本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種新的參蘇補(bǔ)腎膠囊中腦蛋白水解物的制備方法。
背景技術(shù)：
：參蘇補(bǔ)腎膠囊為中成藥中經(jīng)典品種藥，具有補(bǔ)腎健腦、活血通絡(luò)，對(duì)老年人失眠、健忘具有較好療效，臨床效果良好，市場(chǎng)需求較大。參蘇補(bǔ)腎膠囊處方中包括腦蛋白水解物，腦蛋白水解物系健康豬腦經(jīng)脫脂、酶水解，干燥得到的產(chǎn)物，豬腦含有人腦正?；顒?dòng)中必需的活性物質(zhì)，主要為小分子活性肽和多種氨基氮，能直接通過(guò)腦屏障提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)，增強(qiáng)腦功能、促進(jìn)大腦發(fā)育，效果顯著。豬腦中除有效成分外還含有大量的脂肪，使水解反應(yīng)難于進(jìn)行，水解體系渾濁導(dǎo)致無(wú)法分離，最終影響蛋白水解產(chǎn)物外觀及穩(wěn)定性，可見(jiàn)脫脂環(huán)節(jié)尤為重要?，F(xiàn)今豬腦蛋白水解物的生產(chǎn)工藝，一般多采用丙酮溶劑脫脂處理制備脫脂豬腦粉，再進(jìn)行蛋白酶水解操作，最終得到豬腦蛋白水解物。該脫脂工藝中丙酮作為脫脂劑，脫脂效果良好，但其為易制毒品，存在危險(xiǎn)性大和成本高等缺點(diǎn)，目前生產(chǎn)中正在不斷尋找脫脂劑丙酮的替代溶劑，完善其不足之處。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明目的是提供一種新的參蘇補(bǔ)腎膠囊中豬腦蛋白水解物的制備方法，包括脫脂、酶解兩步工藝，建立腦蛋白水解物的多指標(biāo)檢測(cè)方法，新工藝簡(jiǎn)單，降低成本，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，可為企業(yè)獲得較高的經(jīng)濟(jì)收益。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的步驟如下：(1)將新鮮豬腦洗凈、剔除雜質(zhì)，勻漿，得到豬腦勻漿液。(2)向豬腦勻漿液中加入脫脂劑乙醇，控制脫脂溫度，攪拌脫脂0.5～3小時(shí)后過(guò)濾，收集濾渣。(3)將濾渣在70～80℃條件下干燥，粉碎至細(xì)粉，即得豬腦脫脂粉。(4)向步驟(3)中脫脂豬腦粉加入適量水?dāng)嚢杌靹颍脷溲趸c溶液調(diào)節(jié)pH值為7.5～8.5，加入胰蛋白酶適量，在35～50℃水浴下水解5～10小時(shí)后，在100℃水浴下煮沸10分鐘，冷卻至室溫，離心分離10分鐘(3000r/min)，將上清液pH調(diào)至中性，濃縮，減壓干燥，粉碎過(guò)100目篩，即得豬腦蛋白水解物。步驟(2)中所述新鮮豬腦勻漿液與脫脂劑的體積比為5～10倍。步驟(2)中所述脫脂溶劑溫度為24～30℃。步驟(2)中所述脫脂攪拌頻率為80～120r/min。步驟(3)中所述脫脂粉加水量為3～6倍。步驟(3)中所述胰蛋白酶的酶活力為4000U/g。步驟(3)中所述胰蛋白酶加入量為2～15g/kg鮮豬腦。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有明顯的技術(shù)進(jìn)步和實(shí)用性，具體優(yōu)點(diǎn)如下：1、本發(fā)明制備的脫脂豬腦粉，改變現(xiàn)有工藝丙酮脫脂法，將丙酮更換為乙醇，在保證蛋白質(zhì)量同時(shí)，提高了脫脂率，克服了丙酮溶劑的毒性和易爆的危險(xiǎn)性，簡(jiǎn)化了脫脂工藝環(huán)節(jié)，降低了生產(chǎn)成本。2、本發(fā)明制備的豬腦酶解物，選用單一酶水解豬腦脫脂粉，保證豬腦蛋白水解物質(zhì)量，簡(jiǎn)化了酶解工藝，降低了生產(chǎn)時(shí)間及成本。3、豬腦蛋白水解物質(zhì)量檢測(cè)除原標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)外，還增加了脂肪、磷脂、膽固醇、氨基酸等含量檢測(cè)，全面地表征其質(zhì)量。附圖說(shuō)明圖1是十六種氨基酸混合對(duì)照品高效液相色譜圖；圖2是實(shí)施例1腦蛋白水解物樣品中各氨基酸高效液相色譜圖；圖3是實(shí)施例2腦蛋白水解物樣品中各氨基酸高效液相色譜圖；圖4是實(shí)施例3腦蛋白水解物樣品中各氨基酸高效液相色譜圖；圖5是原工藝腦蛋白水解物樣品中各氨基酸高效液相色譜圖。具體實(shí)施方式：實(shí)施例1新鮮豬腦去除血管、雜質(zhì)后取20kg，攪碎勻漿，加7倍體積乙醇，恒溫控制26℃、攪拌頻率90r/min條件下脫脂0.5小時(shí)，過(guò)濾，濾渣80℃干燥，得2.90kg脫脂豬腦粉。取此粉加入4倍體積水勻漿，調(diào)節(jié)pH為8.0，加0.2％胰蛋白酶水解，45℃攪拌酶解7小時(shí)，離心收集清液，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉過(guò)100目篩，得2.03kg豬腦蛋白水解物。實(shí)施例2新鮮豬腦去除血管、雜質(zhì)后取20kg，攪碎勻漿，加6倍體積乙醇，恒溫控制27℃、攪拌頻率80r/min條件下脫脂1小時(shí)，過(guò)濾，濾渣80℃干燥，得2.81kg脫脂豬腦粉。取此粉加入4倍體積水勻漿，調(diào)節(jié)pH為8.0，加0.3％胰蛋白酶水解，45℃攪拌酶解6小時(shí)，離心收集清液，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉過(guò)100目篩，得1.97kg豬腦蛋白水解物。實(shí)施例3新鮮豬腦去除血管、雜質(zhì)后取20kg，攪碎勻漿，加7倍體積乙醇，恒溫控制28℃、攪拌頻率100r/min條件下脫脂1小時(shí)，過(guò)濾，濾渣80℃干燥，得2.71kg脫脂豬腦粉。取此粉加入5倍體積水勻漿，調(diào)節(jié)pH為8.2，加0.2％胰蛋白酶水解，45℃攪拌酶解7小時(shí)，離心收集清液，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉過(guò)100目篩，得1.84kg豬腦蛋白水解物。實(shí)驗(yàn)例1豬腦蛋白水解物總氮及氨基氮含量測(cè)定：方法參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)腦蛋白水解物(編號(hào)WS1-XG-130-2002)中總氮及氨基氮含量的測(cè)定方法。測(cè)定結(jié)果可知，三批新腦水解物新生產(chǎn)工藝與原工藝水解物各含量相對(duì)比，總氮及氨基氮含量較高，有效成分達(dá)到精制。氨基氮含量為總氮的40～50之間，腦蛋白水解物符合標(biāo)準(zhǔn)要求。實(shí)驗(yàn)例2豬腦水解物脂肪含量測(cè)定方法參照GB/T14772-2008《食品中粗脂肪的測(cè)定》。類(lèi)別脂肪含量(％)實(shí)施例120.41實(shí)施例219.87實(shí)施例319.25原工藝(丙酮脫脂酶解水解物)27.21測(cè)定結(jié)果可知，三批新腦蛋白水解物中脂肪含量均低于原工藝水解物，表明乙醇脫脂效果好于丙酮。實(shí)驗(yàn)例3豬腦蛋白水解物磷脂含量檢測(cè)：方法參照GB/T5537-2008《糧油檢驗(yàn)磷脂含量的測(cè)定》。類(lèi)別磷脂含量(％)實(shí)施例142.51實(shí)施例242.14實(shí)施例341.54原工藝(丙酮脫脂酶解水解物)37.27測(cè)定結(jié)果可知，三批新豬腦蛋白水解物中磷脂含量均較高于原工藝水解物，磷脂為功效成分對(duì)人體有用，可作為新、原工藝對(duì)比分析指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)例4豬腦蛋白水解物膽固醇含量檢測(cè)：方法參照GB/T5009.128-2003《食品中膽固醇的測(cè)定》。類(lèi)別膽固醇含量(％)實(shí)施例10.72實(shí)施例20.68實(shí)施例30.62原工藝(丙酮脫脂酶解水解物)0.94測(cè)定結(jié)果可知，三批豬腦蛋白水解物中磷脂含量均低于原工藝水解物，膽固醇也為人體有益成分，但是當(dāng)含量過(guò)多時(shí)容易導(dǎo)致冠心病等疾病，參蘇補(bǔ)腎膠囊多適用于中老年人群，故不宜服用過(guò)高，可作為新、原工藝對(duì)比分析指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)例5豬腦蛋白水解物游離氨基酸含量檢測(cè)：氨基酸測(cè)定方法參照J(rèn)YT019-1996氨基酸分析方法通則，測(cè)定腦蛋白水解物中游離氨基酸的種類(lèi)及含量。類(lèi)別游離氨基酸總量％實(shí)施例116.42實(shí)施例216.55實(shí)施例316.51原工藝(丙酮脫脂水解物)14.32測(cè)定結(jié)果可知，優(yōu)化豬腦蛋白水解物生產(chǎn)工藝后的樣品中游離氨基酸種類(lèi)與原產(chǎn)品一致，共16種氨基酸，分別為谷氨酸、門(mén)冬氨酸、絲氨酸、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、胱氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、賴(lài)氨酸，本發(fā)明制備的豬腦蛋白水解物中游離氨基酸總含量高于原產(chǎn)品，各氨基酸混合對(duì)照品及樣品圖譜見(jiàn)附圖1、2、3、4、5。綜合分析，乙醇可作為新脫脂溶劑替代傳統(tǒng)丙酮，乙醇極性稍大于丙酮，可能脫脂同時(shí)帶走部分蛋白質(zhì)，但通過(guò)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，嚴(yán)格控制脫脂溶劑的溫度能有效降低蛋白質(zhì)的損失，同時(shí)脫脂溶劑的溫度還影響豬腦水解物中膽固醇及磷脂的含量，溶劑溫度過(guò)高時(shí)能有效減低膽固醇含量，但同時(shí)會(huì)導(dǎo)磷脂含量的損失，溫度過(guò)低時(shí)會(huì)降低磷脂含量的損失，但膽固醇成分較難除去，本發(fā)明制備的豬腦蛋白水解物中磷脂及膽固醇成分含量均優(yōu)于傳統(tǒng)工藝。新工藝選擇乙醇脫脂，胰蛋白酶水解得到的腦蛋白水解物中游離氨基酸種類(lèi)和原工藝水解物一致，其總含量高于工藝。多指標(biāo)含量檢測(cè)結(jié)果均表明新工藝優(yōu)于原工藝。綜上所述此新工藝替代傳統(tǒng)丙酮脫脂-蛋白酶水解法，可作為參蘇補(bǔ)腎膠囊中豬腦蛋白水解物的制備方法。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3