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一種a?氰基丙烯酸酯細(xì)胞毒性檢測(cè)方法與流程

文檔序號(hào):12412562閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種a-氰基丙烯酸酯細(xì)胞毒性檢測(cè)方法,其特征在于,主要包括a-氰基丙烯酸酯膠粘劑生物相容性和細(xì)胞毒性體外實(shí)驗(yàn)、a-氰基丙烯酸酯膠粘劑生物相容性和細(xì)胞毒性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以及聚丙烯補(bǔ)片應(yīng)用a-氰基丙烯酸酯膠進(jìn)行固定效果實(shí)驗(yàn),其中a-氰基丙烯酸酯膠粘劑生物相容性和細(xì)胞毒性體外實(shí)驗(yàn)主要包括以下步驟:

(1)取真皮層成纖維細(xì)胞和間皮細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)基培養(yǎng);

(2)在預(yù)定時(shí)間點(diǎn)(每月2日、4日、7日、10日、14日、21日、28日的0時(shí)、6時(shí)和24時(shí))取步驟1中的樣本進(jìn)行依次進(jìn)行洗滌、分散、再洗滌、離心;

取步驟2中的懸濁液并加入10ml的a-氰基丙烯酸酯膠和6ml 的PBS混合液后繼續(xù)播種到培養(yǎng)基上并在37°C環(huán)境的密封內(nèi)孵化5 h后進(jìn)行進(jìn)行染色處理,同時(shí)在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),并對(duì)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)并計(jì)算細(xì)胞數(shù),同時(shí)在a-氰基丙烯酸酯膠與PBS混合液混合時(shí)進(jìn)行甲醛測(cè)定;

所述的細(xì)胞毒性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)主要包括以下步驟:

(1)取新西蘭兔人為造成腹部缺陷,包括腹前壁(右和左側(cè)面)內(nèi)部和外部斜肌和橫向肌肉,腹橫筋以及腹膜壁層,并均分為觀察組以及對(duì)照組;

(2)將觀察組采用a-氰基丙烯酸酯膠粘劑處理固定,將對(duì)照組采用縫合處理;

(3)將觀察組以及對(duì)照組的在培養(yǎng)14天后制作標(biāo)本顯微鏡下觀察模型部分細(xì)胞特征并對(duì)比;

所述聚丙烯補(bǔ)片應(yīng)用a-氰基丙烯酸酯膠進(jìn)行固定效果實(shí)驗(yàn)主要包括以下步驟:

(1)將需要縫合的患者均為為兩組,一組為對(duì)照組,另一組為觀察組;

(2)將觀察組患者應(yīng)用聚丙烯補(bǔ)片和a-氰基丙烯酸酯膠進(jìn)行固定,將對(duì)照組患者應(yīng)用聚丙烯補(bǔ)片和縫合的方式進(jìn)行固定;

(3)對(duì)對(duì)照組與觀察組的患者進(jìn)行術(shù)后血液指標(biāo)(白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞)、生化指標(biāo)(AST、ALT、BUN、Cr)以及術(shù)后隨訪并發(fā)癥監(jiān)測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的a-氰基丙烯酸酯細(xì)胞毒性檢測(cè)方法,其特征在于,a-氰基丙烯酸酯膠粘劑生物相容性和細(xì)胞毒性體外實(shí)驗(yàn)中的甲醛測(cè)定主要在室溫條件下并放在封閉的環(huán)境中,在預(yù)定時(shí)間點(diǎn)將50ul樣本置于96孔板中,加入甲醛試劑進(jìn)行孵育30分鐘,同時(shí)在在535nm光照處測(cè)定甲醛的量。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的a-氰基丙烯酸酯細(xì)胞毒性檢測(cè)方法,其特征在于,a-氰基丙烯酸酯膠粘劑生物相容性和細(xì)胞毒性體外實(shí)驗(yàn)中的培養(yǎng)基包括低糖杜爾貝科培養(yǎng)基、10%的胎牛血清營(yíng)養(yǎng)液、抗生素(10000U/ml的青霉素,10000ug/ml的鏈霉素和25ug/ml的兩性霉素),且每3天更換新的培養(yǎng)液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的a-氰基丙烯酸酯細(xì)胞毒性檢測(cè)方法,其特征在于,a-氰基丙烯酸酯膠粘劑生物相容性和細(xì)胞毒性體外實(shí)驗(yàn)中樣本分離和計(jì)算主要是孵育完的待測(cè)溶液首先進(jìn)行洗滌去培養(yǎng)液后,加入胰蛋白酶進(jìn)行吹打分散,然后上離心機(jī)以1000r/min離心7分鐘,加入2ml染色液后再進(jìn)行離心,取懸濁液上流式機(jī),細(xì)胞計(jì)算采用流式細(xì)胞術(shù),最終計(jì)算出細(xì)胞水平,判定a-氰基丙烯酸酯是否具有細(xì)胞毒性。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的a-氰基丙烯酸酯細(xì)胞毒性檢測(cè)方法,其特征在于,聚丙烯補(bǔ)片應(yīng)用a-氰基丙烯酸酯膠進(jìn)行固定效果實(shí)驗(yàn)所選取患者不包括患有血液學(xué)、肝臟、腎臟疾病。

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