專利名稱：抗奶牛乳腺炎病原菌復(fù)合卵黃抗體及其制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及了一種具有抗體活性的卵黃抗體物質(zhì)——抗奶牛乳腺炎病原菌卵復(fù)合黃抗體(抗-MasIgY)產(chǎn)品，并涉及其制備工藝及在獸類藥學(xué)和飼料添加劑中的應(yīng)用。
奶牛乳腺炎(Mastitis)主要是病原微生物感染引起，革蘭氏陽(yáng)性菌是最常見(jiàn)引起乳腺炎的細(xì)菌，乳腺炎的80％-90％由葡萄球菌及鏈球菌所引起。葡萄球菌中以金黃色葡萄球菌感染最多，鏈球菌屬又以無(wú)乳鏈球菌感染最多。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性桿菌(G-)也能引起急性乳腺炎、乳腺壞疽。病原微生物可以由損傷的皮膚和乳頭進(jìn)入乳腺，隨著乳腺內(nèi)牛奶的充盈，病原體能漂浮到乳腺上部，自下而上，呈漸進(jìn)性上行感染；也可通過(guò)消化道、呼吸道、生殖道及受傷的皮膚進(jìn)入體內(nèi)，經(jīng)體液轉(zhuǎn)至乳腺引起感染。若得不到及時(shí)治療，感染范圍擴(kuò)大，感染程度加劇，引起乳腺化膿、破潰，喪失泌乳功能。奶牛乳腺炎按照目前臨床上常用的分類方法，可分隱性乳腺炎、臨床型乳腺炎和慢性乳腺炎三種。
奶牛乳腺炎目前主要的治療方法是應(yīng)用抗生素，如β-內(nèi)酰胺類抗生素、氨基糖甙類藥物、大環(huán)內(nèi)脂類抗生素、土霉素類及林可霉素和克林霉素等，靠該類藥物防治奶牛乳腺炎疾病雖有一定的幫助，卻直接導(dǎo)致奶制品抗生素殘留大大超過(guò)我國(guó)自訂的綠色無(wú)污染標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)際出口標(biāo)準(zhǔn)，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失；另有部分養(yǎng)殖企業(yè)采用中藥制劑方式對(duì)奶牛進(jìn)行該類疾病的防治，但中藥制劑的效果不甚理想，因而疾病在奶牛中無(wú)法從根本上得到控制。近年來(lái)許多國(guó)家都逐漸在使用包括活菌苗、滅活苗等生物制劑來(lái)控制這類疾病，這種生物制劑防治乳腺炎感染的效果多數(shù)情況下是單一的，對(duì)混合感染的疾病無(wú)能為力，疫苗對(duì)健康動(dòng)物傳染病的預(yù)防是根本，但對(duì)臨床上一定比例發(fā)病群體和混合感染的治療至今是一個(gè)難題。以上幾點(diǎn)是我國(guó)現(xiàn)行奶牛乳腺炎疾病的的主要防治方式，均各有弊端，不利于我國(guó)奶制品質(zhì)量得到確切有效的提高。長(zhǎng)期食用這樣的食品，將給人們的身體健康帶來(lái)嚴(yán)重的損害。
雞卵黃抗體(IgY)是來(lái)自雞血清的IgG(免疫球蛋白G)，IgY的結(jié)構(gòu)與IgG相似，具有典型的免疫球蛋白的空間構(gòu)象。研究表明IgY具有高度的穩(wěn)定性，在熱、酸、堿環(huán)境中具有優(yōu)良的耐受性，同時(shí)IgY還具有成本低、易于形成規(guī)?；a(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。目前國(guó)內(nèi)已有病毒、細(xì)菌等顆粒性抗原誘導(dǎo)雞卵黃表達(dá)特異性抗體的研究報(bào)告。
現(xiàn)有技術(shù)中未見(jiàn)有通過(guò)采用奶牛乳腺炎病原菌(葡萄球菌、鏈球菌、G-桿菌)作為抗原，免疫健康母雞，收集其所產(chǎn)的卵，再?gòu)穆阎刑崛】?MasIgY報(bào)道。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)以上問(wèn)題，提供一種方便、高效、無(wú)毒副作用的非抗生素生物制劑，用于因葡萄球菌、鏈球菌、G-桿菌感染所引起的奶牛乳腺炎疾病的防治。針對(duì)以往產(chǎn)品只能采取針劑的形式注射使用，使用不便，而加以改進(jìn)。該抗體穩(wěn)定性較強(qiáng)、耐酸、堿，可以采取口服形式使用，能保持產(chǎn)品的活性與效價(jià)，使用方便，易于推廣。因其制備免疫球蛋白的方法較以往的要簡(jiǎn)單、快速、易于掌握，提取回收率理想、經(jīng)濟(jì)效益可觀，適于產(chǎn)業(yè)化制作。
本發(fā)明通過(guò)以奶牛乳腺炎病原菌為抗原，免疫健康產(chǎn)蛋母雞，提取活性成分(抗-MasIgY)。為治療奶牛乳腺炎感染提供一條新思路和新方法，并為進(jìn)一步制備抗奶牛乳腺炎的免疫生物制劑奠定基礎(chǔ)。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題之一是提供一種具有抗體活性的抗奶牛乳腺炎卵黃抗體(抗-MasIgY)；本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題之二是提供上述抗奶牛乳腺炎卵黃抗體(抗-MasIgY)的制備方法；本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題之三是提供上述抗奶牛乳腺炎卵黃抗體(抗-MasIgY)在制備用于因病原菌引起的奶牛乳腺炎的預(yù)防或治療的藥物制劑或飼料添加劑應(yīng)用。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題之一所采用的技術(shù)方案是這樣的，即一種抗奶牛乳腺炎卵黃抗體(抗-MasIgY)，其特征在于所述抗-MasIgY按SDS-PAGE電泳(7.5％分離膠)檢測(cè)，圖譜呈現(xiàn)單一區(qū)帶；經(jīng)電泳考馬斯亮蘭R250染色呈藍(lán)色；免疫印記Western-blotting檢測(cè)中高分子量帶處出現(xiàn)清晰的特異性酶染條帶；采用雙縮脲生化法測(cè)定蛋白濃度。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題之二是通過(guò)采用這樣的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，即一種制備抗奶牛乳腺炎卵黃抗體(抗-MasIgY)的方法，其特征在于采用如下的步驟完成1、制備奶牛乳腺炎病原菌抗原(1)菌體抗原制備分別將葡萄球菌、鏈球菌、G-桿菌菌株，涂布于血瓊脂和營(yíng)養(yǎng)瓊脂上，37℃培養(yǎng)24h，得純菌種后，在營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)24h，收集菌體。
(2)莢膜亞單位抗原的制備菌種按1∶100接種于新鮮牛肉湯中、37℃培養(yǎng)24h后置60C水浴滅活1h，振蕩幾次后置冰箱過(guò)夜，次日4000g離心25min，收集上層清液，加入適量CTAB〔預(yù)先水浴溶解〕，充分振蕩后冰箱過(guò)夜，4000g離心45min，棄上層清夜、收集沉淀、用原菌液量2.5％的去離子水研磨，再加入等量2mol/L的CaCl2溶液.振蕩1h，按體積比加入25％(v/v)預(yù)冷無(wú)水乙醇，充分振蕩，冰箱過(guò)夜，4000g離心25min，棄沉淀，收集上層清夜繼續(xù)加入無(wú)水乙醇，使乙醇總量為80％(V/V)，冰箱過(guò)夜，4000g離心45min，棄上層清夜，收集沉淀。
(3)結(jié)合抗原制備根據(jù)三類菌的主要致病因子(葡萄球菌腸毒素、鏈球菌外毒素、G-桿菌內(nèi)毒素)，構(gòu)建含有以上三種細(xì)胞毒素的基因表達(dá)質(zhì)粒，在大腸桿菌系統(tǒng)中進(jìn)行表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)分離純化制備。
以上所得按重量比1∶1加入完全福氏佐劑，乳化得菌體抗原2、將菌體抗原按以下的步驟制備抗體(1)對(duì)產(chǎn)卵母雞的免疫I、基礎(chǔ)免疫選用產(chǎn)卵母雞(健康)隔離飼養(yǎng)，進(jìn)行雞皮下多點(diǎn)注射復(fù)合抗原，0.5ml/只。
II、強(qiáng)化免疫基礎(chǔ)免疫7天后，進(jìn)行強(qiáng)化免疫，注射不完全福氏佐劑復(fù)合抗原0.5ml/只。
III、超強(qiáng)化免疫21天后需超強(qiáng)化免疫1-3次，注射量1ml/只，以保持抗體滴度。
于7天后開(kāi)始收集雞蛋，4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br> (2)卵黃抗體的提取①.采用水溶法提取卵黃抗體從免疫雞卵中分離得蛋黃，以蒸餾水稀釋，調(diào)整適當(dāng)PH值4℃靜置8h，離心取上層清夜?jié)饪s、冷凍干燥，得到抗-MasIgY；
或②采用膜過(guò)濾法提取卵黃抗體分離得蛋黃，以蒸餾水稀釋，4℃靜置12h后，以分子量為300KD和100KD的膜分別過(guò)濾，收集蛋白物質(zhì)，冷凍干燥得到抗-MasIgY。
本發(fā)明所提供的上述抗-MasIgY產(chǎn)品由奶牛乳腺炎病原菌免疫產(chǎn)卵母雞而得，具有特異性，對(duì)防治奶牛乳腺炎感染引起的疾病具有良好的效果。本發(fā)明采用母雞所產(chǎn)雞卵為載體，安全無(wú)毒，易于產(chǎn)業(yè)化。
由于解決上訴技術(shù)問(wèn)題抗奶牛乳腺炎病原菌復(fù)合卵黃抗體(抗-MasIgY)可制成粉劑、散劑、水劑等劑型，可以口服、灌注應(yīng)用，使用方便。
附圖
的說(shuō)明附圖給出了本發(fā)明制備方法的工藝流程圖。
實(shí)施例2菌體抗原的制備，病原菌菌株，在營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)24h。收集菌體，按重量比1∶1加入完全福氏佐劑，乳化得菌體抗原。
實(shí)施例3莢膜亞單位抗原的制備菌種按1∶100接種于新鮮牛肉湯中、37℃培養(yǎng)24h后置60℃水浴滅活1h，振蕩幾次后置冰箱過(guò)夜，次日4000g離心25min，收集上層清夜，加入適量CTAB〔預(yù)先水浴溶解〕，充分振蕩后冰箱過(guò)夜，4000g離心45min，棄上層清夜、收集沉淀、用原菌液量2.5％的去離子水研磨，再加入等量2mol/L的CaCl2溶液.振蕩1h，按體積比加入25％(v/v)預(yù)冷無(wú)水乙醇，充分振蕩，冰箱過(guò)夜，4000g離心25min，棄沉淀，收集上層清夜繼續(xù)加入無(wú)水乙醇，使乙醇總量為80％(V/V)，冰箱過(guò)夜，4000g離心45min，棄上層清夜，收集沉淀。按重量比1∶1加入完全福氏佐劑，乳化得菌體抗原。
實(shí)施例4結(jié)合抗原制備根據(jù)三類菌的主要致病因子(葡萄球菌腸毒素、鏈球菌外毒素、G-桿菌內(nèi)毒素)，構(gòu)建含有以上三種細(xì)胞毒素的基因表達(dá)質(zhì)粒，在大腸桿菌系統(tǒng)中進(jìn)行表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)分離純化制備。按重量比1∶1加入完全福氏佐劑，乳化得菌體抗原。
實(shí)施例5采用如下方式分離提取抗-MasIgY從免疫雞卵中分離得蛋黃，以蒸餾水稀釋，調(diào)整適當(dāng)PH值4℃靜置8h，離心取上層清夜?jié)饪s、冷凍干燥，得到抗-MasIgY。
實(shí)施例6分離得蛋黃，以蒸餾水稀釋，4℃靜置12h后，以分子量為300KD和100KD的膜分別過(guò)濾，收集的蛋白物質(zhì)，冷凍干燥得到抗-MasIgY。
實(shí)施例7取實(shí)施例1、5、6中的產(chǎn)品進(jìn)行IgY純度檢查用PAGE電泳檢測(cè)純化的卵黃抗體的純度，電泳中只出現(xiàn)一條電泳帶，即為提純的卵黃抗體。
實(shí)施例8取實(shí)施例1、5、6中的產(chǎn)品進(jìn)行IgY濃度檢查將提取的抗體用PBS作5-10倍的稀釋，然后用采用雙縮脲生化法測(cè)定蛋白濃度。
實(shí)施例9取實(shí)施例1、5、6中的產(chǎn)品進(jìn)行IgY效價(jià)測(cè)定采用奧氏雙擴(kuò)散方法進(jìn)行IgY效價(jià)測(cè)定，IgY效價(jià)為1∶320-1∶12800。
實(shí)施例10采集抗-MasIgY免疫蛋50個(gè)，分離得到800ml蛋黃，加水稀釋至5000ml，離心得到清液4000ml，采用中空纖維超濾提取，0.22u濾過(guò)除菌，濃縮至400ml待用，其中含有精提(即指純度在95％以上)的IgY抗-MasIgY10克，分裝安瓿50mg/瓶，冷凍干燥，用于治療仔豬大腸桿菌感染引起的細(xì)菌性疾病。
實(shí)施例11采集抗-MasIgY免疫蛋50個(gè)，分離得到800ml蛋黃，加水稀釋至5000ml，離心得到清液4000ml，采用中空纖維超濾提取，最后濃縮至400ml待用，其中含有精提(即指純度在99.5％以上的IgY抗-MASIgY)10克。超濾液按5-10％加入淀粉，混合均勻，冷凍干燥。用于預(yù)防仔豬大腸桿菌感染引起的細(xì)菌性疾病。
實(shí)施例12體外實(shí)驗(yàn)①.分子量檢測(cè)SDS-PAGE電脈，分離膠濃度7.5％，濃縮膠濃度5％，電流11mA，電壓200V，時(shí)間45min，Marker采用低相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)，取下凝膠用于常規(guī)銀染色法。
②.純度分析雙向免疫擴(kuò)散法，參照文獻(xiàn)進(jìn)行。
③.活性檢測(cè)ELISA間接試驗(yàn)，操作方法參照常規(guī)ELISA間接法，所用抗原、抗-MasIgY、酶標(biāo)抗體均按棋盤(pán)滴定法確定工作濃度，抗原濃度為100ug/ml，包被板每孔加樣100ul，被測(cè)抗-MasIgY濃度為5ug/ml，每孔加樣100ul，辣板過(guò)氧化物酶標(biāo)抗IgY-IgG(Sigma公司)工作稀釋度為1∶1000，底物為OPD，2ml/濃硫酸終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀492nm下測(cè)定OD值。
實(shí)施例13IgY抗體抑制細(xì)菌粘附的作用抗-MasIgY和葡萄球菌、鏈球菌、上皮細(xì)胞一起培養(yǎng)，每1ml添加0.5mg抗體就觀察到粘附在上皮細(xì)胞上的葡萄球菌和鏈球菌減少，抗體濃度達(dá)到5mg/ml時(shí)，效果更好。說(shuō)明抗-MasIgY抗體能抑制葡萄球菌和鏈球菌粘附在上皮細(xì)胞上，進(jìn)而阻斷了細(xì)菌的繁殖和產(chǎn)生毒素。
實(shí)施例14抗-MasIgY體外抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的生物活性實(shí)驗(yàn)抗-MasIgY(20ug-400ug/ml)與細(xì)菌(105-107ug/ml)在無(wú)菌條件下11混合。37℃24h后，取0.1ml上層清夜加入營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)中，發(fā)現(xiàn)IgY濃度在400ug/ml可明顯抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。其后的系列稀釋，其抑制保護(hù)活性亦隨之減低。
實(shí)施例15口服抗-MasIgY在體生物學(xué)活性觀察參照相關(guān)文獻(xiàn)建立小鼠乳腺炎細(xì)菌感染的模型，試驗(yàn)分為(15mg/Kg和40mg/Kg)兩個(gè)治療組、對(duì)照組?？诜委?2h后，觀察母鼠乳腺的外觀變化、乳腺的病理組織學(xué)檢查，組織切片中的細(xì)菌檢查等指標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)照組感染72h后的乳腺明顯充血，間質(zhì)明顯增寬，高度水腫，有大量漿性和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，滲出嚴(yán)重區(qū)域的腺泡上皮大多變性、壞死、脫落、崩解以致消失，許多腺泡中散在中性粒細(xì)胞，其中有些中性粒細(xì)胞壞死崩解，乳腺淋巴結(jié)充血，淋巴竇嚴(yán)重?cái)U(kuò)張，大部分竇腔有漿液滲出，其中散在少量的中性粗細(xì)胞、淋巴細(xì)胞；淋巴髓索中有少量的漿細(xì)胞。治療組治療后72h的乳腺充血，間質(zhì)水腫，有漿性和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腺泡間隔增寬，散在有中性粒細(xì)胞，但腺泡腔中白細(xì)胞很少，少數(shù)腺上皮細(xì)胞增生、變性、壞死、脫落，乳腺淋巴結(jié)輕度充血，淋巴組織增生，淋巴濾泡變大，生發(fā)中心擴(kuò)大，網(wǎng)狀細(xì)胞增生，髓索可見(jiàn)大量漿細(xì)胞，淋巴竇很小，淋巴結(jié)免疫反應(yīng)明顯。組織切片中的細(xì)菌檢查對(duì)照組和治療組泌乳母鼠乳腺組織切片鏡檢均見(jiàn)有大量球菌，治療組的乳腺組織切片中大多數(shù)球菌被中性粒細(xì)胞吞噬，少數(shù)附著在腺泡上皮表面。
實(shí)施例16抗-MasIgY灌洗治療在生物學(xué)活性觀察參照相關(guān)文獻(xiàn)建立大鼠乳腺炎細(xì)菌感染的模型，試驗(yàn)分灌洗治療組和對(duì)照組治療組每日灌洗2次，治療48h后，觀察母鼠乳腺的外觀變化、乳腺的病理組織學(xué)檢查，組織切片中的細(xì)菌檢查和乳中體細(xì)胞計(jì)數(shù)等指標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)照組感染48h后的乳房紅腫，腺體嚴(yán)重充血，有的出血，多數(shù)區(qū)域腺上皮成片狀壞死脫落，中性粒細(xì)胞壞死、崩解，有膿球形成。治療組治療后48h的乳房輕微紅腫，乳腺充血，間質(zhì)水腫，有漿性和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腺泡腔中白細(xì)胞很少，少數(shù)腺上皮細(xì)胞變性、壞死。組織切片中的細(xì)菌檢查對(duì)照組和治療組泌乳母鼠乳腺組織切片鏡檢，均見(jiàn)有大量G+球菌，治療組的乳腺組織切片中球菌被中性粒細(xì)胞吞噬，少數(shù)附著在腺泡上皮表面，乳中體細(xì)胞計(jì)數(shù)治療組明顯低于對(duì)照組。
權(quán)利要求
1.一種抗奶牛乳腺炎病原菌復(fù)合卵黃抗體(抗-MasIgY)，其特征在于上述抗-MasIgY按SDS-PAGE電泳(7.5％分離膠)檢測(cè)，圖譜呈現(xiàn)單一區(qū)帶；經(jīng)電泳考馬斯亮蘭R250染色呈藍(lán)色；免疫印記Western-blotting檢測(cè)中高分子量帶處出現(xiàn)清晰的特異性酶染條帶；采用雙縮脲生化法測(cè)定蛋白濃度；經(jīng)體外拮抗細(xì)菌生物活性檢測(cè)，抗-MasIgY濃度在400μg/ml時(shí)可明顯抑制奶牛乳腺炎病原菌(葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌)的生長(zhǎng)，經(jīng)奧氏雙擴(kuò)散法對(duì)抗-BAIgY進(jìn)行效價(jià)測(cè)定效價(jià)為1∶320-1∶12800。
2.一種制備抗奶牛乳腺炎病原菌復(fù)合卵黃抗體，即抗一MasIgY的方法，其特征在于采用如下的工藝步驟(1)制備抗原①菌體抗原制備分別將葡萄球菌、鏈球菌、G-桿菌菌株，涂布于血瓊脂和營(yíng)養(yǎng)瓊脂上，37℃培養(yǎng)24h，得純菌種后，在營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)24h。收集菌體，按重量比1∶1加入完全福氏佐劑，乳化得菌體抗原；②莢膜亞單位抗原的制備菌種按1∶100接種于新鮮牛肉湯中、37℃培養(yǎng)24h后置60℃水浴滅活1h，振蕩幾次后置冰箱過(guò)夜，次日4000g離心25min，收集上層清夜，加入適量CTAB〔預(yù)先水浴溶解〕，充分振蕩后冰箱過(guò)夜，4000g離心45min，棄上層清夜、收集沉淀、用原菌液量2.5％的去離子水研磨，再加入等量2mol/L的CaCl2溶液.振蕩1h，按體積比加入25％(v/v)預(yù)冷無(wú)水乙醇，充分振蕩，冰箱過(guò)夜，4000g離心25min，棄沉淀，收集上層清夜繼續(xù)加入無(wú)水乙醇，使乙醇總量為80％(V/V)，冰箱過(guò)夜，4000g離心45min，棄上層清夜，收集沉淀；③結(jié)合抗原制備根據(jù)三類菌的主要致病因子(葡萄球菌腸毒素、鏈球菌外毒素、G-桿菌內(nèi)毒素)，構(gòu)建含有以上三種細(xì)胞毒素的基因表達(dá)質(zhì)粒，在大腸桿菌系統(tǒng)中進(jìn)行表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)分離純化制備。；以上所得按重量比1∶1加入完全福氏佐劑，乳化得菌體抗原(2)再將所得的菌體抗原按以下的步驟制備抗體①對(duì)產(chǎn)卵母雞的免疫I、基礎(chǔ)免疫選用產(chǎn)卵母雞(健康)隔離飼養(yǎng)，進(jìn)行雞皮下多點(diǎn)注射復(fù)合抗原，0.5ml/只；II、強(qiáng)化免疫基礎(chǔ)免疫7天后，進(jìn)行強(qiáng)化免疫，注射不完全福氏佐劑復(fù)合抗原0.5ml/只；III、超強(qiáng)化免疫21天后需超強(qiáng)化免疫1-3次，注射量1ml/只，以保持抗體滴度；于7天后開(kāi)始收集雞蛋，4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?；②卵黃抗體的提取I、采用水溶法提取卵黃抗體從免疫雞卵中分離得蛋黃，以蒸餾水稀釋，調(diào)整適當(dāng)PH值4℃靜置8h，離心取上層清夜?jié)饪s、冷凍干燥，得到抗-MasIgY；或II、采用膜過(guò)濾法提取卵黃抗體分離得蛋黃，以蒸餾水稀釋，4℃靜置12h后，以分子量為300KD和100KD的膜分別過(guò)濾，收集蛋白物質(zhì)，冷凍干燥得到抗-MasIgY。
3.抗奶牛乳腺炎病原菌復(fù)合卵黃抗體，即抗-MasIgY在制備用于治療因奶牛病原菌引起的乳腺炎相關(guān)疾病藥物中的應(yīng)用。
4.抗奶牛乳腺炎卵黃抗體，即抗-MasIgY在制備用于預(yù)防奶牛乳腺炎病原菌引起的相關(guān)疾病的制劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有抗體活性的抗奶牛乳腺炎病原菌復(fù)合卵黃抗體(抗－MasIgY)、制備該抗體的方法及其在制備用于治療因奶牛乳腺炎感染引起的相關(guān)疾病藥物或飼料添加劑中的應(yīng)用。上述抗－MasIgY按SDS－PAGE電泳(7.5％分離膠)檢測(cè)，圖譜呈現(xiàn)單一區(qū)帶；經(jīng)電泳考馬斯亮蘭R250染色呈藍(lán)色；免疫印記Western－blotting檢測(cè)中高分子量帶處出現(xiàn)清晰的特異性酶染條帶，采用雙縮脲生化法測(cè)定蛋白濃度。上述方法為制備奶牛乳腺炎病原菌抗原，將該抗原免疫健康母雞，收集其所產(chǎn)的卵，再?gòu)穆阎刑崛】梗璏asIgY。該抗體可用于制備治療或預(yù)防因奶牛病原菌引起的乳腺炎相關(guān)疾病藥物。
文檔編號(hào)C07K16/02GK1438247SQ03117508
公開(kāi)日2003年8月27日 申請(qǐng)日期2003年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月21日
發(fā)明者雁杰, 陳君 申請(qǐng)人:重慶和潤(rùn)實(shí)業(yè)(集團(tuán))有限公司