1.一種生物海藻酸鹽的制備方法,其特征在于,該方法包括以下步驟:
A、選取天然海藻,將海藻用粉碎機(jī)粉碎成海藻碎片,將所述海藻碎片放入帶有加濕和排濕裝置的真空容器中平衡水分,測(cè)定海藻碎片的回潮率;稱量碎片質(zhì)量,根據(jù)回潮率計(jì)算其海藻碎片的干重;在海藻碎片中加入去離子水,通過(guò)浸泡使碎片中的海藻碎片充分潤(rùn)濕溶脹;
B、將海藻脫膠細(xì)菌在25℃下 用瓊脂固體培養(yǎng)基活化至少24小時(shí),活化后的海藻脫膠細(xì)菌以脫膠容器中海藻碎片重量的3%為接種量接入到脫膠容器中,此時(shí)碎片中的海藻充分潤(rùn)濕溶脹,然后用去離子水加滿脫膠容器,并加溫至25℃~35℃,加溫的同時(shí)向脫膠容器中加入500萬(wàn)單位的生理鹽水和300萬(wàn)單位的糖原,40-60小時(shí)后,海藻脫膠結(jié)束;
C、向步驟B中脫膠后的海藻中加入6M-8M尿素,再加入氫氧化鈉固體粉末,或者先將氫氧化鈉固體粉末溶于6M-8M尿素后,再將步驟B中脫膠后的海藻放于上述溶液中,室溫下靜置4-24hr,室溫下攪拌均勻制得海藻多糖懸濁液;
D、將步驟C制得的海藻多糖與金屬氧化物反應(yīng),氧化得到海藻酸鹽混合物;
E、將步驟D所制得的混合物進(jìn)行離心分層,將上層清液轉(zhuǎn)移到另一容器中,剩余的濃縮海藻酸鹽懸浮液放入真空冷凍干燥儀中,使其冷凍干燥成型,制得粉態(tài)的海藻酸鹽,最后將制得的海藻酸鹽放入冷凍室儲(chǔ)存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物海藻酸鹽的制備方法,其特征在于,所述步驟A中,粉碎的海藻碎片細(xì)度為400目,在碎片中加入蒸餾水使碎片在蒸餾水中質(zhì)量百分比濃度為11%~15%,蒸餾水浸泡時(shí)間為36h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物海藻酸鹽的制備方法,其特征在于,所述步驟B中,海藻脫膠細(xì)菌接種在富集培養(yǎng)基中,35℃靜止培養(yǎng), 36小時(shí)后,用無(wú)菌移液管吸取20mL菌液轉(zhuǎn)至另外裝有200mL富集培養(yǎng)基的三角瓶中培養(yǎng)24h,連續(xù)轉(zhuǎn)接2~3次,所加的瓊脂量隨著轉(zhuǎn)接逐漸增加;然后將菌液用平板稀釋法在分離培養(yǎng)基上涂布,35℃靜止培養(yǎng)48h,將獲得的單菌落保存后在分離培養(yǎng)基上反復(fù)純化后,即得到所述的海藻脫膠細(xì)菌。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物海藻酸鹽的制備方法,其特征在于,所述步驟E中,通過(guò)離心機(jī)進(jìn)行離心分層,離心機(jī)轉(zhuǎn)速為15000rpm,離心次數(shù)為10次;采用液氮進(jìn)行冷凍干燥成型,冷凍干燥成型的溫度為-70℃,冷凍干燥成型的壓力80Pa,冷凍干燥成型的時(shí)間為 15h。