1.一種艾塞那肽的制備方法，其特征在于，所述方法通過(guò)H-Ser(tBu)-CONH2以及如下三個(gè)片段的全保護(hù)片段制備得到His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-COOH，Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-COOH，Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-COOH。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其中所述全保護(hù)的片段為Boc-His(Trt)-Gly-Glu(otBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr-Ser(tBu)-Asp(otBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-COOH，F(xiàn)moc-Met-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(otBu)-Trp-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-COOH，F(xiàn)moc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-COOH。
3.如權(quán)利要求2所述制備方法，其中所述制備方法包括如下步驟：
(1)片段合成
合成H-Ser(tBu)-CONH2和3個(gè)全保護(hù)片段；
(2)片段組裝連接以及切割得到產(chǎn)品
將步驟(1)制備得到H-Ser(tBu)-CONH2和3個(gè)全保護(hù)片段按照艾塞那肽的氨基酸序列進(jìn)行液相片段組裝連接，得到氮端和側(cè)鏈保護(hù)的艾塞那肽，然后切割處理，得到艾塞那肽粗品，經(jīng)純化得到艾塞那肽產(chǎn)品。
4.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述制備方法，其中所述H2N-Ser(tBu)-CONH2的制備方法如下：將Fmoc-Ser(tBu)-OH、1-羥基苯丙三唑與N,N-二異丙基碳二亞胺按照摩爾比為1:(2-4):(2-4)在有機(jī)溶劑中進(jìn)行反應(yīng)得到反應(yīng)混合液，在該反應(yīng)混合液中加入四氫呋喃與氨的甲醇飽和溶液的混合液，之后分離、純化得到產(chǎn)品。
5.如權(quán)利要求4所述制備方法，所述Fmoc-Ser(tBu)-OH、1-羥基苯丙三唑和N,N-二異丙基碳二亞胺的摩爾比為1:3:3；所述四氫呋喃與氨的甲醇飽和溶液的體積比為1:(0.5-1.5)，優(yōu)選為1:1；所述有機(jī)溶劑為二氯甲烷。
6.如權(quán)利要求2-5任一項(xiàng)所述制備方法，其中所述全保護(hù)片段的是通過(guò)Fmoc-氨基酸-2-CTC Resin制備得到的，其中所述Fmoc-氨基酸-2-CTC Resin是以2-chlorotrityl chloride resin為原料制備得到。
7.如權(quán)利要求2-6任一項(xiàng)所述制備方法，其中所述全保護(hù)片段的制備方法包括如下步驟：
(1)氨基酸的連接：將N端氨基酸形成Fmoc-氨基酸-2-CTC Resin結(jié)構(gòu)，之后依次連接N端被Fmoc保護(hù)的，支鏈也被保護(hù)的羥基氨基酸形成氨基酸鏈的2-CTC Resin結(jié)構(gòu)；所述N端被Fmoc保護(hù)的，支鏈也被保護(hù)的氨基酸表示為Fmoc-氨基酸(保護(hù)基)-OH；以及
(2)切割處理：將步驟(1)得到的氨基酸鏈的2-CTC Resin結(jié)構(gòu)進(jìn)行切割得到所述全保護(hù)片段。
8.如權(quán)利要求2-7任一項(xiàng)所述制備方法，其中，所述Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-COOH的制備方法如下：
將Fmoc-Pro-2-CTC Resin上依次連接Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Gly-OH后得到Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-2-CTC Resin；對(duì)其切割得到所述產(chǎn)品；
所述Fmoc-Met-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(otBu)-Trp-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-COOH的制備方法如下：
將Fmoc-Gly-2-CTC Resin上依次連接Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fomc-Trp-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fomc-Val-OH、Fomc-Ala-OH、Fomc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fomc-Met-OH，得到Fmoc-Met-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(otBu)-Trp-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-2-CTC Resin，經(jīng)切割得到所述產(chǎn)品；
所述Boc-His(Trt)-Gly-Glu(otBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(otBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-COOH的制備方法如下：
將Fmoc-Gln(Trt)-2-CTC Resin上依次連接Fomc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fomc-Thr(tBu)-OH、Fomc-Phe-OH、Fomc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH，得到Boc-His(Trt)-Gly-Glu(otBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(otBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-2-CTC Resin，經(jīng)切割得到所述產(chǎn)品。
9.如權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)所述制備方法，其中，所述Fmoc-氨基酸-2-CTC Resin的制備方法為：將2-chlorotrityl chloride resin用二氯甲烷溶脹后，與Fmoc-氨基酸-OH、N,N′-二異丙基乙胺反應(yīng)得到，其中所述2-chlor otrityl chloride Resin與Fmoc-氨基酸-OH、N,N′-二異丙基乙胺的摩爾比為1:1:4。
10.如權(quán)利要求6-9任一項(xiàng)所述制備方法，其中，所述依次連接N端被Fmoc保護(hù)的，支鏈也被保護(hù)的羥基氨基酸(結(jié)構(gòu)為Fmoc-氨基酸(保護(hù)基)-OH)的反應(yīng)條件為：將Fmoc-氨基酸-2-CTC Resin脫Fmoc，后加入N,N-二甲基甲酰胺、待連接的Fmoc-氨基酸(保護(hù)基)-OH、1-羥基苯丙三唑、苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸、N,N′-二異丙基乙胺反應(yīng)得到F moc-氨基酸(保護(hù)基)-2-CTC Resin。
11.如權(quán)利要求10所述制備方法，其中所述待連接的各個(gè)Fmoc-氨基酸(保護(hù)基)-OH與2-chlorotrityl chloride Resin的摩爾比分別均為(1.5-2.5):1，優(yōu)選該比例為2:1；1-羥基苯丙三唑、苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸、N,N′-二異丙基乙胺與2-chlorotrityl chloride Resin的摩爾比(2-4):(2-4):(2-4):1，優(yōu)選摩爾比為3:3:3:1。
12.如權(quán)利要求10或11所述制備方法，其中，所述脫Fmoc的條件是用體積比為1:4的哌啶與N,N-二甲基甲酰胺的混合液進(jìn)行脫Fmoc。
13.如權(quán)利要求3-12任一項(xiàng)所述制備方法，其中，所述片段組裝連接以及切割得到產(chǎn)品的方法包括如下步驟：
(1)制備H2N-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-CONH2
將摩爾比為1:(1.03～1.07)的H2N-Ser(tBu)-CONH2和Fmoc-Gly-Pr o-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-COOH與1-羥基苯丙三唑、N,N-二異丙基碳二亞胺在N,N-二甲基甲酰胺與二甲亞砜、N-甲基吡咯烷酮的混合液中進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)分離、純化得到Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-CONH2；將Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-CONH2用N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、N-甲基吡咯烷酮的混合液溶解，加入哌啶并使哌啶與N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、N-甲基吡咯烷酮的混合液的體積比為1:(3-5)，進(jìn)行反應(yīng)，后進(jìn)行分離、純化得到H2N-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-CONH2；
(2)制備Boc-His(Trt)-Gly-Glu(otBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(otBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(otBu)-Trp-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gl y-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-CONH2
將步驟(1)得到的H2N-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pr o-Ser(tBu)-CONH2與Fmoc-Met-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(otBu)-Trp-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-COOH以摩爾比均為1:(1.03～1.07)的比例按照步驟(1)相同的方法連接得到H2N-Met-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(otBu)-Trp-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-CONH2；然后將得到的H2N-Met-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(otBu)-Trp-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-CONH2與Boc-His(Trt)-Gly-Glu(otBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(otBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-COOH以摩爾比為1:(1.03～1.07)的比例按照步驟(1)相同的方法連接得到Boc-His(Trt)-Gly-Glu(otBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(otBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(otBu)-Trp-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-CONH2；以及(3)切割、純化獲得產(chǎn)品
將步驟(2)得到Boc-His(Trt)-Gly-Glu(otBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(otBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(otBu)-Trp-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-CONH2加入切割液中反應(yīng)，經(jīng)分離、純化得到艾塞那肽粗品，經(jīng)反相色譜純化、冷凍干燥，得到艾塞那肽。
14.如權(quán)利要求12所述制備方法，其中步驟(1)中，所述N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、N-甲基吡咯烷酮的混合液各成分的體積比為1:(0.5-1.5):(0.5-1.5)，優(yōu)選各成分的體積比為1:1:1；所述H2N-Ser(tBu)-CO NH2與1-羥基苯丙三唑、N,N-二異丙基碳二亞胺的摩爾比為1:(5-7):(5-7)，優(yōu)選該摩爾比為1:6:6；所述步驟(2)中，H2N-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-CONH2與1-羥基苯丙三唑、N,N-二異丙基碳二亞胺的摩爾比為1:(5-7):(5-7)，優(yōu)選該摩爾比為1:6:6；H2N-Met-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(otBu)-Trp-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-CONH2與1-羥基苯丙三唑、N,N-二異丙基碳二亞胺的摩爾比為1:(5-7):(5-7)，優(yōu)選該摩爾比為1:6:6。
15.如權(quán)利要求14所述制備方法，所述切割液為質(zhì)量百分比組成為三氟乙酸83％、苯酚5％、苯甲硫醚4％、水3％、三異丙基硅烷5％的混合溶液。
16.權(quán)利要求1-15任一項(xiàng)所述制備方法制備得到的艾塞那肽產(chǎn)品，其純度高于98％。