本發(fā)明涉及果糖-1,6-二磷酸酶抑制劑領(lǐng)域，具體涉及含硝基乙烯基的酯類化合物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：如今糖尿病已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織等機(jī)構(gòu)公認(rèn)為一類世界范圍內(nèi)的疾病，將是未來30年內(nèi)導(dǎo)致死亡或喪失生活能力的重要疾病之一。人體肝臟是重要的內(nèi)源性葡萄糖主要產(chǎn)生場所，已有的研究表明肝臟內(nèi)源性葡萄糖產(chǎn)生是造成糖尿病病人血糖升高、特別是空腹血糖升高的主要原因。肝臟產(chǎn)生葡萄糖有兩種途徑：一種是內(nèi)源性合成葡萄糖，即糖異生作用；另一種是肝糖原分解。抑制調(diào)控糖異生途徑，減少內(nèi)源性葡萄糖的生成，成為開發(fā)新作用機(jī)制降血糖藥物的重要新策略。人體肝臟果糖-1,6-二磷酸酶(FBPase)是糖異生的一個關(guān)鍵酶，其調(diào)控的催化反應(yīng)是內(nèi)源性葡萄糖生成的控速步驟之一，抑制FBPase的活性可以減少內(nèi)源性葡萄糖的生成，降低血糖水平。另外FBPase催化反應(yīng)位于糖異生途徑的中部，抑制FBPase不但沒有抑制磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的不良反應(yīng)，而且還可抑制甘油生成葡萄糖，與抑制葡萄糖-6-磷酸酶相比，抑制FBPase不會增加低血糖的風(fēng)險。因此，F(xiàn)BPase可作為降血糖藥物非常有潛力的靶點(diǎn)，目前仍然對以FBPase為靶點(diǎn)的抑制劑存在較大的需求。此外，糖尿病真正可怕的并不是它的高血糖，而是體內(nèi)長時間高血糖所帶來的一系列毀滅性的并發(fā)癥，如動脈粥樣硬化所引起的心腦血管疾病、脂質(zhì)沉積所引起的高血脂疾病等。糖尿病患者心血管疾病發(fā)生率是普通人發(fā)病率的2-4倍。而現(xiàn)有技術(shù)鮮有既可以用于糖尿病的治療或預(yù)防同時又可以治療或預(yù)防因糖尿病引起的血栓、高血脂并發(fā)癥的藥物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種以FBPase為靶點(diǎn)的、能夠抑制FBPase的含硝基乙烯基的酯類化合物及其制備方法和應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種含硝基乙烯基的酯類化合物，所述酯類化合物為式(1)所示的化合物：其中，R1-R5中至少有一個為其余的基團(tuán)各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-C6的烷基、C1-C6的烷氧基、-NO2、-COOH、-CN、-NR2、被取代基取代的C1-C6的烷基和被取代基取代的C1-C6的烷氧基，R選自被取代基取代的或未取代的C1-C6的烷基，所述取代基各自獨(dú)立地選自鹵素、-COOH和-NO2中的一種或多種；R6選自H、鹵素、C1-C6的烷基和C2-C8的羧酸酯基。本發(fā)明還提供了上述含硝基乙烯基的酯類化合物的制備方法，該方法包括：(1)在堿金屬鹽和第一有機(jī)溶劑存在下，將式(1’)所示的苯酚類化合物與2-鹵代-2-甲基丙酸乙酯進(jìn)行取代反應(yīng)，得到式(1”)所示的化合物；其中，R1'-R5'中至少有一個為-CHO，其余的基團(tuán)各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-C6的烷基、C1-C6的烷氧基、-NO2、-COOH、-CN、-NR2、被取代基取代的C1-C6的烷基和被取代基取代的C1-C6的烷氧基，R選自被取代基取代的或未取代的C1-C6的烷基，所述取代基各自獨(dú)立地選自鹵素、-COOH和-NO2中的一種或多種；(2)在有機(jī)銨鹽和第二有機(jī)溶劑存在下，將式(1”)所示的化合物與式R6CH2-NO2所示的化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到式(1)所示的化合物。本發(fā)明還提供了一種含硝基乙烯基的酯類化合物，所述酯類化合物為式(2)所示的化合物：其中，R6選自H、鹵素、C1-C6的烷基和C2-C8的羧酸酯基。本發(fā)明還提供了制備上述含硝基乙烯基的酯類化合物的方法，該方法包括：(a)在有機(jī)胺和催化劑存在下，在有機(jī)溶劑中，將式(2’)所示的化合物與式R6CH2-NO2所示的化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到式(2”)所示的化合物；(b)在酸催化下，將式(2”)所示的化合物與乙酸酐進(jìn)行酯交換反應(yīng)，得到式(2)所示的化合物；本發(fā)明還提供了上述含硝基乙烯基的酯類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抑制果糖-1,6-二磷酸酶的藥物上的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了上述含硝基乙烯基的酯類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療或預(yù)防糖異生代謝類疾病或者血栓類疾病的藥物上的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了上述含硝基乙烯基的酯類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抑制肝細(xì)胞釋放葡萄糖的藥物或者制備抑制血小板聚集的藥物上的應(yīng)用。本發(fā)明提供的含硝基乙烯基的酯類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，對人體肝臟果糖-1,6-二磷酸酶具有非常高的抑制作用，在治療或預(yù)防糖異生代謝類疾病上具有潛在的藥用價值。本發(fā)明的發(fā)明人還意外地發(fā)現(xiàn)，上述含硝基乙烯基的酯類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽具有制備治療或預(yù)防血栓類疾病的活性，特別是與血小板聚集有關(guān)的血栓類疾病的治療或預(yù)防的活性。本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的具體實(shí)施方式部分予以詳細(xì)說明。具體實(shí)施方式以下對本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。本發(fā)明提供了一種含硝基乙烯基的酯類化合物，所述酯類化合物為式(1)所示的化合物：其中，R1-R5中至少有一個為其余的基團(tuán)各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-C6的烷基、C1-C6的烷氧基、-NO2、-COOH、-CN、-NR2、被取代基取代的C1-C6的烷基和被取代基取代的C1-C6的烷氧基，R選自被取代基取代的或未取代的C1-C6的烷基，所述取代基各自獨(dú)立地選自鹵素、-COOH和-NO2中的一種或多種；R6選自H、鹵素、C1-C6的烷基和C2-C8的羧酸酯基。根據(jù)本發(fā)明，其中，所述鹵素例如可以選自氟、氯、溴、碘等。C1-C6的烷基例如可以選自甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、-(CH2)2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-(CH2)2-CH3、正己基、-(CH2)3-CH(CH3)2、-CH(CH3)-(CH2)3-CH3。C1-C6的烷氧基例如可以選自甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、-O-(CH2)2-CH(CH3)2、-O-CH(CH3)-(CH2)2-CH3、正己氧基、-O-(CH2)3-CH(CH3)2、-O-CH(CH3)-(CH2)3-CH3。-NR2例如可以選自-N(CH3)2、-N(CH2CH3)2、-N(CH2CH2CH3)2。被取代基取代的C1-C6的烷基例如可以選自-CF3、-CCl3、-CHF2、-CHCl2、-CH2Cl、-CH2-CF3。被取代基取代的C1-C4的烷氧基例如可以選自-O-CF3、-O-CCl3、-O-CHF2、-O-CHCl2、-O-CH2Cl、-O-CH2-CF3。C2-C6的羧酸酯基例如可以選自-C(O)O-CH3、-C(O)O-CH2CH3、-C(O)O-(CH2)2-CH3。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選情況下，式(1)中，R1-R5中除了為以外的其余的基團(tuán)各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-C4的烷基、C1-C4的烷氧基、-NO2、-COOH、-CN、-NR2、被取代基取代的C1-C4的烷基和被取代基取代的C1-C4的烷氧基，R選自被取代基取代的或未取代的C1-C4的烷基，所述取代基各自獨(dú)立地選自鹵素、-COOH和-NO2中的一種或多種；R6選自H、鹵素、C1-C4的烷基和C2-C6的羧酸酯基。更優(yōu)選地，式(1)中，R1-R5中除了為以外的其余的基團(tuán)各自獨(dú)立地選自H、F、Cl、Br、-NO2、-CN、甲基、乙基、、丙基、異丙基、甲氧基、乙氧基、-NO2、-COOH、-CN、-CF3、-CCl3、-CHF2、-CHCl2、-O-CF3、-O-CCl3、-O-CHF2和-O-CHCl2；R6選自H、鹵素、甲基、乙基和-COOCH3；其中，選自本文中，基團(tuán)上的虛線表示該基團(tuán)的連接鍵，指明了該基團(tuán)的連接位點(diǎn)。其中，R1-R5中至少有一個為優(yōu)選R1-R5中有一個為優(yōu)選有兩個為根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選情況下，所述酯類化合物選自以下式所述的化合物：在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述酯類化合物選自上述式(1-1)至式(1-6)以及式(1-11)至式(1-13)中所示的化合物中的一種或多種。在這種情況下，所述酯類化合物具有更高的果糖-1,6-二磷酸酶的抑制性，在治療或預(yù)防糖異生代謝類疾病上具有更為突出的要用價值，最為優(yōu)選地，所述酯類化合物選自上述式(1-1)至式(1-6)所示的化合物中的一種或多種。根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選的實(shí)施方式，所述酯類化合物選自以下式所述的化合物：本發(fā)明還提供了制備上述酯類化合物的方法，該方法包括：1)在堿金屬鹽和第一有機(jī)溶劑存在下，將式(1’)所示的苯酚類化合物與2-鹵代-2-甲基丙酸乙酯進(jìn)行取代反應(yīng)，得到式(1”)所示的化合物；其中，R1'-R5'中至少有一個為-CHO，其余的基團(tuán)各自獨(dú)立地選自H、鹵素、C1-C6的烷基、C1-C6的烷氧基、-NO2、-COOH、-CN、-NR2、被取代基取代的C1-C6的烷基和被取代基取代的C1-C6的烷氧基，R選自被取代基取代的或未取代的C1-C6的烷基，所述取代基各自獨(dú)立地選自鹵素、-COOH和-NO2中的一種或多種；(2)在有機(jī)銨鹽和第二有機(jī)溶劑存在下，將式(1”)所示的化合物與式R6CH2-NO2所示的化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到式(1)所示的化合物。根據(jù)本發(fā)明，上述方法能夠制得前文描述的式(1)所示的化合物，為此，這里的取代基R1'-R5'，可以根據(jù)前文中描述的式(1)所示的化合物的取代基R1-R5進(jìn)行適當(dāng)?shù)剡x擇，對于具體基團(tuán)的描述可以參考上文中的描述，在此不再贅述。需要注意的是，式(1’)所示的化合物的R1'-R5'中有一個為-CHO，該甲?；怯糜谥频檬?1)所示的化合物的R1-R5中有一個為的基團(tuán)的，因此可以理解為，除了這一處不同，代基R1'-R5'和R1-R5剩余的苯環(huán)上的取代基可以對應(yīng)地進(jìn)行選擇，但是該方法并不限制于此。其中，R1'-R5'中至少有一個為-CHO，優(yōu)選R1'-R5'中有一個為-CHO，優(yōu)選R1'-R5'中有兩個為-CHO。根據(jù)本發(fā)明，該方法中的步驟(1)將式(1’)所示的苯酚類化合物與2-鹵代-2-甲基丙酸乙酯進(jìn)行取代反應(yīng)，主要是使得2-鹵代-2-甲基丙酸乙酯中的鹵素與式(1’)所示的苯酚類化合物的酚羥基上的氫進(jìn)行脫去，剩余的基團(tuán)進(jìn)行取代連接，從而制得式(1”)所示的化合物。其中，式(1”)所示的化合物的具體實(shí)例例如可以為以下式所示的化合物：其中，所述2-鹵代-2-甲基丙酸乙酯例如可以為2-氟-2-甲基丙酸乙酯、2-氯-2-甲基丙酸乙酯、2-溴-2-甲基丙酸乙酯和2-碘-2-甲基丙酸乙酯中的一種或多種，優(yōu)選為2-溴-2-甲基丙酸乙酯。根據(jù)本發(fā)明，為了能夠提高式(1”)所示的化合物的產(chǎn)率，優(yōu)選情況下，式(1’)所示的苯酚類化合物與2-鹵代-2-甲基丙酸乙酯的用量摩爾比為1：2-4。根據(jù)本發(fā)明，步驟(1)所采用的堿金屬鹽主要為強(qiáng)堿弱酸鹽，以為反應(yīng)體系提供弱堿性，所述堿金屬鹽優(yōu)選為亞硫酸鉀、磷酸鉀、乙酸鉀、碳酸鉀和硫化鈉中一種或多種。對于所述堿金屬鹽的用量并無特別的限定，只要能能夠發(fā)揮上述作用即可，優(yōu)選情況下，式(1’)所示的苯酚類化合物與堿金屬鹽的用量摩爾比為1：2-3。根據(jù)本發(fā)明，對于所述第一有機(jī)溶劑并無特別的限定，只要能夠溶解反應(yīng)物且不會帶來較多副反應(yīng)即可，優(yōu)選情況下，所述第一有機(jī)溶劑為N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、丙酮、四氫呋喃和乙腈中一種或多種。對于所述第一有機(jī)溶劑的用量并無特別的限定，只要能夠適合于反應(yīng)的進(jìn)行即可，例如所述第一有機(jī)溶劑的用量使得式(1’)所示的苯酚類化合物的濃度為0.1-0.5mmol/mL。根據(jù)本發(fā)明，對步驟(1)的加料順序并無特別的限定，例如可以是將所有反應(yīng)物包括堿金屬鹽和第一有機(jī)溶劑進(jìn)行混合，優(yōu)選先將所述堿金屬鹽、第一有機(jī)溶劑和式(1’)所示的苯酚類化合物進(jìn)行混合，再加入所述2-鹵代-2-甲基丙酸乙酯。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選情況下，步驟(1)中，所述取代反應(yīng)的條件包括：溫度為80-110℃，時間為6-12h。優(yōu)選采用加熱回流的方式進(jìn)行該反應(yīng)。根據(jù)本發(fā)明，為了能夠從步驟(1)中所得的反應(yīng)產(chǎn)物中提取出式(1”)所示的化合物，該方法還可以包括：將步驟(1)所得反應(yīng)液進(jìn)行固液分離(例如抽濾的方式)，將所得的液相的溶劑除去(例如可以通過減壓蒸餾的方式除去)，并加入水和乙酸乙酯進(jìn)行萃取(1:1-2體積比)，該萃取可以進(jìn)行多次(例如2-4次)，合并有機(jī)相，并用飽和食鹽水進(jìn)行洗滌，將洗滌后的有機(jī)相采用干燥劑(例如可以采用無水硫酸鈉)進(jìn)行干燥，然后采用硅膠柱層析純化的方式來制得較為純凈的式(1”)所示的化合物。根據(jù)本發(fā)明，上述方法的步驟(2)在有機(jī)銨鹽和第二有機(jī)溶劑存在下，將式(1”)所示的化合物與式R6CH2-NO2所示的化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)，主要使得式(1”)所示的化合物中的-CHO基與R6CH2-NO2所示的化合物中的與硝基連接的亞甲基進(jìn)行類似于羥醛縮合得到碳碳雙鍵的縮合反應(yīng)，以使得苯環(huán)上形成基團(tuán)由此便可獲得式(1)所示的化合物。其中，R6CH2-NO2所示的化合物中的基團(tuán)R6可以根據(jù)上文中所描述的式(1)所示的化合物中的基團(tuán)中的R6進(jìn)行選擇，但是本發(fā)明并無限于此。例如，當(dāng)基團(tuán)所需的R6為氯時，也可以采用BrCH2-NO2作為這里的R6CH2-NO2所示的化合物，但是在得到溴代的基團(tuán)后在通過適當(dāng)?shù)姆绞饺〈鸀槁燃纯?，本領(lǐng)域技術(shù)人員對此應(yīng)當(dāng)非常理解。根據(jù)本發(fā)明，式R6CH2-NO2所示的化合物例如可以為硝基甲烷、BrCH2-NO2、FCH2-NO2、ClCH2-NO2、CH3CH2-NO2、CH3CH2-CH2-NO2、CH3OOC-CH2-NO2等中的一種或多種。所述式(1”)所示的化合物與式R6CH2-NO2所示的化合物的用量摩爾比優(yōu)選為1：4-8，采用該摩爾比可以使得式(1”)所示的化合物的產(chǎn)率更高。根據(jù)本發(fā)明，步驟(2)中，所采用的有機(jī)銨鹽具有催化反應(yīng)進(jìn)行的作用，所述有機(jī)銨鹽優(yōu)選為甲酸銨、檸檬酸銨、三氟乙酸銨、乙酸銨和草酸銨中一種或多種。對于所述有機(jī)銨鹽的用量并無特別的限定，只要能能夠發(fā)揮上述催化作用即可，優(yōu)選情況下，所述式(1”)所示的化合物與有機(jī)銨鹽的用量摩爾比為1：2-6。根據(jù)本發(fā)明，所述第二溶劑除了具有能夠溶解反應(yīng)物的性質(zhì)外，還能夠提供酸性環(huán)境，優(yōu)選情況下，所述第二有機(jī)溶劑為乙酸。對于所述第二有機(jī)溶劑的用量并無特別的限定，只要能夠適合于反應(yīng)的進(jìn)行即可，例如所述第二有機(jī)溶劑的用量使得式(1”)所示的化合物的濃度為0.1-0.5mmol/mL。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選情況下，步驟(2)中，所述縮合反應(yīng)的條件包括：溫度為100-120℃，時間為8-12h。優(yōu)選采用加熱回流的方式進(jìn)行該反應(yīng)。根據(jù)本發(fā)明，為了能夠從步驟(2)中所得的反應(yīng)產(chǎn)物中提取出式(1)所示的化合物，該方法還可以包括：將步驟(2)所得反應(yīng)液進(jìn)行固液分離(例如抽濾的方式)，將所得的液相的溶劑除去(例如可以通過減壓蒸餾的方式除去)，并加入水和乙酸乙酯進(jìn)行萃取(1:1-2體積比)，該萃取可以進(jìn)行多次(例如2-4次)，合并有機(jī)相，并用飽和食鹽水進(jìn)行洗滌，將洗滌后的有機(jī)相采用干燥劑(例如可以采用無水硫酸鈉)進(jìn)行干燥，然后采用硅膠柱層析純化的方式來制得較為純凈的式(1)所示的化合物。本發(fā)明還提供了一種含硝基乙烯基的酯類化合物，所述酯類化合物為式(2)所示的化合物：其中，R6選自H、鹵素、C1-C6的烷基和C2-C8的羧酸酯基。根據(jù)本發(fā)明，上述基團(tuán)R6如上文中所描述的這里不再贅述。優(yōu)選情況下，R6選自H、鹵素、甲基和乙基。更優(yōu)選地，所述酯類化合物選自以下式所述的化合物：本發(fā)明還提供了一種制備上述式(2)所示的含硝基乙烯基的酯類化合物的方法，該方法包括：(a)在有機(jī)胺和催化劑存在下，在有機(jī)溶劑中，將式(2’)所示的化合物與式R6CH2-NO2所示的化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到式(2”)所示的化合物；(b)在酸催化下，將式(2”)所示的化合物與乙酸酐進(jìn)行酯交換反應(yīng)，得到式(2)所示的化合物；根據(jù)本發(fā)明，上述方法的步驟(a)在有機(jī)胺和催化劑存在下，將式(2’)所示的化合物與式R6CH2-NO2所示的化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)，主要使得式(2’)所示的化合物中的-CHO基與R6CH2-NO2所示的化合物中的與硝基連接的亞甲基進(jìn)行類似于羥醛縮合得到碳碳雙鍵的縮合反應(yīng)，以使得苯環(huán)上形成基團(tuán)以制得式(2”)所示的化合物。其中，式(2”)所示的化合物的具體實(shí)例例如可以為以下式所示的化合物：其中，R6CH2-NO2所示的化合物如上文中所介紹的，在此不再贅述。優(yōu)選地，步驟(a)中，式(2’)所示的化合物與式R6CH2-NO2所示的化合物的用量摩爾比為1：1.5-6。值得一提的是，在采用BrCH2-NO2作為R6CH2-NO2所示的化合物進(jìn)行反應(yīng)時，可以在采用有機(jī)胺鹽酸鹽的情況下，將可制得中R6為氯取代的式(2”)所示的化合物。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選地，步驟(a)中，所述有機(jī)胺選自二甲胺鹽酸鹽、二乙胺鹽酸鹽和三乙胺鹽酸鹽中的一種或多種。優(yōu)選地，式(2’)所示的化合物與有機(jī)胺的用量摩爾比為1：8-12。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選地，所述催化劑為氟化鉀、氟化鈉和氟化銫中的一種或多種。優(yōu)選地，式(2’)所示的化合物與催化劑的用量摩爾比為1：0.1-0.2。根據(jù)本發(fā)明，對步驟(a)中的有機(jī)溶劑并無特別的限定，只要該溶劑可以溶解反應(yīng)物且不會帶來較多副反應(yīng)即可，優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為甲苯、二甲苯和硝基苯中的一種或多種。對于所述有機(jī)溶劑的用量并無特別的限定，只要能夠適于該反應(yīng)的進(jìn)行即可，例如，所述有機(jī)溶劑的用量使得式(2’)所示的化合物的濃度為0.1-0.3mmol/mL。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選情況下，步驟(a)中，縮合反應(yīng)的條件包括：溫度為110-160℃，時間為3-12h。更優(yōu)選地，步驟(a)中，縮合反應(yīng)的條件包括：溫度為120-140℃，時間為4-9h。根據(jù)本發(fā)明，步驟(b)在酸催化下，將式(2”)所示的化合物與乙酸酐進(jìn)行酯交換反應(yīng)，可以使得式(2”)所示的化合物上的酚羥基被乙酸酐酯化，從而使得苯環(huán)上帶有式(2)所示的酯鍵。優(yōu)選地，式(2”)所示的化合物與乙酸酐的用量摩爾比為1：8-20，更優(yōu)選為1：10-15。其中，乙酸酐不僅作為反應(yīng)物，而且也作為了該酯交換反應(yīng)的溶劑。根據(jù)本發(fā)明，步驟(b)中，所述酸催化所采用的酸可以為本領(lǐng)域常規(guī)的催化酯交換反應(yīng)所采用的酸，優(yōu)選地，步驟(b)中，所述酸催化用的酸為硫酸和/或磷酸。所述酸催化所采用的酸優(yōu)選為濃酸，例如濃度達(dá)到85重量％以上的酸，例如85重量％的濃磷酸，98重量％的濃硫酸。對于該酸的用量并無特別的限定，例如相對于10mL的有機(jī)溶劑，該酸的用量為100-200mg。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選情況下，步驟(b)中，所述酯交換反應(yīng)的條件包括：溫度為10-40℃，時間為3-6h。通過這樣的酯交換反應(yīng)條件能夠更高產(chǎn)率地制得式(2)所示的化合物。根據(jù)本發(fā)明，為了能夠從步驟(b)中所得的反應(yīng)產(chǎn)物中提取出式(2)所示的化合物，該方法還可以包括：將步驟(b)所得反應(yīng)液進(jìn)行固液分離(例如抽濾的方式)，將所得的液相的溶劑除去(例如可以通過減壓蒸餾的方式除去)，并加入水和乙酸乙酯進(jìn)行萃取(1:1-2體積比)，該萃取可以進(jìn)行多次(例如2-4次)，合并有機(jī)相，并用飽和食鹽水進(jìn)行洗滌，將洗滌后的有機(jī)相采用干燥劑(例如可以采用無水硫酸鈉)進(jìn)行干燥，然后采用硅膠柱層析純化的方式來制得較為純凈的式(2)所示的化合物。本發(fā)明還提供了前述的含硝基乙烯基的酯類化合物(包括式(1)所示的化合物和式(2)所示的化合物)或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抑制果糖-1,6-二磷酸酶的藥物上的應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明所提供的式(1)所示的化合物和式(2)所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽具有果糖-1,6-二磷酸酶的抑制活性，特別適用于抑制人體肝臟的果糖-1,6-二磷酸酶，優(yōu)選地，對于抑制果糖-1,6-二磷酸酶的IC50可以達(dá)到10μM以下，更優(yōu)選為8.5μM以下，更進(jìn)一步優(yōu)選為4μM以下，更進(jìn)一步優(yōu)選為2.5μM以下，更進(jìn)一步優(yōu)選為2μM以下，更進(jìn)一步優(yōu)選為1μM以下。本發(fā)明還提供了前述含硝基乙烯基的酯類化合物(包括式(1)所示的化合物和式(2)所示的化合物)或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療或預(yù)防糖異生代謝類疾病或者血栓類疾病的藥物上的應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明，因?yàn)楸景l(fā)明所述的含硝基乙烯基的酯類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽具有較好的果糖-1,6-二磷酸酶抑制活性，因此可以用作治療或預(yù)防糖異生代謝類疾病的藥物。其中，所述糖異生代謝類疾病優(yōu)選包括但不限于糖尿病、肥胖、高血脂或非酒精性脂肪肝。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的發(fā)明人還意外地發(fā)現(xiàn)，上述含硝基乙烯基的酯類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽具有制備治療或預(yù)防血栓類疾病的活性，特別是與血小板聚集有關(guān)的血栓類疾病的治療或預(yù)防的活性。所述血栓類疾病優(yōu)選包括但不限于缺血性心腦血管疾病、動脈粥樣硬化、心肌梗塞、心臟瓣膜置換術(shù)、冠狀動脈搭橋術(shù)或者臟器移植術(shù)后排異反應(yīng)而引起的動脈血栓。本發(fā)明還提供了上述含硝基乙烯基的酯類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抑制肝細(xì)胞釋放葡萄糖的藥物或者制備抑制血小板聚集的藥物上的應(yīng)用。以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的范圍并不僅限于以下實(shí)施例。以下實(shí)施例中，式(1”)所示的化合物的產(chǎn)率是以式(1”)所示的化合物的總物質(zhì)的量與所采用的苯酚原料的物質(zhì)的量的百分比。式(1)所示的酯類化合物的產(chǎn)率是式(1)所示的酯類化合物的總物質(zhì)的量與所采用的式(1”)所示的化合物的物質(zhì)的量的百分比。式(2”)所示的化合物的產(chǎn)率是以式(2”)所示的化合物的總物質(zhì)的量與所采用的水楊酸類化合物原料的物質(zhì)的量的百分比。式(2)所示的酯類化合物的產(chǎn)率是式(2)所示的酯類化合物的總物質(zhì)的量與所采用的式(2”)所示的化合物的物質(zhì)的量的百分比。實(shí)施例1本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-1)所示的酯類化合物的制備。(1)將0.701g(5mmol)4-氟-3-甲酰苯酚、10mmol碳酸鉀和25mL乙腈進(jìn)行混合，再加入1.5mL(約10mmol)2-溴-2-甲基丙酸乙酯，而后于80℃下加熱回流6h；而后將反應(yīng)液冷卻至室溫(約25℃)，抽濾并洗滌濾餅。收集濾液，并減壓蒸餾除去濾液的溶劑。加入20mL水和乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有機(jī)相，并采用20mL飽和食鹽水洗滌，將有機(jī)相采用無水硫酸鈉干燥。將干燥后的有機(jī)相濃縮，所得的濃縮液經(jīng)硅膠柱層析(洗脫液為體積比1：4的乙酸乙酯比石油醚的混合液)純化可得式(1”-1)所示的化合物(4mmol，產(chǎn)率為80％)。(2)將0.762g(3mmol)的式(1”-1)所示的化合物和6mmol乙酸銨溶于10mL的乙酸中，再加入0.65mL(約12mmol)硝基甲烷。于110℃下加熱回流8h，將所得反應(yīng)液冷卻至室溫，并通過減壓蒸餾除去溶劑。然后加入15mL水和乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有機(jī)相，并采用20mL飽和食鹽水洗滌，將洗滌后的有機(jī)相采用無水硫酸鈉干燥。將干燥后的有機(jī)相進(jìn)行濃縮，所得濃縮液經(jīng)硅膠柱層析(洗脫液為體積比1：4的乙酸乙酯比石油醚的混合液)純化制得式(1-1)所示的酯類化合物(2.3mmol，產(chǎn)率為77％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.96(d,J＝13.8Hz,1H),7.67(d,J＝13.8Hz,1H),7.06(t,J＝9.5Hz,1H),7.03(dd,J＝5.6,2.9Hz,1H),6.98(dt,J＝8.4,3.5Hz,1H),4.25(q,J＝7.1Hz,2H),1.59(s,6H),1.28(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ173.10,157.04(d,J＝242.3Hz),151.51,138.77,133.93,122.65,119.07(d,J＝23.1Hz),118.24,116.53(d,J＝23.8Hz),80.68,61.79,25.23,13.92.實(shí)施例2本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-2)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用4-氯-3-甲酰苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-2)所示的化合物(4.1mmol，產(chǎn)率為82％)。步驟(2)中，則采用式(1”-2)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，從而制得式(1-2)所示的酯類化合物(2.3mmol，產(chǎn)率為77％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ8.32(d,J＝13.7Hz,1H),7.51(d,J＝13.7Hz,1H),7.34(d,J＝8.9Hz,1H),7.11(d,J＝2.8Hz,1H),6.90(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),4.25(q,J＝7.1Hz,2H),1.62(s,6H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ173.44,154.46,138.85,134.94,131.01,128.96,128.83,123.19,118.89,79.91,61.75,25.24,14.08.實(shí)施例3本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-3)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用4-溴-3-甲酰苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-3)所示的化合物(4mmol，產(chǎn)率為80％)。步驟(2)中，則采用式(1”-3)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，從而制得式(1-3)所示的酯類化合物(2.4mmol，產(chǎn)率為80％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ8.31(d,J＝13.6Hz,1H),7.52(d,J＝8.9Hz,1H),7.46(d,J＝13.6Hz,1H),7.11(d,J＝3.0Hz,1H),6.82(dd,J＝8.8,2.9Hz,1H),4.25(q,J＝7.1Hz,2H),1.62(s,6H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ173.42,155.11,138.87,137.38,134.20,130.85,123.22,118.92,118.27,79.86,61.77,25.25,14.08.實(shí)施例4本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-4)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用6-氯-3-甲酰苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-4)所示的化合物(3.9mmol，產(chǎn)率為78％)。步驟(2)中，則采用式(1”-4)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，從而制得式(1-4)所示的酯類化合物(2.2mmol，產(chǎn)率為73％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ:7.89(d,J＝13.7Hz,1H),7.49(d,J＝13.6Hz,1H),7.45(d,J＝8.2Hz,1H),7.17(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),7.10(d,J＝1.8Hz,1H),4.29(q,J＝7.1Hz,2H),1.65(s,6H),1.29(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ:173.41,152.21,137.86,137.34,131.23,130.85,129.18,123.58,119.87,81.39,61.76,25.02,14.06.實(shí)施例5本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-5)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用6-二氟甲氧基-3-甲酰苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-5)所示的化合物(3.9mmol，產(chǎn)率為78％)。步驟(2)中，則采用式(1”-5)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，從而制得式(1-5)所示的酯類化合物(2.4mmol，產(chǎn)率為80％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.90(d,J＝13.7Hz,1H),7.47(d,J＝13.7Hz,1H),7.24(s,2H),7.15(s,1H),6.65(t,J＝74.4Hz,1H),4.27(q,J＝7.1Hz,2H),1.64(s,6H),1.28(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ:173.12,147.59,145.82,137.74,137.22,127.97,124.28,123.05,120.72,115.87(t,JC-F＝261.2Hz),81.46,61.79,24.96,14.00.實(shí)施例6本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-6)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用3-甲酰苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-6)所示的化合物(4.1mmol，產(chǎn)率為82％)。步驟(2)中，則采用式(1”-6)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，從而制得式(1-6)所示的酯類化合物(2.3mmol，產(chǎn)率為77％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.93(d,J＝13.7Hz,1H),7.54(d,J＝13.6Hz,1H),7.32(t,J＝8.0Hz,1H),7.19(d,J＝7.6Hz,1H),7.05(s,1H),6.96(d,J＝8.2Hz,1H),4.25(q,J＝7.1Hz,2H),1.63(s,7H),1.25(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ173.67,156.05,138.73,137.26,131.11,130.03,122.78,122.14,119.34,79.45,61.58,25.26,14.02.實(shí)施例7本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-7)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用2-甲酰苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-7)所示的化合物(4.2mmol，產(chǎn)率為84％)。步驟(2)中，則采用式(1”-7)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，從而制得式(1-7)所示的酯類化合物(2.4mmol，產(chǎn)率為80％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ8.22(d,J＝13.7Hz,1H),7.84(d,J＝13.7Hz,1H),7.49(d,J＝8.8Hz,1H),7.35(t,J＝7.9Hz,1H),7.03(t,J＝7.5Hz,1H),6.75(d,J＝8.4Hz,1H),4.25(q,J＝7.1Hz,2H),1.72(s,7H),1.23(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ173.30,155.50,138.10,135.36,132.58,131.75,121.83,121.00,116.22,80.15,61.76,25.34,13.95.實(shí)施例8本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-8)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用4-氟-2-甲酰苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-8)所示的化合物(4mmol，產(chǎn)率為80％)。步驟(2)中，則采用式(1”-8)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，從而制得式(1-8)所示的酯類化合物(2.3mmol，產(chǎn)率為77％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.96(d,J＝13.8Hz,1H),7.67(d,J＝13.8Hz,1H),7.06(t,J＝9.5Hz,1H),7.03(dd,J＝5.6,2.9Hz,1H),6.98(dt,J＝8.4,3.5Hz,1H),4.25(q,J＝7.1Hz,2H),1.59(s,6H),1.28(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ173.10,157.04(d,J＝242.3Hz),151.51,138.77,133.93,122.65,119.07(d,J＝23.1Hz),118.24,116.53(d,J＝23.8Hz),80.68,61.79,25.23,13.92.實(shí)施例9本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-9)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用4-氯-2-甲酰苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-9)所示的化合物(3.9mmol，產(chǎn)率為78％)。步驟(2)中，則采用式(1”-9)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，從而制得式(1-9)所示的酯類化合物(2.4mmol，產(chǎn)率為80％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ8.18(d,J＝13.7Hz,1H),7.76(d,J＝13.7Hz,1H),7.19(d,J＝8.5Hz,1H),7.11–7.02(m,1H),6.77(dd,J＝9.1,4.4Hz,1H),4.26(q,J＝7.1Hz,2H),1.68(s,6H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,cdcl3)δ173.10,157.04(d,J＝242.3Hz),151.51,138.77,133.93,122.65,119.07(d,J＝23.1Hz),118.24,116.53(d,J＝23.8Hz),80.68,61.79,25.23,13.92.實(shí)施例10本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-10)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用4-甲酰苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-10)所示的化合物(4.1mmol，產(chǎn)率為82％)。步驟(2)中，則采用式(1”-10)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，從而制得式(1-10)所示的酯類化合物(2.2mmol，產(chǎn)率為73％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.96(d,J＝13.6Hz,1H),7.52(d,J＝13.6Hz,1H),7.50–7.42(m,2H),6.85(d,J＝8.7Hz,2H),4.24(q,J＝7.1Hz,2H),1.66(s,6H),1.23(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ173.50,159.06,138.76,135.31,130.70,123.09,118.41,79.39,61.70,25.29,14.00.實(shí)施例11本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-11)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用2-氯-4-甲酰苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-11)所示的化合物(4mmol，產(chǎn)率為80％)。步驟(2)中，則采用式(1”-11)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，從而制得式(1-11)所示的酯類化合物(2.4mmol，產(chǎn)率為80％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.89(d,J＝13.6Hz,1H),7.60(d,J＝2.2Hz,1H),7.50(d,J＝13.6Hz,1H),7.33(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),6.83(d,J＝8.6Hz,1H),4.26(q,J＝7.1Hz,2H),1.69(s,6H),1.25(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ173.14,154.62,137.39,136.32,130.78,128.56,126.53,124.20,118.02,81.00,61.81,25.16,14.01.實(shí)施例12本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-12)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用3-氯-4-甲酰苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-12)所示的化合物(4.1mmol，產(chǎn)率為82％)。步驟(2)中，則采用式(1”-12)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，從而制得式(1-12)所示的酯類化合物(2.2mmol，產(chǎn)率為73％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ8.35(d,J＝13.7Hz,1H),7.56(d,J＝13.6Hz,1H),7.50(d,J＝8.8Hz,1H),6.93(d,J＝2.6Hz,1H),6.75(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),4.26(q,J＝7.1Hz,2H),1.66(s,6H),1.25(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ173.02,159.10,137.08,136.97,134.78,129.31,121.27,119.60,116.92,79.93,61.86,25.26,14.00.實(shí)施例13本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-13)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用2-甲基-4-甲酰苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-13)所示的化合物(3.9mmol，產(chǎn)率為78％)。步驟(2)中，則采用式(1”-13)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，從而制得式(1-13)所示的酯類化合物(2.4mmol，產(chǎn)率為80％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.93(d,J＝13.6Hz,1H),7.51(d,J＝13.6Hz,1H),7.37(s,1H),7.27(d,J＝8.5Hz,1H),6.63(d,J＝8.5Hz,1H),4.24(q,J＝7.1Hz,2H),2.26(s,3H),1.66(s,6H),1.23(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ173.64,157.48,139.09,134.98,131.55,130.03,128.41,122.62,115.19,79.31,61.61,25.39,16.65,13.97.實(shí)施例14本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-27)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用3-甲酰苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-6)所示的化合物(4.1mmol，產(chǎn)率為82％)。步驟(2)中，則采用式(1”-6)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，硝基乙酸乙酯替代硝基甲烷從而制得式(1-27)所示的酯類化合物(2.2mmol，產(chǎn)率為76％)。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.15(d,J＝13.3Hz,1H),7.91(d,J＝13.3Hz,1H),7.61(d,J＝9.0Hz,1H),6.43(d,J＝9.0Hz,1H),5.84(s,1H),4.19(q,J＝7.1Hz,2H),3.36(s,4H),1.65(s,4H),1.59(s,2H),1.18(q,J＝7.2Hz,3H),1.10(t,J＝7.3Hz,6H).13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.20,157.83,152.11,136.43,134.72,134.06,132.06,107.88,106.43,98.06,88.62,79.84,61.83,44.70,25.30,14.25,12.81,12.55.實(shí)施例15本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的式(1-28)所示的酯類化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，所不同的是，步驟(1)中，采用4-(二乙氨基)水楊醛代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(1”-18)所示的化合物(3.1mmol，產(chǎn)率為82％)。步驟(2)中，則采用式(1”-18)所示的化合物代替式(1”-1)所示的化合物，硝基乙酸乙酯替代硝基甲烷從而制得式(1-28)所示的酯類化合物(2.5mmol，產(chǎn)率為81％)。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ7.31(q,J＝7.9Hz,1H),7.06(d,J＝7.8Hz,1H),6.91(s,1H),6.86(d,J＝8.6Hz,1H),4.25(p,J＝7.4Hz,4H),4.16(q,J＝7.4Hz,2H),1.54(m,5H),1.16(s,6H).13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.50,158.91,157.11,156.12,155.75,154.69,128.87,128.31,124.48,124.20,121.13,119.23,79.20,62.47,61.43,25.34,14.16.對比例1該對比例用于說明式(3)所示的化合物的制備。根據(jù)實(shí)施例1的步驟(1)的方法制備該式(3)所示的化合物，不同的是，采用對氯苯酚代替4-氟-3-甲酰苯酚，從而制得式(3)所示的化合物(4.2mmol，產(chǎn)率為84％)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ1.34(t,J＝7.1Hz,3H),1.59(s,6H),4.23(q,J＝6.6Hz,2H),6.79(d,J＝8.9Hz,2H),7.19(d,J＝8.9Hz,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ14.4,24.9,61.5,78.7,115.9,128.3,136.6,155.6,170.3.實(shí)施例14該實(shí)施例用于說明式(2-1)所示的化合物的制備。(a)將1.66g(10mmol)5-甲酰水楊酸、90mmol二甲胺鹽酸鹽、1.5mmol氟化鉀、1.8mL(19mmol)溴代硝基甲烷和40mL甲苯進(jìn)行混合，并于120℃下加熱回流6h；而后將反應(yīng)液冷卻至室溫(約25℃)，并減壓蒸餾除去濾液的溶劑。加入30mL水和乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有機(jī)相，并采用30mL飽和食鹽水洗滌，將有機(jī)相采用無水硫酸鈉干燥。將干燥后的有機(jī)相濃縮，所得的濃縮液經(jīng)硅膠柱層析(洗脫液為體積比1：4的乙酸乙酯和石油醚的混合液)純化可得式(2”-1)所示的化合物(7.2mmol，產(chǎn)率為72％)。(b)將1.22g(5mmol)式(2”-1)所示的化合物溶解于5mL(50mmol)乙酸酐中，滴加2滴85重量％的濃磷酸(約100mg)，并在室溫(約25℃)下反應(yīng)4h后，加入10mL的水，繼續(xù)反應(yīng)1h。抽濾，所得固相用水洗滌，干燥即可得到式(2-1)所示的化合物(4mmol，產(chǎn)率為80％)。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.48(s,1H),8.72(s,1H),8.56(d,J＝2.4Hz,1H),8.22(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),2.29(s,3H).測試?yán)?：人體肝臟果糖-1,6-二磷酸酶的抑制測試反應(yīng)體系為50mMTric-HClpH7.4,0.8mMMgCl2，F(xiàn)BPase11.2μg/ml，0.4mMFBP(果糖-1,6-二磷酸)，將上述實(shí)施例制備的含硝基乙烯基的酯類化合物以及對比例制備的化合物和阿司匹林(為購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)分別配置為合適的濃度梯度的抑制劑溶液，然后在37℃酶解5min，以1M高氯酸終止酶催反應(yīng)，采用終點(diǎn)法測定無機(jī)磷酸的含量來測定肝臟果糖-1,6-二磷酸酶的活性，進(jìn)而求得各抑制劑的IC50，結(jié)果如下表1所示。表1化合物IC50(μM)式(1-1)0.87式(1-2)0.93式(1-3)0.79式(1-4)0.83式(1-5)0.95式(1-6)0.99式(1-7)2.68式(1-8)6.99式(1-9)8.21式(1-10)3.68式(1-11)1.88式(1-12)1.98式(1-13)2.18式(1-27)97.3式(1-28)65.2式(3)24.7％(50μM)式(2-1)8.1阿司匹林20.7％(50μM)注：式(3)中的24.7％(50μM)表示，50μM式(3)的抑制率僅能達(dá)到24.7％，對阿司匹林以同樣的方式進(jìn)行理解。通過上表1的數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明提供的含硝基乙烯基的酯類化合物具有較高的果糖-1,6-二磷酸酶抑制性，抑制果糖-1,6-二磷酸酶的IC50可以達(dá)到10μM以下，更優(yōu)選為8.5μM以下，更進(jìn)一步優(yōu)選為4μM以下，更進(jìn)一步優(yōu)選為2.5μM以下，更進(jìn)一步優(yōu)選為2μM以下，更進(jìn)一步優(yōu)選為1μM以下。測試?yán)?：對大鼠肝細(xì)胞葡萄糖釋放的影響從禁食過夜的SD大鼠中分離制備原代肝細(xì)胞，將肝細(xì)胞使用含有1g/L葡萄糖和10重量％FBS的DMEM培養(yǎng)基(InvitrogenTM)重懸，在24孔板(每孔約2×105個)溫育4小時后更換新鮮培養(yǎng)基過夜培養(yǎng)。之后培養(yǎng)基換成500μL不含有葡萄糖和苯酚，含有20mM乳酸鈉、2mM丙酮酸鈉、待測化合物的DMEM培養(yǎng)基(使用濃度見下表2所示)，4小時后取50μL培養(yǎng)基(InvitrogenTM)按照制造商的使用說明用葡萄糖氧化酶試劑盒(Fudan-ZhangjiangTM)測定葡萄糖含量。以DMSO為空白對照試驗(yàn)，二甲雙胍為陽性對照試驗(yàn)，其結(jié)果如下表2所示：表2通過上表2可以看出，本發(fā)明提供的含硝基乙烯基的酯類化合物，在濃度為50μM時，就能夠獲得58％以下的釋放率，而提高濃度到100μM后，釋放率明顯下降至50％以下(特別是式(1)所示的化合物，能夠下降至15％以下)，甚至比采用更高濃度的二甲雙胍的釋放率都低，這表明，本發(fā)明提供的含硝基乙烯基的酯類化合物能較好地抑制降血糖靶酶人體肝臟果糖-1,6-二磷酸酶，對肝細(xì)胞葡萄糖釋放量也有顯著影響。測試?yán)?：影響血小板聚集的測試對健康志愿者肘部靜脈取血，以3.8重量％枸櫞酸鈉(體積比為1：9)混勻抗凝，室溫(約25℃)下以500g離心10分鐘收集富含血小板的血漿(PRP)，剩余部分以18000g離心10分鐘，制備貧血小板的血漿(PPP)。以PPP調(diào)零，取200μLPRP加入比濁管中，37℃下溫育5分鐘，分別加入1μLDMSO或1μL待測化合物儲液，結(jié)合5min，然后再加入Thrombin2nM，用血小板聚集儀檢測血小板最大聚集率，結(jié)果見表3所示。表3化合物血小板聚集抑制率(％，2μM)式(1-1)90.5式(1-3)87.3式(1-5)84.2式(1-8)85.8式(1-12)88.6式(2-1)50.9式(3)5通過上表3可以看出，本發(fā)明提供的含硝基乙烯基的酯類化合物，還能夠有效地抑制血小板聚集，在濃度為2μM下，能夠獲得50％以上的血小板聚集抑制率，特別是對于式(1)所示的化合物來說，可以獲得80％以上的抑制率，這表明，本發(fā)明提供的含硝基乙烯基的酯類化合物能較好地抑制血小板聚集，在制備治療或預(yù)防血栓類疾病的藥物的應(yīng)用上具有潛在的藥用價值。測試?yán)?：對老鼠肝細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積的影響將原代小鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)于35mm培養(yǎng)皿中，血清饑餓過夜后，更換為含有30mM葡萄糖和500nM胰島素的DMEM培養(yǎng)基。具體分組為：正常培養(yǎng)基對照組、高糖+高胰島素培養(yǎng)基組和化合物+高糖+高胰島素培養(yǎng)基組向培養(yǎng)基中加入葡萄糖和胰島素，使之濃度分別達(dá)到30mM和500nM，可以模擬體內(nèi)高血糖和高胰島素環(huán)境，誘導(dǎo)肝細(xì)胞發(fā)生脂質(zhì)沉積和IR。細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量測定方法具體為：各組細(xì)胞經(jīng)藥物處理后，吸去培養(yǎng)基，加入100μl含10％TritonX-100的PBS緩沖液，冰上放置15min，接著刮取收集樣品至離心管中，超聲30s后以4℃、14000rpm離心15min，然后測定上清中TG、TC及蛋白質(zhì)的含量，操作均按試劑盒說明書進(jìn)行。其結(jié)果如下表4、5所示。表4表5通過表4和表5的數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明的化合物具有較好的降血脂的作用，在制備治療或預(yù)防高血脂類疾病的藥物的應(yīng)用上具有潛在的藥用價值。以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。另外需要說明的是，在上述具體實(shí)施方式中所描述的各個具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進(jìn)行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對各種可能的組合方式不再另行說明。此外，本發(fā)明的各種不同的實(shí)施方式之間也可以進(jìn)行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開的內(nèi)容。當(dāng)前第1頁1 2 3