本發(fā)明涉及槲皮素的衍生物及其在制藥中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

利用我國(guó)豐富的中草藥資源，分離提取活性成分，并以此為先導(dǎo)物，對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，以改善其給藥途徑，增強(qiáng)其藥理活性，降低毒副作用，是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化和創(chuàng)新新藥的重要途徑。

槲皮素具有擴(kuò)張冠狀血管、降低血脂、抗血小板聚集、抗炎、抗過(guò)敏、抗糖尿病并發(fā)癥等多種生物活性，但其脂溶性差，半衰期短，藥效低，限制了其應(yīng)用。近年來(lái)，槲皮素對(duì)腫瘤的化學(xué)預(yù)防和治療作用越來(lái)越受到人們的關(guān)注，使槲皮素及其衍生物的研究進(jìn)入了一個(gè)嶄新的階段。雖然人們對(duì)槲皮素抗癌作用機(jī)制的認(rèn)識(shí)還很不清楚，但槲皮素?zé)o論發(fā)揮何種藥理作用，都以其所具有的基本母核色原酮為基本結(jié)構(gòu)。因此，本發(fā)明以槲皮素作為先導(dǎo)化合物，對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，以期增加其藥效、改善吸收、降低毒副作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種槲皮素衍生物，其具有抗癌的作用。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述槲皮素衍生物的制備方法。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述槲皮素衍生物的用途。

以下對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。

本發(fā)明提供一種槲皮素衍生物，結(jié)構(gòu)如下式所示：

式中：Z為O和S；R選自下列取代基：H、CH₃、CH₃CO。

所述的槲皮素衍生物的具體實(shí)例包括以下結(jié)構(gòu)：

。

本發(fā)明還提供了槲皮素衍生物的制備方法，步驟包括：

式中：Z = O和S；R = CH₃、CH₃CO。

本發(fā)明的槲皮素衍生物具有抗癌活性。

有益效果：提供了一種易于通過(guò)血腦屏障，對(duì)腦瘤和中樞神經(jīng)系統(tǒng)瘤具有抑制作用的槲皮素衍生物。

通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步舉例說(shuō)明本發(fā)明，但應(yīng)注意本發(fā)明的范圍并不受這些實(shí)施例的任何限制。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

槲皮素衍生物（1）和（5）的制備

將122 mg (1.5 mmol) 的甲醛溶液，175 mg (1.5 mmol)濃氨水，302 mg (1 mmol)槲皮素和5 mL乙醇加入密閉耐壓反應(yīng)器中，加3滴鹽酸，加熱至75-80℃反應(yīng)3h,自然冷卻，析出固體，抽濾，粗品經(jīng)層析板分離（V（正丁醇）：V(水）：V(HOAc）= 4:1:1，甲醇洗脫，得中間體(a)淡黃色固體105 mg，收率31.7%。m.p.>300℃；¹H NMR（400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.74 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 6.19 (s, 1H), 3.86 (s, 2H)。

N₂保護(hù)下，將中間體(a)331mg (1.0 mmol)和130.5 mg (1.5 mmol)2-噁唑烷酮混合，加熱至120℃反應(yīng)2h,降溫至0℃，加入141.6 mg (1.2 mmol)SOCl₂，加熱至100℃反應(yīng)2h,冷卻，加入15 mL水,析出固體，過(guò)濾，粗品經(jīng)層析板分離（V（正丁醇）：V(水）：V(HOAc）= 4:1:1，甲醇洗脫，得中間體(b-1)淡黃色固體113.8 mg，收率26.1%。m.p.>300℃；¹H NMR（400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.70 (d, 1H), 7.57 (d, 1H), 6.88 (d, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.17 (s, 1H), 4.25-4.10 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.86-3.80 (m, 1H)。

N₂保護(hù)下，將中間體(b-1) 436 mg (1.0 mmol)溶于5mLDMF中，加入759 mg (5.5 mmol)K₂CO₃和781 mg (5.5 mmol)CH₃I，30-40℃反應(yīng)3h,減壓蒸除溶劑，加入50mL水洗殘?jiān)?得粗品。粗品經(jīng)柱層析分離（V（CH₂Cl₂）：V(CH₃OH）= 40:1）洗脫，得中間體(c-1)黃色固體253.5 mg，收率50.1%。m.p.>300℃；¹H NMR（400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.71 (d, 1H), 7.56 (d, 1H), 6.87 (d, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.17 (s, 1H), 4.24-4.11 (t, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.86-3.80 (m, 1H), 3.71 (s, 15H)。

將中間體(c-1) 506 mg (1.0 mmol)溶于5 mL甲酸中，冷至0℃，滴加含82.8 mg (1.2 mmol)的50%的NaNO₂水溶液，0-5℃反應(yīng)3h,加入50mL水,析晶，過(guò)濾,得粗品。粗品經(jīng)柱層析分離（V（CH₂Cl₂）：V(CH₃OH）= 60:1）洗脫，得化合物（5）黃色固體150.0mg，收率28%。m.p.>300℃；¹H NMR（400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.72 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 6.88 (d, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.17 (s, 1H), 4.25-4.12 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.87-3.81 (m, 1H), 3.70 (s, 15H)。EIS [M+Na]⁺ = 558.1。

N₂保護(hù)下，將化合物(5) 267 mg (0.5 mmol)溶于6mLCH₂Cl₂中，加入416 mg (4.0 mmol)Me₃SiCl，加熱回流6h，冷卻，用1mol·L^-1的HCl溶液調(diào)pH3-4, 過(guò)濾，層析板分離（V（正丁醇）：V(水）：V(HOAc）= 4:1:1，甲醇洗脫，得化合物（1）黃色固體200mg，收率86%。m.p.>300℃；¹H NMR（400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.73 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 6.88 (d, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.18 (s, 1H), 4.25-4.11 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.87-3.80 (m, 1H)。EIS [M+Na]⁺ = 488.0。

實(shí)施例2

槲皮素衍生物（2）和（6）的制備

用154.5 mg (1.5 mmol)2-噁唑硫酮代替實(shí)施例1中的130.5 mg (1.5 mmol)2-噁唑烷酮,其它操作與實(shí)施例1相同，得化合物（2）黃色固體190.7 mg，得化合物（6）黃色固體197.9 mg，m.p.均>300℃；化合物（2）的¹H NMR（400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.73 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 6.89 (d, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.18 (s, 1H), 4.24-4.10 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.87-3.80 (m, 1H)。EIS [M-Na]⁺ = 458.0?；衔铮?）的¹H NMR（400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.72 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 6.88 (d, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.17 (s, 1H), 4.24-4.10 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.87-3.80 (m, 1H)，3.71 (s, 15H)。EIS [M+Na]⁺= 574.0。

實(shí)施例3

槲皮素衍生物（3）的制備

用300 mg (8.1 mmol)無(wú)水NaOAc和7mL醋酐代替實(shí)施例1中的759 mg (5.5 mmol)K₂CO₃和781 mg (5.5 mmol)CH₃I，回流反應(yīng)2h，反應(yīng)畢，傾入100 mL冰水中，過(guò)濾，水洗至中性，干燥，95%乙醇重結(jié)晶，其它操作同實(shí)施例1，得到化合物（3）黃色固體230.9 mg，m.p.>300℃；¹H NMR（400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.73 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 6.89 (d, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.18 (s, 1H), 4.24-4.10 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.87-3.80 (m, 1H), 2.04 (s, 15H)。EIS [M+Na]⁺ = 698.1。

實(shí)施例4

槲皮素衍生物（4）的制備

用154.5 mg (1.5 mmol)2-噁唑硫酮代替實(shí)施例1中的130.5 mg (1.5 mmol)2-噁唑烷酮,操作同實(shí)施例1，其它操作與實(shí)施例3相同，得化合物（4）黃色固體199.2 mg，m.p.>300℃；¹H NMR（400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.74 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 6.90 (d, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.18 (s, 1H), 4.24-4.10 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.87-3.81 (m, 1H), 2.03 (s, 15H)。EIS [M+Na]⁺ = 714.0。

實(shí)施例5

槲皮素衍生物（7）的制備

N₂保護(hù)下，將675 mg (1.0 mmol)化合物(3) 溶于6mLCHCl₃中，加入156 mg (1.1 mmol)MeI 和151mg (1.1 mmol)K₂CO₃, 回流2h，然后蒸除CHCl₃，加入5 mL甲醇和5 mL10%NaOH溶液，室溫反應(yīng)1h, 用10%HCl溶液調(diào)pH3-4，蒸除甲醇，加入5 mL水，過(guò)濾，得粗品。經(jīng)層析板分離（V（正丁醇）：V(水）：V(HOAc）= 4:1:1，甲醇洗脫，得化合物（7）黃色固體282.6 mg，收率59%。m.p.>300℃；¹H NMR（400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.73 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 6.88 (d, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.18 (s, 1H), 4.25-4.11 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.87-3.80 (m, 1H), 3.70 (s, 3H)。EIS [M+Na]⁺ = 502.1。

實(shí)施例6

槲皮素衍生物（8）的制備

用277 mg (2.2 mmol)Me₂SO₄ 和303 mg (2.2 mmol)K₂CO₃代替156 mg (1.1 mmol)MeI 和151 mg (1.1 mmol)K₂CO₃,其它操作同實(shí)施例5，得化合物（8）黃色固體310 mg，收率63%。m.p.>300℃；¹H NMR（400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.73 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 6.88 (d, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.18 (s, 1H), 4.25-4.11 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.87-3.80 (m, 1H), 3.70 (s, 6H)。EIS [M+Na]⁺ = 516.8。

實(shí)施例7

槲皮素衍生物（9）的制備

N₂保護(hù)下，將535 mg (1.0 mmol)化合物（5）溶于6 mLDMF中，加入2g蒙脫土（montmorillonite)，60℃反應(yīng)30min，過(guò)濾，濾液蒸除DMF，用10%HCl溶液調(diào)pH4-5，乙酸乙酯萃取3x10mL，干燥，過(guò)濾，蒸干，硅膠柱層析純化（V（乙酸乙酯）：V(石油醚） = 3:1），得到化合物（9）476 mg，收率91.3%。m.p.>300℃；¹H NMR（400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.72 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 6.89 (d, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.17 (s, 1H), 4.25-4.10 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.87-3.80 (m, 1H), 3.71 (s, 12H)。EIS [M+Na]⁺ = 544.0。

實(shí)施例8

槲皮素衍生物抗腫瘤活性

槲皮素衍生物用滅菌水配制成10mg／ml的原藥貯存液：4℃保存，臨用時(shí)以RPMI-1640培養(yǎng)基稀釋，0.22μm微孔濾膜過(guò)濾。ECl09(人食管鱗癌細(xì)胞)、U251(人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系細(xì)胞)、Hep-2（人肝癌細(xì)胞）、MGC-803(人胃癌細(xì)胞)、PC-3(人前列腺癌細(xì)胞)均購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞庫(kù)。各細(xì)胞系均用含有10％優(yōu)級(jí)胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為5％C0₂、37℃。

用MTT法檢測(cè)不同濃度的槲皮素及衍生物對(duì)ECl09細(xì)胞、U251細(xì)胞、Hep-2細(xì)胞、MGC-803細(xì)胞、PC-3細(xì)胞增殖的抑制作用。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，調(diào)整濃度為6x10³個(gè)／每孔，接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔200μl,5％C0₂、飽和濕度37℃孵育箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁，實(shí)驗(yàn)組加入RPMll640培養(yǎng)基稀釋的槲皮素衍生物至終濃度分別O.5、l、2、4、8、16、32、64、128μg／ml，溶劑對(duì)照組各加入完全培養(yǎng)基，每孔終體積為200μ1，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)72h后取出培養(yǎng)板，倒置顯微鏡下形態(tài)學(xué)觀察并拍照。再加入5mg／ml MTT(20μ1／每孔)繼續(xù)培養(yǎng)4h，倒掉原培養(yǎng)液后用PBS清洗每孔，加入DMSO(150μL/孔)，晃勻使沉淀溶解，室溫下20min(紫紅色溶液)后將96孔板置于酶標(biāo)儀上，用酶標(biāo)儀測(cè)在492nm波長(zhǎng)處各孔光密度值(OD值)，計(jì)算出各組均值。按公式：

GI(生長(zhǎng)抑制率)=l-(藥物組OD值／對(duì)照組OD值)×100％計(jì)算各組的生長(zhǎng)抑制率。根據(jù)結(jié)果，采用SPSSl9.0計(jì)算IC₅₀(表1)。結(jié)果顯示：與槲皮素相比，所述槲皮素衍生物對(duì)ECl09細(xì)胞、U251細(xì)胞、Hep-2細(xì)胞、MGC-803細(xì)胞、PC-3細(xì)胞的增殖均有顯著的抑制作用。