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一種單堿基突變檢測(cè)方法與流程

文檔序號(hào):12412949閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種單堿基突變檢測(cè)方法,其包括以下步驟:

A,根據(jù)目標(biāo)基因設(shè)計(jì)捕獲探針與信號(hào)探針;

B,將與捕獲探針偶聯(lián)的磁球配置成磁球溶液,加入信號(hào)探針和待測(cè)樣本進(jìn)行核酸雜交;

C,核酸雜交結(jié)束后進(jìn)行磁分離,然后將磁球重懸于低金屬離子的溶液中;

D,再次進(jìn)行磁分離,對(duì)獲得上清液進(jìn)行檢測(cè),判斷待檢樣本中是否存在單堿基突變;

其中,所述捕獲探針與目標(biāo)基因的非突變部分完全互補(bǔ);所述信號(hào)探針與目標(biāo)基因的突變型基因完全互補(bǔ),與目標(biāo)基因的野生型基因形成單堿基錯(cuò)配;

所述信號(hào)探針的類型為熒光標(biāo)記的信號(hào)探針、富含G序列的信號(hào)探針或等溫指數(shù)擴(kuò)增引物的信號(hào)探針。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,當(dāng)所述信號(hào)探針的類型為熒光標(biāo)記的信號(hào)探針時(shí),檢測(cè)上清液中的熒光值,若熒光值超過背景噪音的6倍,則待檢樣本中存在單堿基突變;

當(dāng)所述信號(hào)探針的類型為富含G序列的信號(hào)探針時(shí),在上清液中加入氯化血紅素、H2O2和2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽進(jìn)行顯色反應(yīng),若反應(yīng)液呈現(xiàn)綠色,則待檢樣本中存在單堿基突變;

當(dāng)所述信號(hào)探針的類型為等溫指數(shù)擴(kuò)增引物的信號(hào)探針時(shí),利用上清液進(jìn)行等溫指數(shù)擴(kuò)增反應(yīng),若擴(kuò)增過程中出現(xiàn)擴(kuò)增曲線,則待檢樣本中存在單堿基突變。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述磁球溶液中的金屬離子濃度為200-400mM;和/或所述低金屬離子的溶液中的金屬離子濃度為0-10mM。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述的金屬離子為Na和/或K。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述信號(hào)探針與目標(biāo)基因互補(bǔ)的堿基個(gè)數(shù)為9-12個(gè)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述捕獲探針的長(zhǎng)度為20-25個(gè)堿基。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,在捕獲探針上標(biāo)記生物素,在磁球表面包覆親和素,通過生物素-親和素的相互作用,將捕獲探針偶聯(lián)于磁球上。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述磁球的平均直徑為2μm。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述核酸雜交的溫度為20-27℃,時(shí)間為10-20min。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述方法對(duì)單堿基突變的檢測(cè)限為0.1%。

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