1.CAR修飾的NK細(xì)胞的制備方法，其特征在于，構(gòu)建成含特異結(jié)合信號(hào)淋巴細(xì)胞激活分子家族成員的嵌合抗原受體基因重組到病毒載體上并轉(zhuǎn)染NK細(xì)胞；
所述CAR基因的cDNA構(gòu)建在病毒載體中，并轉(zhuǎn)染NK細(xì)胞，再將NK細(xì)胞培養(yǎng)到第21天，獲得CAR-NK細(xì)胞；通過熒光定量PCR技術(shù)檢測，轉(zhuǎn)染了CAR病毒載體的NK細(xì)胞其表達(dá)CAR基因高于未轉(zhuǎn)染的NK細(xì)胞為50倍以上；
所獲得的CAR-NK細(xì)胞能高表達(dá)CAR基因，可特異結(jié)合表達(dá)信號(hào)淋巴細(xì)胞激活分子家族成員的腫瘤細(xì)胞，并抑制NK細(xì)胞抑制性受體表達(dá)，阻止了腫瘤細(xì)胞免疫逃避，同時(shí)激活第一信號(hào)和共刺激信號(hào)；其高表達(dá)其特異標(biāo)志物CD16，陽性率高于80％以上，激活性受體陽性率超過80％以上，而抑制性受體陽性率低于10％以下。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CAR修飾的NK細(xì)胞的制備方法，其特征在于，所述的含特異結(jié)合信號(hào)淋巴細(xì)胞激活分子家族成員的特異嵌合抗原受體基因，包括特異結(jié)合信號(hào)淋巴細(xì)胞激活分子家族成員7的單鏈抗體并串聯(lián)了兩個(gè)共刺激分子胞內(nèi)域和CD3ζ胞內(nèi)信號(hào)區(qū)的基因片段；所述兩個(gè)共刺激分子為CD28和CD137。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的CAR修飾的NK細(xì)胞的制備方法，其特征在于，所述NK細(xì)胞來源于自體靜脈血、自體骨髓、臍帶血和胎盤血等的單個(gè)核細(xì)胞。