一種抗仔豬etec性腹瀉的功能性蛋乳粉及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉及其制備方法，所述蛋乳粉是由抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳液進(jìn)行干燥制得，其中，以制備3L的功能性蛋乳液計(jì)算，所述乳液包括以下組分：牛奶0.5?1.5L；卵黃抗體液1.5?3L；添加劑0.1?1g。本發(fā)明提供一種抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉及其制備方法，所述功能性蛋乳粉不僅含有豐富的ETEC卵黃抗體，能高效防治仔豬ETEC性腹瀉，并且所述乳粉營養(yǎng)豐富、適口性好，飼喂方法簡單，適合應(yīng)用于工廠化養(yǎng)豬，所述制備方法簡單、易掌握，易于進(jìn)行大批量生產(chǎn)。
【專利說明】
一種抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及家畜疾病預(yù)防與控制技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種抗仔豬ETEC性腹瀉的功 能性蛋乳粉及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 由腸毒素性大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)引起的仔豬腹 瀉，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。通過母乳獲得抗體，可以較好的防治仔豬ETEC感染性腹 瀉。但仔豬獲得母乳抗體受多方面因素的影響，抗體在斷奶后將很快消失，抗生素治療常引 發(fā)細(xì)菌耐藥性等問題。高效的ETEC卵黃抗體粉可以用于防治仔豬大腸桿菌性腹瀉，但是因 適口性差，往往需要灌服，操作費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不適合工廠化養(yǎng)豬工藝。目前，還沒有適合工廠化 養(yǎng)豬工藝、有效防治仔豬ETEC感染性腹瀉的方法。
[0003] 因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待于進(jìn)一步改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明在于提供一種抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉及 其制備方法，旨在解決目前抗生素治療常引發(fā)細(xì)菌耐藥性及ETEC卵黃抗體粉的適口性差、 操作費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不適合工廠化養(yǎng)豬工藝。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下： 一種抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉，其中，所述蛋乳粉是由抗仔豬ETEC性腹瀉的 功能性蛋乳液進(jìn)行干燥制得，以制備3L的功能性蛋乳液計(jì)算，所述乳液包括以下組分： 牛奶 0.5-1.5L; 卵黃抗體液1.5-3L; 添加劑0.1-lg。
[0006] 所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉，其中，所述添加劑包括甜味劑和香味 劑，所述甜味劑和香味劑的質(zhì)量比為1:1。
[0007] 所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉，其中，所述3L的蛋乳液包括以下含量 的組分:牛奶1-1.5L，卵黃抗體液2-3L，甜味劑為0.5g，香味劑為0.5g。
[0008] 所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉，其中，所述卵黃抗體液由體積比為1: 1-1:3的ETEC免疫雞蛋卵黃與無機(jī)鹽稀釋液組成。
[0009] 所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉，其中，所述無機(jī)鹽稀釋液包括以下含 量的成分:氯化鈣0.1-0.5g/L，氯化鉀0.1-0.5g g/L，氯化鈉 o.l-l g/L，乳酸鈉0.1-0.5 g/ L〇
[0010] 所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉，其中，所述ETEC免疫雞蛋卵黃含有抗 ETEC的四個(gè)菌株987P、K99、K88、F41的四聯(lián)卵黃抗體。
[0011] 一種如上所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的制備方法，其中，所述制備 方法為： SI :將四種產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌菌株987?、1(99、1(88、?41的菌毛蛋白混合疫苗多點(diǎn)注射 免疫初產(chǎn)母雞，12-16天后以同樣的方式第二次注射免疫母雞，二免5-10天后收集雞蛋的卵 黃； S2:配制無機(jī)鹽稀釋液，將卵黃與無機(jī)鹽稀釋液按比例混合，獲得卵黃抗體液； S3:將相應(yīng)含量的牛奶、甜味劑、香味劑混勻溶解，再加入卵黃抗體液，混合均勻，制得 蛋乳液； S4:對(duì)所述得到的蛋乳液進(jìn)行噴霧干燥。
[0012] 所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的制備方法，其中，所述菌毛蛋白混合 疫苗的制備方法為:將培養(yǎng)好的987P、K 99、K883種菌株的菌液分別進(jìn)行離心，離心后的沉淀用 lmL生理鹽水清洗3次;將沉淀物以0. lg/mL的懸浮于含2Μ尿素的roS緩沖液中，60°C水浴震 30min脫沉淀物上的細(xì)菌，16000r/min離心15min，去細(xì)菌沉淀，上清即為粗提的菌毛蛋白， 對(duì)粗提的菌毛蛋白進(jìn)行純化，純化后得到的四種菌毛蛋白進(jìn)行混合，再向菌毛蛋白混合液 中加入等體積的Marco 1 52佐劑乳化，得到菌毛蛋白混合疫苗。
[0013] 所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的制備方法，其中，對(duì)粗提的菌毛蛋白 進(jìn)行純化的方法為:將粗提的菌毛蛋白在磁力攪拌的情況下，緩慢加入固體硫酸銨使其質(zhì) 量濃度達(dá)到30%，4°C放置沉淀過夜;將沉淀好的菌毛蛋白在4°C下，8000r/min離心30min， 并收集蛋白沉淀;將蛋白沉淀溶于PH7.4的含2M尿素的100mM Tris-Hcl緩沖液中，并用相同 的緩沖液攪拌透析48小時(shí)，更換透析液兩次，得到純化后的菌毛蛋白。
[0014] 所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的制備方法，其中，對(duì)蛋乳液進(jìn)行噴霧 干燥時(shí)，入口溫度為110-130°C，出口溫度為60-80°C。
[0015]有益效果:本發(fā)明提供一種抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉及其制備方法，所 述功能性蛋乳粉不僅含有豐富的ETEC卵黃抗體，能高效防治仔豬ETEC性腹瀉，并且所述乳 粉營養(yǎng)豐富、適口性好，飼喂方法簡單，適合應(yīng)用于工廠化養(yǎng)豬，，所述制備方法簡單、易掌 握，易于進(jìn)行大批量生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 本發(fā)明提供一種抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉及其制備方法，為使本發(fā)明的 目的、技術(shù)方案及效果更加清楚、明確，以下對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描 述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0017] 本發(fā)明提供一種抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉，其中，所述蛋乳粉是由抗仔 豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳液進(jìn)行干燥制得，以制備3L的功能性蛋乳液計(jì)算，所述乳液包 括以下組分： 牛奶 0.5-1.5L; 卵黃抗體液1.5-3L; 添加劑0.1-lg。
[0018]向乳液中加入上牛奶，不僅有效提尚乳液的口味和香味，提尚蛋乳粉的適口性，并 且由于牛奶營養(yǎng)豐富，富含蛋白質(zhì)、脂肪、多種礦物質(zhì)(鈣磷比例恰當(dāng)，有利于鈣的吸收)等， 制備的蛋乳粉可以作為一種功能性輔食對(duì)仔豬進(jìn)行營養(yǎng)補(bǔ)充。加入牛奶的體積控制在0.5-1.5L范圍內(nèi)，不會(huì)過渡稀釋卵黃抗體液，降低抗體的活性，影響其防治效果，并保證較佳的 適口性。
[0019] 其中，所述卵黃抗體液由體積比為1:1-1:3的ETEC免疫雞蛋卵黃與無機(jī)鹽稀釋液 組成。所述卵黃抗體液選用ETEC免疫的雞蛋卵黃，而不是直接采用分離純化好的ETEC免疫 抗體，不僅降低了原料成本(商品化的ETEC免疫抗體比較昂貴），并且省去了從卵黃中分離 純化ETEC免疫抗體的工藝步驟，簡化制備方法。并且，ETEC免疫的雞蛋卵黃不僅含有豐富的 抗體，并且營養(yǎng)價(jià)值高，具有雞蛋的鮮味，提高乳粉的營養(yǎng)價(jià)值和口感。
[0020] 將ETEC免疫雞蛋卵黃用上述比例的無機(jī)鹽稀釋，可以有效將卵黃中的抗體和其他 營養(yǎng)物質(zhì)分散開來，充分溶解在無機(jī)鹽溶液中，有利于制備分散均勻、有利于消化吸收的蛋 乳粉。
[0021 ]優(yōu)選地，所述無機(jī)鹽稀釋液包括以下含量的成分:氯化鈣0.1-0.5g/L，氯化鉀0. ΙΟ.5g g/L，氯化鈉 0.1-1 g/L，乳酸鈉 0.1-0.5 g/L。選擇這種配比的無機(jī)鹽稀釋液有效防止 ETEC蛋黃抗體在乳粉的制備過程中變性、失效，使其保持很高活性，提高制備的蛋乳粉的防 止腹瀉的功效。此外，也進(jìn)一步提高蛋乳粉中的無機(jī)鹽的含量。
[0022] 其中，所述ETEC免疫雞蛋卵黃含有抗ETEC的四個(gè)菌株987?、1(99、1(88、？41的四聯(lián)卵 黃抗體。這四種菌株是引起仔豬腹瀉的主要的ETEC菌株，用這四種菌株的菌毛蛋白的混合 疫苗免疫產(chǎn)生的四聯(lián)卵黃抗體的免疫效果明顯優(yōu)于其他菌體苗及多價(jià)苗的免疫效果，具有 顯著的仔豬ETEC性腹瀉的防治效果。
[0023] 此外，向乳粉中加入添加劑Ο.Ι-lg，能有效提高乳粉的適口性，誘使仔豬能主動(dòng)進(jìn) 食蛋乳粉，使飼喂變得簡單，降低人工成本，使蛋乳粉可以用于工業(yè)化養(yǎng)殖。所述添加劑可 以是甜味劑、香味劑、葡萄糖或其他誘食劑。
[0024] 優(yōu)選地，所述添加劑包括甜味劑和香味劑，所述甜味劑和香味劑的質(zhì)量比為1: 1。 這樣配比的添加劑不僅誘食效果好，并且原料簡單易獲取、成本低廉。
[0025]較佳實(shí)施例中，所述3L的蛋乳液包括以下含量的組分:牛奶1-1.5L，卵黃抗體液2-3L，甜味劑為0.5g，香味劑為0.5g。所述制備出的蛋乳粉的不僅防止效果好、口感最佳、適口 性好，且營養(yǎng)豐富。
[0026] 一種如上所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的制備方法，其中，所述制備 方法為： 菌毛蛋白混合疫苗的制備:將培養(yǎng)好的987ρ、κ99、κ883種菌株的菌液分別進(jìn)行離心，離心 后的沉淀用lmL生理鹽水清洗3次;將沉淀物以O(shè).lg/mL的懸浮于含2Μ尿素的PBS緩沖液中， 60°C水浴震30min脫沉淀物上的細(xì)菌，16000r/min離心15min，去細(xì)菌沉淀，上清即為粗提的 菌毛蛋白，對(duì)粗提的菌毛蛋白進(jìn)行純化，純化后得到的四種菌毛蛋白進(jìn)行混合，再向菌毛蛋 白混合液中加入等體積的Marco 1 52佐劑乳化，得到菌毛蛋白混合疫苗。
[0027] 其中，菌毛蛋白的純化方法為:將粗提的菌毛蛋白在磁力攪拌的情況下，緩慢加入 固體硫酸銨使其質(zhì)量濃度達(dá)到30 %，4 °C放置沉淀過夜；將沉淀好的菌毛蛋白在4 °C下， 8000r/min離心30min，并收集蛋白沉淀;將蛋白沉淀溶于pH7.4的含2M尿素的100mM Tris-Hcl緩沖液中，并用相同的緩沖液攪拌透析48小時(shí)，更換透析液兩次，得到純化后的菌毛蛋 白。
[0028] 采用上述的菌毛蛋白的提取方法及透析純化方法，菌毛蛋白的提取量高、純度高， 并且菌毛蛋白的變性率低，保持高活性的免疫原性。
[0029] 接著進(jìn)行蛋乳粉的制備，具體步驟為： S1 :將四種產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌菌株987?、1(99、1(88、?41的菌毛蛋白混合疫苗多點(diǎn)注射 免疫初產(chǎn)母雞，12-16天后以同樣的方式第二次注射免疫母雞，二免5-10天后收集雞蛋的卵 黃。
[0030] S2:配制無機(jī)鹽稀釋液，將卵黃與無機(jī)鹽稀釋液按比例混合，獲得卵黃抗體液。
[0031] S3:將相應(yīng)含量的牛奶、甜味劑、香味劑混勻溶解，再加入卵黃抗體液，混合均勻， 制得蛋乳液。
[0032] S4:對(duì)所述得到的蛋乳液進(jìn)行噴霧干燥。
[0033] 優(yōu)選地，初次免疫初產(chǎn)母雞14天后以同樣的方式第二次注射免疫母雞，二免7天后 收集雞蛋的卵黃，這樣免疫得到的卵黃中抗體含量高，防治仔豬腹瀉的效果好。
[0034] 其中，對(duì)蛋乳液進(jìn)行噴霧干燥時(shí)，入口溫度為110-130°(：，出口溫度為60-80°(：。這 種溫度條件下制備的蛋乳粉不僅粉末均勻、不易成結(jié)，并且對(duì)蛋乳粉中的卵黃抗體的活性 沒有太大影響，也能很大程度上保持了乳粉中其他營養(yǎng)物質(zhì)的營養(yǎng)價(jià)值。
[0035] 最佳實(shí)施例中，噴霧干燥時(shí)，入口溫度為120°C，出口溫度為72°C °C。
[0036]噴霧干燥前后，對(duì)抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉中卵黃抗體效價(jià)的測(cè)定實(shí) 驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1和表2。
[0037]表1蛋乳液噴粉前效價(jià)
表2蛋乳液噴粉后效價(jià)
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：噴霧干燥后，卵黃抗體效價(jià)平均只下降一個(gè)倍比度，卵黃抗體具有 很好的高溫穩(wěn)定性，噴霧干燥法制粉工藝適用于抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的生 產(chǎn)。制備的功能性蛋乳粉中，卵黃抗體的活性高，具有很好的防治仔豬腹瀉的作用。
[0038]所述抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的應(yīng)用方法為:取抗仔豬ETEC性腹瀉的功 能性蛋乳粉5-15g，加溫開水90ml搖均。每頭仔豬2-4ml乳瓶喂服或料盤自食。
[0039] 為了更詳盡的描述本發(fā)明的制備方法，以下列舉幾個(gè)實(shí)施例更進(jìn)一步的說明。
[0040] 實(shí)施例1 本發(fā)明提供的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉是由抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋 乳液進(jìn)行干燥制得，以制備3L的功能性蛋乳液計(jì)算，所述乳液包括以下組分： 牛奶1L; 卵黃抗體液2L; 甜味劑0.5g。
[0041 ]香味劑 0.5g 所述卵黃抗體液中，卵黃與無機(jī)鹽稀釋液的比例為1:2。
[0042]無機(jī)鹽稀釋液的組分為:氯化鈣0.2g，氯化鉀0.3g，氯化鈉0.6g，乳酸鈉0.31g，蒸 餾水 1000 ml。
[0043]菌株的培養(yǎng):將987P、K99、K883種菌株分別接種到TSB培養(yǎng)基中，在37°C培養(yǎng)條件下震 蕩48小時(shí)后，分別收集987P、K99、K88菌毛蛋白；將F 41菌株在Minca培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí)后，收集 F41菌毛蛋白。
[0044]菌毛蛋白的提?。河?mL生理鹽水洗下由固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌苔，8000r/min離心 10分鐘，液體培養(yǎng)基可直接吸取離心，離心后的沉淀懸浮在lmL生理鹽水中，再離心，重復(fù)3 次。稱量沉淀物的濕重，將沉淀物以〇 . 1 g/mL懸浮于含2M尿素的PBS緩沖液中。60 °C水浴震 30min脫沉淀物上的細(xì)菌，16000r/min離心15min，去細(xì)菌沉淀，上清即為粗提的菌毛蛋白。 [0045]菌毛蛋白的純化:將粗提的菌毛蛋白在磁力攪拌的情況下，緩慢加入固體硫酸銨 使之達(dá)到質(zhì)量占比為30%，4°C放置沉淀過夜。將沉淀好的菌毛蛋白4°C8000r/min離心 30min，并收集沉淀。將沉淀溶于lOmLIOOmM pH7.4含2M尿素的Tris-Hcl緩沖液中，并用相同 的緩沖液攪拌透析48小時(shí)，更換透析液兩次，除去硫酸銨，即為純化后的菌毛蛋白。
[0046]所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的制備方法為： S1:將濃度分別為1135 μg/ml、1246μg/ml、1086μg/ml、1190μg/ml四種產(chǎn)腸毒素大腸埃 希氏菌菌株987?、1(99、1(88、？41的菌毛蛋白各21111，混合均勾，再用等體積的1&11'〇〇152佐劑 乳化，取2ml多點(diǎn)注射免疫初產(chǎn)母雞，14天后以同樣的方式第二次注射免疫母雞，二免7天后 收集雞蛋的卵黃。
[0047] S2:配制無機(jī)鹽稀釋液，將卵黃與無機(jī)鹽稀釋液按比例混合，獲得卵黃抗體液。
[0048] S3:將相應(yīng)含量的牛奶、甜味劑、香味劑混勻溶解，再加入卵黃抗體液，混合均勻， 制得蛋乳液。
[0049 ] S4:對(duì)所述得到的蛋乳液進(jìn)行噴霧干燥。
[0050] 對(duì)蛋乳液進(jìn)行噴霧干燥時(shí)，入口溫度120°C，出口溫度72°C。
[0051 ] 實(shí)施例2 本發(fā)明提供的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉是由抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋 乳液進(jìn)行干燥制得，以制備3L的功能性蛋乳液計(jì)算，所述乳液包括以下組分： 牛奶1.5L; 卵黃抗體液1.5L; 甜味劑O.lg。
[0052] 香味劑 O.lg 所述卵黃抗體液中，卵黃與無機(jī)鹽稀釋液的比例為1:1。
[0053] 無機(jī)鹽稀釋液的組分為:氯化鈣0. lg，氯化鉀0. lg，氯化鈉0.6g，乳酸鈉0.5g，蒸餾 水1000 ml〇
[0054] 所述抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的制備方法與實(shí)施例1相同。
[0055] 實(shí)施例3 本發(fā)明提供的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉是由抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋 乳液進(jìn)行干燥制得，以制備3L的功能性蛋乳液計(jì)算，所述乳液包括以下組分： 牛奶0.5L; 卵黃抗體液2.5L; 甜味劑lg。
[0056] 香味劑lg 所述卵黃抗體液中，卵黃與無機(jī)鹽稀釋液的比例為1:3。
[0057]無機(jī)鹽稀釋液的組分為:氯化鈣0.5g，氯化鉀0.5g，氯化鈉 lg，乳酸鈉0. lg，蒸餾水 1000 ml〇
[0058]所述抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的制備方法與實(shí)施例1相同。
[0059]應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的應(yīng)用不限于上述的舉例，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可 以根據(jù)上述說明加以改進(jìn)或變換，所有這些改進(jìn)和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保 護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉，其特征在于，所述蛋乳粉是由抗仔豬ETEC 性腹瀉的功能性蛋乳液進(jìn)行干燥制得，其中，以制備3L的功能性蛋乳液計(jì)算，所述乳液包括 以下組分： 牛奶 0.5-1.5L; 卵黃抗體液1.5-3L; 添加劑0.1-lg。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉，其特征在于，所述添加劑 包括甜味劑和香味劑，所述甜味劑和香味劑的質(zhì)量比為1:1。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉，其特征在于，所述3L的蛋 乳液包括以下含量的組分:牛奶1-1.5L，卵黃抗體液2-3L，甜味劑為0.5g，香味劑為0.5g。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉，其特征在于，所述卵黃抗 體液由體積比為1:1-1:3的ETEC免疫雞蛋卵黃與無機(jī)鹽稀釋液組成。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉，其特征在于，所述無機(jī)鹽 稀釋液包括以下含量的成分:氯化鈣0.1-0.5g/L，氯化鉀0.1-0.5g g/L，氯化鈉0.1-1 g/L， 乳酸鈉〇·1-0.5 g/L。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉，其特征在于，所述ETEC免 疫雞蛋卵黃含有抗ETEC的四個(gè)菌株 9成、1(99、1(88^41的四聯(lián)卵黃抗體。7. -種如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的制備方 法，其特征在于，所述制備方法為： S1 :將四種產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌菌株987?、1(99、1(88、？41的菌毛蛋白混合疫苗多點(diǎn)注射 免疫初產(chǎn)母雞，12-16天后以同樣的方式第二次注射免疫母雞，二免5-10天后收集雞蛋的卵 黃； S2:配制無機(jī)鹽稀釋液，將卵黃與無機(jī)鹽稀釋液按比例混合，獲得卵黃抗體液； S3:將相應(yīng)含量的牛奶、甜味劑、香味劑混勻溶解，再加入卵黃抗體液，混合均勻，制得 蛋乳液； S4:對(duì)所述得到的蛋乳液進(jìn)行噴霧干燥。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的制備方法，其特征在于， 所述菌毛蛋白混合疫苗的制備方法為:將培養(yǎng)好的 987P、K99、K883種菌株的菌液分別進(jìn)行離 心，離心后的沉淀用lmL生理鹽水清洗3次;將沉淀物以0. lg/mL的懸浮于含2Μ尿素的PBS緩 沖液中，60°C水浴震30min脫沉淀物上的細(xì)菌，16000r/min離心15min，去細(xì)菌沉淀，上清即 為粗提的菌毛蛋白，對(duì)粗提的菌毛蛋白進(jìn)行純化，純化后得到的四種菌毛蛋白進(jìn)行混合，再 向菌毛蛋白混合液中加入等體積的Marco 1 52佐劑乳化，得到菌毛蛋白混合疫苗。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的制備方法，其特征在于， 對(duì)粗提的菌毛蛋白進(jìn)行純化的方法為:將粗提的菌毛蛋白在磁力攪拌的情況下，緩慢加入 固體硫酸銨使其質(zhì)量濃度達(dá)到30 %，4 °C放置沉淀過夜；將沉淀好的菌毛蛋白在4 °C下， 8000r/min離心30min，并收集蛋白沉淀;將蛋白沉淀溶于pH7.4的含2M尿素的100mM Tris-Hcl緩沖液中，并用相同的緩沖液攪拌透析48小時(shí)，更換透析液兩次，得到純化后的菌毛蛋 白。10. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗仔豬ETEC性腹瀉的功能性蛋乳粉的制備方法，其特征在
【文檔編號(hào)】A23C9/16GK106035672SQ201610359568
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年5月27日
【發(fā)明人】馬春全, 李冬虹, 李桂珍, 王愛富, 尚秀國, 陳倫盛, 付強(qiáng)
【申請(qǐng)人】佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院