技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高雙鏈DNA穩(wěn)定性的方法。
背景技術(shù)：
雙鏈DNA由于容易在體外受到損壞，而其又是科研活動中非常重要的載體，使得如何避免其受到損壞而保持穩(wěn)定性成為重要的研究課題。
近幾年，利用氧化石墨烯作為雙鏈DNA穩(wěn)定劑受到了研究者的普遍關(guān)注，如《Nanoscale》刊載的“Adsorption of double-stranded DNA to graphene oxide preventing enzymatic digestion”和《Small》刊載的“Constraint of DNA on Functionalized Graphene Improves its Biostability and Specificity”均有所報道。
然而，上述方法所能提供的穩(wěn)定性還是有限的，如在高濃度內(nèi)切酶的情況下如何保持高度的穩(wěn)定性，現(xiàn)有的研究成果還沒有涉及。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對現(xiàn)有技術(shù)的研究空白和缺點，本發(fā)明的目的在于提供一種提高雙鏈DNA穩(wěn)定性的方法，該方法包括步驟：
將雙鏈DNA保存于穩(wěn)定劑中，所述穩(wěn)定劑由如下組分組成：
聚乙酰亞胺納米粒，其粒徑為20~200 nm，分子量1800；
殼聚糖納米粒，其粒徑為20~200 nm，分子量7~8 KDa，脫乙酰度70~75%；
氧化石墨烯；
所述穩(wěn)定劑的溶液為水；
其中，聚乙酰亞胺納米粒、殼聚糖納米粒和氧化石墨烯的濃度分別為0.02~0.08 mg/ml、0.02~0.08 mg/ml和0.05~0.06μg/ml。
優(yōu)選的，所述聚乙酰亞胺納米粒的粒徑為150~180 nm。
優(yōu)選的，所述殼聚糖納米粒的粒徑為150~180 nm。
優(yōu)選的，所述聚乙酰亞胺納米粒的濃度為0.03 mg/ml。
優(yōu)選的，所述殼聚糖納米粒的濃度為0.03 mg/ml。
優(yōu)選的，所述氧化石墨烯的濃度為0.055μg/ml。
本發(fā)明的有益效果：
本發(fā)明可以使得雙鏈DNA在高濃度的內(nèi)切酶情況下保持高度的穩(wěn)定性，使得雙鏈DNA可以在更為復雜的環(huán)境下保存，利于相關(guān)科研工作和產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
附圖說明
圖1為本發(fā)明瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果圖，泳道1為實施例1穩(wěn)定劑對DNA保護結(jié)果，泳道2為實施例2穩(wěn)定劑對DNA保護結(jié)果，泳道3為實施例3穩(wěn)定劑對DNA保護結(jié)果，泳道4為對比實施例1穩(wěn)定劑對DNA保護結(jié)果，泳道5為對比實施例2穩(wěn)定劑對DNA保護結(jié)果，泳道6為對比實施例3穩(wěn)定劑對DNA保護結(jié)果。
具體實施方式
下面通過實施例對本發(fā)明進行具體描述，有必要在此指出的是以下實施例只是用于對本發(fā)明進行進一步的說明，不能理解為對本發(fā)明保護范圍的限制，該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員根據(jù)上述發(fā)明內(nèi)容所做出的一些非本質(zhì)的改進和調(diào)整，仍屬于本發(fā)明的保護范圍。
下述實施例中的氧化石墨烯的制備方法參考如下文獻進行：
Graphene and Graphene Oxide ：Synthesis， Properties， and Applications.Adv.Mater.2010，online。
實施例1
按下述配方制備穩(wěn)定劑：
聚乙酰亞胺納米粒，其粒徑為20~80 nm，分子量1800；
殼聚糖納米粒，其粒徑為20~80 nm，分子量7 KDa，脫乙酰度75%；
氧化石墨烯；
所述穩(wěn)定劑的溶液為水；
其中，聚乙酰亞胺納米粒、殼聚糖納米粒和氧化石墨烯的濃度分別為0.02 mg/ml、0.02 mg/ml和0.05μg/ml。
實施例2
按下述配方制備穩(wěn)定劑：
聚乙酰亞胺納米粒，其粒徑為150~180 nm，分子量1800；
殼聚糖納米粒，其粒徑為150~180nm，分子量8 KDa，脫乙酰度70%；
氧化石墨烯；
所述穩(wěn)定劑的溶液為水；
其中，聚乙酰亞胺納米粒、殼聚糖納米粒和氧化石墨烯的濃度分別為0.08 mg/ml、0.08 mg/ml和0.06μg/ml。
實施例3
按下述配方制備穩(wěn)定劑：
聚乙酰亞胺納米粒，其粒徑為160~200 nm，分子量1800；
殼聚糖納米粒，其粒徑為160~200 nm，分子量8 KDa，脫乙酰度75%；
氧化石墨烯；
所述穩(wěn)定劑的溶液為水；
其中，聚乙酰亞胺納米粒、殼聚糖納米粒和氧化石墨烯的濃度分別為0.03 mg/ml、0.03 mg/ml和0.055μg/ml。
對比實施例1
除了聚乙酰亞胺納米粒的粒徑為250 ~300 nm之外其余與實施例3一致。
對比實施例2
除了氧化石墨烯的濃度為0.1μg/ml之外其余與實施例3一致。
對比實施例3
僅利用濃度為0.1μg/ml的氧化石墨烯水溶液作為穩(wěn)定劑。
將DNA保存于實施例1-3和對比實施例1-3所得穩(wěn)定劑中，在20U DNase l 的情況下，37℃進行酶切反應(yīng)。利用瓊脂糖凝膠電泳進行DNA的檢測。
檢測結(jié)果如圖1所示，本發(fā)明所得穩(wěn)定劑可以對DNA具有保護作用，而對比實施例所得試劑不能起到搜需要的保護作用（條帶消失）。