加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解，即完成采用變性裂解液作為提取試劑提取細(xì)胞組織中全蛋白工序。

本實施例為本發(fā)明較佳實例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明原則范圍內(nèi)做任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。