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一種鴨瘟卵黃抗體口服液及其制備方法

文檔序號(hào):8211736閱讀:425來源:國知局
一種鴨瘟卵黃抗體口服液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于禽類用生物制品技術(shù)領(lǐng)域,涉及一種鴨瘟卵黃抗體口服液及其制備方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鴨瘟病是養(yǎng)鴨業(yè)中常見的疾病,容易大范圍內(nèi)爆發(fā),二者有時(shí)會(huì)混合感染,給治療 增加了難度。防治方法很多,其中蛋黃抗體是最有效的治療鴨發(fā)生病毒病的方法。
[0003] 鴨瘟(Duckplape)又名鴨病毒性腸炎(Duckvirusenteritis,DVE),是鴨、鶴和 其他雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病。該病的特征是流行廣泛,傳播迅速,發(fā)病 率和死亡率都高。荷蘭的Baudet氏早在1923年首次發(fā)現(xiàn)本病,Bos氏在1940年首次提出 鴨瘟這個(gè)病名。黃引賢1957年在廣東首先正式提出本病。1957年后,本病廣泛流行于我國 華南、華中、華東養(yǎng)鴨業(yè)較發(fā)達(dá)地區(qū),造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。
[0004] 卵黃抗體IgY是的一種免疫球蛋白Ig,IgY在功能上相當(dāng)于哺乳動(dòng)物IgG,但結(jié)構(gòu) 上有所不同,具有典型的的免疫球蛋白的空間構(gòu)象。卵黃抗體具有很多優(yōu)越性。(1)由于鳥 類與哺乳類動(dòng)物種系發(fā)生學(xué)的差距,鳥類更適于生產(chǎn)抗哺乳動(dòng)物抗原的特異性抗體。卵黃 抗體不會(huì)激發(fā)補(bǔ)體系統(tǒng),不與抗哺乳動(dòng)物抗原的抗體發(fā)生反應(yīng),不與哺乳動(dòng)物和細(xì)菌的Fc 受體結(jié)合,這在免疫診斷中具有重要意義。(2)卵黃抗體作為一種具有生物活性的免疫球蛋 白,在貯存、生產(chǎn)、加工、攝食及消化過程中保證其穩(wěn)定性是非常關(guān)鍵的。多項(xiàng)試驗(yàn)表明,IgY 具有較好的穩(wěn)定性,耐酸、耐堿、耐熱。卵黃抗體較易保存,4°C條件下存放5年或室溫條件 下存放6個(gè)月對(duì)抗體活性無明顯影響。(3)卵黃抗體量大,成本低,便于規(guī)?;a(chǎn)。卵黃 中抗體濃度能長期維持在相當(dāng)于甚至超過血清抗體濃度的水平上。總的來講,卵黃抗體對(duì) 動(dòng)物沒有毒副作用,用卵黃抗體治療動(dòng)物疾病不但避免了血清價(jià)格昂貴、產(chǎn)量低的缺點(diǎn),而 且可以避免血清在治療過程中引起的副作用,是一種很有前途的新型免疫球蛋白制劑。因 此,卵黃抗體在禽畜疾病診斷、治療和預(yù)防的應(yīng)用越來越多。目前卵黃抗體的制備及生產(chǎn)工 藝已經(jīng)成熟,可以保質(zhì)保量的生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供一種鴨瘟卵黃抗體口服液及其制備方法,解決注射用的鴨瘟卵黃抗體 使用不方便的問題。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過以下形式實(shí)現(xiàn)的: 一種鴨瘟卵黃抗體口服液,包括以下按照體積比計(jì)算的原料:含卵黃抗體的全蛋水溶 液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;還包括800-1000單位/毫升口 服液的青鏈霉素。
[0007] 制備步驟是: 1)采用鴨瘟病毒滅活疫苗對(duì)雞只進(jìn)行強(qiáng)化免疫:采用三次免疫程序,每次間隔10天, 每只雞每次疫苗用量為2ml,當(dāng)抗體效價(jià)達(dá)到1 : (128-256)時(shí),進(jìn)行高免蛋收集; 2) 使用0. 1-0. 2%新潔爾滅對(duì)高免蛋進(jìn)行消毒; 3) 將2)中高免蛋的全蛋液進(jìn)行乳化,乳化時(shí)間7-10min,然后加入pH為4. 2-4. 3的、 溫度為4-6°C的鹽酸酸化水,鹽酸酸化水的加入量為全蛋液體積的5. 5-6. 5倍,混勻后,降 溫至3-5°C,靜置18-24小時(shí); 4) 取3)中的上層清液,升溫到25-32°C,加入辛酸,攪拌l_2h,然后靜置10-12h,過濾; 其中辛酸體積量:上層清液體積量為(〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素,使卵黃抗體的全蛋水溶液:辛酸:甲醛:硫柳汞的體積 比為(95-105) : (0? 2-0. 3) : (0? 2-0. 3) : (0? 01-0. 02),青鏈霉素的含量為 800-1000 單位 / 暈升口服液; 6) 分裝,保存。
[0008] 步驟4)過濾時(shí)依次通過1. 0mm、0. 45mm、0. 22mm的濾膜進(jìn)行過濾。
[0009] 本發(fā)明通過對(duì)高免蛋全蛋提取、低溫酸化處理、辛酸處理后得到澄清卵黃抗體口 服液。本發(fā)明將全蛋使用到卵黃抗體的提取中,可以直接在臨床上進(jìn)行口服使用,蛋清中含 有大量的各類蛋白質(zhì),可充分利用高免蛋的價(jià)值,提高動(dòng)物機(jī)體的免疫力和應(yīng)激能力,生物 利用度高,具有生物活性不受影響的優(yōu)點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1 : 一種鴨瘟卵黃抗體口服液的配方包括以下原料:含卵黃抗體的全蛋水溶液95L、辛酸 0. 2L、甲醛0. 3L、硫柳汞0. 02L,以及1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。
[0011] 其制備方法包括以下步驟: 1)采用市售的鴨瘟病毒滅活疫苗進(jìn)行強(qiáng)化免疫,每只雞每次疫苗用量為2ml,每次間隔 10天,進(jìn)行三次免疫程序,當(dāng)抗體效價(jià)達(dá)到1 :256時(shí),開始收集高免蛋。
[0012] 2)將收集高免蛋整理,0. 2%新潔爾滅消毒,備用。
[0013] 3)水稀釋法酸化處理:將2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐體內(nèi)進(jìn)行充分乳化,乳化時(shí) 間7min,然后將乳化后的全蛋液加入pH為4. 2、溫度為4°C的鹽酸酸化水,鹽酸酸化水加入 量為全蛋液體積的6倍,混勻,放置4°C環(huán)境中18小時(shí)靜置沉淀,取上清液;其中,鹽酸酸化 水是在水中加入鹽酸使其PH值達(dá)到4. 2。
[0014] 4)辛酸處理;將步驟3)的上清液,即含卵黃抗體的全蛋水溶液進(jìn)行稱量,升溫到 25°C,加入辛酸,充分混勻lh,然后靜置10h;其中,按體積比,上層清液:辛酸=95 :0. 2 ; 5) 對(duì)步驟4)所得澄清液依次用1. 0_、0. 45mm、0. 22mm的濾膜過濾,留取濾液; 6) 向步驟5)所得濾液加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素;按體積比,含卵黃抗體的全蛋全蛋 水溶液:辛酸:甲醛:硫柳汞=95 :0. 2 :0. 3 :0. 02 ;青鏈霉素在該口服液中的含量為1000單 位/毫升; 7) 分裝,保存。
[0015] 為確定卵黃抗體口服液在常溫下的放置有效期,做了以下試驗(yàn):將本品保存在 37°C培養(yǎng)箱中,保存24個(gè)月,分別1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月 后,用瓊脂擴(kuò)散(AGP)法,測定每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣品的卵黃抗體效價(jià)變化,結(jié)果見表1。
[0016] 表1.常溫放置口服液不同時(shí)間段效價(jià)的變化
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種鴨瘟卵黃抗體口服液,其特征在于:包括以下按照體積比計(jì)算的原料:含卵 黃抗體的全蛋水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;還包括 800-1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。
2. -種如權(quán)利要求1所述鴨瘟卵黃抗體口服液的制備方法,其特征在于具體步驟是: 1) 采用鴨瘟病毒滅活疫苗對(duì)雞只進(jìn)行強(qiáng)化免疫:采用三次免疫程序,每次間隔10天, 每只雞每次疫苗用量為2ml,當(dāng)抗體效價(jià)達(dá)到1 : (128-256)時(shí),進(jìn)行高免蛋收集; 2) 使用0. 1-0. 2%新潔爾滅對(duì)高免蛋進(jìn)行消毒; 3) 將2)中高免蛋的全蛋液進(jìn)行乳化,乳化時(shí)間7-10min,然后加入pH為4. 2-4. 3的、 溫度為4-6°C的鹽酸酸化水,鹽酸酸化水的加入量為全蛋液體積的5. 5-6. 5倍,混勻后,降 溫至3-5°C,靜置18-24小時(shí); 4) 取3)中的上層清液,升溫到25-32°C,加入辛酸,攪拌l_2h,然后靜置10-12h,過濾; 其中辛酸體積量:上層清液體積量為(〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素,使卵黃抗體的全蛋水溶液:辛酸:甲醛:硫柳汞的體積 比為(95-105) : (0? 2-0. 3) : (0? 2-0. 3) : (0? 01-0. 02),青鏈霉素的含量為 800-1000 單位 / 暈升口服液; 6) 分裝,保存。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鴨瘟卵黃抗體口服液的制備方法,其特征在于:步驟4)過 濾時(shí)依次通過1. 〇mm、〇. 45mm、0. 22mm的濾膜進(jìn)行過濾。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鴨瘟卵黃抗體口服液及其制備方法。其配方在于,包括以下按照體積比計(jì)算的原料:含卵黃抗體的全蛋水溶液95-105、辛酸0.2-0.3、甲醛0.2-0.3、硫柳汞0.01-0.02;還包括800-1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。制備時(shí)采用高免蛋全蛋得到澄清卵黃抗體口服液。這種方法制備的卵黃抗體口服液不僅使生產(chǎn)過程中損失少、免疫活性物質(zhì)強(qiáng)多、生物活性高、無臨床副作用,同時(shí),含有蛋清中大量的各種蛋白質(zhì),可以減少口服時(shí)對(duì)抗體的不良影響。
【IPC分類】A61K9-00, A61K39-42, A61K31-7036, A61K31-43, A61P31-22
【公開號(hào)】CN104524573
【申請?zhí)枴緾N201410762609
【發(fā)明人】徐進(jìn), 郭俊清
【申請人】鄭州后羿制藥有限公司
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年12月14日
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