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用于鑒定牛支原體和牛病毒性腹瀉病毒的引物組及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):12644695閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.引物組合,為如下(a1)或(a2)或(a3):

(a1)由引物對(duì)甲和引物對(duì)乙組成;

(a2)所述引物對(duì)甲;

(a3)所述引物對(duì)乙;

所述引物對(duì)甲由引物F1和引物R1組成;

所述引物F1為如下(b1)或(b2):

(b1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子;

(b2)將序列1經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子;

所述引物R1為如下(b3)或(b4):

(b3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子;

(b4)將序列2經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子;

所述引物對(duì)乙由引物F2和引物R2組成;

所述引物F2為如下(c1)或(c2):

(c1)序列表的序列3所示的單鏈DNA分子;

(c2)將序列3經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列3具有相同功能的DNA分子;

所述引物R2為如下(c3)或(c4):

(c3)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子;

(c4)將序列4經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子。

2.權(quán)利要求1所述引物組合在制備試劑盒中的應(yīng)用;所述試劑盒的用途為如下(d1)或(d2)或(d3):

(d1)鑒別牛支原體和牛病毒性腹瀉病毒;

(d2)鑒定待測病原微生物是否為牛支原體或牛病毒性腹瀉病毒;

(d3)鑒定待測樣本是否感染了牛支原體和/或牛病毒性腹瀉病毒。

3.含有權(quán)利要求1所述引物組合的試劑盒;所述試劑盒的用途為如下(d1)或(d2)或(d3):

(d1)鑒別牛支原體和牛病毒性腹瀉病毒;

(d2)鑒定待測病原微生物是否為牛支原體或牛病毒性腹瀉病毒;

(d3)鑒定待測樣本是否感染了牛支原體和/或牛病毒性腹瀉病毒。

4.權(quán)利要求3所述試劑盒的制備方法,包括將各條引物單獨(dú)包裝的步驟。

5.一種鑒別待測病原微生物為牛支原體還是牛病毒性腹瀉病毒的方法,包括如下步驟:

(1)提取待測病原微生物的核酸;

(2)以步驟(1)得到的核酸為模板,采用權(quán)利要求1中的所述引物對(duì)甲和所述引物對(duì)乙進(jìn)行二重二溫式PCR,然后進(jìn)行如下判斷:如果得到大小為412bp的擴(kuò)增產(chǎn)物,待測病原微生物為牛支原體;如果得到大小為170bp的擴(kuò)增產(chǎn)物,待測病原微生物為牛病毒性腹瀉病毒。

6.一種鑒定待測病原微生物是否為牛支原體或牛病毒性腹瀉病毒的方法,包括如下步驟:

(1)提取待測病原微生物的核酸;

(2)以步驟(1)得到的核酸為模板,采用權(quán)利要求1中的所述引物對(duì)甲和所述引物對(duì)乙進(jìn)行二重二溫式PCR,然后進(jìn)行如下判斷:如果得到大小為412bp的擴(kuò)增產(chǎn)物,待測病原微生物為或候選為牛支原體;如果得到大小為170bp的擴(kuò)增產(chǎn)物,待測病原微生物為或候選為牛病毒性腹瀉病毒。

7.一種鑒定待測樣本是否感染牛支原體和/或牛病毒性腹瀉病毒的方法,包括如下步驟:

(1)提取待測樣本的核酸;

(2)以步驟(1)得到的核酸為模板,采用權(quán)利要求1中的所述引物對(duì)甲和所述引物對(duì)乙進(jìn)行二重二溫式PCR,然后進(jìn)行如下判斷:如果得到大小為412bp的擴(kuò)增產(chǎn)物,待測樣本感染或疑似感染牛支原體;如果得到大小為170bp的擴(kuò)增產(chǎn)物,待測樣本感染或疑似感染牛病毒性腹瀉病毒。

8.一種鑒別待測病原微生物為牛支原體還是牛病毒性腹瀉病毒的方法,包括如下步驟:檢測待測病原微生物的核酸中是否具有序列表的序列5所示的特異DNA分子或是否具有序列表的序列6所示的特異RNA分子,如果待測病原微生物的核酸中具有序列表的序列5所示的特異DNA分子、待測病原微生物為牛支原體,如果待測病原微生物的核酸中具有序列表的序列6所示的特異RNA分子、待測病原微生物為牛病毒性腹瀉病毒。

9.一種鑒定待測病原微生物是否為牛支原體或牛病毒性腹瀉病毒的方法,包括如下步驟:檢測待測病原微生物的核酸中是否具有序列表的序列5所示的特異DNA分子或是否具有序列表的序列6所示的特異RNA分子,如果待測病原微生物的核酸中具有序列表的序列5所示的特異DNA分子、待測病原微生物為或候選為牛支原體,如果待測病原微生物的核酸中具有序列表的序列6所示的特異RNA分子、待測病原微生物為或候選為牛病毒性腹瀉病毒。

10.一種鑒定待測樣本是否感染牛支原體和/或牛病毒性腹瀉病毒的方法,包括如下步驟:檢測待測樣本的核酸中是否具有序列表的序列5所示的特異DNA分子和/或是否具有序列表的序列6所示的特異RNA分子,如果待測樣本的核酸中具有序列表的序列5所示的特異DNA分子、待測樣本感染或疑似感染牛支原體,如果待測樣本的核酸中具有序列表的序列6所示的特異RNA分子、待測樣本感染或疑似感染牛病毒性腹瀉病毒。

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