本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，屬于油茶分子生物學(xué)及遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種油茶種子油脂中花生烯酸含量篩選的SNP分子標(biāo)記，同時(shí)還涉及該分子標(biāo)記在油茶種子油品質(zhì)育種中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

油茶(Camellia oleifera Abel.)，隸屬山茶科(Theaceae)山茶屬(Camellia L.)，是我國特有的木本油料樹種，也是我國南方重要的木本食用油料物種。油茶籽油營養(yǎng)保健價(jià)值較高，其品質(zhì)可與橄欖油相媲美，是一種優(yōu)質(zhì)的食用油，其不飽和脂肪酸含量達(dá)90％以上，以油酸(80％以上)和亞油酸(約8％)為主，且具有抗腫瘤、降血脂等功效。近十年來，在國家政策引導(dǎo)和扶持下，我國油茶產(chǎn)業(yè)得到了長(zhǎng)足發(fā)展，全國種植面積已達(dá)6000多萬畝，年產(chǎn)油60多萬噸。根據(jù)《全國油茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展規(guī)劃(2009～2020)》，至2020年，我國油茶種植面積將達(dá)到9300萬畝，因此油茶良種苗木需求量很大。目前，油茶育種以選擇和雜交育種為主要手段、以產(chǎn)果量為主要育種目的，并已取得了重要進(jìn)展，但以改良油茶籽油品質(zhì)為目的育種研究開展較少。同時(shí)，由于油茶童期長(zhǎng)的生物特性導(dǎo)致油茶育種年限較長(zhǎng)，新品種選育緩慢，良種選育速度還不能滿足產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求，已成為阻礙油茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素之一。應(yīng)用分子標(biāo)記輔助(MAS)育種手段可從苗期開始選擇，大幅縮短育種的進(jìn)程，對(duì)以果實(shí)為主要目的的經(jīng)濟(jì)林育種優(yōu)勢(shì)尤其明顯。因此，開展油茶籽油品質(zhì)MAS育種將有效縮短油茶育種周期，且具有巨大的應(yīng)用潛力。

油茶的分子標(biāo)記輔助育種研究已有幾十年的歷史，包括RAPD、ISSR、SRAP等多種分子標(biāo)記技術(shù)，取得了一定的成果。但這些技術(shù)均表現(xiàn)出一定的弊端，所獲得的多態(tài)性標(biāo)記位點(diǎn)很難真正用于油茶輔助育種。主要弊端包括：1、這些標(biāo)記均屬于顯性標(biāo)記，無法準(zhǔn)確的體現(xiàn)多態(tài)性位點(diǎn)的基因型；2、這些標(biāo)記技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員及環(huán)境要求較高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定；3、這些標(biāo)記技術(shù)均是對(duì)整個(gè)基因組序列進(jìn)行分析，工作量大，無法將多態(tài)性位點(diǎn)精準(zhǔn)定位，亦很難篩選到與目的性狀緊密連鎖的標(biāo)記；4、傳統(tǒng)的數(shù)量性狀位點(diǎn)(quantitative trait loci，QTL)作圖需要具有親緣關(guān)系的作圖群體，油茶童期長(zhǎng)的生物特性，使得創(chuàng)建大規(guī)模的油茶雜交作圖群體耗時(shí)長(zhǎng)，難度大且需占用大面積林地。因此，以自然群體為研究對(duì)象，采用共顯性SNPs標(biāo)記，通過連鎖不平衡作圖開發(fā)與油茶種子油花生烯酸含量關(guān)聯(lián)的多態(tài)性位點(diǎn)，篩選可穩(wěn)定用于早期輔助選擇的標(biāo)記，成為油茶有效的分子標(biāo)記輔助育種策略。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供了一個(gè)與油茶種子油脂中花生烯酸含量極顯著關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)記。該標(biāo)記位于油茶Cofad2-1A基因開放閱讀框內(nèi)，屬于共顯性的SNP標(biāo)記，因而可靠且使用方便，這為油茶高品質(zhì)品系選育提供了極大的便利。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了一個(gè)與油茶種子油花生烯酸含量顯著關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)記在油茶品質(zhì)育種中的應(yīng)用。申請(qǐng)人利用該標(biāo)記對(duì)有性油茶群體進(jìn)行了輔助選擇，結(jié)果表明，該位點(diǎn)為T/G或T/T的單株中，60.95％的個(gè)體其花生烯酸含量低于群體花生烯酸含量平均值，而基因型為G/G的單株中，75.03％的個(gè)體其花生烯酸含量高于群體花生烯酸含量平均值。這表明該標(biāo)記用于輔助選擇是切實(shí)有效的。

與油茶種子油脂肪酸含量關(guān)聯(lián)位點(diǎn)的開發(fā)方法，其原理是油茶是典型的異交物種，連鎖不平衡(LD)通常在一個(gè)基因范圍內(nèi)迅速消減，因此可以開展重要性狀關(guān)鍵基因內(nèi)的LD作圖。茶油優(yōu)于其他油料的主要特點(diǎn)在于不飽和脂肪酸含量達(dá)90％以上，其中油酸含量在74％～87％，亞油酸含量為7％～14％。調(diào)控油茶不飽和脂肪酸含量的關(guān)鍵基因已經(jīng)被分離，作為本發(fā)明標(biāo)記開發(fā)的主要區(qū)域。在具備產(chǎn)生了大量明顯的遺傳變異的油茶自然群體的前提下，可有效開展與不飽和脂肪酸含量變異顯著相關(guān)的標(biāo)記開發(fā)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施：

(1)在油茶全分布區(qū)內(nèi)廣泛收集油茶種質(zhì)資源，建立種子油脂脂肪酸含量廣泛分離的油茶自然群體，作為關(guān)聯(lián)群體。

(2)采用KAC法(TaKaRa試劑盒Code No.9768)提取自然群體500個(gè)單株的嫩葉總DNA，并用0.8％～1％的瓊脂糖凝膠電泳及核酸測(cè)定儀測(cè)定提取DNA的質(zhì)量，要求DNA無降解，無蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)污染，濃度達(dá)100ng/μL以上。

(3)采集關(guān)聯(lián)群體500份油茶種質(zhì)的完全成熟種子，用氣象色譜法測(cè)定成熟種子油脂的脂肪酸成分含量，包括硬脂酸、軟脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、花生烯酸，具體方法按照GB/T 17376《動(dòng)植物油脂脂肪酸甲酯制備》和GB/T 17377《動(dòng)植物油脂脂肪酸甲脂的氣相色譜分析》執(zhí)行。

(4)根據(jù)油茶Cofad2-1A基因序列，合成引物P1和P2，序列分別為：5’-ATGGGTGCTGGTGGACGAATG-3’(SEQ ID NO.1)和5’-TTGCATCAGAATCAATACGTG-3’(SEQ ID NO.2)，并對(duì)樣本DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，該擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為1160±3bp。擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠回收后，采用一代測(cè)序技術(shù)測(cè)定核苷酸序列。過程中用到軟件包primer5(http://www.Premier5BioSoft.com)是免費(fèi)公開的；主要試劑包括Taq酶、dNTP、瓊脂糖、AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒。

(5)采用多序列比對(duì)法，依據(jù)最少基因型頻率≥5％的原則，篩選序列內(nèi)的SNP位點(diǎn)，分析測(cè)序峰圖確定SNP位點(diǎn)基因型。

(6)將群體的基因型數(shù)據(jù)輸入Structure2.3.4(http://pritchardlab.stanford.edu/structure.html)軟件，進(jìn)行群體遺傳結(jié)構(gòu)分析。

(7)將群體的基因型數(shù)據(jù)、遺傳結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)、脂肪酸成分含量的表型數(shù)據(jù)以及Kinship矩陣數(shù)據(jù)輸入TASSEL5.0(http://www.maizegenetics.net/tassel)軟件中，采用統(tǒng)一混合模型方法(MLM)分析SNPs標(biāo)記和脂肪酸含量性狀的連鎖不平衡性，共檢測(cè)到了3個(gè)與脂肪酸含量顯著關(guān)聯(lián)的SNPs。其中SNP01573位點(diǎn)與油茶種子油中花生烯酸含量顯著關(guān)聯(lián)(采用Bonferroni多重檢驗(yàn)校正，P<2.75×10^-4)，對(duì)表型變異的貢獻(xiàn)率為12.36％。

利用上述技術(shù)措施，本發(fā)明最終獲得了與油茶種子油花生烯酸含量顯著關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)記SNP01573，該標(biāo)記位于油茶Cofad2-1A基因開放閱讀框573bp處，堿基為T/T、T/G或G/G。若假設(shè)G/G基因型的基因效應(yīng)為0，針對(duì)油茶種子油花生烯酸含量性狀，T/T、T/G的基因效應(yīng)分別為-7.4508×10^-3和-4.202×10^-3。

進(jìn)一步地，本發(fā)明的與油茶種子油脂中花生烯酸含量相關(guān)的SNP分子標(biāo)記可以由核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示的引物對(duì)以油茶基因組DNA為模板經(jīng)PCR擴(kuò)增獲得。

本發(fā)明提供了上述SNP分子標(biāo)記在檢測(cè)花生烯酸含量高低的油茶中的應(yīng)用，若該位點(diǎn)的基因型為T/T或T/G，則待鑒定油茶為低花生烯酸含量油茶或候選低花生烯酸含量油茶；若該位點(diǎn)的基因型為G/G，則待鑒定油茶為高花生烯酸含量油茶或候選高花生烯酸含量油茶。

具體方法為：

(1)將待鑒定油茶材料嫩葉提取基因組DNA，采用P1和P2引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并回收所得到的PCR產(chǎn)物；

(2)測(cè)定PCR產(chǎn)物的堿基序列，并鑒定SNP01573位點(diǎn)的基因型，若該位點(diǎn)的基因型為T/T或T/G，則待鑒定油茶為低花生烯酸含量油茶或候選低花生烯酸含量油茶；若該位點(diǎn)的基因型為G/G，則待鑒定油茶為高花生烯酸含量油茶或候選高花生烯酸含量油茶。

所述待鑒定油茶可以為任何育種材料，包括自然群體個(gè)體和有性群體個(gè)體。

上述方法中，提取油茶基因組DNA采用KAC法(TaKaRa試劑盒Code NO.9768)。

上述方法中，所述PCR程序?yàn)椋?5℃，3min，1個(gè)循環(huán)預(yù)變性；95℃，15s變性，68℃，45s延伸，40個(gè)循環(huán)；68℃，5min，1個(gè)循環(huán)徹底延伸。

所述瓊脂糖凝膠電泳中，瓊脂糖凝聚的濃度為1.2％。膠回收使用AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒。

上述方法測(cè)定PCR產(chǎn)物的堿基序列，以P1為測(cè)序引物，采用一代測(cè)序技術(shù)。

本發(fā)明提供了上述SNP分子標(biāo)記在油茶種質(zhì)資源改良中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了上述SNP分子標(biāo)記在油茶種子油脂品質(zhì)早期預(yù)測(cè)中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了用于檢測(cè)上述SNP分子標(biāo)記的基因型的引物對(duì)，其核苷酸序列分別如SEQ ID NO.1-2所示。

含有SEQ ID NO.1-2所示引物對(duì)的試劑盒屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

本發(fā)明提供了SEQ ID NO.1-2所示的引物對(duì)或含有該引物對(duì)的試劑盒在鑒定高花生烯酸含量的油茶中的應(yīng)用。

上述應(yīng)用是采用PCR檢測(cè)待測(cè)油茶基因組DNA，擴(kuò)增產(chǎn)物(核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示)的第573位堿基，若基因型為G/G時(shí)，則待鑒定油茶為高花生烯酸含量的油茶。

上述應(yīng)用中，PCR的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃3min；95℃15s，68℃45s，共40個(gè)循環(huán)；68℃5min，1個(gè)循環(huán)徹底延伸。

本發(fā)明首次開發(fā)了一個(gè)與油茶花生烯酸含量關(guān)聯(lián)的SNP位點(diǎn)，可以解釋12.36％的花生烯酸含量表型方差。在油茶常規(guī)選擇育種中，種子油脂成分性狀的鑒定需要幼苗造林5-6年才能鑒定，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。本發(fā)明中的SNP位點(diǎn)位置明確，檢測(cè)方法方便快速，不受環(huán)境影響，目的性更強(qiáng)，工作量小，效率更高，成本低。因此，通過檢測(cè)該SNP位點(diǎn)，可在苗期進(jìn)行鑒定和輔助篩選，大大節(jié)約生產(chǎn)成本和提高選擇效率。

附圖說明

圖1油茶自然群體種子油中花生烯酸含量分布圖(橫坐標(biāo)表示油茶種子油脂中花生烯酸含量(％)，縱坐標(biāo)表示樣品個(gè)體數(shù))。結(jié)果表明油茶種子油中花生烯酸含量表型呈正態(tài)分布，屬于數(shù)量性狀。

圖2提取嫩葉總DNA電泳圖，每個(gè)泳道為一個(gè)樣品，可見所提取的DNA樣品無降解，無蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)污染，質(zhì)量較高，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖3擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序峰圖，由于油茶屬于異交物種，雜合度較高，很多位點(diǎn)屬于雜合位點(diǎn)，本發(fā)明中檢測(cè)到的SNP位點(diǎn)亦為雜合位點(diǎn)。虛線框內(nèi)部分即為檢測(cè)位點(diǎn)，從左至右分別為T/T、T/G(雜合位點(diǎn))和G/G基因型。

圖4樣本亞群群體結(jié)構(gòu)效應(yīng)示意圖，結(jié)果表明本發(fā)明所用自然群體所有個(gè)體，根據(jù)其核苷酸多態(tài)性可分為4個(gè)亞群。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。

本研究中所用的自然群體材料500份單株，均由中國林業(yè)科學(xué)研究院亞熱帶林業(yè)研究所木本油料研究組收集、評(píng)價(jià)，并保存于浙江金華婺城區(qū)東方紅林場(chǎng)種質(zhì)資源圃。

若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。

實(shí)施例1油茶種子油脂肪酸成分含量分離群體的構(gòu)建及性狀測(cè)定

本實(shí)施例中使用普通油茶資源收集圃內(nèi)500份種質(zhì)資源的自然群體，其起源地涵蓋我國油茶主產(chǎn)區(qū)的大部分，包括浙江省、湖南省、江西省、廣西區(qū)、福建省、廣東省等。500個(gè)體待果實(shí)完全成熟后(5％果實(shí)開裂)，采集種子，提取油脂測(cè)定脂肪酸成分及含量。其操作步驟如下：

(1)適量油茶種子用烤箱80℃烘烤過夜至恒重，剝?nèi)ビ卜N皮。

(2)種仁用粉碎機(jī)粉碎后，用中速濾紙包好，加入適量乙醚浸泡抽提過夜。

(3)待乙醚完全揮發(fā)后，利用Agilent6890N氣相色譜儀按照GB/T17376-2008、GB/T17377-2008方法測(cè)定脂肪酸成分及含量。

脂肪酸成分含量測(cè)定結(jié)果表明：自然群體種子油中花生烯酸含量呈正態(tài)分布(圖1)，說明這個(gè)性狀具有數(shù)量性狀特點(diǎn)。

實(shí)施例2 Cofad2-1A基因片段擴(kuò)增

1、葉片總DNA提?。?/p>

利用TaKaRa MiniBEST Plant Genomic DNA Extraction Kit中富含多糖、多酚及油脂植物材料裂解系統(tǒng)提取葉片總DNA，具體步驟如下：

(1)首先在1.5ml離心管中加入500μl的Buffer HSⅡ。取0.1g新鮮葉片加入液氮充分研磨，迅速將研磨好的葉片粉末加入到離心管中充分混勻，然后加入10μl的RNaseA(10mg/ml)，充分振蕩混勻，于56℃水浴溫浴10分鐘；

(2)加入62.5μl的Buffer KAC，充分混勻。冰上放置5分鐘，12000rpm離心5分鐘。取上清，加入與上清液等體積的Buffer GB，充分混勻。

(3)將Spin Column安置于收集管上，溶液移至Spin Column中(溶液過多，可分兩次過柱，每次過柱的體積量不要超過700μl)，12000rpm離心1分鐘，棄濾液。

(4)將500μl的Buffer WA加入至Spin Column中，12000rpm離心1分鐘，棄濾液。

(5)將700μl的Buffer WB加入至Spin Column中，12000rpm離心1分鐘，棄濾液。

(6)重復(fù)操作步驟(5)。

(7)將Spin Column安置于收集管上，12000rpm離心2分鐘。

(8)將Spin Column放置于新的1.5ml的離心管上，在Spin Column膜的中央處加入30～50μl的Elution Buffer，室溫靜置5分鐘，12000rpm離心2分鐘洗脫DNA。用紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA濃度，于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?圖2)。

2、引物的開發(fā)和合成：

所用引物是根據(jù)譚曉風(fēng)等(譚曉風(fēng)，陳鴻鵬，張黨權(quán)等，油茶FAD2基因全長(zhǎng)cDNA的克隆和序列分析，林業(yè)科學(xué)，2008,44(3)：70-75)已克隆的油茶Cofad2-1A基因的cDNA序列設(shè)計(jì)的。具體的開發(fā)方法是根據(jù)該基因的cDNA序列利用Primer5軟件(http://www.Premier5BioSoft.com)在起始密碼子和終止密碼子附近分別設(shè)計(jì)引物P1(5’-ATGGGTGCTGGTGGACGAATG-3’)和P2(5’-TTGCATCAGAATCAATACGTG-3’)，以群體個(gè)體DNA為模板，擴(kuò)增Cofad2-1A基因的基因組序列。

3、Cofad2-1A基因片段擴(kuò)增，其流程如下：

以提取的所有個(gè)體DNA為模板，P1和P2為擴(kuò)增引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系：

PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?/p>

4、擴(kuò)增片段的凝膠檢測(cè)和純化回收并測(cè)序、基因分型，按照AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒說明書進(jìn)行，其流程如下：

(1)配制1.2％的瓊脂糖凝膠，將50μl擴(kuò)增產(chǎn)物全部上樣，電泳電壓為5V/cm，電泳約20分鐘至上樣緩沖液中二甲苯青達(dá)到距離凝膠前端1cm處時(shí)停止電泳。

(2)在紫外燈下切下含有目的DNA的瓊脂糖凝膠，用紙巾吸盡凝膠表面的液體并切碎。計(jì)算凝膠重量，該重量作為一個(gè)凝膠體積(例如100mg＝100μl體積)。

(3)加入3個(gè)凝膠體積的Buffer DE-A，混合均勻后于75℃加熱，每2～3分鐘間斷混合，直至凝膠塊完全熔化。

(4)加入0.5個(gè)Buffer DE-A體積的Buffer DE-B，混合均勻。

(5)將上述溶液轉(zhuǎn)移到DNA制備管中，12000rpm離心1分鐘，棄濾液。

(6)加入500μl Buffer W1，12000rpm離心30秒，棄濾液。

(7)加入700μl Buffer W2，12000rpm離心30秒，棄濾液。以同樣的方法再用700μl Buffer W2洗滌一次，12000rpm離心1分鐘，棄濾液。

(8)將制備管放回離心管中，12000rpm離心1分鐘。

(9)將制備管置于潔凈的1.5ml離心管中，在制備膜中央加25～30μl去離子水，室溫靜置1分鐘。12000rpm離心1分鐘洗脫DNA。

(10)凝膠回收DNA，以P1和P2為測(cè)序引物，采用一代測(cè)序測(cè)定擴(kuò)增產(chǎn)物核苷酸序列。用Chromas軟件判讀測(cè)序峰圖上每個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型(圖3)

實(shí)施例3與油茶種子油脂肪酸含量相關(guān)的SNP位點(diǎn)的篩選

群體結(jié)構(gòu)分析和連鎖不平衡分析，其步驟如下：

(1)將所有樣本的SNPs位點(diǎn)數(shù)據(jù)導(dǎo)入Structure2.3.4軟件中，設(shè)置K＝2～9，每K值運(yùn)行5次，burnin5000次，重復(fù)50000次。當(dāng)LnP(D)和α值均保持穩(wěn)定，且α＜0.2時(shí)，確定群體結(jié)構(gòu)的K值(圖4)，本發(fā)明中K＝4，并確定各個(gè)樣本的K(4)個(gè)亞群效應(yīng)值(表1)。

表1自然群體部分個(gè)體的4個(gè)亞群效應(yīng)值

(2)將所有樣本的SNPs位點(diǎn)數(shù)據(jù)、K個(gè)亞群效應(yīng)值數(shù)據(jù)、表型數(shù)據(jù)(見實(shí)施例1)及Kinship矩陣數(shù)據(jù)導(dǎo)入TASSEL5.0軟件中，采用MLM法分析SNPs和脂肪酸含量表型性狀之間的相關(guān)性，分析SNPs與脂肪酸含量的連鎖不平衡性，篩選與不飽和脂肪酸含量顯著關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)記，采用Bonferroni多重檢驗(yàn)校正，檢測(cè)到了一個(gè)跟花生烯酸含量存在顯著關(guān)聯(lián)的位點(diǎn)SNP01573。該標(biāo)記與花生烯酸含量關(guān)聯(lián)F檢驗(yàn)的P值為1.06×10^-4，對(duì)花生烯酸含量差異的貢獻(xiàn)率為12.36％。

實(shí)施例4分子標(biāo)記SNP01573在高花生烯酸含量油茶育種中的應(yīng)用

(1)選擇一個(gè)油茶雜交F1代家系群體為材料，采集嫩葉提取總DNA(見實(shí)施例2)。

(2)利用P1和P2引物對(duì)總DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增(見實(shí)施例2)。

(3)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠回收純化和測(cè)序分析(見實(shí)施例2)。

(4)鑒定所有個(gè)體SNP01573位點(diǎn)的基因型。若該位點(diǎn)的基因型為T/T或T/G，則油茶個(gè)體為低花生烯酸含量油茶或候選低花生烯酸含量油茶；若該位點(diǎn)的基因型為G/G，則油茶個(gè)體為高花生烯酸含量油茶或候選高花生烯酸含量油茶。

(5)采集所有F1代個(gè)體完全成熟種子，測(cè)定其種子油的脂肪酸成分和含量(見實(shí)施例1)。結(jié)果表明(表2)，該位點(diǎn)為T/T或T/G的單株中，60.95％的個(gè)體其花生烯酸含量低于群體花生烯酸含量平均值(0.50％)，而基因型為G/G的單株中，75.03％的個(gè)體其花生烯酸含量高于群體花生烯酸含量平均值(0.50％)。這表明該標(biāo)記用于輔助選擇是切實(shí)有效的，可用于早期鑒別或輔助鑒別，可大大節(jié)約生產(chǎn)成本，提高選擇效率，加快油茶茶油品質(zhì)育種進(jìn)程。

表2利用SNP01573位點(diǎn)輔助選擇得到的F1單株的花生烯酸含量數(shù)據(jù)

雖然，上文已經(jīng)用一般性說明、具體實(shí)施方式及試驗(yàn)，對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之做出一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。

SEQUENCE LISTING

<110> 中國林科院亞熱帶林業(yè)研究所

<120> 一種與油茶種子油脂中花生烯酸含量相關(guān)的SNP分子標(biāo)記

<130> KHP171110821.2

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

atgggtgctg gtggacgaat g 21

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ttgcatcaga atcaatacgt g 21

<210> 3

<211> 1160

<212> DNA

<213> 油茶

<400> 3

atgggtgctg gtggacgaat gcctgtccca gcaaccaaac atgaacagca gattaccccc 60

cacagggccc ctcactcaaa gccaccattc actctcggtg aaatcaagaa agccatccca 120

ccccactgct ttgaacgttc tctcctccgc tcattctcct acattgttta tgacttctct 180

ctcgtctttc ttttctacta cgtcaccacc tcttacatcc acctccttcc acagcacttc 240

cgttatcttg tgtggcccat ctactgggca cttcaaggtt gtgtcctcac tggtgtgtgg 300

gtcattgctc atgaatgtgg tcaccatgca ttcagtgatt accaatgggt cgatgacacg 360

gttggtctca tccttcactc caccctttta gttccctact tctcatggaa atacagtcac 420

cgccgtcacc actccaacac cagttccctt gagcatgatg aagtttttgt cccgaaaccc 480

aaatccaaac tcgcatggta ttccaaatac ttgaacaacc cggtgggtcg tgttgtcaca 540

cttgtgatca cactcactct tggctggccc tcttacttgg ccttcaatgt atcagggaga 600

ccttatgatc gttttgcatg tcactacgac ccatatggcc cgatctacaa caaccgtgaa 660

aggctccaga tttacatctc tgatgttggt atcatcacta tagtttatgt tctctgtcgc 720

cttgcttttg caaaagggct ggcttggctt gtttgtgttt atggggttcc gttactgatt 780

gtgaacgggt tccttgtctt gatcacattc ctgcagcaca ctcatcctgc tctgcctcat 840

tatgactcat cggaatggga ctggctgagg ggagctctgt caaccatgga tagggattat 900

ggagtgctga acaaggtgtt ccataatatc acagatactc atgttgctca ccacctcttc 960

tctacaatgc cacattacca tgcaatggag gccacaaagg cgattaagcc tattctcggt 1020

gagtattacc tgtttgatgg tactgcattt tacaaggcga tgtggaggga ggcaagagag 1080

tgtctctacg tggaatcaga tgacgatacc accaccaaag gtgtattttg gtataaaaac 1140

acgtattgat tctgatgcaa 1160