發(fā)明背景本申請是國際申請日為2011年11月18日，中國國家申請?zhí)枮?01180055868.6，發(fā)明名稱為“調(diào)控基于toll-樣受體的免疫應(yīng)答的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸(iro)化合物”的發(fā)明專利申請的分案申請。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明總體上涉及免疫學(xué)和免疫治療領(lǐng)域，且更具體地涉及免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸(iro)組合物和其用于抑制和/或阻遏toll-樣受體-介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的用途。具體地，本發(fā)明涉及獨特地抑制通過tlr7和/或tlr9刺激正常地產(chǎn)生的細(xì)胞因子的toll-樣受體7(tlr7)和/或tlr9拮抗劑。相關(guān)技術(shù)概述toll-樣受體(tlr)存在于免疫系統(tǒng)的許多細(xì)胞上，并已顯示其參與先天性免疫應(yīng)答(hornung,v.等人,(2002)j.immunol.168:4531-4537)在脊椎動物或哺乳動物中，該家族由稱為tlr1至tlr10的十種蛋白組成，已知這十種蛋白識別來自細(xì)菌、真菌、寄生蟲和病毒的病原體相關(guān)的分子模式(poltorak,a.等人(1998)science282:2085-2088；underhill,d.m.,等人(1999)nature401:811-815；hayashi,f.et.al(2001)nature410:1099-1103；zhang,d.等人(2004)science303:1522-1526；meier,a.等人(2003)cell.microbiol.5:561-570；campos,m.a.等人(2001)j.immunol.167:416-423；hoebe,k.等人(2003)nature424:743-748；lund,j.(2003)j.exp.med.198:513-520；heil,f.等人(2004)science303:1526-1529；diebold,s.s.,等人(2004)science303:1529-1531；hornung,v.等人(2004)j.immunol.173:5935-5943)。tlr是哺乳動物借以識別外來分子并發(fā)動針對其的免疫應(yīng)答的關(guān)鍵工具，而且還提供了借以聯(lián)系先天性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的工具(akira,s.等人(2001)natureimmunol.2:675-680；medzhitov,r.(2001)naturerev.immunol.1:135-145)。還已顯示tlr在許多疾病包括自身免疫、傳染病和炎癥的病理發(fā)生中起作用(cook,d.n.等人(2004)natureimmunol.5:975-979)，且利用適當(dāng)?shù)膭┱{(diào)節(jié)tlr-介導(dǎo)的激活可提供用于疾病干預(yù)的工具。一些tlr位于細(xì)胞表面以檢測和啟動對細(xì)胞外病原體的應(yīng)答，而其他tlr位于細(xì)胞內(nèi)部以檢測和啟動對細(xì)胞內(nèi)病原體的應(yīng)答。表1提供了tlr的表示、其細(xì)胞位置和其已知的激動劑(diebold,s.s.等人(2004)science303:1529-1531；liew,f.等人(2005)nature5:446-458；hemmih等人(2002)natimmunol3:196-200；jurkm等人,(2002)natimmunol3:499；leej等人(2003)proc.natl.acad.sci.usa100:6646-6651)；(alexopoulou,l.(2001)nature413:732-738)。表1tlr分子激動劑細(xì)胞表面tlr：tlr2細(xì)菌脂肽tlr4革蘭氏陰性細(xì)菌tlr5能運(yùn)動的細(xì)菌tlr6革蘭氏陽性細(xì)菌內(nèi)體tlr：tlr3雙鏈rna病毒tlr7單鏈rna病毒tlr8單鏈rna病毒tlr9未甲基化dna已顯示細(xì)菌和合成dna中存在的某些未甲基化cpg基序激活免疫系統(tǒng)和誘導(dǎo)抗腫瘤活性。(tokunagat等人,j.natl.cancerinst.(1984)72:955-962；shimadas,等人,jpn.hcancerres,1986,77,808-816；yamamotos,等人,jpn.j.cancerres.,1986,79,866-73)。利用含有cpg二核苷酸的反義寡核苷酸的其他研究顯示刺激免疫應(yīng)答(zhaoq,等人(1996)biochem.pharmacol.26:173-182)。隨后的研究證明tlr9識別細(xì)菌和合成dna中存在的未甲基化cpg基序(hemmi,h.等人(2000)nature408:740-745)。othermodificationsof含有cpg的硫代磷酸寡核苷酸的其他修飾也可影響其作為通過tlr9的免疫應(yīng)答的調(diào)控物(modulator)的能力(參見，如，zhao等人,biochem.pharmacol.(1996)51:173-182；zhao等人(1996)biochempharmacol.52:1537-1544；zhao等人(1997)antisensenucleicaciddrugdev.7:495-502；zhao等人(1999)bioorg.med.chem.lett.9:3453-3458；zhao等人(2000)bioorg.med.chem.lett.10:1051-1054；yu,d.等人(2000)bioorg.med.chem.lett.10:2585-2588；yu,d.等人(2001)bioorg.med.chem.lett.11:2263-2267；andkandimalla,e.等人(2001)bioorg.med.chem.9:807-813)。此外，結(jié)構(gòu)活性關(guān)系研究允許鑒定誘導(dǎo)不同于獲自未甲基化cpg二核苷酸的免疫應(yīng)答譜的特異性免疫應(yīng)答譜的合成基序和新型基于dna的化合物。(kandimalla,e.等人(2005)proc.natl.acad.sci.usa102:6925-6930.kandimalla,e.等人(2003)proc.nat.acad.sci.usa100:14303-14308；cong,y.等人(2003)biochembiophysres.commun.310:1133-1139；kandimalla,e.等人(2003)biochem.biophys.res.commun.306:948-953；kandimalla,e.等人(2003)nucleicacidsres.31:2393-2400；yu,d.等人(2003)bioorg.med.chem.11:459-464；bhagat,l.等人(2003)biochem.biophys.res.commun.300:853-861；yu,d.等人(2002)nucleicacidsres.30:4460-4469；yu,d.等人(2002)j.med.chem.45:4540-4548.yu,d.等人(2002)biochem.biophys.res.commun.297:83-90；kandimalla.e.等人(2002)bioconjug.chem.13:966-974；yu,d.等人(2002)nucleicacidsres.30:1613-1619；yu,d.等人(2001)bioorg.med.chem.9:2803-2808；yu,d.等人(2001)bioorg.med.chem.lett.11:2263-2267；kandimalla,e.等人(2001)bioorg.med.chem.9:807-813；yu,d.等人(2000)bioorg.med.chem.lett.10:2585-2588；putta,m.等人(2006)nucleicacidsres.34:3231-3238).tlr的選擇性定位和由此產(chǎn)生的信號傳導(dǎo)提供了其在免疫應(yīng)答中的作用的洞察。免疫應(yīng)答基于參與應(yīng)答的細(xì)胞亞組包括先天性和適應(yīng)性應(yīng)答二者。例如，參與經(jīng)典的細(xì)胞介導(dǎo)的功能諸如延遲型超敏感性和細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞(ctl)激活的t輔助(th)細(xì)胞是th1細(xì)胞。這一應(yīng)答是身體對抗原(如病毒感染、細(xì)胞內(nèi)病原體和腫瘤細(xì)胞)的先天性應(yīng)答，并造成ifn-γ的分泌和ctl的共同激活。替代地，作為輔助細(xì)胞參與b-細(xì)胞激活的th細(xì)胞是th2細(xì)胞。已顯示th2細(xì)胞響應(yīng)于細(xì)菌和寄生蟲被激活并可通過分泌il-4和il-5介導(dǎo)身體的適應(yīng)性免疫應(yīng)答(如ige產(chǎn)生和嗜曙紅細(xì)胞激活)。免疫應(yīng)答的類型受響應(yīng)于抗原暴露產(chǎn)生的細(xì)胞因子的影響，而th1和th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的差異可能是這兩個亞組的不同生物功能的結(jié)果。雖然tlr的激活參與免疫應(yīng)答的發(fā)動，但是通過tlr的對免疫系統(tǒng)的不受控制的刺激可在免疫受損的受治療者中加劇某些疾病。近年來，多個研究組顯示了合成的寡脫氧寡核苷酸(odn)作為炎性細(xì)胞因子抑制劑的用途(lenert,p.等人(2003)dnacellbiol.22(10):621-631)。使用某些合成的odn，lenert等人報告了產(chǎn)生theabilitytoproduce抑制性odn的能力(lenert,p.等人(2003)dnacellbiol.22(10):621-631)。這些抑制性odn需要兩個三聯(lián)體序列，近端的“cct”三聯(lián)體和遠(yuǎn)端的“ggg”三聯(lián)體。除了這些含有三聯(lián)體的抑制性odn之外，多個研究組還報告了可抑制含有cpg的odn對tlr-9介導(dǎo)的激活的其他特異性dna序列。這些“抑制性”或“阻遏性”基序富含易于被甲基化的多聚“g”(如“gggg”)或“gc”序列并存在于哺乳動物和某些病毒的dna中(參見如；chen,y.,等人,genether.8:1024-1032(2001)；stunz,l.l.,eur.j.immunol.32:1212-1222(2002)。duramad,o.,等人,j.immunol.,174:5193-5200(2005)和jurket.al(us2005/0239733)，描述了在序列內(nèi)含有g(shù)ggg基序的抑制性dna寡核苷酸的結(jié)構(gòu)。patole等人證明含有g(shù)ggg的odn將阻遏全身性紅斑狼瘡(patole,p.等人(2005)j.am.soc.nephrol.16:3273-3280)。另外，gursel,i.,等人,j.immunol.,171:1393-1400(2003)，描述了以高頻率存在于哺乳動物端粒中的重復(fù)ttaggg元件下調(diào)cpg誘導(dǎo)的免疫激活。shirota,h.,等人,j.immunol.,173:5002-5007(2004)，證明含有ttaggg元件的合成的寡核苷酸模擬這一活性并能夠有效地預(yù)防/治療某些th1依賴性自身免疫性疾病。相反，一些研究質(zhì)疑含有多聚g的odn作為tlr的拮抗劑起作用的觀點。例如，us6,426,334，agrawal等人，證明施用含有g(shù)ggg串的cpg寡核苷酸具有強(qiáng)效的抗病毒和抗癌活性，且施用這些化合物將造成血清il-12濃度的增加。另外，已知含有polyg序列的cpg寡聚體通過tlr9激活誘導(dǎo)免疫應(yīng)答(verthelyid等人,jimmunol.166,2372,2001；gurselm等人,jleukocbiol,71,813,2001,kruga等人,eurjimmunol,31,2154,2001)并顯示抗腫瘤和抗病毒活性(ballasgk等人,jimmunol,167,4878,2001；verthelyid等人,jimmunol,170,4717,2003)。此外，已知polyg寡核苷酸抑制hiv和rela(mcshanwm,等人,jbiolchem.,267(8):5712-21,1992；rando,rf等人,jbiolchem,270(4):1754-60,1995；benimetskayal,等人,nucleicacidsres.,25(13):2648-56,1997)；且含有免疫刺激性cpg基序和4個連續(xù)g核苷酸的odn(稱為a類odn)誘導(dǎo)干擾素-γ產(chǎn)生和免疫應(yīng)答的th1轉(zhuǎn)變。而且，在臨床前疾病模型中，已顯示a類odn誘導(dǎo)tlr-介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。作為另外的限制，已顯示含有鳥苷串的寡核苷酸形成四聚體(tetraplex)結(jié)構(gòu)，作為適體起作用，和抑制凝血酶活性(bocklc等人,nature,355:564-6,1992；padmanabhan,k等人,jbiolchem.,268(24):17651-4,1993)。因此，還不清楚是單鏈還是多鏈結(jié)構(gòu)有效地阻遏tlr9激活。kandimalla等人(11/549,048)描述了不需要polyg序列的新型種類的tlr拮抗劑。kandimalla等人還描述了應(yīng)用這些新型組合物來治療和預(yù)防各種疾病和疾患(11/549,048；11/743,876；12/140,334；12/140,338；12/244199)。然而，開發(fā)不需要polyg序列并因此不存在形成二級結(jié)構(gòu)額問題的另外的tlr拮抗劑仍是挑戰(zhàn)。這一挑戰(zhàn)可通過設(shè)計可作為tlr7和/或9的獨特抑制劑起作用的新的基于寡核苷酸的化合物和組合物來解決。此類新的定制化合物和組合物將可用于許多臨床上重要的應(yīng)用，包括治療和預(yù)防具有免疫刺激性組分的疾病和疾患。發(fā)明簡要概述發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，獨特地修飾核心免疫刺激性二核苷酸的5’-側(cè)的核酸序列、核心免疫刺激性二核苷酸內(nèi)的核酸、核苷酸之間的連接或連接兩個或更多個寡核苷酸的連接物產(chǎn)生tlr7和/或tlr9的新型拮抗劑，該新型拮抗劑不同地拮抗、抑制、阻遏或阻止通過tlr7和/或tlr9刺激正常地產(chǎn)生的體外和體內(nèi)細(xì)胞因子和趨化因子譜。這一拮抗、抑制、阻遏或阻止對tlr7和/或tlr9激動劑的細(xì)胞因子和趨化因子響應(yīng)的能力提供了以疾病特異性和甚至是患者特異性方式預(yù)防和/或治療各種疾病狀況的能力。因此，本發(fā)明提供作為tlr7和/或tlr9的不同拮抗劑起作用的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸(iro)化合物和使用此類化合物來拮抗、抑制、阻遏或阻止tlr7-和/或tlr9-介導(dǎo)的免疫刺激的方法。這些iro化合物包含免疫刺激性基序并且將是免疫刺激性的，但是在免疫刺激性基序的5’-側(cè)的核酸序列和/或免疫刺激性基序中具有一種或多種化學(xué)修飾時除外。優(yōu)先拮抗、抑制、阻遏或阻止tlr7和/或tlr9的活性的iro化合物和組合物具有結(jié)構(gòu)5-nm–n3n2n1cgn1n2n3–nm-3’，其中cg是選自cpg、c*pg、c*pg*或cpg*的寡核苷酸基序，其中c是胞嘧啶，c*是胞嘧啶類似物或衍生物，g是鳥嘌呤和g*是鳥嘌呤類似物或衍生物；n1-n3在每次出現(xiàn)時獨立地是核苷酸或核苷酸衍生物；n1-n3在每次出現(xiàn)時獨立地是核苷酸或核苷酸衍生物；nm和nm在每次出現(xiàn)時獨立地是核苷酸、核苷酸衍生物或非核苷酸連接物；條件是寡核苷酸基序的n1、n2和n3和/或c和/或g中的至少一個是拮抗、抑制、阻遏或阻止該寡核苷酸基序的活性的核苷酸衍生物；且另外的條件是該化合物含有少于4個連續(xù)鳥苷核苷酸和優(yōu)選地少于3個連續(xù)鳥苷，其中所述寡核苷酸基序的免疫刺激性活性被所述核苷酸衍生物拮抗、抑制、阻遏或阻止；且其中m是0至約30的數(shù)字。在一些實施方案中，iro化合物可包含至少兩個寡核苷酸，其中至少兩個寡核苷酸經(jīng)由其3’端的直接核苷酸與核苷酸間的連接通過糖的3’位置或通過修飾的糖或修飾的核堿基或經(jīng)由其3’端的非核苷酸連接物通過糖的3’位置或通過修飾的糖或修飾的核堿基而共價連接。在此實施方案的優(yōu)選方面，iro化合物的至少一個寡核苷酸具有結(jié)構(gòu)5’-nm–n3n2n1cgn1n2n3–nm-3’，其中nm、n1、n2、n3、c、g、n1、n2、n3和nm如上文對于iro化合物的通用結(jié)構(gòu)所述。在此實施方案的更優(yōu)選的方面，iro化合物的至少兩個寡核苷酸具有結(jié)構(gòu)5’-nm–n3n2n1cgn1n2n3–nm-3’，其中nm、n1、n2、n3、c、g、n1、n2、n3和nm如上文對于iro化合物的通用結(jié)構(gòu)所述。此類iro化合物可具有結(jié)構(gòu)5’-nm–n3n2n1cgn1n2n3–nm-3’–x–3’-nm–n3n2n1gcn1n2n3–nm-5’，其中x是核苷酸連接或非核苷酸連接物和nm、n1、n2、n3、c、g、n1、n2、n3和nm如上文對于iro化合物的通用結(jié)構(gòu)所述。根據(jù)本發(fā)明的iro化合物和組合物在各種細(xì)胞類型中和在各種體外和體內(nèi)實驗?zāi)Ｐ椭袃?yōu)先抑制tlr7和/或tlr9-介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，每種化合物或組合物提供不同的免疫抑制譜。本發(fā)明還提供包含根據(jù)本發(fā)明的iro化合物和藥學(xué)可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明還提供抑制脊椎動物或哺乳動物中tlr-介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的方法，該方法包含向哺乳動物施用藥學(xué)有效量的根據(jù)本發(fā)明的iro化合物或組合物。在一些優(yōu)選的實施方案中，阻遏或抑制tlr刺激包含施用根據(jù)本發(fā)明的iro化合物，其中所述tlr選自tlr7和tlr9。本發(fā)明還提供阻遏或抑制tlr激動劑的活性的方法，該方法包含施用根據(jù)本發(fā)明的iro化合物，其中所述iro化合物與tlr激動劑同時、在tlr激動劑之前或在tlr激動劑之后施用。在優(yōu)選的實施方案中，tlr激動劑選自tlr7和tlr9的激動劑。本發(fā)明還提供治療性處理具有由tlr7和/或tlr9介導(dǎo)的疾病的哺乳動物的方法，所述方法包含向哺乳動物施用藥學(xué)有效量的根據(jù)本發(fā)明的iro化合物。在優(yōu)選的實施方案中，所述疾病是癌癥、自身免疫性疾病或疾患、氣道炎癥、炎性疾病或疾患、傳染病、瘧疾、萊姆病、眼部感染、結(jié)膜炎、皮膚疾患、牛皮癬、硬皮癥、心血管疾病、動脈粥樣硬化、慢性疲勞綜合征、結(jié)節(jié)病、移植排斥反應(yīng)、變應(yīng)性、哮喘或由病原體引起的疾病。優(yōu)選的自身免疫性疾病和疾患包括但不限于紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、ⅰ型糖尿病、腸易激綜合征、克羅恩病(chron’sdisease)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、感染性休克、普禿、急性播散性腦脊髓炎、阿狄森氏病、強(qiáng)直性脊柱炎、抗磷脂抗體綜合征、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、大皰性類天皰瘡、恰加斯病、慢性阻塞性肺病、腹腔疾病、皮肌炎、子宮內(nèi)膜異位癥、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺疾病、格林-巴利綜合征、橋本氏病、化膿性汗腺炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜、間質(zhì)性膀胱炎、硬斑病、重癥肌無力、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強(qiáng)直、天皰瘡、惡性貧血、多發(fā)性肌炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、精神分裂癥、干燥綜合征、顳動脈炎(也稱為"巨細(xì)胞動脈炎")、血管炎、白癜風(fēng)、外陰疼痛和韋格納氏肉芽腫。優(yōu)選的炎性疾病和疾患包括但不限于氣道炎癥、哮喘、自身免疫性疾病、慢性炎癥、慢性前列腺炎、腎小球性腎炎、白塞氏病、超敏感性、炎癥性腸疾病、再灌注損傷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、移植排斥反應(yīng)、潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎、結(jié)膜炎、和血管炎。本發(fā)明還提供預(yù)防脊椎動物或哺乳動物中的癌癥、自身免疫性疾病或疾患、氣道炎癥、炎性疾病或疾患、傳染病、瘧疾、萊姆病、眼部感染、結(jié)膜炎、皮膚疾患、牛皮癬、硬皮癥、心血管疾病、動脈粥樣硬化、慢性疲勞綜合征、結(jié)節(jié)病、移植排斥反應(yīng)、變應(yīng)性、哮喘或由病原體引起的疾病的方法，該方法包含向哺乳動物施用藥學(xué)有效量根據(jù)本發(fā)明的iro化合物。優(yōu)選的自身免疫性疾病和疾患包括但不限于紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、ⅰ型糖尿病、腸易激綜合征、克羅恩病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、感染性休克、普禿、急性播散性腦脊髓炎、阿狄森氏病、強(qiáng)直性脊柱炎、抗磷脂抗體綜合征、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、大皰性類天皰瘡、恰加斯病、慢性阻塞性肺病、腹腔疾病、皮肌炎、子宮內(nèi)膜異位癥、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺疾病、格林-巴利綜合征、橋本氏病、化膿性汗腺炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜、間質(zhì)性膀胱炎、硬斑病、重癥肌無力、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強(qiáng)直、天皰瘡、惡性貧血、多發(fā)性肌炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、精神分裂癥、干燥綜合征、顳動脈炎(也稱為"巨細(xì)胞動脈炎")、血管炎、白癜風(fēng)、外陰疼痛和韋格納氏肉芽腫。優(yōu)選的炎性疾病和疾患包括但不限于氣道炎癥、哮喘、自身免疫性疾病、慢性炎癥、慢性前列腺炎、腎小球性腎炎、白塞氏病、超敏感性、炎癥性腸疾病、再灌注損傷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、移植排斥反應(yīng)、潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎、結(jié)膜炎、和血管炎。在一些優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的iro化合物與一種或多種疫苗、抗原、抗體、細(xì)胞毒性劑、變應(yīng)原、抗生素、反義寡核苷酸、tlr激動劑、tlr拮抗劑、肽、蛋白、基因治療載體、dna疫苗、佐劑、激酶抑制劑或共刺激分子或其組合聯(lián)合施用。在一些優(yōu)選的實施方案中，施用路徑是胃腸外、粘膜遞送、口服、舌下、透皮、體表、吸入、鼻內(nèi)、氣溶膠、眼內(nèi)、氣管內(nèi)、直腸內(nèi)、胃內(nèi)、陰道、通過基因槍、皮膚貼片或以滴眼液或漱口劑形式。附圖簡述圖1是本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)化合物的線性合成的合成方案。dmtr＝4,4'-二甲氧基三苯甲基；ce＝氰乙基。圖2是本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)化合物的平行合成的合成方案。dmtr＝4,4'-二甲氧基三苯甲基；ce＝氰乙基。圖3描繪在根據(jù)實施例3處理的小鼠脾細(xì)胞中通過tlr7/9拮抗劑的根據(jù)本發(fā)明的tlr7/9拮抗劑抑制tlr7誘導(dǎo)的細(xì)胞因子/趨化因子的能力。圖4描繪在根據(jù)實施例3處理的小鼠脾細(xì)胞中通過tlr7/9拮抗劑的根據(jù)本發(fā)明的tlr7/9拮抗劑抑制tlr9誘導(dǎo)的細(xì)胞因子/趨化因子的能力。圖5描繪在根據(jù)實施例4處理的小鼠中根據(jù)本發(fā)明的tlr7/9拮抗劑體內(nèi)抑制tlr7誘導(dǎo)的il-12的能力。圖6描繪在根據(jù)實施例4處理的小鼠中根據(jù)本發(fā)明的tlr7/9拮抗劑體內(nèi)抑制tlr9誘導(dǎo)的il-12的能力。圖7描繪在根據(jù)實施例4處理的小鼠中根據(jù)本發(fā)明的tlr7/9拮抗劑隨時間體內(nèi)抑制tlr7誘導(dǎo)的il-12的能力。圖8描繪在根據(jù)實施例4處理的小鼠中根據(jù)本發(fā)明的tlr7/9拮抗劑隨時間體內(nèi)抑制tlr9誘導(dǎo)的il-12的能力。圖9描繪在根據(jù)實施例4處理的小鼠中根據(jù)本發(fā)明的tlr7/9拮抗劑體內(nèi)選擇性抑制小鼠tlr7&9誘導(dǎo)的細(xì)胞因子的能力。圖10證明在根據(jù)實施例4處理的小鼠中根據(jù)本發(fā)明的tlr7/9拮抗劑不體內(nèi)抑制tlr3或tlr5的活性。優(yōu)選實施方案詳述本發(fā)明涉及新型基于寡核苷酸的化合物作為免疫調(diào)控劑用于免疫治療應(yīng)用的治療用途。本發(fā)明提供通過其與tlr7和/或tlr9的相互作用提供不同的免疫抑制譜的新型基于寡核苷酸的化合物。具體地，本發(fā)明提供作為toll-樣受體(tlr)的拮抗劑抑制和/或阻遏tlr-介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸(iro)化合物。這些iro具有提供其對響應(yīng)于內(nèi)源和/或外源tlr配體或激動劑的tlr7-和/或tlr9-介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)的抑制或阻遏的化學(xué)修飾、和/或核苷酸間連接、和/或寡核苷酸之間的連接物。本文引用的參考文獻(xiàn)反映本領(lǐng)域的知識水平并通過引用整體并入本文。所引用的參考文獻(xiàn)和本說明書的教導(dǎo)之間的任何沖突將以本說明書為準(zhǔn)。本發(fā)明還提供阻遏tlr導(dǎo)致的免疫應(yīng)答的方法并可用于免疫治療應(yīng)用，諸如，但不限于，在成人和兒科以及獸醫(yī)學(xué)應(yīng)用中治療癌癥、自身免疫疾患、哮喘、呼吸道變應(yīng)性、食物變應(yīng)性、皮膚變應(yīng)性、全身性紅斑狼瘡(sle)、關(guān)節(jié)炎、胸膜炎、慢性感染、炎性疾病、炎性腸綜合征、敗血癥、和細(xì)菌、寄生蟲和病毒感染。因此，本發(fā)明提供具有用于免疫治療的最佳水平的免疫調(diào)控效果的iro化合物以及制備和使用此類化合物的方法。此外，本發(fā)明的iro化合物可與例如疫苗、抗原、抗體、變應(yīng)原、化療劑(化療和靶向治療二者)、和/或反義寡核苷酸聯(lián)合用于預(yù)防和治療疾病。定義術(shù)語“寡核苷酸”一般指包含多個連接的核苷單元的多核苷。此類寡核苷酸可獲自現(xiàn)有的核酸源，包括基因組或cdna，但優(yōu)選地通過合成方法產(chǎn)生。在優(yōu)選的實施方案中，每個核苷單元與野生型寡核苷酸相比可涵蓋多種化學(xué)修飾和取代，包括但不限于修飾的核苷堿基和/或修飾的糖單元。化學(xué)修飾的實例是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的并描述于，例如uhlmanne等人(1990)chem.rev.90:543；"protocolsforoligonucleotidesandanalogs"synthesisandproperties&synthesisandanalyticaltechniques,s.agrawal,ed,humanapress,totowa,usa1993；andhunziker,j.等人(1995)mod.syn.methods7:331-417；和crooke,s.等人(1996)ann.rev.pharm.tox.36:107-129。核苷殘基可通過多種已知的核苷間連接中的任何一種彼此偶聯(lián)。此類核苷間連接包括但不限于，磷酸二酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、烷基膦酸酯、烷基硫代膦酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、硅氧烷、碳酸酯、烷氧羰基、氨基乙酸酯、氨基甲酸酯、嗎啉代、硼代、硫醚、橋接氨基磷酸酯、橋接亞甲基膦酸酯、橋接硫代磷酸酯、和砜核苷間連接。術(shù)語"寡核苷酸"還涵蓋具有一種或多種立體特異性核苷間連接(如，(rp)-或(sp)-硫代磷酸酯、烷基膦酸酯,或磷酸三酯連接)。如本文所用，術(shù)語"寡核苷酸"和"二核苷酸"明確地意圖包括具有任何此類核苷間連接的多核苷和二核苷，無論所述連接是否包含磷酸酯基團(tuán)。在某些優(yōu)選的實施方案中，這些核苷間連接可以是磷酸二酯、硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯連接或其組合。術(shù)語"2'-取代的核糖核苷"或“2’-取代的阿糖苷”一般包括其中戊糖部分2'位置處的羥基基團(tuán)被取代產(chǎn)生2’-取代的或2'-o-取代的核糖核苷的核糖核苷或阿糖核苷。在某些實施方案中，此類取代是用含有1-6個飽和或不飽和碳原子的低級烴基基團(tuán)、用鹵素原子、或用具有6-10個碳原子的芳基基團(tuán)，其中此類烴基或芳基基團(tuán)可以是未取代的或可以是取代的，例如，用鹵素、羥基、三氟甲基、氰基、硝基、?；?、酰氧基、烷氧基、羧基、烷氧羰基或氨基基團(tuán)。2'-o-取代的核糖核苷或2’-o-取代的-阿糖苷包括但不限于2’-氨基、2’-氟、2’-烯丙基、2’-o-烷基和2’-炔丙基核糖核苷或阿糖苷、2'-o-甲基核糖核苷或2’-o-甲基阿糖苷和2'-o-甲氧基乙氧基核糖核苷或2’-o-甲氧基乙氧基阿糖苷。術(shù)語"3'"當(dāng)用于指方向時，一般指位于相同多核苷酸或寡核苷酸中另一區(qū)域或位置的3'(下游)的多核苷酸或寡核苷酸區(qū)域或位置。術(shù)語"5'"當(dāng)用于指方向時，一般指位于相同多核苷酸或寡核苷酸中另一區(qū)域或位置的5'(上游)的多核苷酸或寡核苷酸區(qū)域或位置。術(shù)語"約"一般指準(zhǔn)確的數(shù)字不是關(guān)鍵的。因此，寡核苷酸中核苷殘基的數(shù)目不是關(guān)鍵的，且具有少一個或兩個核苷殘基、或具有一個至多個另外的核苷殘基的寡核苷酸預(yù)期為上述每個實施方案的等同物。術(shù)語“激動劑”一般指結(jié)合細(xì)胞的受體并誘導(dǎo)應(yīng)答的物質(zhì)。激動劑經(jīng)常模擬天然存在的物質(zhì)諸如配體的作用。術(shù)語“拮抗劑”一般指減弱、抑制或阻遏激動劑或配體的作用的物質(zhì)。術(shù)語"佐劑"一般指當(dāng)被加入免疫原性劑諸如疫苗或抗原時增強(qiáng)或加暴露于該混合物的接受者宿主對該劑的免疫應(yīng)答的物質(zhì)。術(shù)語"氣道炎癥"一般包括但不限于哮喘。術(shù)語"變應(yīng)原"一般指抗原或分子通常是蛋白的抗原性部分，其在暴露于受治療者時引發(fā)變應(yīng)性應(yīng)答。通常，受治療者是通過例如風(fēng)團(tuán)和潮紅檢驗或本領(lǐng)域中已知的任何方法表明為對變應(yīng)原變應(yīng)性的。即使僅有一小亞組的受治療者在暴露于分子時展現(xiàn)變應(yīng)性免疫應(yīng)答，該分子也被稱為是變應(yīng)原。術(shù)語"變應(yīng)性"一般指特征為炎癥的不適當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答，且包括但不限于食物變應(yīng)性和呼吸道變應(yīng)性。術(shù)語"抗原"一般指被抗體或被t細(xì)胞抗原受體識別和選擇性結(jié)合、導(dǎo)致誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的物質(zhì)?？乖砂ǖ幌抻陔?、蛋白、核苷、核苷酸和其組合?？乖梢允翘烊坏幕蚝铣傻模⑶乙话阏T導(dǎo)對該抗原特異的免疫應(yīng)答。術(shù)語“自身免疫疾病”和自身免疫疾患”一般指其中"自身"組分受到免疫系統(tǒng)攻擊的疾病或疾患。術(shù)語“tlr-介導(dǎo)的疾病”或tlr-介導(dǎo)的疾患”一般指其中一種或多種tlr的激活是貢獻(xiàn)因素的任何病理狀況。此類狀況包括但不限于癌癥、自身免疫性疾病或疾患、氣道炎癥、炎性疾病或疾患、傳染病、皮膚疾患、變應(yīng)性、哮喘或由病原體導(dǎo)致的疾病。術(shù)語"生理上可接受的"一般指不干擾根據(jù)本發(fā)明的iro化合物或組合物的效力并與生物系統(tǒng)諸如細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)物、組織或生物體相容的材料。優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是活生物體，諸如脊椎動物或哺乳動物。術(shù)語"載體"一般涵蓋任何賦形劑、稀釋劑、填充劑、鹽、緩沖劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、油、脂質(zhì)、含有脂質(zhì)的囊泡、微球、脂質(zhì)體膠囊或本領(lǐng)域熟知的用于藥物制劑的其他材料。應(yīng)理解，載體、賦形劑或稀釋劑的特征將取決于具體應(yīng)用的施用路徑。含有這些材料的藥學(xué)可接受制劑的制備描述于，例如，remington’spharmaceuticalsciences,18thedition,ed.a.gennaro,mackpublishingco.,easton,pa,1990。術(shù)語"共施用"一般指在時間上充分接近地施用至少兩種不同的物質(zhì)以調(diào)控、阻遏或抑制免疫應(yīng)答。共施用指至少兩種不同物質(zhì)以任何順序、以單獨劑量或分開劑量同時施用、以及以相距多達(dá)數(shù)天的時間間隔量施用。術(shù)語“互補(bǔ)”一般指具有與核酸雜交的能力。此類雜交通常是互補(bǔ)鏈之間氫鍵鍵合的結(jié)果，優(yōu)選地形成watson-crick或hoogsteen堿基對，雖然其他氫鍵鍵合模式以及堿基堆疊也可導(dǎo)致雜交。術(shù)語"有效量"或"足量"一般指足以實現(xiàn)期望的生物效應(yīng)諸如有益結(jié)果的量。因此，"有效量"或“足量”將取決于施用其的背景。在施用調(diào)控針對共施用的抗原的免疫應(yīng)答的化合物或組合物的背景下，根據(jù)本發(fā)明的iro化合物或組合物和抗原有效量是當(dāng)與單獨施用抗原時獲得的免疫應(yīng)答相比足以實現(xiàn)期望的調(diào)控、抑制或阻遏的量。有效量可以以一次或多次施用來施用術(shù)語"聯(lián)合"一般指在治療患者的疾病或疾患過程中，施用根據(jù)本發(fā)明的iro化合物或組合物和不減小根據(jù)本發(fā)明的iro化合物或組合物的免疫抑制效果的對于治療疾病或疾患有用的劑。此類聯(lián)合治療還可包括根據(jù)本發(fā)明的iro化合物或組合物和/或獨立的劑的多與一次施用。根據(jù)本發(fā)明的iro化合物或組合物和/或所述劑的施用可以是通過相同或不同路徑。術(shù)語"個體"或"受治療者"或“脊椎動物”一般指哺乳動物。哺乳動物一般包括但不限于，人類、非人靈長類、大鼠、小鼠、貓、狗、馬、牛、奶牛、豬、綿羊和兔。術(shù)語“激酶抑制劑”一般指拮抗或抑制細(xì)胞中依賴磷酸化的細(xì)胞信號傳導(dǎo)和/或生長途徑的分子。激酶抑制劑可以是天然存在的合成的，并包括具有作為口服治療劑施用的潛能的小分子。激酶抑制劑具有快速和特異地抑制靶激酶分子的激活的能力。蛋白激酶是有吸引力的藥物靶，部分是因為它們調(diào)節(jié)廣泛的信號傳導(dǎo)和生長途徑并包括許多不同的蛋白。如此，它們具有治療涉及激酶信號傳導(dǎo)的疾病，包括癌癥、心血管疾病、炎性疾患、糖尿病、黃斑變性和神經(jīng)學(xué)疾患的極大潛能。激酶抑制劑的實例包括索拉非尼達(dá)沙替尼、dasatinibtm、zactimatm、tykerbtm和sti571。術(shù)語“核苷”一般指由糖，通常是核糖或脫氧核糖，和嘌呤或嘧啶堿基組成的化合物。術(shù)語“核苷酸”一般指包含與糖連接的磷酸酯基團(tuán)的核苷。如本文所用，術(shù)語"嘧啶核苷"指其中核苷的堿基組分是嘧啶堿基(如，胞嘧啶(c)或胸腺嘧啶(t)或尿嘧啶(u))的核苷。相似地，術(shù)語"嘌呤核苷"指其中核苷的堿基組分是嘌呤堿基(如，腺嘌呤(a)或鳥嘌呤(g))的核苷。術(shù)語“類似物”或“衍生物"可互換地使用，一般指具有修飾的堿基和/或糖的任何嘌呤和/或嘧啶核苷酸或核苷。修飾的堿基是鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶或尿嘧啶之外的堿基。修飾的糖是核糖或2’脫氧核糖之外的并且可用于寡核苷酸的主鏈中的任何糖。術(shù)語“抑制”或"阻遏"一般指應(yīng)答的降低或阻止或應(yīng)答的定性差異，其可另外地由應(yīng)答的引發(fā)和/或刺激而產(chǎn)生。術(shù)語"非核苷酸連接物"一般指可通過含磷連接之外的連接來連接或被連接到寡核苷酸的任何連接或部分。優(yōu)選地此類連接物是約2埃至約200埃長度。術(shù)語“核苷酸連接”一般指通過含磷連接直接連接兩個核苷的3’和5’羥基基團(tuán)的直接3’-5’連接。術(shù)語“寡核苷酸基序”指寡核苷酸序列，包括選自cpg、c*pg、c*pg*或cpg*的二核苷酸。術(shù)語cpg、c*pg、c*pg*和cpg*指免疫刺激性的寡核苷酸基序，其中c是胞嘧啶、c*是胞嘧啶類似物或衍生物、g是鳥嘌呤和g*是鳥嘌呤類似物或衍生物。“將是免疫刺激性的、但在具有一個或多個修飾時除外的寡核苷酸基序”是指在親本寡核苷酸中是免疫刺激性的、但在衍生物寡核苷酸中不是免疫刺激性的寡核苷酸基序，其中衍生物寡核苷酸基于親本寡核苷酸、但具有一個或多個修飾。換言之，“將是免疫刺激性的、但在具有一個或多個修飾時除外的寡核苷酸基序”指將具有tlr9激動劑活性但事實上已通過tlr9誘導(dǎo)部分本身和/或通過基于寡核苷酸的化合物內(nèi)的一種或多種化學(xué)修飾被功能上阻斷或抑制了對tlr9介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)的tlr9誘導(dǎo)部分。抑制的tlr9誘導(dǎo)部分活性的修飾包括但不限于，2’-ome-核糖核苷、3’-ome-核糖核苷、3-硝基吡咯、5-硝基吲哚、du、β-l-脫氧核苷、α-脫氧核苷、無堿基核苷、丙二醇連接物、氨基連接物、異丙氧基、甘油連接物、2’-5’-dna、2’-5’rna和p-medna。術(shù)語"治療"一般指意圖獲得有益或期望的結(jié)果的方法，其可包括疾病或疾患的癥狀的緩解和/或疾病或疾患的進(jìn)展的延遲和/或改善。根據(jù)本發(fā)明的某些iro顯示在表2中。在該表中，除了用‘o’指出的地方，否則iro化合物全部具有硫代磷酸(ps)連接。除了指出的地方，否則所有核苷酸是脫氧核糖核苷酸。表2g1＝7-去氮-dg；g2＝arag；c*＝5-me-dc；c*＝2’-o-me-5-me-c；a^/g^/t^/g^＝2’-o-(2-甲氧基乙基)-核糖核苷酸；x＝甘油連接物(也稱為1,2,3-丙三醇連接物)；x1＝1,2,4-丁三醇連接物；z＝1,3,5-戊三醇連接物；x4＝3-三甲基氨基-1,2-丙二醇連接物；x5＝雙-1,5-o-(3’-胸苷基)-1,3,5-戊三醇連接物；x6＝雙-1,5-o-[3’-(1,2-二脫氧-d-核糖基)]-1,3-5-戊三醇連接物；x7＝3-(2-羥乙基)-1,5-戊二醇連接物；g/u/a/c＝2’-o-me-核糖核苷酸s；o＝磷酸二酯連接。在第一方面，本發(fā)明提供免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸(iro)化合物。術(shù)語“iro”指為tlr7-和/或tlr9的拮抗劑的基于免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸的化合物，其中所述化合物包含寡核苷酸基序和至少一個修飾，其中所述寡核苷酸基序?qū)⑹敲庖叽碳ば缘?，但?dāng)具有功能上阻斷或抑制寡核苷酸基序的活性的一個或多個修飾時除外，條件是所述化合物含有少于4個連續(xù)鳥苷核苷酸和優(yōu)選地少于3個連續(xù)鳥苷核苷酸。此類修飾可以在寡核苷酸5’末端、在寡核苷酸基序側(cè)翼的5’序列中、和/或在免疫刺激性寡核苷酸基序中。這些修飾導(dǎo)致拮抗、抑制、阻遏或阻止tlr7-和/或tlr9-介導(dǎo)的免疫刺激的iro化合物。此類修飾可以針對免疫刺激性寡核苷酸基序側(cè)翼或此類寡核苷酸基序內(nèi)的核苷酸/核苷的堿基、糖殘基和/或磷酸酯主鏈。iro化合物的通用結(jié)構(gòu)具有結(jié)構(gòu)5’-nm–n3n2n1cgn1n2n3–nm-3’，其中cg是選自cpg、c*pg、c*pg*或cpg*的寡核苷酸基序，其中c是胞嘧啶、c*是胞嘧啶類似物或衍生物、g是鳥嘌呤和g*是鳥嘌呤類似物或衍生物；n1-n3在每次出現(xiàn)時獨立地是核苷酸或核苷酸衍生物；n1-n3在每次出現(xiàn)時獨立地是核苷酸或核苷酸衍生物；nm和nm在每次出現(xiàn)時獨立地是核苷酸、核苷酸衍生物或非核苷酸連接物；條件是寡核苷酸基序的n1、n2,和n3和/或c和/或g中的至少一個是功能上阻斷或抑制寡核苷酸基序的活性的核苷酸衍生物；且另外條件是所述化合物含有少于4個連續(xù)鳥苷核苷酸和優(yōu)選地少于3個連續(xù)鳥苷，其中寡核苷酸基序的免疫刺激活性被所述核苷酸衍生物拮抗、抑制、阻遏或阻止；且其中m是0至約30的數(shù)字。在優(yōu)選的實施方案中，n1是功能上阻斷或抑制寡核苷酸基序的活性的核苷酸衍生物。在優(yōu)選的實施方案中，n1和n2、或n1和n3、或n2和n3、或n1、n2和n3是是功能上阻斷或抑制寡核苷酸基序的活性的核苷酸衍生物。在優(yōu)選的實施方案中，iro化合物不是反義寡核苷酸。在本發(fā)明的某些實施方案中，iro化合物可包含至少個寡核苷酸(例如2、3、4、5或6個寡核苷酸)，其中至少兩個寡核苷酸至少兩個寡核苷酸經(jīng)由其3’端的直接核苷酸與核苷酸間的連接通過糖的3’位置或通過修飾的糖或修飾的核堿基或經(jīng)由其3’端的非核苷酸連接物通過糖的3’位置或通過修飾的糖或修飾的核堿基而共價連接。在此實施方案的優(yōu)選方面，iro化合物的至少一個寡核苷酸具有結(jié)構(gòu)5’-nm–n3n2n1cgn1n2n3–nm-3’，其中nm、n1、n2、n3、c、g、n1、n2、n3和nm如上文對于iro化合物的通用結(jié)構(gòu)所述。在此實施方案的更優(yōu)選的方面，iro化合物的至少兩個寡核苷酸具有結(jié)構(gòu)5’-nm–n3n2n1cgn1n2n3–nm-3’，其中nm、n1、n2、n3、c、g、n1、n2、n3和nm如上文對于iro化合物的通用結(jié)構(gòu)所述。此類iro化合物可具有結(jié)構(gòu)5’-nm–n3n2n1cgn1n2n3–nm-3’–x–3’-nm–n3n2n1gcn1n2n3–nm-5’，其中x是核苷酸連接或非核苷酸連接物和nm、n1、n2、n3、c、g、n1、n2、n3和nm如上文對于iro化合物的通用結(jié)構(gòu)所述。在本發(fā)明的某些實施方案中，為tlr7和/或tlr9的拮抗劑的iro化合物具有結(jié)構(gòu)5-npn3n2n1c*g*n1n2n3nzn4n5-3’，其中c*g*是其中c*是5-me-dc、和g*是7-去氮-dg的寡核苷酸基序；n1-n2在每次出現(xiàn)時獨立地是2’-o-me-核糖核苷酸；n3在每次出現(xiàn)時獨立地是核苷酸或核苷酸衍生物；n1-n3在每次出現(xiàn)時獨立地是核苷酸或核苷酸衍生物；np和nz在每次出現(xiàn)時獨立地是核苷酸或核苷酸衍生物；n4-n5在每次出現(xiàn)時獨立地是2’-o-me-核糖核苷酸；p是0至約30的數(shù)字和z是0至約30的數(shù)字；條件是所述化合物含有少于3個連續(xù)鳥苷。在某些實施方案中，p和z獨立地是1至約20的數(shù)字。在某些實施方案中，p和z獨立地是2至約15的數(shù)字。在某些實施方案中，p和z獨立地是3至約10的數(shù)字。在本發(fā)明的某些實施方案中，為tlr7和/或tlr9的拮抗劑的iro化合物具有結(jié)構(gòu)5-npn3n2n1c*g*n1n2n3nzn4n5-3’，其中c*g*是其中c*是5-me-dc、和g*是7-去氮-dg的寡核苷酸基序；n1-n2在每次出現(xiàn)時獨立地是2’-o-me-核糖核苷酸；n3在每次出現(xiàn)時獨立地是核苷酸；n1-n3在每次出現(xiàn)時獨立地是核苷酸；np和nz在每次出現(xiàn)時獨立地是核苷酸；n4-n5在每次出現(xiàn)時獨立地是2’-o-me-核糖核苷酸；p是5和z是3；條件是所述化合物含有少于3個連續(xù)鳥苷。在優(yōu)選的實施方案中，具有結(jié)構(gòu)5’-nm–n3n2n1cgn1n2n3–nm-3’的兩個寡核苷酸經(jīng)由其3’端的直接核苷酸與核苷酸間的連接通過糖的3’位置或通過修飾的糖或修飾的核堿基或經(jīng)由其3’端的非核苷酸連接物通過糖的3’位置或通過修飾的糖或修飾的核堿基而共價連接。在此實施方案的優(yōu)選方面，iro化合物具有結(jié)構(gòu)5’-nm–n3n2n1cgn1n2n3–nm-3’–x–3’-nm–n3n2n1gcn1n2n3–nm-5’，其中x是核苷酸連接或非核苷酸連接物和nm、n1、n2、n3、c、g、n1、n2、n3和nm如上文對于iro化合物的通用結(jié)構(gòu)所述。在優(yōu)選的實施方案中，所述兩個寡核苷酸經(jīng)由核苷酸連接直接共價連接。在更優(yōu)選的實施方案中，所述兩個寡核苷酸經(jīng)由非核苷酸連接物共價連接。作為非限制性實例，共價連接兩個寡核苷酸的非核苷酸連接物可連接至糖的3'-羥基。在此類實施方案中，所述連接物包含借助基于磷酸酯的連接像，例如，磷酸二酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、甲基膦酸酯，或通過基于非磷酸酯的連接與3'-羥基連接的官能團(tuán)。連接物與寡核苷酸的3’端偶聯(lián)的可能位點在下面的式i中示出，其中b代表雜環(huán)堿基和其中指向p的箭頭指示與磷的任何連接。式i在某些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的此方面，非核苷酸連接物是小分子、大分子或生物分子，包括但不限于，多肽、抗體、脂質(zhì)、抗原、變應(yīng)原、和寡糖。在某些其他實施方案中，非核苷酸連接物是小分子。對于本發(fā)明目的，小分子是具有少于1,000da的分子量的有機(jī)部分。在一些實施方案中，小分子具有少于750da的分子量。在一些實施方案中，小分子是脂肪烴或芳香烴，其每一個可任選地以連接寡核苷酸或附加于寡核苷酸的直鏈包括一個或多個官能團(tuán)，包括但不限于，羥基、氨基、硫醇、硫醚、醚、酰胺、硫代酰胺、酯、脲或硫脲。小分子可以是環(huán)狀的或非環(huán)狀的。小分子連接物的實例包括但不限于氨基酸、碳水化合物、環(huán)糊精、金剛烷胺、膽固醇、半抗原和抗生素。然而，對于描述非核苷酸連接物目的，術(shù)語"小分子"不意圖包括核苷。在一些實施方案中，非核苷酸連接物是烷基連接物或氨基連接物。烷基連接物可以是支鏈的或非支鏈的、環(huán)狀的或非環(huán)狀的、取代的或未取代的、飽和的或不飽和的、手性的、非手性的或消旋混合物。烷基連接物可具有約2至約18個碳原子。在一些實施方案中，此類烷基連接物具有約2至約9個原子。在其他實施方案中，烷基連接物具有少于3個碳原子。在另外的實施方案中，烷基連接物具有至少3個碳原子和優(yōu)先多于3個碳原子。一些烷基連接物包括一種或多種官能團(tuán)，包括但不限于，羥基、氨基、硫醇、硫醚、醚、酰胺、硫代酰胺、酯、脲和硫醚。此類烷基連接物可包括但不限于1,2丙二醇、1,2,3丙三醇、1,3丙二醇、1,2,4-丁三醇、1,3,5-戊三醇、3-三甲基氨基-1,2-丙二醇、雙-1,5-o-(3’胸苷基(-1,3,5-戊三醇、雙-1,5-o-[3’-(1,2-二脫氧-d-核糖基)]-1,3,5-戊三醇、3-(2-羥乙基)-1,5-戊二醇、三甘醇、六甘醇、聚乙二醇連接物(如[-o-ch2-ch2-]n(n＝1-9))、甲基連接物、乙基連接物、丙基連接物、丁基連接物或己基連接物。在一些實施方案中，此類烷基連接物可包括肽或氨基酸。在一些實施方案中，非核苷酸連接物可包括但不限于表3中列出的那些。表3：代表性非核苷酸連接物在一些實施方案中，小分子連接物是甘油或式ho-(ch2)o-ch(oh)-(ch2)p-oh的甘油同系物，其中o和p獨立地是1至約6、1至約4、或1至約3的整數(shù)。在一些其他實施方案中，小分子連接物是1,3-二氨基-2-羥基丙烷的衍生物。一些此類衍生物具有式ho-(ch2)m-c(o)nh-ch2-ch(oh)-ch2-nhc(o)-(ch2)m-oh，其中m是0至約10、0至約6、2至約6、或2至約4的整數(shù)。根據(jù)本發(fā)明的一些非核苷酸連接物允許連接多于兩個寡核苷酸。例如，小分子連接物甘油具有3個可共價連接寡核苷酸的羥基基團(tuán)。根據(jù)本發(fā)明的一些iro因此包含與核苷酸或非核苷酸連接物連接的兩個或多個寡核苷酸。此類iro稱為是“支鏈的”。iro化合物還可包含非共價連接的至少兩個寡核苷酸，諸如通過靜電相互作用、疏水相互作用、π-堆積相互作用、氫鍵鍵合和其組合。此類非共價連接的非限制性實例包括watson-crick堿基配對、hoogsteen堿基配對和堿基堆積。在優(yōu)選的實施方案中，iro化合物中的一個寡核苷酸不是反義寡核苷酸。在更優(yōu)選的實施方案中，iro化合物的寡核苷酸均不是反義寡核苷酸。在某些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合物和方法中使用的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸中的嘧啶核苷具有結(jié)構(gòu)(ii)：其中：d是氫鍵供體；d'選自由以下組成的組：氫、氫鍵供體、氫鍵接受者、親水基團(tuán)、疏水基團(tuán)、吸電子基團(tuán)和供電子基團(tuán)；a是氫鍵接受者或親水基團(tuán)；a’選自由以下組成的組：氫鍵接受者、親水基團(tuán)、疏水基團(tuán)、吸電子基團(tuán)和供電子基團(tuán)；x是碳或氮；和s'是戊糖或己糖糖環(huán)、或糖類似物。在某些實施方案中，糖環(huán)用磷酸酯部分、修飾的磷酸酯部分、或適合連接嘧啶核苷與另一核苷或核苷類似物的其他連接物部分衍生。在一些實施方案中，氫鍵供體包括但不限于，-nh-、-nh2、-sh和-oh。優(yōu)選的氫鍵接受者包括但不限于、c＝o、c＝s、和芳香雜環(huán)的環(huán)氮原子，如胞嘧啶的n3。在一些實施方案中，結(jié)構(gòu)(ii)是嘧啶核苷衍生物。嘧啶核苷衍生物的實例包括但不限于，5-羥基胞嘧啶、5-羥基甲基胞嘧啶、n4-烷基胞嘧啶、或n4-乙基胞嘧啶、arac、5-oh-dc、n3-me-dc、2’-o-me-c、2’-o-me-u、2’-o-me-t、和4-硫尿嘧啶?；瘜W(xué)修飾的衍生物還包括但不限于胸腺嘧啶或尿嘧啶類似物。在一些實施方案中，(ii)中的糖部分s'是糖衍生物。合適的糖衍生物包括但不限于海藻或海藻衍生物、己糖或己糖衍生物、阿拉伯糖或阿拉伯糖衍生物。在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合物和方法中使用的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸中的嘌呤核苷具有結(jié)構(gòu)(iii)：其中：d是氫鍵供體；d’選自由以下組成的組：氫、氫鍵供體、和親水基團(tuán)；a是氫鍵接受者或親水基團(tuán)；x是碳或氮；每個l獨立地選自由以下組成的組：c、o、n和s；和s'是戊糖或己糖糖環(huán)、或糖類似物。在某些實施方案中，糖環(huán)用磷酸酯部分、修飾的磷酸酯部分、或適合連接嘧啶核苷與另一核苷或核苷類似物的其他連接物部分衍生。在某些實施方案中，氫鍵供體包括但不限于，-nh-、-nh2、-sh和-oh。在某些實施方案中，氫鍵接受者包括但不限于，c＝o、c＝s、-no2和芳香雜環(huán)的環(huán)氮原子，如鳥嘌呤的n1。在一些實施方案中，結(jié)構(gòu)(iii)是呤核苷衍生物。嘌呤核苷衍生物的實例包括但不限于，鳥嘌呤類似物諸如7-去氮-g、7-去氮-dg、ara-g、6-硫-g、肌苷、iso-g、洛索立賓、tog(7-硫-8-氧)-g、8-溴-g、8-羥基-g、5-氨基間型霉素b、氧代間型霉素、7-甲基-g、9-p-氯苯基-8-氮雜-g、9-苯基-g、9-己基-鳥嘌呤、7-去氮-9-芐基-g、6-氯-7-去氮鳥嘌呤、6-甲氧基-7-去氮鳥嘌呤、8-氮-7-去氮-g(ppg)、2-(二甲基氨基)鳥苷、7-甲基-6-硫鳥苷、8-芐氧基鳥苷、9-去氮鳥苷、1-(b-d-呋喃核糖基)-2-氧-7-去氮-8-甲基-嘌呤、1-(2’-脫氧-β-d-呋喃核糖基)-2-氧-7-去氮-8-甲基-嘌呤、2’-o-甲基-g、和n1-me-dg?；瘜W(xué)修飾的衍生物還包括但不限于腺嘌呤類似物諸如9-芐基-8-羥基-2-(2-甲氧基乙氧基)腺嘌呤、2-氨基-n2-o-、甲基腺苷、8-氮-7-去氮-a、7-去氮-a、阿糖腺苷、2-氨基腺苷、n1-甲基腺苷、8-氮腺苷、5-碘殺結(jié)核菌素、和2’-o-me-a。在一些實施方案中，(iii)中的糖部分s'是如對式ii所定義的糖衍生物。在本發(fā)明的某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)核酸包含含有至少一個b-l-脫氧核苷或3’-脫氧核苷的核酸序列。在本發(fā)明的某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸包含含有至少一個選自cpg、c*pg、c*pg*和cpg*的二核苷酸的核酸序列，其中c是胞嘧啶或2’-脫氧胞苷，g是鳥苷或2’-脫氧鳥苷，c*是2'-脫氧胸苷、1-(2'-脫氧-β-d-呋喃核糖基)-2-氧-7-去氮-8-甲基-嘌呤、5-me-dc、2’-二脫氧-5-鹵代胞嘧啶、2’-二脫氧-5-硝基胞嘧啶、阿糖胞苷、2'-脫氧-2'-取代的阿糖胞苷、2'-o-取代的阿糖胞苷、2'-脫氧-5-羥基胞苷、2'-脫氧-n4-烷基-胞苷、2'-脫氧-4-硫尿核苷、2’-o-取代的核糖核苷酸(包括但不限于，2’-o-me-5-me-c、2’-o-(2-甲氧基乙基)-核糖核苷酸或2’-o-me-核糖核苷酸或其他嘧啶核苷類似物或衍生物，g*是2'-脫氧-7-去氮鳥苷、2'-脫氧-6-硫鳥苷、阿糖鳥苷、2'-脫氧-2'取代的-阿糖鳥苷、2'-o-取代的-阿糖鳥苷、2'-脫氧肌苷、2’-o-取代的核糖核苷酸(包括但不限于，2’-o-(2-甲氧基乙基)-核糖核苷酸；或2’-o-me-核糖核苷酸)或其他嘌呤核苷類似物或衍生物，和p是選自由以下組成的組的核苷間連接：磷酸二酯、硫代磷酸酯、和二硫代磷酸酯，和其中至少一個二核苷酸的活性受側(cè)翼序列的調(diào)節(jié)。在一些實施方案中，iro化合物的寡核苷酸各自具有約6至約35個核苷殘基、優(yōu)選地約9至約30個核苷殘基、更優(yōu)選地約11至約23個核苷殘基。在一些實施方案中，寡核苷酸具有約6至約18個核苷酸殘基。在一些實施方案中，iro化合物可與一種或多種疫苗、抗原、抗體、細(xì)胞毒性劑、變應(yīng)原、抗生素、反義寡核苷酸、tlr激動劑、tlr拮抗劑、肽、蛋白、基因治療載體、dna疫苗、增強(qiáng)免疫應(yīng)答的特異性或幅度的佐劑或激酶抑制劑、或共刺激分子諸如細(xì)胞因子、趨化因子、蛋白配體、反式激活因子、肽和包含修飾的氨基酸的肽組合。在第二方面，本發(fā)明提供包含根據(jù)本發(fā)明的iro化合物和生理上可接受的載體的藥物組合物。在本發(fā)明此方面的實施方案中，所述組合物還可包含一種或多種疫苗、抗原、抗體、細(xì)胞毒性劑、變應(yīng)原、抗生素、反義寡核苷酸、tlr激動劑、tlr拮抗劑、肽、蛋白、基因治療載體、dna疫苗、增強(qiáng)免疫應(yīng)答的特異性或幅度的佐劑或激酶抑制劑、或共刺激分子諸如細(xì)胞因子、趨化因子、蛋白配體、反式激活因子、肽和包含修飾的氨基酸的肽。在第三方面，本發(fā)明提供抑制或阻遏哺乳動物中tlr-介導(dǎo)的免疫應(yīng)答誘導(dǎo)的方法，此類方法包含向哺乳動物施用根據(jù)本發(fā)明的iro化合物。在一些實施方案中，所述哺乳動物是人。在優(yōu)選的實施方案中，將所述iro化合物施用至需要免疫阻遏的哺乳動物。根據(jù)本發(fā)明的此方面，iro化合物能夠阻遏對另外的tlr配體或tlr激動劑的基于tlr的免疫應(yīng)答。如下文的實施例中進(jìn)一步討論的，基于tlr的免疫應(yīng)答被tlr激動劑或tlr配體(例如，免疫刺激性寡核苷酸)的激活可通過同時、之前或之后施用的iro化合物而拮抗、抑制、阻遏或阻止，且此類拮抗、抑制、阻遏或阻止可在施用后維持延長的時間段(例如，數(shù)天)。本發(fā)明的這一有益性質(zhì)對于疾病或疾患的預(yù)防和/或治療具有獨特優(yōu)勢。例如，在治療疾病過程中某些tlr-激動劑的應(yīng)用可導(dǎo)致不希望的免疫刺激，iro化合物可拮抗、阻遏、抑制或阻止該不希望的免疫刺激。在施用tlr激動劑的同時、之前和/或之后施用iro可允許來自tlr激動劑的治療益處同時拮抗、阻遏、抑制或阻止不希望的副作用。此外，根據(jù)本發(fā)明的iro化合物的事先施用可拮抗、阻遏、抑制或阻止針對隨后或稍后的tlr激動劑攻擊的免疫應(yīng)答(例如，變應(yīng)反應(yīng))。優(yōu)選地tlr7和/或tlr9激動劑在根據(jù)本發(fā)明的此方面的方法中，根據(jù)本發(fā)明的iro化合物的施用可通過任何合適的路徑，包括但不限于，胃腸外、粘膜遞送、口服、舌下、透皮、體表、吸入、胃內(nèi)、鼻內(nèi)、氣溶膠、眼內(nèi)、氣管內(nèi)、直腸內(nèi)、陰道、通過基因槍、皮膚貼片或以滴眼液或漱口劑形式。iro化合物的治療組合物的施用可以用有效減輕疾病的癥狀或替代標(biāo)志物的劑量和時間段使用已知的程序進(jìn)行。當(dāng)全身施用時，治療組合物優(yōu)選地以達(dá)到約0.0001微摩爾/升至約100微摩爾/升的iro化合物血液濃度的足夠劑量施用。更優(yōu)選地，全身施用將是達(dá)到約0.001微摩爾/升至約10微摩爾/升的iro化合物血液濃度的足夠劑量。對于局部施用，比這低得多的濃度可以是有效的，且高得多的濃度可以是耐受的。優(yōu)選地，iro化合物的總劑量在約0.001mg/患者/天至約200mg/kg體重/天范圍內(nèi)。可期望每天、每兩天、每三天、每四天、每五天、每六天或每周一次地施用根據(jù)本發(fā)明的iro化合物。可期望向個體同時或先后施用治療有效量的一種或多種本發(fā)明的含有iro的治療組合物作為單一治療事件。iro化合物可任選地連接至一種或多種變應(yīng)原和/或抗原(自身的或外來的)、免疫原性蛋白諸如鑰孔戚血藍(lán)素(klh)、霍亂毒素b亞基、或任何其他免疫原性載體蛋白。iro還可與其他化合物(例如，佐劑)聯(lián)合使用，包括但不限于，tlr激動劑(如tlr2激動劑、tlr4激動劑和tlr9激動劑)、弗氏不完全佐劑、klh、單磷酰脂質(zhì)a(mpl)、明礬、merck明礬佐劑(maa)、和皂苷包括qs-21和咪喹莫特、或其組合。根據(jù)本發(fā)明的此方面方法在免疫系統(tǒng)的模型研究中是有用的。所述方法還對于人或動物疾病的預(yù)防性或治療性治療是有用的。例如，所述方法對于兒科、成人和獸醫(yī)疫苗應(yīng)用是有用的。在第四方面，本發(fā)明提供用于治療性治療具有疾病或疾患的患者的方法，所述方法包含向患者施用根據(jù)本發(fā)明的iro化合物。在不同的實施方案中，待治療的疾病或疾患是癌癥、自身免疫疾患、氣道炎癥、炎性疾患、傳染病、瘧疾、萊姆病、眼部感染、結(jié)膜炎、皮膚疾患、牛皮癬、硬皮癥、心血管疾病、動脈粥樣硬化、慢性疲勞綜合征、結(jié)節(jié)病、移植排斥反應(yīng)、變應(yīng)性、哮喘或由病原體引起的疾病。優(yōu)選的自身免疫疾患包括但不限于紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、ⅰ型糖尿病、腸易激綜合征、克羅恩病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、感染性休克、普禿、急性播散性腦脊髓炎、阿狄森氏病、強(qiáng)直性脊柱炎、抗磷脂抗體綜合征、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、大皰性類天皰瘡、恰加斯病、慢性阻塞性肺病、腹腔疾病、皮肌炎、子宮內(nèi)膜異位癥、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺疾病、格林-巴利綜合征、橋本氏病、化膿性汗腺炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜、間質(zhì)性膀胱炎、硬斑病、重癥肌無力、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強(qiáng)直、天皰瘡、惡性貧血、多發(fā)性肌炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、精神分裂癥、干燥綜合征、顳動脈炎("巨細(xì)胞動脈炎")、血管炎、白癜風(fēng)、外陰疼痛和韋格納氏肉芽腫。優(yōu)選的炎性疾患包括但不限于氣道炎癥、哮喘、自身免疫性疾病、慢性炎癥、慢性前列腺炎、腎小球性腎炎、白塞氏病、超敏感性、炎癥性腸疾病、再灌注損傷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、移植排斥反應(yīng)、潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎、結(jié)膜炎、和血管炎。病原體包括細(xì)菌、寄生蟲、真菌、病毒、類病毒、和朊病毒。施用如本發(fā)明第三方面所述的進(jìn)行。在第五方面，本發(fā)明提供用于預(yù)防疾病或疾患的方法，所述方法包含向患者施用根據(jù)本發(fā)明的iro化合物。在不同的實施方案中，待預(yù)防的疾病或疾患是癌癥、自身免疫疾患、氣道炎癥、炎性疾患、傳染病、瘧疾、萊姆病、眼部感染、結(jié)膜炎、皮膚疾患、牛皮癬、硬皮癥、心血管疾病、動脈粥樣硬化、慢性疲勞綜合征、結(jié)節(jié)病、移植排斥反應(yīng)、變應(yīng)性、哮喘或由病原體引起的疾病。優(yōu)選的自身免疫疾患包括但不限于紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、ⅰ型糖尿病、腸易激綜合征、克羅恩病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、感染性休克、普禿、急性播散性腦脊髓炎、阿狄森氏病、強(qiáng)直性脊柱炎、抗磷脂抗體綜合征、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、大皰性類天皰瘡、恰加斯病、慢性阻塞性肺病、腹腔疾病、皮肌炎、子宮內(nèi)膜異位癥、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺疾病、格林-巴利綜合征、橋本氏病、化膿性汗腺炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜、間質(zhì)性膀胱炎、硬斑病、重癥肌無力、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性肌強(qiáng)直、天皰瘡、惡性貧血、多發(fā)性肌炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、精神分裂癥、干燥綜合征、顳動脈炎("巨細(xì)胞動脈炎")、血管炎、白癜風(fēng)、外陰疼痛和韋格納氏肉芽腫。優(yōu)選的炎性疾患包括但不限于氣道炎癥、哮喘、自身免疫性疾病、慢性炎癥、慢性前列腺炎、腎小球性腎炎、白塞氏病、超敏感性、炎癥性腸疾病、再灌注損傷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、移植排斥反應(yīng)、潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎、結(jié)膜炎、和血管炎。病原體包括細(xì)菌、寄生蟲、真菌、病毒、類病毒和朊病毒。施用如本發(fā)明第三方面所述的進(jìn)行。在根據(jù)本發(fā)明第三、第四或第五方面的方法的任何一種中，iro化合物可對于治療或預(yù)防疾病或病癥有用的不消除iro化合物的免疫拮抗劑、抑制、阻遏或阻止作用或活性的任何其他劑施用。在任何根據(jù)本發(fā)明的方法中，對于治療或預(yù)防疾病或病癥有用的劑包括但不限于，一種或多種疫苗、抗原、抗體、細(xì)胞毒性劑、變應(yīng)原、抗生素、反義寡核苷酸、tlr激動劑、tlr拮抗劑、肽、蛋白、基因治療載體、dna疫苗、增強(qiáng)免疫應(yīng)答的特異性或幅度的佐劑或激酶抑制劑、或共刺激分子諸如細(xì)胞因子、趨化因子、蛋白配體、反式激活因子、肽和包含修飾的氨基酸的肽。例如，在癌癥的治療中，預(yù)期iro化合物可聯(lián)合一種或多種化療化合物、靶向治療劑和/或單克隆抗體施用；和在預(yù)防疾病中，預(yù)期iro化合物可聯(lián)合一種或多種疫苗施用?？蛇x地，所述劑可包括編碼抗原或變應(yīng)原的dna載體。在這些實施方案中，本發(fā)明的iro化合物可不同地起佐劑作用和/或產(chǎn)生直接免疫調(diào)控效應(yīng)。以下實施例意圖進(jìn)一步說明本發(fā)明的某些示例性實施方案而不意圖限制本發(fā)明的范圍。例如，以下實施例中顯示了代表性tlr-配體，但不意圖限制本發(fā)明的iro針對其起拮抗劑作用的配體的范圍.實施例1含有免疫調(diào)節(jié)部分的寡核苷酸的合成。本發(fā)明的所有iro化合物根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)程序合成(參見如美國專利公布第20040097719號)。利用自動化dna合成儀(expedite8909；perseptivebiosystems,framingham,mass.)、遵循標(biāo)準(zhǔn)線性合成或平行合成程序以1μm規(guī)模合成寡核苷酸(參見如美國專利公布第20040097719號的圖5和6)。脫氧核糖核苷亞磷酰胺獲自(aldrich-sigma,stlouis,mo)。1',2'-二脫氧核糖亞磷酰胺、丙基-1-亞磷酰胺、2-脫氧尿苷亞磷酰胺、1,3-雙-[5-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)戊基亞氨基]-2-丙醇亞磷酰胺和甲基亞膦酰胺獲自glenresearch(sterling,va.)。β-l-2'-脫氧核糖核苷亞磷酰胺、α-2'-脫氧核糖核苷亞磷酰胺、單-dmt-甘油亞磷酰胺和二-dmt-甘油亞磷酰胺獲自chemgenes(willmington,mass.)。(4-氨基丁基)-1,3-丙二醇亞磷酰胺獲自clontech(paloalto,calif.)。阿糖鳥苷獲自reliablepharmaceutical(st.louis,mo.)。阿糖鳥苷亞磷酰胺在iderapharmaceuticals,inc.(cambridge,mass.)合成(noronha等人(2000)biochem.,39:7050-7062)。所有核苷亞磷酰胺通過31p和1hnmr譜表征。利用普通的偶聯(lián)循環(huán)將修飾的核苷摻入特定位點。合成后，寡核苷酸利用濃氫氧化銨脫保護(hù)和通過反相hplc純化、然后透析。在使用前，將純化的鈉鹽形式的寡核苷酸凍干。純度通過cge和maldi-tofms測試。實施例2tlr7和tlr9刺激的抑制用5mg/kgiro化合物在0小時和0.25mg/kgtlr9激動劑或10mg/kgtlr7激動劑在24小時在左側(cè)腋下皮下(s.c.)注射c57bl/6小鼠。注射tlr9或tlr7激動劑后2小時采集血清樣品并通過elisa確定il-12濃度。對于iro編號40，tlr7和tlr9激動劑在施用iro后72小時施用。所有iro的結(jié)果顯示于表4-11。這些結(jié)果證明根據(jù)本發(fā)明的iro化合物可體內(nèi)抑制tlr7和/或tlr9活性，且更廣義而言，根據(jù)本發(fā)明的iro化合物可抑制tlr激活。表4.在小鼠中的體內(nèi)拮抗活性表5.在小鼠中的體內(nèi)拮抗活性表6.在小鼠中的體內(nèi)拮抗活性表7.在小鼠中的體內(nèi)拮抗活性表8.在小鼠中的體內(nèi)拮抗活性表9.在小鼠中的體內(nèi)拮抗活性表10.在小鼠中的體內(nèi)拮抗活性表11.在小鼠中的體內(nèi)拮抗活性表12.在小鼠中的體內(nèi)拮抗活性實施例3tlr7/tlr9體外拮抗劑研究本研究中使用c57bl/6。在tlr7激動劑(200mg/ml)存在下或在tlr9激動劑(1mg/ml)存在下或在pbs存在下用0.3、1、5、10mg/ml劑量范圍(a)或單一劑量10mg/ml(b)的tlr7/tlr9拮抗劑培養(yǎng)小鼠脾細(xì)胞24小時(在37℃、5％co2下)。收集上清液，然后利用luminexxmap系統(tǒng)通過多重測定評估上清液中的細(xì)胞因子/趨化因子應(yīng)答。樣品以兩個重復(fù)進(jìn)行測定(±sd)。結(jié)果顯示于圖3和4。實施例4tlr7/tlr9體內(nèi)拮抗劑研究用1、5或15mg/kg拮抗劑化合物在0小時在右脅腹皮下注射雌性c57bl/6小鼠(2只/組)。然后用tlr7激動劑(10mg/kg)或用tlr9激動劑(0.25mg/kg)在24小時在左脅腹注射小鼠。激動劑施用后2小時通過眼眶采血收集血液。然后通過il-12elisa分析血清樣品。結(jié)果顯示于圖5和6。另外，用5mg/kg拮抗劑化合物在第0天在右脅腹皮下注射雌性c57bl/6小鼠(2只/組)。然后用tlr7(10mg/kg)激動劑在第1、2、4、9和11天或用tlr9(0.25mg/kg)激動劑在第1、2、4、7、9和11天在左脅腹注射小鼠。激動劑施用后2小時通過眼眶采血收集血液。然后通過il-12elisa分析血清樣品。結(jié)果顯示于圖7和8。還用5mg/kg拮抗劑化合物在0小時在右脅腹皮下注射雌性c57bl/6小鼠(2只/組)。然后用tlr9(0.25mg/kg)或tlr7(10mg/kg)激動劑在24小時在左脅腹注射小鼠。激動劑施用后2小時通過眼眶采血收集血液。然后利用luminexxmap系統(tǒng)通過多重測定評估血清樣品中的細(xì)胞因子/趨化因子應(yīng)答。細(xì)胞因子/趨化因子結(jié)果顯示于圖9。最后，用5mg/kg拮抗劑化合物在0小時在右脅腹皮下注射雌性c57bl/6小鼠(2只/組)。然后用tlr3(10mg/kg)或tlr5(0.25mg/kg)激動劑在24小時在左脅腹注射小鼠。激動劑施用后2小時通過眼眶采血收集血液。然后利用luminexxmap系統(tǒng)通過多重測定評估血清樣品中的細(xì)胞因子/趨化因子應(yīng)答。細(xì)胞因子/趨化因子結(jié)果顯示于圖10。序列表<110>kandimalla,ekambarwang,daqingnowak,ireneuszagrawal,sudhir<120>調(diào)控基于toll-樣受體的免疫應(yīng)答的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸(iro)化合物immuneregulatoryoligonucleotide(iro)compoundstomodulatetoll-likereceptorbasedimmuneresponse<130>ide10639p000361pc<140>pct/us11/61412<141>2011-11-18<160>69<170>patentin版本3.5<210>1<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>1ugucgttct9<210>2<211>8<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>2ugucgttc8<210>3<211>7<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>3ugucgtt7<210>4<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(2)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>7-去氮-dg<400>4gucgttctt9<210>5<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>arag<400>5ugucgttct9<210>6<211>8<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>arag<400>6ugucgttc8<210>7<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(2)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>7tgucgttct9<210>8<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(5)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>7-去氮-dg<400>8cttgucgttct11<210>9<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(3)..(4)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(6)..(6)<223>7-去氮-dg<400>9ttgucgttc9<210>10<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(5)..(6)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(8)..(8)<223>7-去氮-dg<400>10ctttgucgttc11<210>11<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(2)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>11tgucgttca9<210>12<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(5)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>7-去氮-dg<400>12tctgacgttct11<210>13<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(5)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>arag<400>13tctgacgttct11<210>14<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(3)..(4)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(6)..(6)<223>7-去氮-dg<400>14ttgucgtta9<210>15<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(5)..(6)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(8)..(8)<223>7-去氮-dg<400>15ctctgucgtta11<210>16<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>5-me-dc<400>16tgtcgttct9<210>17<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>2'-o-me<400>17tgtcgttct9<210>18<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>2'-o-me<400>18tgtcgttct9<210>19<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>19ugucgacat9<210>20<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>20ugacgttct9<210>21<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>5-me-dc<400>21ugucgttct9<210>22<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-(2-甲氧基乙基)<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>5-me-dc<400>22tgtcgttct9<210>23<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>2'-o-me-5-me-c<400>23ugucgttct9<210>24<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-(2-甲氧基乙基)<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>2'-o-me-5-me-c<400>24tgtcgttct9<210>25<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>arag<400>25ugacgttct9<210>26<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(5)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>7-去氮-dg<400>26tctgucgttct11<210>27<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(5)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>arag<400>27tctgucgttct11<210>28<211>7<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>arag<400>28ugucgtt7<210>29<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(2)..(4)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(6)..(6)<223>7-去氮-dg<400>29tugucgttc9<210>30<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(3)..(5)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>7-去氮-dg<400>30ctugucgtt9<210>31<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(1)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(3)..(3)<223>7-去氮-dg<400>31ucgttcttc9<210>32<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(7)..(8)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(9)..(9)<223>5-me-dc<400>32ctatctgacgttctctgt18<210>33<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(7)..(9)<223>2'-o-me<400>33ctatctgacgttctctgt18<210>34<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(7)..(8)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(9)..(9)<223>2'-o-me-5-me-c<400>34ctatctgacgttctctgt18<210>35<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(7)..(8)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(10)..(10)<223>2'-o-me<400>35ctatctgacgttctctgt18<210>36<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(7)..(8)<223>2'-o-(2-甲氧基乙基)<400>36ctatctgacgttctctgt18<210>37<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(7)..(8)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(9)..(9)<223>5-me-dc<400>37ctatctgucgttctctgt18<210>38<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(7)..(9)<223>2'-o-me<400>38ctatctgucgttctctgt18<210>39<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(7)..(8)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(9)..(9)<223>2'-o-me-5-me-c<400>39ctatctgucgttctctgt18<210>40<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(7)..(8)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(10)..(10)<223>2'-o-me<400>40ctatctgucgttctctgt18<210>41<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(5)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(6)..(6)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>7-去氮-dg<400>41cttgucgttct11<210>42<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(7)..(8)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(9)..(9)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(10)..(10)<223>7-去氮-dg<220><221>修飾堿基<222>(17)..(18)<223>2'-o-me<400>42ctatctgucgttctctgu18<210>43<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(2)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>43tgucgttct9<210>44<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(5)..(6)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(8)..(8)<223>7-去氮-dg<400>44ctttgucgttc11<210>45<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(2)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(3)..(3)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>7-去氮-dg<400>45gucgttctt9<210>46<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(2)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>46tgucgttca9<210>47<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(5)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(6)..(6)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>arag<400>47cttgucgttct11<210>48<211>10<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(5)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(6)..(6)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>7-去氮-dg<400>48cttgucgttc10<210>49<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(3)..(4)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(6)..(6)<223>7-去氮-dg<400>49ctgucgttctt11<210>50<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>50ugucgttct9<210>51<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>arag<400>51ugucgttct9<210>52<211>8<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>52ugucgttc8<210>53<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(7)..(8)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(9)..(9)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(10)..(10)<223>7-去氮-dg<400>53ctatctgucgttctctgt18<210>54<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(8)..(8)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(9)..(9)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(10)..(10)<223>7-去氮-dg<400>54ctatctgucgttctctgt18<210>55<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(2)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>55tgacgttct9<210>56<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(5)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(6)..(6)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>7-去氮-dg<400>56cttgacgttct11<210>57<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(5)..(6)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(8)..(8)<223>7-去氮-dg<400>57ctttgacgttc11<210>58<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(2)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(3)..(3)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>7-去氮-dg<400>58gacgttctt9<210>59<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(2)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>59tgacgttca9<210>60<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(5)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(6)..(6)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>arag<400>60cttgacgttct11<210>61<211>10<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(5)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(6)..(6)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(7)..(7)<223>7-去氮-dg<400>61cttgacgttc10<210>62<211>11<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(3)..(4)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(6)..(6)<223>7-去氮-dg<400>62ctgacgttctt11<210>63<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>63ugacgttct9<210>64<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>arag<400>64ugacgttct9<210>65<211>8<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(1)..(3)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(5)..(5)<223>7-去氮-dg<400>65ugacgttc8<210>66<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(7)..(8)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(9)..(9)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(10)..(10)<223>7-去氮-dg<400>66ctatctgacgttctctgt18<210>67<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(8)..(8)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(9)..(9)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(10)..(10)<223>7-去氮-dg<400>67ctatctgacgttctctgt18<210>68<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(7)..(8)<223>2'-o-me<220><221>修飾堿基<222>(9)..(9)<223>5-me-dc<220><221>修飾堿基<222>(10)..(10)<223>7-去氮-dg<220><221>修飾堿基<222>(17)..(18)<223>2'-o-me<400>68ctatctgacgttctctgu18<210>69<211>9<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸<220><221>修飾堿基<222>(4)..(4)<223>2'-o-me-5-me-c<400>69tgtcgttct9當(dāng)前第1頁12