一種禽流感卵黃抗體口服液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于禽類用生物制品技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種禽流感卵黃抗體口服液及其制備 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 禽流感（avianinfluenza;AI)又名真雞瘟，由禽流感病毒（AIV)所引起的一種主 要流行于雞群中的烈性傳染病。高致病力毒株可致禽類突發(fā)死亡，是國際獸疫局規(guī)定的A 類疫病，也能感染人。禽流感最早發(fā)生于1878的意大利。當(dāng)時，意大利發(fā)生雞群大量死亡， 當(dāng)時被稱為雞瘟。到1955年，科學(xué)家證實其致病病毒為甲型流感病毒。此后，這種疾病被 更名為禽流感。禽流感被發(fā)現(xiàn)100多年來，人類并沒有掌握特異性的預(yù)防和治療方法，僅能 以消毒、隔離、大量宰殺禽畜的方法防止其蔓延。
[0003] 卵黃抗體IgY是的一種免疫球蛋白Ig，IgY在功能上相當(dāng)于哺乳動物IgG，但結(jié)構(gòu) 上有所不同，具有典型的的免疫球蛋白的空間構(gòu)象。卵黃抗體具有很多優(yōu)越性。（1)由于鳥 類與哺乳類動物種系發(fā)生學(xué)的差距，鳥類更適于生產(chǎn)抗哺乳動物抗原的特異性抗體。卵黃 抗體不會激發(fā)補體系統(tǒng)，不與抗哺乳動物抗原的抗體發(fā)生反應(yīng)，不與哺乳動物和細菌的Fc 受體結(jié)合，這在免疫診斷中具有重要意義。（2)卵黃抗體作為一種具有生物活性的免疫球蛋 白，在貯存、生產(chǎn)、加工、攝食及消化過程中保證其穩(wěn)定性是非常關(guān)鍵的。多項試驗表明，IgY 具有較好的穩(wěn)定性，耐酸、耐堿、耐熱。卵黃抗體較易保存，4°C條件下存放5年或室溫條件 下存放6個月對抗體活性無明顯影響。（3)卵黃抗體量大，成本低，便于規(guī)?；a(chǎn)。卵黃 中抗體濃度能長期維持在相當(dāng)于甚至超過血清抗體濃度的水平上?？偟膩碇v，卵黃抗體對 動物沒有毒副作用，用卵黃抗體治療動物疾病不但避免了血清價格昂貴、產(chǎn)量低的缺點，而 且可以避免血清在治療過程中引起的副作用，是一種很有前途的新型免疫球蛋白制劑。因 此，卵黃抗體在禽畜疾病診斷、治療和預(yù)防的應(yīng)用越來越多。目前卵黃抗體的制備及生產(chǎn)工 藝已經(jīng)成熟，可以保質(zhì)保量的生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供一種禽流感卵黃抗體口服液及其制備方法，解決注射用的禽流感卵黃 抗體使用不方便的問題。
[0005] 本發(fā)明的目的是通過以下形式實現(xiàn)的： 一種禽流感卵黃抗體口服液，包括以下按照體積比計算的原料：含卵黃抗體的全蛋水 溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;還包括800-1000單位/毫升 口服液的青鏈霉素。
[0006] 制備步驟是： 1) 采用禽流感滅活疫苗對雞只進行強化免疫：采用三次免疫程序，每次間隔10天，每 只雞每次疫苗用量為2ml，當(dāng)抗體效價達到1 : (128-256)時，進行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新潔爾滅對高免蛋進行消毒； 3) 將2)中高免蛋的全蛋液進行乳化，乳化時間7-10min，然后加入pH為4. 2-4. 3的、 溫度為4-6°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水的加入量為全蛋液體積的5. 5-6. 5倍，混勻后，降 溫至3-5°C，靜置18-24小時； 4) 取3)中的上層清液，升溫到25-32°C，加入辛酸，攪拌l_2h，靜置10-12h，過濾；其中 辛酸體積量：上層清液體積量為（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素，使卵黃抗體的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的體積 比為（95-105) : (0? 2-0. 3) : (0? 2-0. 3) : (0? 01-0. 02)，青鏈霉素的含量為 800-1000 單位 / 暈升口服液； 6) 分裝，保存。
[0007] 步驟4)過濾時依次通過1. 0mm、0. 45mm、0. 22mm的濾膜進行過濾。
[0008] 本發(fā)明通過對高免蛋全蛋提取、低溫酸化處理、辛酸處理后得到澄清卵黃抗體口 服液。本發(fā)明將全蛋使用到卵黃抗體的提取中，可以直接在臨床上進行口服使用，蛋清中含 有大量的各類蛋白質(zhì)，可充分利用高免蛋的價值，提高動物機體的免疫力和應(yīng)激能力，生物 利用度高，具有生物活性不受影響的優(yōu)點。
【具體實施方式】
[0009] 實施例1 : 一種禽流感卵黃抗體口服液的配方包括以下原料：含卵黃抗體的全蛋水溶液95L、辛 酸0. 2L、甲醛0. 3L、硫柳汞0. 02L，以及1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。
[0010] 其制備方法包括以下步驟： 1)采用市售的禽流感滅活疫苗（HP株）進行強化免疫，每只雞每次疫苗用量為2ml，每 次間隔10天，進行三次免疫程序，當(dāng)抗體效價達到1 :256時，開始收集高免蛋。
[0011] 2)將收集高免蛋整理，0. 2%新潔爾滅消毒，備用。
[0012] 3)水稀釋法酸化處理：將2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐體內(nèi)進行充分乳化，乳化時 間7min，然后將乳化后的全蛋液加入pH為4. 2、溫度為4°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水加入 量為全蛋液體積的6倍，混勻，放置4°C環(huán)境中18小時靜置沉淀，取上清液；鹽酸酸化水是 在水中加入鹽酸使其PH值達到4. 2。
[0013] 4)辛酸處理；將步驟3)的上清液，即含卵黃抗體的全蛋水溶液進行稱量，升溫到 25°C，加入辛酸，充分混勻lh，然后靜置10h;其中，按體積比，上層清液：辛酸=95 :0. 2 ; 5) 對步驟4)所得澄清液依次用1. 0_、0. 45mm、0. 22mm的濾膜過濾，留取濾液； 6) 向步驟5)所得濾液加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素；按體積比，含卵黃抗體的全蛋全蛋 水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞=95 :0. 2 :0. 3 :0. 02 ;青鏈霉素在該口服液中的含量為1000單 位/毫升； 7) 分裝，保存。
[0014] 為確定卵黃抗體口服液在常溫下的放置有效期，做了以下試驗：將本品保存在 37°C培養(yǎng)箱中，保存24個月，分別1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月 后，用瓊脂擴散(AGP)法，測定每個時間點取樣品的卵黃抗體效價變化，結(jié)果見表1。
[0015] 表1.常溫放置口服液不同時間段效價的變化
【主權(quán)項】
1. 一種禽流感卵黃抗體口服液，其特征在于：包括以下按照體積比計算的原料：含 卵黃抗體的全蛋水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;還包括 800-1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。
2. -種如權(quán)利要求1所述禽流感卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于具體步驟 是： 1) 采用禽流感滅活疫苗對雞只進行強化免疫：采用三次免疫程序，每次間隔10天，每 只雞每次疫苗用量為2ml，當(dāng)抗體效價達到1 : (128-256)時，進行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新潔爾滅對高免蛋進行消毒； 3) 將2)中高免蛋的全蛋液進行乳化，乳化時間7-10min，然后加入pH為4. 2-4. 3的、 溫度為4-6°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水的加入量為全蛋液體積的5. 5-6. 5倍，混勻后，降 溫至3-5°C，靜置18-24小時； 4) 取3)中的上層清液，升溫到25-32°C，加入辛酸，攪拌l_2h，靜置10-12h，過濾；其中 辛酸體積量：上層清液體積量為（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素，使卵黃抗體的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的體積 比為（95-105) : (0? 2-0. 3) : (0? 2-0. 3) : (0? 01-0. 02)，青鏈霉素的含量為 800-1000 單位 / 暈升口服液； 6) 分裝，保存。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的禽流感卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于：步驟4) 過濾時依次通過1. 〇mm、〇. 45mm、0. 22mm的濾膜進行過濾。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種禽流感卵黃抗體口服液及其制備方法。其配方在于，包括以下按照體積比計算的原料：含卵黃抗體的全蛋水溶液95-105、辛酸0.2-0.3、甲醛0.2-0.3、硫柳汞0.01-0.02；還包括800-1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。制備時采用高免蛋全蛋得到澄清卵黃抗體口服液。這種方法制備的卵黃抗體口服液不僅使生產(chǎn)過程中損失少、免疫活性物質(zhì)強多、生物活性高、無臨床副作用，同時，含有蛋清中大量的各種蛋白質(zhì)，可以減少口服時對抗體的不良影響。
【IPC分類】A61K39-42, A61K9-00, A61K31-43, A61K31-7036, A61P31-16
【公開號】CN104524572
【申請?zhí)枴緾N201410762581
【發(fā)明人】徐進, 郭俊清
【申請人】鄭州后羿制藥有限公司
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年12月14日