1.一種雞腺病毒4型高免卵黃抗體的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
步驟1、分離毒株制備疫苗:樣品經(jīng)過研磨,凍融3次,12000g/min告訴離心8min,吸取上清液,將上清液接種到雞胚尿囊腔,經(jīng)過3代的傳遞,根據(jù)雞胚的病變和PCR檢測情況,驗證得到弱毒株XH03;
步驟2、免疫健康雞群制得蛋:采用自備的雞腺病毒滅活苗對健康21只進(jìn)行免疫,免疫兩次,間隔兩周,一周后開始收集蛋,清理、消毒、晾干備用;
步驟3、將收集好的雞蛋表面污物洗干凈,在0.4%的新潔爾滅溶液中浸泡15min;取出后用消毒紗布擦干,從小頭打破蛋殼后倒盡蛋清;用不帶針頭的1ml無菌注射器插入蛋黃中,吸取500ul放入高壓滅菌過的2ml離心管內(nèi),加入1ml PBS緩沖液,即卵黃:PBS以1:2的比例稀釋;在卵黃液中加入青、鏈霉素各1000單位/ml;按0.01%加入硫柳汞,以防止微生物污染;在漩渦混勻器上充分混合均勻,并用封口膜封口,放置4℃?zhèn)溆茫?/p>
步驟4、高免卵黃抗體的提取
1)用PBS稀釋卵黃液,體積比為2:1,用PEG-6000配成3.5%的PEG溶液,混合均勻,靜置20min,4℃,14000rpm離心10min;
2)棄去上清液和脂肪層;添加PEG-6000,配成12%的PEG溶液,混合均勻,靜置20min;4℃,14000rpm離心10min;
3)棄去上清液,用PBS稀釋沉淀至原卵黃液體積;然后添加PEG-6000,配成12%(w/v)的PEG溶液,混合均勻,靜置20min;4℃,14000rpm離心10min;
4)棄去上清液,PEG用抽氣法移走,然后用PBS溶解沉淀至體積為原卵黃溶液的二分之一。