本發(fā)明總體涉及肽領域，更具體而言，本發(fā)明涉及用于修復軟骨和/或治療骨關節(jié)炎的肽及包含所述肽的藥物。

背景技術：

骨關節(jié)炎(osteoarthritis，OA)是一種常見的關節(jié)疾病，表現為關節(jié)疼痛、僵硬，軟骨損傷是導致骨關節(jié)炎的主要成因。本病在中年以后多發(fā)，女性多于男性，40歲人群的患病率為10％-17％，60歲以上為50％，而在75歲以上人群則高達80％。該病有一定的致殘率。而隨著人口的日益老齡化，骨關節(jié)炎將成為影響人們生活質量的重要問題，骨關節(jié)炎藥物市場需求將不斷擴大。

目前臨床上對于骨關節(jié)炎的治療藥物分為特異性治療藥物與非特異性治療藥物。非特異性治療藥物以鎮(zhèn)痛和控制癥狀為主，但對軟骨沒有保護作用，如非甾體抗炎藥等。特異性治療藥物可保護關節(jié)軟骨，延緩骨關節(jié)炎進展，如氨基葡萄糖、硫酸軟骨素、雙膦酸鹽等，但一般起效較慢，需治療數周才見效，而且對受損軟骨的再生沒有作用。因此開發(fā)一種安全性好、療效突出的新型骨關節(jié)炎治療藥物成為醫(yī)學界的一大目標。

軟骨損傷是導致骨關節(jié)炎的主要成因，關節(jié)軟骨是由豐富的細胞外基質(ECM)和嵌于其中的少數軟骨細胞所組成。軟骨細胞的代謝受到許多細胞因子的調節(jié)，其中，骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)對骨和軟骨的合成和代謝具有重要的作用。

骨形態(tài)發(fā)生蛋白又稱骨形成蛋白，是一類能在骨骼外異位誘導骨和軟骨形成的酸性多肽。BMP是疏水性酸性糖蛋白，其分子量為18000D，由10余種氨基酸組成。在酸性條件下性能穩(wěn)定，pH值7.2的溶液中有一定的溶解度，pH值大于8.5完全失活。

BMP是屬于TGF-β超家族的一類多功能生長因子，現已有超過20個家族成員被證實和描述，大量文獻指出，BMP可以誘導間充質細胞增殖、分化為成骨細胞或軟骨細胞，在骨的發(fā)生、誘導、修復等方面發(fā)揮關鍵作用，能夠影響細胞的生長、分化和凋亡，它能夠明顯促進培養(yǎng)的軟骨細胞的生長和成熟，并且在多種組織的發(fā)生發(fā)育過程中起著關鍵作用。

BMP-2是一種酸性多肽，其誘導骨髓間充質干細胞向成骨定向分化的能力在BMP超家族中最強，但半衰期比較短，治療濃度難以維持，不能在有效的時間內作用于更多的靶細胞，故其誘導活性難以得到充分的發(fā)揮，對BMP-2的臨床應用造成了極大的局限。目前在研的BMP-2類的藥物，多為重組BMP-2，如前所述，此類蛋白穩(wěn)定性不佳，半衰期短，因此急需開發(fā)一種新型藥物克服重組BMP-2存在的缺陷。

技術實現要素：

本發(fā)明旨在以BMP-2的氨基酸序列為來源，開發(fā)出一種穩(wěn)定的可以用于修復軟骨和/或治療骨關節(jié)炎的新型肽。

本發(fā)明的目的通過以下技術方案來實現：

第一方面，本發(fā)明涉及一種用于修復軟骨和/或治療骨關節(jié)炎的肽(稱為BM23肽)，該肽通過對天然BMP-2的多肽片段進行突變和修飾而得，其包含23個氨基酸，氨基酸序列為GlnLeuLysHisArgAsnHarHisArgIleLysThrGlySerThrAsnHisGlyLeuValGlnSerLeu(SEQ ID NO:1)，其中第1位氨基酸為D-型谷氨酰胺，第7位氨基酸為高精氨酸，第23位氨基酸為酰胺化的亮氨酸。

優(yōu)選的，該肽可以用于修復軟骨，和/或用于治療骨關節(jié)炎。

優(yōu)選的，該肽的羧基端可以經過修飾，包括酰胺化或羰基化，優(yōu)選酰胺化。

優(yōu)選的，該肽用于軟骨損傷和/或骨關節(jié)炎的治療的有效劑量為1-10mg。

優(yōu)選的，該肽可以通過修飾來形成嵌合分子，所述嵌合分子包括所述肽與免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)或人血清白蛋白(HSA)融合形成的融合蛋白。

優(yōu)選的，該肽與其它治療骨關節(jié)炎的藥物聯用治療骨關節(jié)炎，包括透明質酸、非甾體抗炎藥等。

第二方面，本發(fā)明涉及BM23肽的藥學上可接受的鹽，包括其醋酸鹽、鹽酸鹽、磷酸鹽或乙酸鹽，優(yōu)選醋酸鹽。

第三方面，本發(fā)明涉及一種藥物，其特征在于，該藥物含有治療有效劑量的BM23肽和藥學上可接受的載體。

優(yōu)選的，所述藥學上可接受的載體是鹽水溶液，所述藥物是可注射的。

優(yōu)選的，所述藥學上可接受的載體是膠體溶液，包括透明質酸凝膠，所述藥物是可注射的。

優(yōu)選的，所述藥物的給藥方式為注射給藥，包括膝關節(jié)腔注射或皮下注射。

第四方面，本發(fā)明涉及BM23肽在制備用于修復軟骨和/或治療骨關節(jié)炎的藥物中的用途。

與現有技術相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點：本發(fā)明的BM23肽克服了BMP-2類藥物不穩(wěn)定、半衰期短的缺點，其具有顯著改善的穩(wěn)定性和體內功效持續(xù)時間，具有促進間充質干細胞分化為軟骨細胞和促進軟骨細胞增殖的活性，由此可以促進受損軟骨的修復，改善骨關節(jié)炎的癥狀。

附圖說明

圖1為BM23肽固相合成的HPLC檢測。

圖2是顯示分離培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)的顯微鏡照片，其中A)為大鼠BMSCs原代分離P0培養(yǎng)(10×10放大)；B)為大鼠BMSCs原代分離后傳代P1培養(yǎng)(10×10放大)。

圖3為BM23肽對Ⅱ型膠原(COL2A1)mRNA表達的作用，通過定量PCR檢測COL2A1mRNA的相對表達量，以PBS為陰性對照，人胰島素生長因子(IGF-1)為陽性對照。

圖4為BM23肽對蛋白多糖(ACAN)mRNA表達的作用，通過定量PCR檢測ACAN mRNA的相對表達量，以PBS為陰性對照，IGF-1為陽性對照。

圖5為對照組和BM23肽處理間充質干細胞的COL2A1免疫組化結果，其中A)為PBS處理組，COL2A1的免疫組化染色結果；B)為1μM BM23肽處理，COL2A1的免疫組化染色結果。

圖6為BM23肽對大鼠軟骨細胞增殖的作用，通過MTS法測量細胞增殖，以PBS為陰性對照，IGF-1為陽性對照。

圖7為對照組和BM23肽組處理軟骨細胞的COL2A1免疫組化結果，其中A)為PBS處理組，COL2A1的免疫組化染色結果；B)為1μM BM23肽處理組，COL2A1的免疫組化染色結果。

圖8為對照組和BM23肽高劑量組治療的大體觀察結果，其中A)為PBS治療組，首次給藥后90天，軟骨修復情況；B)為BM23肽治療組，首次給藥后90天，軟骨修復情況。

圖9為對照組和BM23肽不同劑量組治療的大體觀察評分。

圖10為對照組和BM23肽高劑量組的組織病理切片，其中A)為PBS治療組，首次給藥后90天，軟骨的組織病理切片；B)為BM23肽治療組，首次給藥后90天，軟骨的組織病理切片。

圖11為對照組和BM23肽不同劑量組治療的組織病理評分。

圖12為BM23肽和BMP-2的血漿穩(wěn)定性比較。

圖13為BM23肽和BMP-2的血漿清除半衰期比較。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。以下實施例將有助于本領域的技術人員進一步理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。應當指出的，對本領域的技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，可以做出許多變化和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。

實施例1 BM23肽的固相合成

BM23肽(SEQ ID NO：1，其中第1位、第7位和第23位氨基酸分別采用D-型谷氨酰胺、高精氨酸和酰胺化的亮氨酸)委托上海翱博生物科技有限公司采用常規(guī)固相工藝合成，合成的肽純度＞98％，見圖1。

實施例2間充質干細胞(BMSCs)的分離和培養(yǎng)

8周齡SD大鼠3只，以脫臼法處死，70％乙醇消毒5分鐘。然后以剪刀剪開腹壁各層，將切口拉至股骨，小心分離股骨上的肌肉。

將股骨中間剪斷，用注射器吸取低糖DMEM培養(yǎng)液(含肝素1mL/L)反復沖洗骨髓腔，以沖出骨髓。

用注射器反復沖打骨髓液，依次通過7號和4號針頭，制成單細胞懸液。

將單細胞懸液離心(1500r/分鐘，10分鐘)，棄上清。加入含10％FBS的DMEM-F12完全培養(yǎng)基，以10⁷個/mL的密度接種在培養(yǎng)瓶中，置37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

利用差異貼壁培養(yǎng)法純化細胞。于接種后48h更換培養(yǎng)液，以后每3d更換培養(yǎng)液，以除去不貼壁的造血細胞。

至細胞長滿至80％-90％，進行傳代：去除培養(yǎng)液，PBS洗滌以去除殘留的血清。吸去PBS。

加BMSCs消化液(0.25％胰蛋白酶+0.02％EDTA液)輕輕搖動使至剛好蓋過瓶底，消化時間約為5分鐘，進行傳代。

將細胞轉移至離心管，離心，1500r/分鐘，10分鐘，去上清，加入間充質干細胞的完全培養(yǎng)液重懸細胞，見圖2A、B。

實施例3 BM23肽體外對間充質干細胞分化的作用

成軟骨誘導

將BM23肽用磷酸緩沖液(PBS)溶解。

用含不同濃度的BM23肽(0.1、0.3和1μM)的完全成軟骨培養(yǎng)基(購自廣州賽業(yè)生物科技有限公司，貨號：RASMX-90011)重懸細胞，使得BMSCs的濃度為每毫升5.0×10⁵個細胞。并以PBS為陰性對照，1μM人胰島素生長因子(IGF-1，購自北京義翹神州生物技術有限公司)為陽性對照。

處理的BMSCs置于37℃，5％CO2飽和濕度條件下孵育。每2-3天更換培養(yǎng)基，每管加入0.5mL新鮮完全成軟骨培養(yǎng)基。

一般持續(xù)誘導28天后可以收樣，可對軟骨球進行福爾馬林固定和石蠟包埋切片后阿利新藍染色。

定量PCR檢測

總RNA抽提：收集細胞，Trizol法提取總RNA，逆轉錄得cDNA，反應條件為：30℃保溫10分鐘；42℃保溫60分鐘；85℃保溫10分鐘。

PCR：

以cDNA為模板，利用下列引物，進行定量PCR：

①rat COL2A1-F1：5’GCGGAGACTACTGGATTGAT 3’

②rat COL2A1-R1：5’CGTTCATGGTCTCTCCAAAC 3’

③ratACAN-F1：5’GAGTTCCCAGATCTGCATGG 3’

④rat ACAN-R1：5’TGGTGCTGACGGTAACATTC 3’

反應條件：50℃2分鐘；95℃2分鐘；95℃15秒，60℃32秒讀板，40個循環(huán)。

融解曲線分析：溫度60℃-95℃。每個樣重復3次。

組織石蠟包埋：

4％多聚甲醛固定24～36小時。

取出標本洗去固定液，切取合適大小材料(厚度0.2cm左右)進行包埋。

70％、80％、90％和95％乙醇各一次，每次60分鐘；100％乙醇二次，每次50分鐘。

1/2二甲苯-1/2無水乙醇一次，二甲苯兩次，每次15分鐘。石蠟(60℃)兩次，每次60分鐘。石蠟包埋。

免疫組化檢測：

二甲苯脫蠟2次，每次10分鐘。依次經100％，95％，85％，75％，50％乙醇和純水各1次，每次5分鐘。

PBS洗5分鐘。過氧化氫室溫濕盒孵育10分鐘。PBS洗5分鐘，3次。

于微波爐中高火加熱至沸騰，低火維持沸騰繼續(xù)加熱8分鐘(檸檬酸抗原修復液)，待水溫自然降至室溫。PBS洗5分鐘。

10％正常山羊血清室溫濕盒封閉30分鐘。一抗4℃孵育過夜。PBS洗5分鐘，3次。二抗室溫濕盒30分鐘。PBS洗5分鐘，3次。DAB顯色。PBS洗5分鐘，3次。蘇木素復染。水洗去多余染液，分化數秒。水洗，返藍。50％，75％，85％，95％和100％乙醇梯度脫水各1次，二甲苯透明2次，每次5分鐘。中性樹膠封片。

結果

1.BM23肽對COL2A1和ACAN基因表達的誘導作用

不同濃度的BM23肽誘導COL2A1、ACAN的mRNA表達量發(fā)生變化，并表現出明顯的量效關系和時效關系，具體而言，隨BM23肽濃度的提高，COL2A1、ACAN的mRNA表達量相應提高，與PBS處理相比，0.1μM BM23肽處理作用不顯著，0.3和1μM BM23肽處理作用差異顯著。并且BM23肽對COL2A1、ACAN的mRNA表達量的促進作用隨時間增加而增加，21天的表達量高于7天，見圖3和圖4。

2.COL2A1的免疫組化結果

見圖5A、B，與PBS處理組相比，1μM BM23肽處理組的COL2A1免疫組化染色更加明顯，表明COL2A1蛋白的表達量顯著提高。

綜合以上結果，作為軟骨標志基因的COL2A1、ACAN表達量增加，說明BM23肽促進間充質干細胞向軟骨細胞的分化。

實施例4軟骨細胞分離和培養(yǎng)

無菌條件下切取2月齡新西蘭大白兔關節(jié)軟骨，剪成1mm大小，37℃下按下列程序依次消化：

①2mg/ml透明質酸酶消化45分鐘；

②2mg/ml胰蛋白酶消化45分鐘；

③4mg/mlⅡ型膠原酶消化3小時，沖洗離心(1500r/分鐘)5分鐘，將沉淀物置入含15％胎牛血清DMEM培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。

實施例5 BM23肽體外對軟骨細胞增殖的作用

軟骨細胞的鑒定：

取少量原代軟骨細胞涂片后用I型膠原抗體SABC免疫檢測，染成棕黃色，說明分泌I型膠原，證實為軟骨細胞。

MTS法測軟骨細胞增殖

軟骨細胞按照2×10⁴個/孔接種于96孔板，加入不同濃度BM23肽(0.1、0.3和1μM)，并以PBS為陰性對照組，IGF-1(1μM)為陽性對照組。

37℃、5％CO₂的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天。

每孔加20μl MTS混合液，繼續(xù)培養(yǎng)3-4小時顯色。

檢測前搖晃培養(yǎng)板10秒鐘，混勻顏色。在酶聯檢測儀上，波長570nm處檢測各孔的光吸收值(OD)。

免疫組化測COL2A1

軟骨細胞以3.5×10⁵/ml接種于放置有蓋玻片的6孔培養(yǎng)板中，加入不同濃度BM23肽，并以PBS為陰性對照組，IGF-1為陽性對照組。

37℃、5％CO₂的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天。

按實施例3方法進行免疫組化染色。

結果

BM23肽對軟骨細胞增殖的促進作用

不同濃度的BM23肽處理5天后，軟骨細胞增殖顯示出顯著的差異。與PBS組相比，BM23肽和陽性對照均顯著促進軟骨細胞的增殖，見圖6。

BM23肽對COL2A1表達的促進作用

與PBS處理組相比，1μM BM23肽處理組的COL2A1免疫組化染色更加明顯，表明COL2A1蛋白表達量顯著提高，見圖7A、B。

綜合以上結果，說明BM23肽在體外可以促進軟骨細胞增殖。

實施例6兔軟骨修復模型

動物：新西蘭兔，2月齡，雌雄各半

造模：新西蘭兔以6％戊巴比妥鈉(0.7mL/kg)耳緣靜脈麻醉。麻醉后，左側后退膝關節(jié)內側縱向切口，長約3cm，依次切開皮膚、皮下組織和關節(jié)囊，保持髕韌帶完整性，將髕骨翻向外側，顯露股骨髁。用直徑4.2mm鉆頭在膝關節(jié)屈曲90°時髕骨所對應股骨內、外側髁間關節(jié)面中部鉆出直徑4.2mm、深3mm的關節(jié)軟骨缺損區(qū)(以可見軟骨下骨滲血為標準)。缺損部位用生理鹽水沖洗，不作其他處理。將髕骨復位后，依次縫合肌肉和皮膚切口。動物術后立即肌肉注射青霉素鈉，1次/天，連續(xù)3天，以防感染。

給藥：將膝關節(jié)軟骨缺損的新西蘭兔分成四組，分別為陰性對照組、受試物低劑量組(1mg/只)、中劑量組(3mg/只)和高劑量組(10mg/只)，12只/組，雌雄各半。各組動物于造模后的第6天，進行關節(jié)腔給藥，分別給予受試物1、3、10mg/只，給藥體積分別為0.2ml。

處死及觀察：在首次給藥后90天，每組分別取6只動物(雌雄各半)處死，解剖并觀察膝關節(jié)軟骨修復情況。

(1)大體觀察：剖檢時，剖開關節(jié)腔，暴露髕骨關節(jié)面，觀察缺損填充邊緣修復情況，軟骨表面平整度，新生軟骨顏色等。

并按照以下標準打分：

0分：關節(jié)面光整，色澤如常；

1分：關節(jié)面粗糙，有小的裂隙且色澤灰暗；

2分：軟骨缺損深達軟骨中層；

3分：關節(jié)面潰瘍形成，軟骨缺損深達軟骨深層；

4分：軟骨剝脫，軟骨下骨質裸露。

(2)組織學病理觀察：光鏡下觀察，根據ICRS病理學評分標準評分，

0級軟骨表面平整，軟骨完整。

1級軟骨表面淺層纖維形成，且不均勻。

2級軟骨表面不連續(xù)，伴有細胞增殖，在Ⅱ-Ⅲ層異染物質增加或減少。

3級軟骨皸裂擴散至Ⅲ層或出現侵蝕。

4級軟骨侵蝕加重，關節(jié)軟骨出現了損害。

5級關節(jié)軟骨剝脫。

6級關節(jié)變形

(3)HE染色

動物經麻醉放血處死后，剝離關節(jié)軟骨組織用10％中性福爾馬林固定，經脫水、常規(guī)石蠟包埋制片及HE染色封片，光鏡檢查。

結果

給藥90天后，兔膝關節(jié)缺損處大體觀察

陰性對照組：

軟骨缺陷區(qū)凹陷明顯，表面較平坦、完整。周邊軟骨可見爬行生長，但無光澤，大體評分為4.3分；

低劑量組：

軟骨缺陷區(qū)凹陷較明顯，表面較平坦，周邊軟骨可見爬行生長，但無光澤，大體觀察評分為3.7分；

中劑量組：

軟骨缺陷區(qū)凹陷與正常區(qū)域無明顯高低，表面較平坦、完整。周邊軟骨覆蓋，光澤與正常軟骨無差異。大體觀察評分為3.0分；

高劑量組：

軟骨缺陷區(qū)凹陷與正常區(qū)域無明顯高低，表面平坦、完整。周邊軟骨覆蓋，光澤與正常軟骨無差別。大體觀察評分為2.1分。

大體觀察結果見圖8，評分見圖9。

組織病理學檢查結果：

陰性對照組

6/6例動物關節(jié)囊腔光滑、未見異常；6/6例動物軟骨缺損區(qū)以纖維組織增生為主，內有少量軟骨細胞；交界處有裂隙，兩端整合不良。6/6例動物關節(jié)軟骨組織病理學評分均為4.3分。

低劑量組

全部例動物關節(jié)囊腔光滑、未見異常；軟骨缺損區(qū)以纖維組織增生為主，內有一些軟骨細胞；表層細胞覆蓋，交界處無裂隙，兩端整合良好；其中1/6例動物可見周邊軟骨爬行并可見少量軟骨基質形成，1/6例動物缺損區(qū)略凹陷。6/6例動物關節(jié)軟骨組織病理學評分均為3.7分。

中劑量組

全部動物關節(jié)囊腔光滑、未見異常；6/6例動物軟骨缺損區(qū)表層纖維組織增生，多量軟骨細胞及軟骨基質形成，表層細胞覆蓋并連續(xù)，表層不規(guī)則，交界處無裂隙，兩端整合良好。6/6例動物關節(jié)軟骨組織病理學評分均為3.0分。

高劑量組

全部動物關節(jié)囊腔光滑、未見異常；軟骨缺損區(qū)表層纖維組織增生，內有多量軟骨細胞增生及軟骨基質形成，表層細胞覆蓋并連續(xù)，交界處無裂隙，兩端整合良好。6/6例動物關節(jié)軟骨組織病理學評分均為2.1分。

組織病理切片見圖10，評分見圖11。

以上結果說明，BM23肽在體內對軟骨損傷具有明顯的修復作用，并且該作用顯示劑量依賴關系。

實施例7血漿穩(wěn)定性比較

血漿制備：取健康志愿者抗凝全血10ml，2000rpm離心10分鐘，吸取淡黃色上清即為血漿；

將BM23肽、BMP-2(購自北京義翹神州生物技術有限公司)按照終濃度為50ug/ml分別與人血漿37℃孵育。

在10、30、60、120、240分鐘分別取樣20ul，采用HPLC分別檢測血漿中BM23肽、BMP-2的含量，以相對峰面積(％)表示。

結果：在血漿中孵育直至4小時，BM23肽濃度保持穩(wěn)定，而BMP-2在血漿中孵育30分鐘后，濃度即出現明顯下降(圖12)，表明BM23肽在血漿中的穩(wěn)定性優(yōu)于BMP-2。

實施例8體內血漿清除半衰期的比較

為了證實合成的BM23肽具有較長的半衰期，利用LC/MSMS方法檢測BM23肽和BMP-2在家兔體內的半衰期。

LC/MSMS方法學建立，Finnigan TSQ Discovery Max液質聯用儀，配以Surveyor HPLC系統，檢測限為1-1000ng/ml，回收率大于80％。

取6只新西蘭兔，隨機分成兩組(每組3只)，每組分別靜脈注射0.5mg/kg BM23肽和BMP-2，并在5、10、15、30、60、120、180、300分鐘分別取血樣0.5ml于抗凝管中，2000rpm離心，去血漿-20℃保存至測定。

利用LC/MSMS法測定血藥濃度，取血漿100μl，加入含IS 2000ng/ml乙腈：甲醇(70:30)的混合溶劑500μl，振蕩，12000rpm離心10分鐘，上清液進樣20μl，進行LC/MSMS分析，采用3P97藥代動力學軟件計算主要藥代動力學參數。

測定結果顯示，BM23肽的半衰期為123±38分鐘，BMP-2的半衰期為23±11分鐘，BM23肽的半衰期顯著高于BMP-2(圖13)。BM23肽較長的半衰期有利于藥物持久的發(fā)揮藥效，降低給藥次數。

由上述實施例可知，本發(fā)明BM23肽在體外可以促進間充質干細胞向軟骨細胞分化，并刺激軟骨細胞的增殖；在體內，BM23肽對軟骨損傷具有明顯的修復作用，且該作用成劑量依賴關系；并且BM23肽在血漿中穩(wěn)定性優(yōu)于BMP-2，體內血漿清除半衰期也明顯長于BMP-2。因此，本發(fā)明的BM23肽呈現出優(yōu)于BMP-2的穩(wěn)定性，具有更長的作用時間，可用于軟骨修復和/或骨關節(jié)炎的治療中。

序列表

<110> 廣州領晟醫(yī)療科技有限公司

<120> 一種用于促進軟骨修復和/或治療骨關節(jié)炎的肽

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Gln Leu Lys His Arg Asn Har His Arg Ile Lys Thr Gly Ser Thr Asn

1 5 10 15

His Gly Leu Val Gln Ser Leu

20