技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及大麥轉(zhuǎn)基因材料的構(gòu)建，旨在提供一種運(yùn)用CRISPR?Cas9系統(tǒng)敲除大麥VE合成通路中的關(guān)鍵基因HPT的方法。該方法包括下述步驟：gRNA靶位點(diǎn)的選擇、gRNA片段的克隆、GG(gRNA?gRNA)片段的連接、連接產(chǎn)物的PCR擴(kuò)增、純化產(chǎn)物和目標(biāo)載體的酶切、純化產(chǎn)物和目標(biāo)載體的連接反應(yīng)、連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)、農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大麥轉(zhuǎn)基因、陽性轉(zhuǎn)基因植株的篩選、突變體測(cè)序。本發(fā)明利用先進(jìn)的基因編輯技術(shù)?CRISPR?Cas9系統(tǒng)對(duì)大麥VE合成通路中的關(guān)鍵基因(HPT)進(jìn)行靶向基因編輯，獲得有效的功能缺失突變體，為大麥中生物活性物質(zhì)的研究創(chuàng)造條件。

技術(shù)研發(fā)人員：邊紅武;曾章慧;劉翠翠;韓凝;朱睦元
受保護(hù)的技術(shù)使用者：浙江大學(xué)
文檔號(hào)碼：201710194580
技術(shù)研發(fā)日：2017.03.29
技術(shù)公布日：2017.06.30