本申請主張于2015年2月13日申請的韓國專利申請第10-2015-0022300號的優(yōu)先權(quán)，上述專利申請的公開事項作為參考記載于本說明書。本發(fā)明涉及利用交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的生物降解性微結(jié)構(gòu)體及其的制造方法。更詳細地，本發(fā)明涉及通過作為透明質(zhì)酸衍生物的交聯(lián)透明質(zhì)酸形成的利用水凝膠的生物降解性微結(jié)構(gòu)體及其的制造方法。

背景技術(shù)：

藥物傳遞系統(tǒng)(dds，drugdeliverysystem)為控制藥物的吸收及釋放，由此，以減少藥物的副作用并使功效極大化的方式向細胞、組織等標的位置傳遞藥物的一系列技術(shù)。

藥物傳遞系統(tǒng)除一般的口服攝取之外，包括可局部使用藥物的經(jīng)皮透過型傳遞系統(tǒng)等，持續(xù)進行用于有效且安全地對如藥物的藥劑學(xué)物質(zhì)進行給藥的研究。其中，在注射療法的情況下，給藥方法麻煩，且除暫時注入根據(jù)患者伴隨疼痛的藥物之外，控制受到了限制。

為了改善這種注射療法的缺點，進行著對于尺寸完全小于注射器的針，且疼痛少的微結(jié)構(gòu)體(微針)的研究，在藥物傳遞、血液采取、生物傳感器及皮膚美容等多種領(lǐng)域中進行著研究。

作為以往的微針的制造方法，包括美國專利第6334856號的“microneedledevicesandmethodsofmanufactureandusethereof”和韓國專利第10-0793615號的“生物降解性固體微針及其的制造方法”。

上述專利中，向利用硬化性聚合物制造的微型模具注入生物降解性黏性物質(zhì)并進行干燥之后，從模具分離來制造微針(注塑工法)，涂敷用于形成生物降解性固體微針的生物降解性黏性物質(zhì)，通過柱(柱形物)圖案化的框架對涂敷的生物降解性黏性物質(zhì)進行繪制并進行干燥之后，通過切斷繪制的生物降解性黏性物質(zhì)的步驟來制造微針(繪制工法)。

但是，通過這種以往的制造方法制造的生物降解性聚合物微結(jié)構(gòu)體因相對低的機械強度，當透過皮膚時，會彎曲或被破壞。

尤其，在將具有高彈性的高分子衍生物作為原材料的情況下，當利用注塑工法或繪制工法來制造微結(jié)構(gòu)體時，無法均勻地生成所需要的結(jié)構(gòu)體的形狀，很難滿足用于皮膚透過的微結(jié)構(gòu)體的機械強度。

在本發(fā)明中使用的透明質(zhì)酸為n-乙酰氨基葡糖和葡糖醛酸的二糖單位具有重復(fù)連接結(jié)構(gòu)的生物降解性高分子。

在通過透明質(zhì)酸制造的結(jié)構(gòu)體的情況下，透明質(zhì)酸的平均分子量越低，越容易形成結(jié)構(gòu)體且黏性低，分子量越高，機械強度會提高，但是黏性會降低。因這種特性，通常，作為微結(jié)構(gòu)體的原料利用低分子的透明質(zhì)酸，在利用低分子的透明質(zhì)酸的微結(jié)構(gòu)體的情況下，當透過皮膚時，很容易發(fā)生彎曲或破壞等問題。

在本發(fā)明中，使用低分子的透明質(zhì)酸并具有適合于皮膚透過的機械強度，在皮膚內(nèi)簡單溶解或膨潤，從而，為了制造適合于藥物傳遞或皮膚美容的微結(jié)構(gòu)體，開發(fā)交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠及將其作為主要材料的微結(jié)構(gòu)體的制造方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)的問題而提出。結(jié)果，本發(fā)明人將由作為皮膚結(jié)構(gòu)成分的透明質(zhì)酸的衍生物的交聯(lián)透明質(zhì)酸形成的水凝膠作為微結(jié)構(gòu)體的主要材料，由此，可制造均勻且使彎曲最小化的微結(jié)構(gòu)體，并具有高的硬度，可提高有效成分傳遞的有效性。并且，上述微結(jié)構(gòu)體通過作為交聯(lián)透明質(zhì)酸的特性的高的粘彈性來改善皺紋等老化的皮膚組織并給予保濕效果。同時，本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體的膨潤性優(yōu)秀，從而在生物體內(nèi)簡單吸收體液，對透明質(zhì)酸分解酶穩(wěn)定，從而增加微結(jié)構(gòu)體的生物體內(nèi)持續(xù)時間，結(jié)果，可向生物體內(nèi)穩(wěn)定傳遞包含微結(jié)構(gòu)體的有效成分，由此完成了本發(fā)明。

因此，本發(fā)明的目的在于，提供包含交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的微結(jié)構(gòu)體(microstructure)。

本發(fā)明的再一目的在于，提供利用交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的微結(jié)構(gòu)體的制造方法。

本發(fā)明的另一目的在于，提供有效成分傳遞系統(tǒng)(effectivecomponentdeliverysystem)。

本發(fā)明的其他目的及優(yōu)點通過以下的發(fā)明的詳細說明、發(fā)明要求保護范圍及附圖變得更加明確。

根據(jù)本發(fā)明的一實施方式，本發(fā)明提供包含交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠(cross-linkedhyaluronicacidhydrogel)的微結(jié)構(gòu)體(microstructure)。

本發(fā)明為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)的問題而提出。結(jié)果，本發(fā)明人將由作為皮膚結(jié)構(gòu)成分的透明質(zhì)酸的衍生物的交聯(lián)透明質(zhì)酸形成的水凝膠作為微結(jié)構(gòu)體的主要材料，由此，可制造均勻且使彎曲最小化的微結(jié)構(gòu)體，并具有高的硬度，可提高有效成分傳遞的有效性。并且，上述微結(jié)構(gòu)體通過作為交聯(lián)透明質(zhì)酸的特性的高的粘彈性來改善皺紋等老化的皮膚組織并給予保濕效果。同時，本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體的膨潤性優(yōu)秀，從而在生物體內(nèi)簡單吸收體液，對透明質(zhì)酸分解酶穩(wěn)定，從而增加微結(jié)構(gòu)體的生物體內(nèi)持續(xù)時間，結(jié)果，可向生物體內(nèi)穩(wěn)定傳遞包含微結(jié)構(gòu)體的有效成分。

在本說明書中的術(shù)語“透明質(zhì)酸”不僅包含透明質(zhì)酸，而且還包含透明質(zhì)酸鹽(例如，透明質(zhì)酸鈉、透明質(zhì)酸鉀、透明質(zhì)酸鎂及透明質(zhì)酸鈣)及這些的混合物。

在本說明書中的術(shù)語“水凝膠”為保留充分量的水分的親水性高分子的三維結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明的目的中，水凝膠為形成于交聯(lián)透明質(zhì)酸之間的水凝膠。

本發(fā)明可提供多種微結(jié)構(gòu)體，例如，可提供微針、微刀片、微刀、微纖維、微穗、微探針、微閥門(microbarb)、微陣列或微電極。根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體為微針。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠具有1-50％的交聯(lián)度。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水溶膠具有1-40％、2-40％、5-40％、7-40％、10-40％、15-40％、18-40％、20-40％、22-40％、25-40％、28-40％、30-40％、1-35％、2-35％、5-35％、7-35％、10-35％、15-35％、18-35％、20-35％、22-35％、25-35％、28-35％、1-30％、2-30％、5-30％、7-30％、10-30％、15-30％、18-30％、20-30％、22-30％、25-30％、28-30％、1-25％、2-25％、5-25％、7-25％、10-25％、15-25％、18-25％、20-25％、22-25％、1-20％、2-20％、5-20％、7-20％、10-20％、15-20％、18-20％、1-15％、2-15％、5-15％、7-15％、10-15％、1-10％、2-10％、5-10％、7-10％、1-5％、2-5％、1-3％或2-3％的交聯(lián)度。如以下實施例6中證明，交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠呈現(xiàn)出因生物體內(nèi)存在的透明質(zhì)酸分解酶所引起的生物體抑制效果，因此，與非交聯(lián)透明質(zhì)酸相比，呈現(xiàn)出長時間的皮膚內(nèi)持續(xù)時間。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體的半衰期為20小時至850小時。本說明書中的術(shù)語“半衰期”為對于當透明質(zhì)酸分解酶(hyaluronidase)的非交聯(lián)透明質(zhì)酸的分解率為100％時，對于上述透明質(zhì)酸分解酶的分解率為50％的時點的時間。如以下實施例7中證明，包含本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的微結(jié)構(gòu)體的半衰期長，從而可穩(wěn)定地向有效成分生物內(nèi)傳遞，在上述有效成分為微溶性成分的情況下，呈現(xiàn)出高的皮膚美容改善效果。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠在本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體包含15％(w/v)以下。根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠在本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體包含0.1-15％(w/v)。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠在本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體包含0.1-12、0.1-10、0.1-7.5、0.5-12、0.5-10、0.5-7.5、1-12、1-10或1-7.5％(w/v)。

根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠在1hz中的彈性系數(shù)小于0.5pa至5pa的情況下包含15％(w/v)以下、在小于5pa至50pa的情況下包含12％(w/v)以下、在小于50pa至200pa的情況下包含10％以下、在小于200pa至1000pa的情況下包含7.5％以下。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠在1hz中的彈性系數(shù)小于0.5pa至3pa、小于0.5pa至2pa、小于1pa至5pa、小于1pa至3pa、小于1pa至2pa的情況下，本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體包含15％(w/v)以下。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠在1hz中的彈性系數(shù)小于5pa至30pa、小于8pa至30pa、小于10pa至30pa、小于5pa至25pa、小于8pa至25pa、小于10pa至25pa、小于5pa至20pa、小于8pa至15pa、小于20pa至30pa、小于22pa至26pa的情況下，本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體包含12％(w/v)以下。根據(jù)本發(fā)明的一種實施例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠在1hz中的彈性系數(shù)小于50pa至150pa、小于50pa至130pa、小于50pa至70pa、小于100pa至150pa、小于100pa至140pa或小于100pa至130pa的情況下，本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體包含10％(w/v)以下。根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠在1hz中的彈性系數(shù)小于200pa至900pa、小于200pa至500pa、小于200pa至300pa、小于300pa至900pa、小于400pa至900pa、小于400pa至500pa或小于800pa至900pa的情況下，本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體包含7.5％(w/v)以下。

本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠可通過本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的一種透明質(zhì)酸交聯(lián)方法來進行交聯(lián)。根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠通過交聯(lián)劑交聯(lián)的透明質(zhì)酸水凝膠。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的上述交聯(lián)劑為醚交聯(lián)劑。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，上述醚交聯(lián)劑為選自乙二醇二縮水甘油醚(egdge，ethyleneglycoldiglycidylether)、1，4-丁二醇二縮水甘油醚(1，4-丁二醇二縮水甘油醚，1,4-butandioldiglycidylether)、1，6-己二醇二縮水甘油醚(1,6-hexanedioldiglycidylether)、丙二醇二縮水甘油醚(propyleneglycoldiglycidylether)、聚丙二醇二縮水甘油醚(polypropyleneglycoldiglycidylether)、雙甘油多縮水甘油醚(diglycerolpolyglycidylether)及1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(edc，1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide)組成的族中的一種以上的交聯(lián)劑。根據(jù)本發(fā)明的特定實例，上述醚交聯(lián)劑為丁二醇二縮水甘油醚。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠在頻率為0.02hz中具有3-5000pa.s的復(fù)合粘度。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，上述復(fù)合粘度為3-4500、3-4300、3-4200、3-2000、3-1500、3-1000、3-700、3-650、3-600、3-400、3-200、3-150、3-100、3-70、3-50、3-20、3-10、3-8、5-4500、5-4300、5-4200、5-2000、5-1500、5-1000、5-700、5-650、5-600、5-400、5-200、5-150、5-100、5-70、5-50、5-20、5-10、50-4500、50-4300、50-4200、50-2000、50-1500、50-1000、50-700、50-650、50-600、50-400、50-200、50-150、50-100、50-70、100-4500、100-4300、100-4200、100-2000、100-1500、100-1000、100-700、100-650、100-600、100-400、100-200、100-150、300-4500、300-4300、300-4200、300-2000、300-1500、300-1000、300-700、300-650、300-600、300-400、500-4500、500-4300、500-4200、500-2000、500-1500、500-1000、500-700、500-650、500-600、600-4500、600-4300、600-4200、600-2000、600-1500、600-1000、600-700、600-650、650-4500、650-4300、650-4200、650-2000、650-1500、650-1000、650-700、650-650、650-600、650-400、650-200、650-150、650-100、650-70、650-50、650-20、650-10、1000-2000、1000-1500、1000-4500、1000-4300、1000-4200、1000-2000、1000-1500、1300-4500、1300-4300、1300-4200、1300-2000、1300-1500、1500-4500、1500-4300、1500-4200、1500-2000、4000-4500或4000-4300pa.s。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠在頻率為1hz中具有1-1000pa的彈性系數(shù)。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，上述彈性系數(shù)為1-900pa、1-870pa或1.5-870pa。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，上述彈性系數(shù)為1-500、1-450、1-300、1-250、1-150、1-130、1-100、1-70、1-10、1-5、1-3、8-900、8-500、8-450、8-300、8-250、8-150、8-130、8-100、8-70、8-10、10-900、10-500、10-450、10-300、10-250、10-150、10-130、10-100、10-70、20-900、20-500、20-450、20-300、20-250、20-150、20-130、20-100、20-70、50-900、50-500、50-450、50-300、50-250、50-150、50-130、50-100、50-70、100-900、100-500、100-450、100-300、100-250、100-150、100-130、110-900、110-500、110-450、110-300、110-250、110-150、110-130、120-900、120-500、120-450、120-300、120-250、120-150、120-130、400-900、400-500、400-450或800-900pa。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠在頻率為1hz中具有0.5-500pa的彈性系數(shù)。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，上述黏性系數(shù)為0.5-400pa、0.5-300pa、0.5-250pa或0.7-250pa。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，上述黏性系數(shù)為0.5-300、0.5-150、0.5-120、0.5-70、0.5-50、0.5-10、0.5-5、0.5-3、0.5-2、0.5-1、1-300、1-150、1-120、1-70、1-50、1-10、1-5、1-3、1-2、1-1、3-300、3-150、3-120、3-70、3-50、3-10、3-5、5-300、5-150、5-120、5-70、5-50、5-10、6-300、6-150、6-120、6-70、6-50、6-10、7-500、7-300、7-150、7-120、7-70、7-50、7-10、10-500、10-300、10-150、10-120、10-70、10-50、15-500、15-300、15-150、15-120、15-70、15-50、30-500、30-300、30-150、30-120、30-70、30-50、40-500、40-300、40-150、40-120、40-70、40-50、80-500、80-300、80-150、80-120、90-500、90-300、90-150、90-120、100-500、100-300、100-150、100-120、200-500、200-300、230-500、230-300或230-250pa。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠具有100-1000000cp的粘度。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，上述粘度為100-500000、100-200000、100-160000、100-130000、100-120000、100-110000、100-100000、100-90000、100-85000、100-80000、100-75000、100-70000、100-60000、100-55000、100-50000、100-40000、100-35000、100-30000、100-25000、100-20000、100-15000、100-5000、100-2000、100-1200、100-500、100-400、150-1000000、150-500000、150-200000、150-160000、150-130000、150-120000、150-110000、150-100000、150-90000、150-85000、150-80000、150-75000、150-70000、150-60000、150-55000、150-50000、150-40000、150-35000、150-30000、150-25000、150-20000、150-15000、150-5000、150-2000、150-1200、150-500、150-400、500-1000000、500-500000、500-200000、500-160000、500-130000、500-120000、500-110000、500-100000、500-90000、500-85000、500-80000、500-75000、500-70000、500-60000、500-55000、500-50000、500-40000、500-35000、500-30000、500-25000、500-20000、500-15000、500-5000、500-2000、500-1200、600-1000000、600-500000、600-200000、600-160000、600-130000、600-120000、600-110000、600-100000、600-90000、600-85000、600-80000、600-75000、600-70000、600-60000、600-55000、600-50000、600-40000、600-35000、600-30000、600-25000、600-20000、600-15000、600-5000、600-2000、600-1200、800-1000000、800-500000、800-200000、800-160000、800-130000、800-120000、800-110000、800-100000、800-90000、800-85000、800-80000、800-75000、800-70000、800-60000、800-55000、800-50000、800-40000、800-35000、800-30000、800-25000、800-20000、800-15000、800-5000、800-2000、800-1200、10000-1000000、10000-500000、10000-200000、10000-160000、10000-130000、10000-120000、10000-110000、10000-100000、10000-90000、10000-85000、10000-80000、10000-75000、10000-70000、10000-60000、10000-55000、10000-50000、10000-40000、10000-35000、10000-30000、10000-25000、10000-20000、10000-15000、25000-1000000、25000-500000、25000-200000、25000-160000、25000-130000、25000-120000、25000-110000、25000-100000、25000-90000、25000-85000、25000-80000、25000-75000、25000-70000、25000-60000、25000-55000、25000-50000、25000-40000、25000-35000、25000-30000、40000-1000000、40000-500000、40000-200000、40000-160000、40000-130000、40000-120000、40000-110000、40000-100000、40000-90000、40000-85000、40000-80000、40000-75000、40000-70000、40000-60000、40000-55000、40000-50000、45000-1000000、45000-500000、45000-200000、45000-160000、45000-130000、45000-120000、45000-110000、45000-100000、45000-90000、45000-85000、45000-80000、45000-75000、45000-70000、45000-60000、45000-55000、45000-50000、50000-1000000、50000-500000、50000-200000、50000-160000、50000-130000、50000-120000、50000-110000、50000-100000、50000-90000、50000-85000、50000-80000、50000-75000、50000-70000、50000-60000、60000-1000000、60000-500000、60000-200000、60000-160000、60000-130000、60000-120000、60000-110000、60000-100000、60000-90000、60000-85000、60000-80000、60000-75000、60000-70000、70000-1000000、70000-500000、70000-200000、70000-160000、70000-130000、70000-120000、70000-110000、70000-100000、70000-90000、70000-85000、70000-80000、70000-75000、100000-1000000、100000-500000、100000-200000、100000-160000、100000-130000、100000-120000、100000-110000、110000-1000000、110000-500000、110000-200000、110000-160000、110000-130000、110000-120000、130000-1000000、130000-500000、130000-200000、130000-160000、140000-1000000、140000-500000、140000-200000、140000-160000、350000-1000000、350000-500000、370000-1000000、370000-500000或370000-450000cp。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體具有2000-80000％的膨潤度。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體具有2000-75000、2000-70000、2000-60000、2000-45000、2000-40000、2000-35000、2000-30000、2000-25000、2000-15000、2000-12000、2000-5000、2000-3000、2000-2500、2500-75000、2500-70000、2500-60000、2500-45000、2500-40000、2500-35000、2500-30000、2500-25000、2500-15000、2500-12000、2500-5000、2500-3000、3000-75000、3000-70000、3000-60000、3000-45000、3000-40000、3000-35000、3000-30000、3000-25000、3000-15000、3000-12000、3000-5000、4000-75000、4000-70000、4000-60000、4000-45000、4000-40000、4000-35000、4000-30000、4000-25000、4000-15000、4000-12000、4000-5000、10000-75000、10000-70000、10000-60000、10000-45000、10000-40000、10000-35000、10000-30000、10000-25000、10000-15000、10000-12000、20000-75000、20000-70000、20000-60000、20000-45000、20000-40000、20000-35000、20000-30000、20000-25000、25000-75000、25000-70000、25000-60000、25000-45000、25000-40000、25000-35000、25000-30000、30000-75000、30000-70000、30000-60000、30000-45000、30000-40000、30000-35000、35000-75000、35000-70000、35000-60000、35000-45000、35000-40000、40000-75000、40000-70000、40000-60000、40000-45000、55000-75000、55000-70000、55000-60000、65000-75000、65000-70000、70000-75000或70000-72000％的膨潤度。本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠若在干燥之后再次添加水，則呈現(xiàn)出高的膨潤度，當制造微結(jié)構(gòu)體時，限制上述膨潤性的范圍，由此可調(diào)節(jié)微結(jié)構(gòu)體的生物體內(nèi)吸收時間的藥物傳遞速度。尤其，在皮膚插入用微結(jié)構(gòu)體利用本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的情況下，膨潤度及生物內(nèi)吸收性優(yōu)秀，從而可呈現(xiàn)出高的美容效果。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體還包含非交聯(lián)透明質(zhì)酸。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，以交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠重量100為基準，上述還包含的非交聯(lián)透明質(zhì)酸包含5-2000重量份。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，以交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠重量100為基準，上述還包含的非交聯(lián)透明質(zhì)酸為7-1500、9-1100、10-1000、20-500、50-200、5-20、5-15或8-12重量份。如以下實施例6中證明，當制造微結(jié)構(gòu)體時，以規(guī)定比例混合非交聯(lián)透明質(zhì)酸和本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠，由此可調(diào)節(jié)膨潤度。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體還包含有效成分。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，上述有效成分為藥物、微溶性成分或這些的組合。本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體包含有效成分，由此可有效地向皮膚內(nèi)傳遞有效成分。

根據(jù)本發(fā)明的另一實施方式，本發(fā)明提供微結(jié)構(gòu)體的制造方法，上述微結(jié)構(gòu)體的制造方法包括：步驟(a)，向微型模具提供交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠；步驟(b)，向微型模具的孔注入上述交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠；以及步驟(c)，分離上述微型模具和交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來形成微結(jié)構(gòu)體。

詳細說明本發(fā)明的方法的各個步驟如下。

步驟(a)：向微型模具提供交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠

根據(jù)本發(fā)明，首先，向微型模具提供交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠。

本發(fā)明的微型模具可通過本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的任何微型模具制造方法來制造。例如，可通過微機電系統(tǒng)(mems，micro-electromec透明質(zhì)酸nicalsystem)制造工法、光刻(photolithography,biodegradablepolymermicroneedles:fabrication,mec透明質(zhì)酸nicsandtransdermaldrugdelivery,journalofcontrolledrelease104,51-66,2005)制造工法及軟光刻(softlithography)制造工法等來制造微型模具，但并不局限于此。在利用雙重軟光刻制造工法的情況下，制造如聚二甲基硅氧烷(pdms，polydimethylsiloxane)或聚(甲基丙烯酸甲酯)(pmma，poly(methylmet透明質(zhì)酸crylate))的彈性體模具愛將其簡單用于微結(jié)構(gòu)體的制造。制造聚二甲基硅氧烷模具的技術(shù)為一種塑料加工技術(shù)，可通過鑄造(casting)、注射(injection)、熱壓印(hot-embossing)等多種方法來獲得需要的模具結(jié)構(gòu)。例如，向硅晶片、玻璃等的基板涂敷感光物質(zhì)，利用光罩來進行圖案化，則會形成主膜(master)。以此為主形，若對聚二甲基硅氧烷進行挑選并燒結(jié)，則可完成起到時間戳功能的聚二甲基硅氧烷模具。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)度為1-50％。本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體的制造方法與本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體和鉸鏈的透明質(zhì)酸水凝膠相同，因此，這些之間的共同內(nèi)容為了避免本說明書的過度復(fù)雜而省略。

步驟(b)：向微微型模具的孔注入交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠

接著，向微微型模具的孔注入上述交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的注入通過向上述鉸鏈的透明質(zhì)酸水凝膠施加向外力來實施。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，上述外向力為離心力。

根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的注入在大氣壓以下的壓力條件下實施。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，本發(fā)明的注入在100-750mmhg的壓力條件下實施。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的注入在100-750、200-750、300-750、400-750、500-750、600-750、100-700、200-700、300-700、400-700、500-700或600-700mmhg實施。根據(jù)本發(fā)明的一種實施例，上述注入在大氣壓以下的壓力條件下實施5分鐘以上、5-180分鐘、5-120分鐘、5-60分鐘、5-30分鐘、5-20分鐘、10-180分鐘、10-120分鐘、10-60分鐘、10-30分鐘、10-20分鐘、13-180分鐘、13-120分鐘、13-60分鐘、13-30分鐘、13-20分鐘或13-17分鐘實施。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，在本發(fā)明的步驟(b)之后，還包括向微型模具供給本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來形成規(guī)定厚度的1次基座(base)部的步驟(圖1)。在此情況下，可構(gòu)成與微結(jié)構(gòu)體結(jié)構(gòu)物質(zhì)相同的基座部，用于使基座部的彎曲最小化的上述1次基座部的厚度為10μm-200μm或30μm-100μm。

根據(jù)本發(fā)明的另一實例，構(gòu)成本發(fā)明的1次基座部的步驟之后，還包括向微型模具供給與本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠不同的高分子物質(zhì)來形成規(guī)定厚度的2次基座部(圖1)的步驟。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，本發(fā)明的2次基座部包含適合于生物體的高分子或粘結(jié)劑。根據(jù)本發(fā)明的特定實例，適合于生物的高分子為選自非交聯(lián)透明質(zhì)酸(圖1b)、海藻酸(alginicacid)、果膠、角叉菜膠、軟骨素(硫酸鈉)、葡聚糖(硫酸酯)、脫乙酰殼多糖、聚賴氨酸(polylysine)、膠原蛋白、明膠、羧甲殼素(carboxymethylchitin)、纖維蛋白、瓊脂糖、支鏈淀粉、聚乳酸、聚羥基氟化物(pga)、聚丙交酯-糖基氟乙烯共聚物(plga)、透明質(zhì)酸(hyaluronicacid)、海藻酸(alginicacid)、聚原酸酯(polyorthoester)，聚醚酯(polyetherester)，聚己內(nèi)酯(polycaprolactone)，聚酯酰胺(polyesteramide)，聚(美容鉆機酸)，聚(山谷鉆機酸)、聚氨酯、聚丙烯酸酯、乙烯-乙酸乙烯酯聚合物、丙烯酸類取代的纖維素乙酸酯、不可降解的聚氨酯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚氟乙烯、聚(乙烯咪唑)、氯磺酸酯聚烯烴(chlorosulphonatepolyolefins)、聚環(huán)氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚乙二醇(peg)、聚甲基丙烯酸酯、羥丙基甲基纖維素(hpmc)、乙基纖維素(ec)、羥丙基纖維素(hpc)、羧甲基纖維素、環(huán)糊精及形成這種高分子的單體的共聚物及纖維組成的族中的一種以上的高分子。根據(jù)本發(fā)明的特定實例，上述添加劑為選自硅樹脂、聚氨酯、透明質(zhì)酸、物理粘合劑(壁虎)、聚丙烯腈、乙基纖維素、羥甲基纖維素、乙烯乙酸乙烯酯及聚異丁烯組成的組中的一種以上的粘結(jié)劑。

步驟(c)：分離微型模具和交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠

在實施步驟(b)之后，分離本發(fā)明的微型模具和交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來形成微結(jié)構(gòu)體。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，在本發(fā)明的步驟(a)之后，實施對上述交聯(lián)的透明質(zhì)酸水凝膠進行干燥的步驟。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，在本發(fā)明的步驟(a)之后實施的干燥在15-90℃條件下實施10分鐘-60小時、在20-80℃條件下實施1-60小時或在20-80℃條件下實施1-50小時。根據(jù)本發(fā)明的一種實例在本發(fā)明的步驟(a)之后實施的干燥在小于10℃至30℃的條件下實施12-60、18-52、24-48、18-30、42-54；在40-60℃條件下實施1-8、2-8,2-6、2.5-6、2-3、4-8、4-6、5-7或3-5小時；或在60-90℃或60-80℃條件下實施1-5、1-3、1.5-5、1.5-3、1.5-2.5、2-4、2-3或1-2小時。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，在本發(fā)明的步驟(b)之后實施對上述交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠進行干燥的步驟。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，在本發(fā)明的步驟(b)之后實施的干燥在15-90℃條件下實施10分鐘-60小時、在20-90℃條件下實施10分鐘-10小時、在30-80℃條件下實施10分鐘-5小時、在40-80℃條件下實施10分鐘-3小時、在40-80℃條件下實施20分鐘-2小時。根據(jù)本發(fā)明的一實例，在本發(fā)明的步驟(b)之后實施的干燥在10-30℃條件下實施36-60小時或42-54小時，在40-60℃條件下實施0.5-7、5-7、0.5-2、0.5-1.5小時，在60-90℃或60-80℃條件下實施0.2-4、2-4、0.2-1、0.2-0.6小時。在上述步驟(b)之后的干燥過程中，提高微結(jié)構(gòu)體的機械強度并提高基座部的平整度。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，在本發(fā)明的步驟(a)之前實施對上述交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠進行干燥的步驟。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的步驟(a)之前實施的干燥在15-90℃條件下實施10分鐘-60小時、在20-90℃條件下實施1-30小時，在20-80℃條件下實施1-25小時或在20-80℃條件下實施1.5-22小時。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，在本發(fā)明的步驟(a)之前實施的干燥在15-90℃條件下實施10分鐘-60小時、在15-30℃條件下實施10-30小時，在40-60℃條件下實施2-6小時或在60-80℃條件下實施1-3小時。通過上述步驟(a)之前實施的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠干燥，交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的體積減少3/100-1/10。

根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的步驟(a)之后對交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠進行干燥在大氣壓以下的壓力條件下實施。本發(fā)明的步驟(a)之后的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的干燥在1氣壓(760mmhg)以下實施的情況下，可平均縮減40％的干燥時間，在本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體包含有效成分(例如，藥物或美容成分)的情況下，可提高上述有效成分的穩(wěn)定性。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，在本發(fā)明的步驟(a)之后，交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的干燥在100-750mmhg的壓力條件下實施。根據(jù)本發(fā)明的另一實例，在本發(fā)明的步驟(a)之后交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的干燥在100-750、200-750、300-750、400-750、500-750、600-750、100-700、200-700、300-700、400-700、500-700或600-700mmhg中實施。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，在本發(fā)明的步驟(a)之后交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的干燥在大氣壓以下的壓力條件下進行5分鐘以上、5-180分鐘、5-120分鐘、5-60分鐘、5-30分鐘、5-20分鐘、10-180分鐘、10-120分鐘、10-60分鐘、10-30分鐘、10-20分鐘、13-180分鐘、13-120分鐘、13-60分鐘、13-30分鐘、13-20分鐘或13-17分鐘。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的步驟(a)之前實施使上述交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠均質(zhì)化的步驟。在本說明書中，術(shù)語“均質(zhì)化”為將交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠形成為均勻的粒子形態(tài)。在本發(fā)明中，在實施均質(zhì)化的情況下，可獲取具有窄的粒子分布和低的突出壓力的水凝膠，并使交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠不超出微結(jié)構(gòu)體模具的孔大小。

根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明的方法還實施包括如下步驟的制備交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的步驟(pre-a)：步驟(i)，在步驟(a)之前，向透明質(zhì)酸添加堿；以及步驟(ii)，向上述步驟(i)的產(chǎn)物添加交聯(lián)劑來引起交聯(lián)反應(yīng)。

根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的透明質(zhì)酸的平均分子量為100-5000kda。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，本發(fā)明的透明質(zhì)酸的平均分子量為100-4500、150-4500、200-4200kda、220-4200、220-1500、300-1500、350-1500、220-550、240-490、3000-3500、1000-1800、1200-1500、300-400kda。

根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的步驟(i)的產(chǎn)物的濃度為5-50％(w/v)。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，本發(fā)明的步驟(i)的產(chǎn)物的濃度為5-40、5-35、5-30、5-25、5-20、5-15、5-13、8-40、8-35、8-30、8-25、8-20、8-15、8-13、10-40、10-35、10-30、10-25、10-20、13-40、13-35、13-30、13-25、13-20、13-15、15-40、15-35、15-30、15-25、15-20、18-40、18-35、18-30、18-25、18-20、28-40、28-35、28-32、28-30％(w/v)。

根據(jù)本發(fā)明的另一實例，奔放買那個的步驟(i)的產(chǎn)物的ph為11-13或12-13。

根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的交聯(lián)劑為醚交聯(lián)劑。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，上述交聯(lián)劑為1,4-丁二醇二縮水甘油醚。根據(jù)本發(fā)明的特定實例，以透明質(zhì)酸的重復(fù)單元0.5-50摩爾百分比的濃度添加上述交聯(lián)劑。通過調(diào)節(jié)上述交聯(lián)劑的濃度來調(diào)節(jié)上述透明質(zhì)酸的交聯(lián)率。

根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的交聯(lián)反應(yīng)在20-50℃條件下實施10-36時間。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，本發(fā)明的交聯(lián)反應(yīng)在20-30℃條件下實施12-36小時，在20-30℃條件下實施18-30小時或在20-30℃條件下實施21-27小時。根據(jù)本發(fā)明一種實例，本發(fā)明的交聯(lián)反應(yīng)在25-35℃條件下實施10-30小時，在25-35℃條件下實施15-25小時或在25-35℃條件下實施18-22小時。

通過精制水、生理食鹽水或氯化鈉溶液(nacl)對在實施交聯(lián)反應(yīng)之后制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠進行洗滌來去除殘留的1，4-丁二醇二縮水甘油醚及naoh并可同時進行膨潤過程。在添加乙醇水溶液(例如，80％乙醇水溶液)的情況下，水凝膠粒子會生成沉淀，在此過程中，可容易去除未反應(yīng)物質(zhì)。

根據(jù)本發(fā)明的另一實例，本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體還包含非交聯(lián)透明質(zhì)酸。根據(jù)本發(fā)明的一實例，以交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠重量100為基準，上述還包含的非交聯(lián)透明質(zhì)酸為5-2000重量份。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，以交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠重量100為基準，上述還包含的非交聯(lián)透明質(zhì)酸為10-1000、7-1500、9-1100、20-500、50-200、5-20、5-15或8-12重量份。

根據(jù)本發(fā)明的實例，本發(fā)明的堿包含本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域通常使用的堿(例如，naoh)，但并不局限于此。根據(jù)本發(fā)明的一種實例，上述堿為氫氧化鈉水溶液。根據(jù)本發(fā)明的特定實例，上述堿為0.25n-5n的naoh水溶液。

本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體的制造方法與上述微結(jié)構(gòu)體相同，因此，在與上述微結(jié)構(gòu)體的關(guān)系中，共同的內(nèi)容為了避免本說明書的過度復(fù)雜而被省略。

簡單說明本發(fā)明的特征及優(yōu)點如下：

(a)本發(fā)明提供利用交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的微結(jié)構(gòu)體及其的制造方法。

(b)本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體利用交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠，從而可制造均勻且使彎曲最小化的微結(jié)構(gòu)體。

(c)并且，本發(fā)明的利用交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的微結(jié)構(gòu)體改善皮膚等老化的皮膚組織，并可給予保濕效果，且膨潤性優(yōu)秀，從而在生物體內(nèi)簡單吸收體液，對透明質(zhì)酸分解酶穩(wěn)定，微結(jié)構(gòu)體的生物體內(nèi)持續(xù)時間變長，從而可向生物體內(nèi)穩(wěn)定地傳遞有效成分。

附圖說明

圖1a為通過本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸(透明質(zhì)酸)水凝膠及微結(jié)構(gòu)體的制造方法制造的微結(jié)構(gòu)體的示意圖。

圖1b為通過本發(fā)明實施例3-1制造的微結(jié)構(gòu)體的顯微鏡(nikoneclipse80i，70倍)照片。上述微結(jié)構(gòu)體的2次基底部通過追加非交聯(lián)透明質(zhì)酸來調(diào)節(jié)基底部的厚度。

圖2為對于本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體的制造過程的示意圖。圖2a為本發(fā)明的微結(jié)構(gòu)體的制造過程的代表示意圖，圖2b為本發(fā)明實施例3-2的具體示意圖。

圖3a為利用通過實施例2-3制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的微結(jié)構(gòu)體的顯微鏡(nikoneclipse80i，100倍)的照片。

圖3b及圖3c為利用通過本發(fā)明的實施例3-2的制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的微結(jié)構(gòu)體的電子顯微鏡(sem，jeoljsm-7500f，70倍)的照片。

圖4為在本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠最大含量范圍以上包含在微結(jié)構(gòu)體的情況下制造的微結(jié)構(gòu)體的顯微鏡(nikoneclipse80i，40倍)照片。

圖5為通過顯微鏡(nikoneclipse80i，80倍)制造的本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的最大粘度范圍以上的微結(jié)構(gòu)體的照片。

圖6示出混合利用微變形透明質(zhì)酸(非交聯(lián)透明質(zhì)酸)制造的微結(jié)構(gòu)體和本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠及非變形透明質(zhì)酸(非交聯(lián)透明質(zhì)酸)制造的微結(jié)構(gòu)體的膨潤的膠狀態(tài)。

圖7a及圖7b示出利用通過本發(fā)明的方法制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的微結(jié)構(gòu)體的機械強度實驗結(jié)果。

圖8示出利用通過本發(fā)明制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來制造微結(jié)構(gòu)體時施加充分的離心力來并未注入的情況下的微結(jié)構(gòu)體顯微鏡(nikoneclipse80i，40倍)照片。

圖9示出利用本發(fā)明制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來制造微結(jié)構(gòu)體時在減壓狀態(tài)下注入并不充分的情況下的微結(jié)構(gòu)體顯微鏡(nikoneclipse80i，40倍)照片。

圖10示出利用通過本發(fā)明制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來制造微結(jié)構(gòu)體時追加干燥過程并不充分的情況下的微結(jié)構(gòu)體顯微鏡(nikoneclipse80i，40倍(圖10a)及80倍(圖10b))照片。

具體實施方式

以下，通過實施例，進一步詳細說明本發(fā)明。這些實施例僅用于更加具體說明本發(fā)明，根據(jù)本發(fā)明的主旨，對本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，本發(fā)明的范圍并不局限于這些實施例是顯而易見的。

實施例

實施例1：交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的制造

實施例1-1：利用10％的透明質(zhì)酸(平均分子量360kda)

實施例1-1-1

將平均分子量為360kda(分子量范圍240-490kda)的透明質(zhì)酸(bloomagefredabiotech，中國)以10％(w/v)的濃度完全溶解在堿性水(0.25nnaoh)之后，通過與羥基的反應(yīng)形成交聯(lián)而添加1，4-丁二醇二縮水甘油醚。1，4-丁二醇二縮水甘油醚以透明質(zhì)酸的重復(fù)單元的10摩爾百分比添加。為了完全進行交聯(lián)反應(yīng)，在25℃的條件下進行24小時或在30℃條件下進行20小時。透明質(zhì)酸溶液的ph約為12。通過精制水或生理食鹽水洗滌所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來去除殘留的1，4-丁二醇二縮水甘油醚及氫氧化鈉(naoh)。所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)濃度通過h1-nmr分析法(核磁共振波譜)測定，交聯(lián)度為19.75％。

實施例1-1-2

除將1，4-丁二醇二縮水甘油醚以透明質(zhì)酸重復(fù)單元的12摩爾百分比添加之外，通過與實施例1-1-1相同的方法制備交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠。所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)度為25.5％。

實施例1-1-3

除將1，4-丁二醇二縮水甘油醚以透明質(zhì)酸重復(fù)單元的15摩爾百分比之外，通過與實施例1-1-1相同的方法制備交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠。所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)度為20.5％。

實施例1-1-4

除將1，4-丁二醇二縮水甘油醚以透明質(zhì)酸重復(fù)單元的30摩爾百分比添加之外，通過與實施例1-1-1相同的方法制備交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠。所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)度為30.5％。

實施例1-1-5

除將1，4-丁二醇二縮水甘油醚以透明質(zhì)酸重復(fù)單元的40摩爾百分比添加之外，通過與實施例1-1-1相同的方法制備交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠。所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)度為31.75％。

實驗例1-2：利用15％的透明質(zhì)酸(平均分子量360kda)

實施例1-2-1

將平均分子量為360kda(分子量范圍240-490kda)的透明質(zhì)酸以15％(w/v)濃度完全溶解在堿性水(0.25nnaoh)之后，通過與羥基的反應(yīng)形成交聯(lián)而添加1，4-丁二醇二縮水甘油醚。1，4-丁二醇二縮水甘油醚以透明質(zhì)酸的重復(fù)單元的10摩爾百分比添加。為了完全進行交聯(lián)反應(yīng)，在25℃條件下進行24小時或在30℃條件下進行20小時。透明質(zhì)酸溶液的ph約為12。通過精制水或生理食鹽水洗滌所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來去除殘留的1，4-丁二醇二縮水甘油醚及氫氧化鈉。所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)度為9.25％。

實施例1-2-2

除將1，4-丁二醇二縮水甘油醚以透明質(zhì)酸重復(fù)單元的7.5摩爾百分比添加之外，通過與實施例1-1-1相同的方法制備交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠。所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)度為19.75％。

實施例1-3：利用20％的透明質(zhì)酸(平均分子量為360kda)

將平均分子量為360kda(分子量范圍240-490kda)的透明質(zhì)酸以20％(w/v)的濃度完全溶解在堿性水(0.25n的氫氧化鈉)之后，通過與羥基的反應(yīng)形成交聯(lián)而添加1，4-丁二醇二縮水甘油醚。1，4-丁二醇二縮水甘油醚以透明質(zhì)酸的重復(fù)單元的3摩爾百分比添加。為了完全進行交聯(lián)反應(yīng)，在25℃條件下進行24小時或在30℃條件下進行20小時。透明質(zhì)酸溶液的ph約為12。通過精制水或生理食鹽水洗滌所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來去除殘留的1，4-丁二醇二縮水甘油醚及氫氧化鈉。所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)度為6.25％。

實施例1-4：利用30％的透明質(zhì)酸(平均分子量為360kda)

將平均分子量為360kda(分子量范圍240-490kda)的透明質(zhì)酸以30％(w/v)的濃度完全溶解在堿性水(0.25nnaoh)之后，通過與羥基的反應(yīng)形成交聯(lián)而添加1，4-丁二醇二縮水甘油醚。1，4-丁二醇二縮水甘油醚以透明質(zhì)酸的重復(fù)單元的1摩爾百分比添加。為了完全進行交聯(lián)反應(yīng)，在25℃條件下進行24小時或在30℃條件下進行20小時。透明質(zhì)酸溶液的ph約為12。通過精制水或生理食鹽水洗滌所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來去除殘留的1，4-丁二醇二縮水甘油醚及氫氧化鈉。所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)度為2.25％。

實施例1-5：利用10％的透明質(zhì)酸(平均分子量為1400kda)

實施例1-5-1

將平均分子量為1400kda(分子量范圍1000-1800kda，bloomagefredabiotech，中國)的透明質(zhì)酸以10％(w/v)的濃度完全溶解在堿性水(0.25n的氫氧化鈉)之后，通過與羥基的反應(yīng)形成交聯(lián)而添加1，4-丁二醇二縮水甘油醚。1，4-丁二醇二縮水甘油醚以透明質(zhì)酸的重復(fù)單元的12摩爾百分比添加。為了完全進行交聯(lián)反應(yīng)，在25℃條件下進行24小時或在30℃條件下進行20小時。透明質(zhì)酸溶液的ph約為12。通過精制水或生理食鹽水洗滌所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來去除殘留的1，4-丁二醇二縮水甘油醚及氫氧化鈉。所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)度為21.25％。

實施例1-5-2

除將1，4-丁二醇二縮水甘油醚以透明質(zhì)酸重復(fù)單元的20摩爾百分比添加之外，通過與實施例1-1-1相同的方法制備交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠。所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)度為26.75％。

實施例1-6：利用20％的透明質(zhì)酸(平均分子量為3200kda)

將平均分子量為3200kda(分子量范圍2400-4000kda，cpn，捷克)的透明質(zhì)酸以20％(w/v)的濃度完全溶解在堿性水(0.25n的氫氧化鈉)之后，通過與羥的反應(yīng)形成交聯(lián)而添加1，4-丁二醇二縮水甘油醚。1，4-丁二醇二縮水甘油醚以透明質(zhì)酸的重復(fù)單元的5摩爾百分比添加。為了完全進行交聯(lián)反應(yīng)，在25℃條件下進行24小時或在30℃條件下進行20小時。透明質(zhì)酸溶液的ph約為12。通過精制水或生理食鹽水洗滌所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來去除殘留的1，4-丁二醇二縮水甘油醚及氫氧化鈉。所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)度為7.75％。

實施例1-7：利用30％的透明質(zhì)酸(平均分子量為3200kda)

將平均分子量為3200kda(分子量范圍2400-4000kda)的透明質(zhì)酸以30％(w/v)的濃度完全溶解在堿性水(0.25n的氫氧化鈉)之后，通過與羥的反應(yīng)形成交聯(lián)而添加1，4-丁二醇二縮水甘油醚。1，4-丁二醇二縮水甘油醚以透明質(zhì)酸的重復(fù)單元的1摩爾百分比添加。為了完全進行交聯(lián)反應(yīng)，在25℃條件下進行24小時或在30℃條件下進行20小時。透明質(zhì)酸溶液的ph約為12。通過精制水或生理食鹽水洗滌所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來去除殘留的1，4-丁二醇二縮水甘油醚及氫氧化鈉。所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的交聯(lián)度為2.25％。

實施例2利用本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的微結(jié)構(gòu)體

制造聚二甲基硅氧烷微型模具

在硅片利用微機電系統(tǒng)制造工法來制造正主模之后(positivemastermold)，利用硬化性硅來從上述正主模制造負模具(negativemold)。

實施例2-1

向聚二甲基硅氧烷微型模具供給通過上述實施例1的方法制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠之后，在常溫(25℃)條件下，進行48小時，在50℃條件下進行6小時或在70℃條件下進行3小時干燥，向形成于上述模的孔注入之后，去除模來制造交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠微結(jié)構(gòu)體。

實施例2-2

向聚二甲基硅氧烷微型模具供給通過上述實施例1的方法制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠之后，在減壓條件下(650mmhg，15分鐘)，向形成于上述模的孔注入。在常溫進行(25℃)條件下進行48小時，在50℃條件下進行6小時或在70℃條件下進行3小時干燥，去除模來制造交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠微結(jié)構(gòu)體。

實施例2-3

向聚二甲基硅氧烷微型模具供給通過上述實施例1的方法制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠之后，在900g條件下利用離心分離(centrifuge)15分鐘來向形成于上述模的孔注入。在常溫條件下進行48小時，在50℃條件下進行6小時或在70℃條件下進行3小時干燥，去除模來制造交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠微結(jié)構(gòu)體。

實施例2-4

以使通過上述實施例1的方法制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠100ml變?yōu)?ml或10ml的方式在常溫條件下進行20小時干燥、在50℃條件下進行4小時干燥或在70℃條件下進行2小時干燥，向聚二甲基硅氧烷微型模具供給之后，在900g中，利用60分鐘的離心分離來向形成于上述模具的孔注入之后，去除模具來制造交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠微結(jié)構(gòu)體。

實施例2-5

利用均質(zhì)機(homogenizer，primixcorporation日本)，在8000rpm條件下，對通過上述實施例1的方法制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠進行均質(zhì)化來向聚二甲基硅氧烷微型模具供給之后，在常溫條件下進行24小時，在50℃條件下進行5小時或在70℃條件下進行2.5小時中間干燥，在離心分離900g中，利用20分鐘的離心分離來均勻地向形成于上述模具的孔注入之后，去除模具來形成交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠微結(jié)構(gòu)體。上述中間干燥過程提高微結(jié)構(gòu)體的機械強度，并提高基座部的平整度。

實施例2-6

利用均質(zhì)機，在8000rpm條件下，對通過上述實施例1的方法制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠進行10分鐘均質(zhì)化來向聚二甲基硅氧烷微型模具供給之后，在37℃條件下進行12小時，在50℃條件下進行4小時或在70℃條件下進行2.5小時中間干燥，在離心分離900g中，利用20分鐘的離心分離來均勻地向形成于上述模具的孔注入之后，在50℃條件下進行1小時或在70℃條件下進行30分鐘追加干燥之后，去除模具來形成交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠微結(jié)構(gòu)體。上述追加干燥過程追加去除殘留在干燥過程中的水分，由此提高微結(jié)構(gòu)體的機械強度。

實施例2-7

利用均質(zhì)機，在8000rpm條件下，對通過上述實施例1的方法制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠進行10分鐘均質(zhì)化來向聚二甲基硅氧烷微型模具供給之后，在37℃條件下進行7小時，在50℃條件下進行2.5小時或在70℃條件下進行1.5小時減壓(684mmhg)條件下進行中間干燥，在900g中，利用20分鐘的離心分離來均勻地向形成于上述模具的孔注入之后，在50℃條件下進行1小時或在70℃條件下進行30分鐘追加干燥之后，去除模具來形成交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠微結(jié)構(gòu)體。上述減壓干燥過程順暢地向衍生物原料的模具內(nèi)進行注入，并縮減中間干燥時間(平均40％)，當在微結(jié)構(gòu)體包含藥物時，可提高穩(wěn)定性。

比較例1：僅利用微變形(非交聯(lián))透明質(zhì)酸的微結(jié)構(gòu)體制造

向聚二甲基硅氧烷微型模具供給非交聯(lián)透明質(zhì)酸30％(w/v)，在900g中，利用15分鐘離心分離(centrifuge)來向形成于上述模具的孔注入。之后，在常溫(25℃)條件下，進行30分鐘干燥，去除模具來制造微結(jié)構(gòu)體。

實施例3：利用交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠及微變形(非交聯(lián))透明質(zhì)酸的微結(jié)構(gòu)體制造

實施例3-1

利用均質(zhì)機，在8000rpm條件下，對實施例1的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠進行均質(zhì)化，以使交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠：非交聯(lián)透明質(zhì)酸重量比為1:1、1:5、1:10或5:1的方式混合非交聯(lián)透明質(zhì)酸，通過利用真空泵(750mmhg)的脫泡過程完全去除氣泡之后向微型模具供水。在減壓條件(650mmhg，15分鐘)，向形成于上述模具的孔注入之后，在常溫(25℃)條件下進行48小時、在50℃條件下進行6小時或在70℃條件下進行3小時干燥，通過去除模具來制造利用交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠及非交聯(lián)透明質(zhì)酸的微結(jié)構(gòu)體。

實施例3-2

利用均質(zhì)機，在8000rpm條件下，對實施例1的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠進行均質(zhì)化，以使交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠：非交聯(lián)透明質(zhì)酸重量比為1:1、1:5、1:10或5:1的方式混合非交聯(lián)透明質(zhì)酸，在減壓條件(250mmhg，以此去除氣泡)，向微型模具供給之后，通過利用真空泵(750mmhg，15分鐘)的脫泡過程完全去除氣泡之后向微型模具供水。在37℃條件下進行12小時、在50℃條件下進行4小時或在70℃條件下進行2.5小時干燥，在900g中，利用20分鐘離心分離來向形成于模具的孔均勻地注入之后，在50℃條件下進行1小時或在70℃條件下進行30分鐘追加干燥之后，通過去除模具來制造利用交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠及非交聯(lián)透明質(zhì)酸的微結(jié)構(gòu)體。

實施例4：交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的粘彈性確認實驗

在交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的情況下，根據(jù)交聯(lián)方法及交聯(lián)劑添加量，呈現(xiàn)出多種粘彈性，在具有過高粘度(2500000cp)以上或彈性系數(shù)(在1hz中測定的彈性系數(shù)值100kpa以上)的情況下，無法制造所需要的形狀的硬度的微結(jié)構(gòu)體。

本實施例為了確認以本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠粘彈性的微結(jié)構(gòu)體制造條件而執(zhí)行。尤其，根據(jù)交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的粘彈性，當制造微結(jié)構(gòu)體時，可改變干燥時間和離心分離條件，在1hz中測定的彈性系數(shù)值大于100pa或者膠的平均粒子大小為200μm以上，且非均質(zhì)的情況下，向模具供給之前，需要水凝膠粒子的均質(zhì)化過程。

為了確認本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的制造方法的粘彈性，對實施例1-1至1-5的產(chǎn)物測定了復(fù)合粘度(|n*|，pa.s)、彈性系數(shù)(g'，pa)及黏性系數(shù)(g″，pa)。

幾何性利用ar2000exrheometer(t.ainstrumentsltd.,美國)裝置和4-cm，2°-圓錐板(coneandplate)，通過1％應(yīng)變(strain)及振動模式(oscillationmode)測定至0.02-1hz，在0.02hz中測定的復(fù)合粘度值，在以下表1中示出在1hz測定的彈性系數(shù)及黏性系數(shù)及黏性系數(shù)值。裝置的偏差為±10％，實驗在25℃的條件下進行。

表1

如上述表1所示，根據(jù)透明質(zhì)酸分子量和交聯(lián)劑組成比例制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的復(fù)合粘度和彈性系數(shù)受到影響。

在初期透明質(zhì)酸反應(yīng)濃度為10％(w/v)的情況下，隨著添加量的增加，所制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的負荷粘度和彈性系數(shù)增加。另一方面，若初期透明質(zhì)酸反應(yīng)濃度提高，則即使在交聯(lián)劑添加量過低的情況下，也可呈現(xiàn)出相對高的復(fù)合粘度和彈性系數(shù)。

并且，通過實施例2-4的方法，向模具供給實施例1-1至1-5的產(chǎn)物之前進行干燥之后，測定通過改變濃度并制造微結(jié)構(gòu)體的范圍內(nèi)，可最大包含的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的含量，將其呈現(xiàn)在表1。當僅通過交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠制造微結(jié)構(gòu)體時，在超出上述最大含量范圍的情況下，彈性(或復(fù)原力)強大，從而很難向模具注入。具體地，實施例1-1-2的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的固體含量為15％，在通過實施例2-4制造的情況下的微結(jié)構(gòu)體以不均勻的狀態(tài)被干燥，每個結(jié)構(gòu)體的向模具注入的量不同，從而制造出長度不均勻的微結(jié)構(gòu)體(圖4)。

實施例5：均質(zhì)化的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的粘度范圍測定

為了確認在實施例1中制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的粘度范圍，利用粉碎機(活塞均質(zhì)機或球磨機)來使實施例1-1至1-5的產(chǎn)物均質(zhì)化之后，利用粘度計(brookfielddv-iprime)來測定粘度。

防止氣泡發(fā)生并將均質(zhì)化的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠放入燒杯，并以使整體試料的溫度變得均勻的方式在常溫放置2-3小時。之后，在平整的底板固定燒杯，利用lv62至64紡錘(spindle)來以使扭矩(torque)的值處于10-100％范圍的方式調(diào)節(jié)rpm之后，測定開始3分鐘后，讀取穩(wěn)定化粘度值來測定均質(zhì)化的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的粘度。粘度范圍呈現(xiàn)在表2。

表2

在粘度范圍2500000cp狀態(tài)下，在將實施例1-1-1的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠通過實施例2-4制造的情況下，交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠并非均勻地向整個模具注入，而是制造出內(nèi)部空著或者中間部分被切割的微結(jié)構(gòu)體。

實施例6：交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的生物體分解確認(hyaluronidaseassay)

為了確認本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的制造方法的生物體分解抑制效果，對實施例1-1至1-7的產(chǎn)物，實施基于透明質(zhì)酸分解酶的分解實驗。

改變reissig等(amodifiedcolorimetricmethodfortheestimationofn-acetylaminosugar,j.biol.chem.1955,217:959-966)的方法來實施基于透明質(zhì)酸分解酶的生物體外分解實驗。將各個試驗管以相同質(zhì)量裝上實施例1-1至1-7的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠。添加包含透明質(zhì)酸分解酶(hyaluronidase，bovinetestes,sigma-aldrich，美國)500u/ml的0.2m的硫化鉛(pbs)(＝ph7.4)。在37℃的條件下，將上述混合物反應(yīng)6小時至48小時。停止酶反應(yīng)，為了將通過酶反應(yīng)分解的n-乙酰葡糖胺(nag)轉(zhuǎn)換為聚酯酰胺(glucoxazoline)而添加0.8m的硼酸鉀(potassiumborate，ph9.1)之后，在100℃的條件下進行5分鐘加熱。為了測定分解的n-乙酰葡糖胺的量，向上述試驗管添加對二甲氨基苯(dmab，p-dimethylaminobenzaldehyde)顏色試藥之后，在37℃條件下進行30分鐘反應(yīng)。之后，進行離心分離(3000rpm，10分鐘)來取出上等液，通過紫外線，在吸光度585nm中測定分解的交聯(lián)物中的n-乙酰葡糖胺。將非交聯(lián)透明質(zhì)酸的分解率定為100％，將基于實施例1-1至1-7的產(chǎn)物的透明質(zhì)酸分解酶的相對分解抑制效果呈現(xiàn)在表3。

表3

如上述表3所示，實施例1-1至1-7的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠呈現(xiàn)出對于生物內(nèi)存在的透明質(zhì)酸分解酶的抑制效果，因此，與非交聯(lián)透明質(zhì)酸相比，呈現(xiàn)出長時間的皮膚內(nèi)持續(xù)時間，利用交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的微結(jié)構(gòu)體因在生物體內(nèi)持續(xù)時間長，從而呈現(xiàn)出高的皮膚美容改善效果，并可穩(wěn)定地向生物體內(nèi)傳遞有效成分。

實施例7：確認利用交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠制造的微結(jié)構(gòu)體的生物體外酶分解速度(半衰期，透明質(zhì)酸lf-life)

為了確認利用本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠制造的微結(jié)構(gòu)體的制造方法的生物體外酶分解速度的差異，利用實施例1-1至1-7的產(chǎn)物，通過實施例2-2的方法形成微結(jié)構(gòu)體之后，切割成固定大小來實施基于透明質(zhì)酸分解酶的分解實驗，并比較各個微結(jié)構(gòu)體的50％被分解的時間。

向各個試驗管放入上述切割成規(guī)定大小的微結(jié)構(gòu)體，并添加分解酶(hyaluronidase，bovinetestes,sigma-aldrich，美國)[包含16units/ml的0.2mpbs(＝ph7.4)]。在37℃的溫度下，使上述混合物分別反應(yīng)24小時、40小時、48小時、72小時、120小時、216小時及360小時。對應(yīng)各個反應(yīng)時間，停止酶反應(yīng)，為了將通過酶反應(yīng)分解的n-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)換為聚酯酰胺而添加0.8m的硼酸鉀之后，在100℃的條件下進行5分鐘加熱。為了測定分解的n-乙酰葡糖胺的量，向上述試驗管添加對二甲氨基苯(顏色試藥之后，在37℃條件下進行30分鐘反應(yīng)。之后，進行離心分離(3000rpm，10分鐘)來取出上等液，通過紫外線，在吸光度585nm中測定在分解的交聯(lián)物中的n-乙酰葡糖胺。將非交聯(lián)透明質(zhì)酸的分解率定為100％，將基于實施例1-1至實施例1-7的產(chǎn)物的微結(jié)構(gòu)體的透明質(zhì)酸分解酶的相對50％分解速度呈現(xiàn)在表4。

表4

實施例8：利用交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠制造的微結(jié)構(gòu)體的膨潤度實驗

交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠在干燥之后，若再次加入水，則呈現(xiàn)出高的膨潤度，當制造微結(jié)構(gòu)體時，限制上述膨潤性的范圍，由此，可調(diào)節(jié)微結(jié)構(gòu)體的生物體內(nèi)吸收時間和藥物傳遞速度。

尤其，在生物體內(nèi)使用利用吸收性和膨潤度優(yōu)秀的原料的皮膚插入用微結(jié)構(gòu)體的情況下，可呈現(xiàn)出高的美容效果。

將在實施例1的70℃干燥器中，以6小時以上完全干燥的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠及通過實施例2-1、2-4至2-7及3-2方法干燥的微結(jié)構(gòu)體切割成規(guī)定大小來沉淀在水中之后，以完全實現(xiàn)平行的方式在常溫條件下保管24小時。去除膨潤的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠及結(jié)構(gòu)體來去除表面的水之后測定重量，之后，放入干燥器來完全去除水分之后，測定被干燥的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠及微結(jié)構(gòu)體的重量，通過下式計算結(jié)構(gòu)體的膨潤度。

ws：膨潤的微結(jié)構(gòu)體的重量，wd：干燥的微結(jié)構(gòu)體的重量

表5

如上述表5所示，本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠及微結(jié)構(gòu)體呈現(xiàn)出約為20倍至400倍的膨潤度，在經(jīng)過均質(zhì)化過程的情況下，膨潤度增加至約700倍。并且，當制造微結(jié)構(gòu)體時，按規(guī)定比例混合非交聯(lián)透明質(zhì)酸，由此可調(diào)節(jié)膨潤度范圍。

實施例9：利用交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠及微變形(非鉸鏈)透明質(zhì)酸來制造的微結(jié)構(gòu)體的長時間(7日)膨潤度維持實驗

使實驗例1的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠均質(zhì)化之后，以使交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠：非交聯(lián)透明質(zhì)酸重量比達到1：1的方式混合非交聯(lián)透明質(zhì)酸，通過實驗例3-1的方法制造微結(jié)構(gòu)體，來比較1日至7日之間膨潤度維持程度。

為了膨潤度實驗，準備大小為10-20mg/cm²的通過上述實施例的方法制造的微結(jié)構(gòu)體。在燒瓶中平整地放置棉紗布或無紡布擦拭器，添加生理食鹽水(pbs)或包含0.003％的亞甲藍(methyleneblue)的生理食鹽水并進行充分的浸漬。使微結(jié)構(gòu)體樣本達到0.01g的相同重量之后，放在浸漬狀態(tài)的棉紗布或無紡布擦拭器，以防止棉紗布或無紡布擦拭器干燥的方式蓋住燒瓶的蓋之后，在37℃的燒杯保管。在第1日、第2日、第3日、第6日及第7日，測定膨潤的微結(jié)構(gòu)體的重量來觀察膨潤度的變化。

利用實施例8的計算式來計算膨潤度，將其呈現(xiàn)在以下表6。

表6

如上述表6所示，僅通過非交聯(lián)透明質(zhì)酸制造的微結(jié)構(gòu)體完全沒有呈現(xiàn)出基于生理食鹽水的膨潤度，相反，混合通過實施例1的方法制造的透明質(zhì)酸水凝膠和非交聯(lián)透明質(zhì)酸之后，通過實施例3-1的方法制造的微結(jié)構(gòu)體的情況下，呈現(xiàn)出高的膨潤度，上述膨潤度在7日內(nèi)沒有太大的變化。

觀察上述微結(jié)構(gòu)體的形態(tài)的結(jié)構(gòu)，僅通過非交聯(lián)透明質(zhì)酸制造的微結(jié)構(gòu)體完全沒有呈現(xiàn)出基于生理食鹽水的膨潤度，而是均被溶解，從而并不呈現(xiàn)特定形態(tài)，相反，在混合通過實施例1的方法制造的透明質(zhì)酸水凝膠和非交聯(lián)透明質(zhì)酸之后通過實施例3-1的方法制造的微結(jié)構(gòu)體的情況下，水凝膠形態(tài)呈現(xiàn)出高的膨潤度，上述膨潤度在7日內(nèi)沒有太大的變化(圖6)。

實施例10：通過交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠制造的微結(jié)構(gòu)體的皮膚透過(微結(jié)構(gòu)體的機械強度)確認實驗

為了觀察利用上述實施例1-1-3及1-4的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠來分別制造成實施例2-4及2-5的微針的機械強度的變化，將添加交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的微結(jié)構(gòu)體插入豬皮膚之后，通過臺盼藍進行染色來確認是夠在皮膚形成孔。結(jié)果，微針成功地在豬皮膚形成孔(圖7a及7b)。因此，添加交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的微結(jié)構(gòu)體呈現(xiàn)出可透過皮膚的充分的機械強度，因此，可在皮膚有效傳遞活性成分。

比較例2：當利用實施例2-3的方法制造微結(jié)構(gòu)體時，所施加的離心力并不充分的情況

在離心力不充分的狀態(tài)下(500g中進行5分鐘離心分離)，在通過實施例2-3的方法制造實施例1-1-4的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的情況下，并未充分施加離心力，交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠無法向模具末端傳遞，末端并未尖銳，從而，整體上制造了不均質(zhì)的微結(jié)構(gòu)體(圖8)。

比較例3：當利用實施例3-1的方法制造微結(jié)構(gòu)體時，減壓注入并不充分的情況

當利用實施例1-1-5的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠及非交聯(lián)透明質(zhì)酸混合物(1:10)來通過實施例3-1的方法制造微結(jié)構(gòu)體時，確認了減壓狀態(tài)并未充分持續(xù)，而是注入的情況下(650mmhg，3分鐘減壓注入)，上述混合物并未向模具末端傳遞，從而末端并未尖銳，整體長度并不恒定的微結(jié)構(gòu)體(圖9)。

比較例4：當利用實施例3-2的方法來制造微結(jié)構(gòu)體時，追加干燥過程并不充分的情況

當利用實施例1-1-2的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠及非交聯(lián)透明質(zhì)酸混合物(1:10)來通過實施例3-2的方法制造微結(jié)構(gòu)體時，在并未充分進行追加干燥工序的情況下(50℃條件下5分鐘的追加干燥)，上述混合物并未完全干燥，從而制造除末端彎曲的微結(jié)構(gòu)體(圖10)。

以上，詳細說明了本發(fā)明的特定部分，對本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，這種具體記述只是優(yōu)選實施例，本發(fā)明的范圍并不局限于此。因此，本發(fā)明的實際范圍通過發(fā)明要求保護范圍和其的等同技術(shù)方案來定義。