一種胸腺法新緩釋微球制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種胸腺法新緩釋微球制劑及其制備方法，一種胸腺法新緩釋微球制劑，它是由微球重量0.1%?30%的胸腺法新和微球重量50%?99.9%的分子量為5000?200000道爾頓的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0%?20%的藥學(xué)上可接受的其他輔料制備而成的制劑。本發(fā)明還提供了一種制備胸腺法新緩釋微球制劑的制備方法，即高壓靜電微膠囊成型法。本發(fā)明制備的胸腺法新緩釋微球達(dá)到了胸腺法新的有效包埋并緩慢釋放，緩釋效果可以達(dá)到40天，可有效降低胸腺法新的毒副作用，提高生物利用度，延長(zhǎng)代謝半衰期，同時(shí)減少給藥次數(shù)，為患者減輕經(jīng)濟(jì)與精神負(fù)擔(dān)。
【專利說(shuō)明】
一種胸腺法新緩釋微球制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于緩釋微球制劑技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種免疫調(diào)節(jié)劑的長(zhǎng)效緩釋微球制劑及其制備方法，具體涉及一種胸腺法新緩釋微球制劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]胸腺法新，即胸腺肽α?，是1984年發(fā)現(xiàn)并由胸腺分泌的一種重要的T淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)因子，與細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)有關(guān)。胸腺法新是一個(gè)N端乙?；乃嵝远嚯模?8個(gè)氨基酸殘基組成，主要用于慢性乙肝及作為免疫損害病者的免疫應(yīng)答增強(qiáng)劑。
[0003]胸腺法新作為一種免疫調(diào)節(jié)劑，它的良好療效已得到確證，臨床應(yīng)用前景可觀。乙型肝炎病毒(HBV)感染是人類最常見(jiàn)的病毒性感染之一，全世界慢性HBV感染者約有3億，其中大部分在亞洲地區(qū)。我國(guó)人群中慢性HBV攜帶者約占1 % -15 %，慢性乙型肝炎(CHB)患者中每年發(fā)生肝硬化和肝細(xì)胞癌者分別占2 %和I %。顯然，積極治療HBV感染，阻止其向肝硬化和肝癌發(fā)展，具有重要意義。此外，胸腺法新對(duì)愛(ài)滋病、惡性腫瘤等疾病具有良好療效。
[0004]目前已有注射用胸腺法新上市銷售，該制劑為凍干粉針劑，其在治療慢性乙型肝炎的推薦量是每針1.6mg皮下注射每周二次，兩劑量大約相隔3-4日，治療應(yīng)連續(xù)6個(gè)月(52針)期間不可中斷。這樣的給藥方式病人的順應(yīng)性很差，因此開發(fā)出能夠每月給藥一次的緩釋微球制劑可以極大的提尚病人的順應(yīng)性，提尚該疾病的治愈率。
[0005]當(dāng)前胸腺法新緩釋微球制劑的制備方法的文獻(xiàn)與專利越來(lái)越多，主要有復(fù)乳法(W/0/W)、乳化溶劑擴(kuò)散法、熔融擠出法等，其中復(fù)乳法是一種制備聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)緩釋微球的典型方法。中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)的鐘延強(qiáng)等發(fā)表的文章和專利(CN200610118413.5)中采用了復(fù)乳法(W/0/W)制備了胸腺法新緩釋微球。專利申請(qǐng)?zhí)枮?00310119386.X公開了一種利用PLGA提取、合成胸腺肽微囊緩釋針的方法。何熠等，胸腺肽聚乳酸微球的制備和釋藥性能研究，中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2006，37(3)，公開了用乳化溶劑揮發(fā)制備胸腺肽聚乳酸微球，其中以PLGA為載體，以乳化揮發(fā)法制備微球。鄒良等，胸腺肽明膠微球的制備和體外釋藥的特征，中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志2004，24(9)，公開了胸腺肽的明膠微球。用乳化交聯(lián)法制備的胸腺肽微球的研究，以藥物A型明膠為囊材。張海松、陳陽(yáng)述，胡軍高，等，口服胸腺微球的研究，中國(guó)藥房，1999，10(2): 58，等。以上傳統(tǒng)的方法容易存在聚集、融合，分離及純化產(chǎn)品困難，大部分時(shí)間和成本用于除去殘留溶劑和多余藥物，不適宜工業(yè)化生產(chǎn)，而噴霧干燥法、熔融法、鹽析法等操作簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好，但制備過(guò)程比較激烈，所使用的溫度較高或PH值變化較大，對(duì)藥物的穩(wěn)定性有較高的要求，不適合多肽、蛋白類藥物或其他熱敏性物質(zhì)，此外，以上方法制備的胸腺法新緩釋微球表面無(wú)孔，內(nèi)部中空或互相不管通的空洞，使得微球載藥量低，對(duì)給藥不利。因此，當(dāng)前亟需一款可以解決上述缺點(diǎn)的胸腺法新實(shí)心多孔緩釋微球及其制備方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種胸腺法新緩釋微球及其制備方法，所述方法是不需要分離純化、避免了第二次乳液及高溫操作的高壓靜電微膠囊成型法，該法制備的胸腺法新緩釋微球?yàn)榇笮【鶆?、藥物含量高的?shí)心多孔微球，能有效延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)作用時(shí)間，降低了胸腺法新的給藥頻率。
[0007]目前國(guó)內(nèi)還沒(méi)有采用高壓靜電微膠囊成型法制備出胸腺法新-聚乳酸長(zhǎng)效緩釋微球制劑的單位或個(gè)人，且本發(fā)明制備的胸腺法新緩釋微球是國(guó)內(nèi)首次制備的表面開孔，內(nèi)外孔洞相互貫通的胸腺法新-聚乳酸多孔緩釋微球。L-聚乳酸是具有優(yōu)良的生物相容性和生物降解性的聚合物，是經(jīng)CFDA批準(zhǔn)可用作藥物載體，在體內(nèi)代謝的最終產(chǎn)物為0)2和出0，中間產(chǎn)物乳酸也是體內(nèi)正常糖代謝的產(chǎn)物，不會(huì)在重要器官聚集，因此聚乳酸微球作為藥物載體得到了廣泛的研究和應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0009]—種采用高壓靜電微膠囊成型法制備胸腺法新緩釋微球技術(shù)，具體如下:
[0010]I) —定量的L-聚乳酸(PLLA)溶解在有機(jī)溶劑中，得到聚乳酸共聚物濃度為(I %-40% )(W/V，g/ml)的油相，其中有機(jī)溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯中的一種或其任意組合物；穩(wěn)定劑為包含但不僅限于普朗羅尼F_127(Pluronic F127)，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01%_1.2%。[0011 ] 2)將胸腺法新、保護(hù)劑溶、致孔劑溶于水，得胸腺法新為I %-60% (W/V)的內(nèi)水相。
[0012]3)將上述油相與內(nèi)水相混合，用細(xì)胞破碎儀超聲乳化一定時(shí)間，乳化時(shí)間一般為(0.5-2 )min (功率200W、超聲I s，間隔I s)形成均勻、穩(wěn)定的W/0乳液。
[0013]4)將新鮮配備的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%_30%的海藻酸鈉或殼聚糖水溶液作為水相(W)加入上述乳液中，用細(xì)胞破碎儀超聲乳化一定時(shí)間，乳化時(shí)間一般為(0.5-2)min(功率200W、超聲I s，間隔I s)形成均勻、穩(wěn)定的W/0/W乳液。
[0014]5)將制得的W/0/W乳液立即裝入注射器中，通過(guò)高壓微膠囊成型裝置和注射栗，注射到新配制的5%-10%的氯化鈣水溶液中，因海藻酸鈉與氯化鈣相遇反應(yīng)生成海藻酸鈣而形成胸腺法新緩釋微球。
[0015]進(jìn)一步，步驟2)中所述的保護(hù)劑主要為:人血清白蛋白、明膠、海藻糖、甘露糖或甘露醇等中的一種或幾種混合物，其中保護(hù)劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)一般在0.0l%-5.0%,致孔劑包含但不僅限于碳酸氫銨，質(zhì)量百分含量為:0.01 % -1.0 %。
[0016]進(jìn)一步，步驟5)中高壓微膠囊成型裝置的工藝參數(shù)為:電壓25KV;推進(jìn)速度:(81-100)111111/11、236針頭，接收距離(41-60)1111]1。磁力攪拌接收后的溶液60-80111；[11，用漏斗過(guò)濾掉溶液中的白色絮狀物，7000rpm離心5min，即可收集胸腺法新-聚乳酸實(shí)心微球，冷凍干燥以除去H20、二氯甲烷、NH3及C02，可得到干燥的胸腺法新實(shí)心多孔緩釋微球。
[0017]本發(fā)明所制備的胸腺法新多孔緩釋微球制劑可以緩釋30-40天。
【附圖說(shuō)明】
[0018]圖1是本發(fā)明實(shí)施例1制備的胸腺法新緩釋微球的掃描電鏡圖；
[0019]圖2是本發(fā)明實(shí)施例2制備的胸腺法新緩釋微球的掃描電鏡圖；
[0020]圖3是本發(fā)明實(shí)施例3制備的胸腺法新緩釋微球的掃描電鏡圖；
[0021]圖4是本發(fā)明實(shí)施例1制備的胸腺法新緩釋微球制劑的體外累積釋放曲線；
[0022]圖5是本發(fā)明實(shí)施例2制備的胸腺法新緩釋微球制劑的體外累積釋放曲線；
[0023]圖6是本發(fā)明實(shí)施例3制備的胸腺法新緩釋微球制劑的體外累積釋放曲線；
[0024]圖7是本發(fā)明實(shí)施例1、2、3制備的胸腺法新緩釋微球制劑的體外累積釋放曲線對(duì)比圖。
【具體實(shí)施方式】
[0025]實(shí)施例1
[0026]200mg的L-聚乳酸(PLLA)溶解在5ml的二氯甲烷中，得到聚乳酸共聚物的油相，并加入3mg的穩(wěn)定劑普朗羅尼F-127。將80mg胸腺法新、15mg的明膠、0.5ml的碳酸氫錢溶于600ml的注射用水中，將油相加入到水相中，采用細(xì)胞破碎儀超聲乳化1.5min(功率200W、超聲ls，間隔Is)形成均勻、穩(wěn)定的W/0乳液。將上述溶液加入到新配制的100ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的海藻酸鈉水溶液，并用細(xì)胞破碎儀超聲乳化1.5min，超聲乳化條件同上，形成均勻、穩(wěn)定的W/0/W乳液，將制得的W/0/W乳液立即裝入注射器中，通過(guò)高壓微囊成型裝置，注射到500ml配置好的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的氯化鈣溶液中，磁力攪拌乳液1.5小時(shí)，用漏斗過(guò)濾掉白色絮狀物，7000rpm離心5min，收集胸腺法新-PLLA微球。冷凍干燥即得到胸腺法新多孔緩釋微球，微球粒徑小于ΙΟΟμπι，載藥量為5.2%,胸腺法新多孔緩釋微球掃描電鏡如圖1。
[0027]實(shí)施例2
[0028]300mg的L-聚乳酸(PLLA)溶解在1ml的乙酸乙酯中，得到聚乳酸共聚物的油相，并加入3.5mg的穩(wěn)定劑普朗羅尼F-127。將150mg胸腺法新、20mg的海藻糖、4.0ml的碳酸氫銨溶于100ml的注射用水中，將油相加入到水相中，采用細(xì)胞破碎儀超聲乳化1.5min(功率200W、超聲I s，間隔Is)形成均勻、穩(wěn)定的W/0乳液。將上述溶液加入到1500ml新配制的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的海藻酸鈉水溶液，并用細(xì)胞破碎儀超聲乳化1.5min，超聲乳化條件同上，形成均勻、穩(wěn)定的W/0/W乳液，將制得的W/0/W乳液立即裝入注射器中，通過(guò)高壓微囊成型裝置，注射到100ml配置好的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8%的氯化鈣溶液中，磁力攪拌乳液1.5小時(shí)，用漏斗過(guò)濾掉白色絮狀物，7000rpm離心5min，收集胸腺法新-PLLA微球。冷凍干燥即得到胸腺法新多孔緩釋微球，微球粒徑小于ΙΟΟμπι，載藥量為6.0%，胸腺法新多孔緩釋微球掃描電鏡如圖2。
[0029]實(shí)施例3
[0030]400mg的L-聚乳酸(PLLA)溶解在1ml的二氯甲烷中，得到聚乳酸共聚物的油相，并加入4.8mg的穩(wěn)定劑普朗羅尼F-127。將10mg胸腺法新、1mg的海藻糖、1.0ml的碳酸氫銨溶于800ml的注射用水中，將油相加入到水相中，采用細(xì)胞破碎儀超聲乳化1.5min(功率200W、超聲ls，間隔Is)形成均勻、穩(wěn)定的W/0乳液。將上述溶液加入到1200ml新配制的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的海藻酸鈉水溶液，并用細(xì)胞破碎儀超聲乳化1.5min，乳化條件同上，形成均勻、穩(wěn)定的W/0/W乳液，將制得的W/0/W乳液立即裝入注射器中，通過(guò)高壓微囊成型裝置，注射到1200ml配置好的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%的氯化鈣溶液中，磁力攪拌乳液1.5小時(shí)，用漏斗過(guò)濾掉白色絮狀物，7000rpm離心5min，收集胸腺法新-PLLA微球。冷凍干燥即得到胸腺法新多孔緩釋微球，微球粒徑小于ΙΟΟμπι，載藥量為5.8%,胸腺法新多孔緩釋微球掃描電鏡如圖3。
[0031 ] 實(shí)施例4
[0032]胸腺法新緩釋微球體外釋放測(cè)定
[0033]將上述實(shí)施例制備的胸腺法新緩釋微球制劑進(jìn)行體外釋放測(cè)定，測(cè)定方法為:
[0034]精密稱取干燥的含藥微球0.1OOg置于1ml具塞試管中，以pH為7.4的磷酸鹽緩沖液(含0.02%疊氮化鈉作為抑菌劑，0.05%的吐溫80為潤(rùn)濕劑HOml為釋放介質(zhì)，置于恒溫水域搖床中，在震蕩速度10rpm、溫度37 °C ± 0.5 °(:條件下進(jìn)行微球的體外釋放度測(cè)定。分別在O小時(shí)、3小時(shí)、I天、3天、5天、7天、9天、14天、18天、21天、24天、28天、30天、40天各取
0.5ml釋放介質(zhì)用于高效液相色譜法測(cè)定胸腺法新的含量，并補(bǔ)充新鮮的釋放介質(zhì)。圖4、5、
6、7分別為實(shí)施例4、5、6所制備的胸腺法新緩釋微球制劑的體外累計(jì)釋放曲線及對(duì)比曲線。由圖4、5、6、7可以看出，本發(fā)明所制備的胸腺法新緩釋微球制劑具有良好的釋放效果，7天內(nèi)均小于20%，其釋放周期為30-40天。
[0035]以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說(shuō)明。對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，所作出了任何修改、等同替換、改進(jìn)等，都應(yīng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種胸腺法新緩釋微球制劑，其特征在于:它是由微球重量的0.1%-30%的胸腺法新和微球重量的50%-99.9%的分子量為5000-200000道爾頓的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0%_20%的藥學(xué)上可接受的其他輔料制備而成的制劑，所述的緩釋微球平均粒徑為50-1 ΟΟμπι。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑，其特征在于，包含質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.1%-5.0%的保護(hù)劑，該保護(hù)劑為人血清白蛋白、明膠、海藻酸糖或甘露醇中的一種或其中任意組合物。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑，其特征在于，所述的可降解具有生物相容性的高分子材料，選自聚乙交酯-丙交酯、明膠、L-聚乳酸、聚乳酸-乙醇酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、聚乙二醇、羥基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸共聚物中的一種或兩種及以上任意混合物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑，其特征在于，所述的可降解具有生物相容性的高分子材料，優(yōu)選L-聚乳酸、聚乙交酯-丙交酯、聚乳酸-聚乙二醇中的一種，以L-聚乳酸為最佳。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑，其特征在于，所述的可降解具有生物相容性的高分子材料，分子量范圍均在5000-200000道爾頓。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑，其特征在于，所述的胸腺法新的緩釋周期為30-40天。7.—種如權(quán)利要求1至6任意一項(xiàng)所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: I)將L-聚乳酸溶解于有機(jī)溶劑，并加入一定量的穩(wěn)定劑，得到聚乳酸濃度為(1%-40%)(W/V，g/ml)的油相，其中有機(jī)溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯中的一種或其任意組合物;穩(wěn)定劑為包含但不僅限于普朗羅尼F-127(Pluronic F127)，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01%_1.2%; 2 )將胸腺法新、保護(hù)劑溶、致孔劑溶于水，得胸腺法新為1%_60%( W/V)的內(nèi)水相，其中保護(hù)劑為人血清白蛋白、明膠、海藻酸糖或甘露醇中的一種或其中任意組合物，質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.01%-5.0%;致孔劑包含但不僅限于碳酸氫銨，質(zhì)量百分含量為:0.01%-1.0%； 3)將上述油相與內(nèi)水相混合，用細(xì)胞破碎儀超聲乳化一定時(shí)間，超聲乳化時(shí)間一般為(0.5-2 )min (功率200W、超聲I s，間隔I s )形成均勻、穩(wěn)定的W/0乳液； 4)將新配制的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%-30%的海藻酸鈉或殼聚糖水溶液作為水相(W)加入上述乳液中，用細(xì)胞破碎儀超聲乳化一定時(shí)間，乳化時(shí)間為(0.5-2)min(功率200W、超聲Is，間隔I s )形成均勻、穩(wěn)定的W/0/W乳液； 5)將上述步驟4)中制得的W/0/W乳液立即裝入注射器中，通過(guò)高壓微膠囊成型裝置，注射到新配制的5%-10%的氯化鈣水溶液中，因海藻酸鈉與氯化鈣相遇反應(yīng)生成海藻酸鈣而形成微球； 6)高壓微膠囊成型裝置注射液與接收液接觸混合發(fā)生反應(yīng)，磁力攪拌50-80min，用漏斗過(guò)濾掉溶液中的白色絮狀物，7000rpm離心5min，即可收集胸腺法新-聚乳酸微球，冷凍干燥以除去H20、二氯甲烷、NH3及C02，可得到干燥的胸腺法新多孔緩釋微球。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑的制備方法，高壓微膠囊成型裝置的工藝參數(shù)為:電壓25KV;推進(jìn)速度:(81-100)111111/11、236針頭，接收距離(41-60)111111。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種胸腺法新緩釋微球制劑的制備方法的步驟6)中，磁力攪拌時(shí)間優(yōu)選為(61_70)min，以65min為最佳。10.權(quán)利要求1-9任意一項(xiàng)所述制備方法制備的胸腺法新緩釋微球制劑。
【文檔編號(hào)】A61K38/22GK105935353SQ201610387160
【公開日】2016年9月14日
【申請(qǐng)日】2016年6月2日
【發(fā)明人】王蕾
【申請(qǐng)人】煙臺(tái)海安藥物研發(fā)有限公司