本發(fā)明屬于海藻加工領域，具體涉及一種海藻酸鹽制備方法。

背景技術：

海藻酸鹽的原料主要是來自天然海藻中所提煉出的海藻多醣。目前市場上的海 藻酸鹽創(chuàng)傷敷材主要有不織布、膜及海綿體(sponge)等形式。例如英國BritCair公 司的Kaltostat商品為不織布型的創(chuàng)傷敷材。近年來，科學家確立在濕潤環(huán)境下具有促進創(chuàng)傷治愈的效果。由傷口所分泌的 液體中，亦發(fā)現(xiàn)存在多數(shù)促進傷口愈合的生長因素(growth factor)。因此確立了在 濕潤環(huán)境下能促進傷口愈合的科學根據(jù)，同時建立了閉鎖性被覆材的概念。根據(jù)此 摡念，開發(fā)出數(shù)種創(chuàng)傷敷材，如PU膜、甲殼質(zhì)(chitin)/幾丁聚醣(chitosan，或稱甲 殼素)、膠原蛋白(collagen)或海藻酸鹽(alginate)等材料的創(chuàng)傷敷材。

目前，傳統(tǒng)的海藻酸鹽制備思路為：將海藻用氫氧化鈉處理后提取液與硫酸等強酸反應制得海藻酸，再與堿反應制得海藻酸鹽。但是采用以上的方法制備海藻酸鹽往往不徹底，不能將海藻中的海藻多糖完全轉(zhuǎn)化為海藻酸鹽出來，從而造成了材料的浪費，因此需要開發(fā)一種能夠盡可能完全制備海藻酸鹽的方法，提高原材料的利用率。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于為了克服以上現(xiàn)有技術的不足而提供一種生物海藻酸鹽制備方法，進一步提高海藻酸鹽的轉(zhuǎn)化率。

一種生物海藻酸鹽的制備方法，該方法包括以下步驟：

A、選取天然海藻，將海藻用粉碎機粉碎成海藻碎片，將所述海藻碎片放入帶有加濕和排濕裝置的真空容器中平衡水分，測定海藻碎片的回潮率；稱量碎片質(zhì)量，根據(jù)回潮率計算其海藻碎片的干重；在海藻碎片中加入去離子水，通過浸泡使碎片中的海藻碎片充分潤濕溶脹；

B、將海藻脫膠細菌在25℃下 用瓊脂固體培養(yǎng)基活化至少24小時，活化后的海藻脫膠細菌以脫膠容器中海藻碎片重量的3％為接種量接入到脫膠容器中，此時碎片中的海藻充分潤濕溶脹，然后用去離子水加滿脫膠容器，并加溫至25℃～35℃，加溫的同時向脫膠容器中加入500萬單位的生理鹽水和300萬單位的糖原，40-60小時后，海藻脫膠結束；

C、向步驟B中脫膠后的海藻中加入6M-8M尿素，再加入氫氧化鈉固體粉末，或者先將氫氧化鈉固體粉末溶于6M-8M尿素后，再將步驟B中脫膠后的海藻放于上述溶液中，室溫下靜置4-24hr，室溫下攪拌均勻制得海藻多糖懸濁液；

D、將步驟C制得的海藻多糖與金屬氧化物反應，氧化得到海藻酸鹽混合物；

E、將步驟D所制得的混合物進行離心分層，將上層清液轉(zhuǎn)移到另一容器中，剩余的濃縮海藻酸鹽懸浮液放入真空冷凍干燥儀中，使其冷凍干燥成型，制得粉態(tài)的海藻酸鹽，最后將制得的海藻酸鹽放入冷凍室儲存。

步驟A中，粉碎的海藻碎片細度為400目，在碎片中加入蒸餾水使碎片在蒸餾水中質(zhì)量百分比濃度為11％～15％，蒸餾水浸泡時間為36h。

步驟B中，海藻脫膠細菌接種在富集培養(yǎng)基中，35℃靜止培養(yǎng)， 36小時后，用無菌移液管吸取20mL菌液轉(zhuǎn)至另外裝有200mL富集培養(yǎng)基的三角瓶中培養(yǎng)24h，連續(xù)轉(zhuǎn)接2～3次，所加的瓊脂量隨著轉(zhuǎn)接逐漸增加；然后將菌液用平板稀釋法在分離培養(yǎng)基上涂布，35℃靜止培養(yǎng)48h，將獲得的單菌落保存后在分離培養(yǎng)基上反復純化后，即得到所述的海藻脫膠細菌。

步驟E中，通過離心機進行離心分層，離心機轉(zhuǎn)速為15000rpm，離心次數(shù)為10次；采用液氮進行冷凍干燥成型，冷凍干燥成型的溫度為-70℃，冷凍干燥成型的壓力80Pa，冷凍干燥成型的時間為 15h。

使用本發(fā)明提供的方法能夠最大程度的將天然海藻中的海藻多糖轉(zhuǎn)化為海藻酸鹽，經(jīng)測定，本發(fā)明提供的海藻酸鹽制備方法的海藻酸鹽轉(zhuǎn)化率達到了70%以上。

具體實施方式

為使本發(fā)明更明顯易懂，茲以幾個優(yōu)選實施例，作詳細說明如下。

實施例1

一種生物海藻酸鹽的制備方法，該方法包括以下步驟：

A、選取天然海藻，將海藻用粉碎機粉碎成海藻碎片，將所述海藻碎片放入帶有加濕和排濕裝置的真空容器中平衡水分，測定海藻碎片的回潮率；稱量碎片質(zhì)量，根據(jù)回潮率計算其海藻碎片的干重；在海藻碎片中加入去離子水，通過浸泡使碎片中的海藻碎片充分潤濕溶脹；其中，粉碎的海藻碎片細度為400目，在碎片中加入蒸餾水使碎片在蒸餾水中質(zhì)量百分比濃度為15％，蒸餾水浸泡時間為36h，

B、將海藻脫膠細菌在25℃下 用瓊脂固體培養(yǎng)基活化至少24小時，活化后的海藻脫膠細菌以脫膠容器中海藻碎片重量的3％為接種量接入到脫膠容器中，此時碎片中的海藻充分潤濕溶脹，然后用去離子水加滿脫膠容器，并加溫至35℃，加溫的同時向脫膠容器中加入500萬單位的生理鹽水和300萬單位的糖原，40-60小時后，海藻脫膠結束；其中，海藻脫膠細菌接種在富集培養(yǎng)基中，35℃靜止培養(yǎng)， 36小時后，用無菌移液管吸取20mL菌液轉(zhuǎn)至另外裝有200mL富集培養(yǎng)基的三角瓶中培養(yǎng)24h，連續(xù)轉(zhuǎn)接3次，所加的瓊脂量隨著轉(zhuǎn)接逐漸增加；然后將菌液用平板稀釋法在分離培養(yǎng)基上涂布，35℃靜止培養(yǎng)48h，將獲得的單菌落保存后在分離培養(yǎng)基上反復純化后，即得到所述的海藻脫膠細菌。

C、向步驟B中脫膠后的海藻中加入6M-8M尿素，再加入氫氧化鈉固體粉末，或者先將氫氧化鈉固體粉末溶于6M-8M尿素后，再將步驟B中脫膠后的海藻放于上述溶液中，室溫下靜置24hr，室溫下攪拌均勻制得海藻多糖懸濁液；

D、將步驟C制得的海藻多糖與金屬氧化物反應，氧化得到海藻酸鹽混合物；

E、將步驟D所制得的混合物進行離心分層，將上層清液轉(zhuǎn)移到另一容器中，剩余的濃縮海藻酸鹽懸浮液放入真空冷凍干燥儀中，使其冷凍干燥成型，制得粉態(tài)的海藻酸鹽，最后將制得的海藻酸鹽放入冷凍室儲存，其中，通過離心機進行離心分層，離心機轉(zhuǎn)速為15000rpm，離心次數(shù)為10次；采用液氮進行冷凍干燥成型，冷凍干燥成型的溫度為-70℃，冷凍干燥成型的壓力80Pa，冷凍干燥成型的時間為 15h。

使用本發(fā)明提供的方法能夠最大程度的將天然海藻中的海藻多糖轉(zhuǎn)化為海藻酸鹽，經(jīng)測定，本發(fā)明提供的海藻酸鹽制備方法的海藻酸鹽轉(zhuǎn)化率達到了70%以上。