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一種酪蛋白磷酸肽的標(biāo)簽肽及其應(yīng)用的制作方法

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技術(shù)特征:

1.一種酪蛋白磷酸肽的標(biāo)簽肽,其特征在于,氨基酸序列為L(zhǎng)SQSKVLPVPQK。

2.一種酪蛋白磷酸肽的內(nèi)標(biāo)肽,其特征在于,氨基酸序列為L(zhǎng)SQSKVL*PV*PQK,其中L*和V*為碳氮全同位素標(biāo)記的氨基酸殘基。

3.如權(quán)利要求1所述的標(biāo)簽肽在奶制品中酪蛋白磷酸肽含量檢測(cè)中的應(yīng)用。

4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用,其特征在于,所述奶制品為嬰幼兒配方奶粉。

5.一種檢測(cè)奶制品中酪蛋白磷酸肽含量的方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)如果待測(cè)樣品為固體,先用水溶解,如果待測(cè)樣品為液體則直接使用,然后加入內(nèi)標(biāo)肽;

(2)使用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè);

(3)計(jì)算待測(cè)樣品中,如權(quán)利要求1所述的標(biāo)簽肽與對(duì)應(yīng)的內(nèi)標(biāo)肽的峰面積比;

(4)將待測(cè)樣品中所述的標(biāo)簽肽的峰面積比數(shù)據(jù)代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,計(jì)算出所述標(biāo)簽肽的濃度,然后根據(jù)相應(yīng)的轉(zhuǎn)換公式計(jì)算出待測(cè)樣品中酪蛋白磷酸肽的含量。

6.如權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,所述的內(nèi)標(biāo)肽的氨基酸序列為L(zhǎng)SQSKVL*PV*PQK,其中L*和V*為碳氮全同位素標(biāo)記的氨基酸殘基。

7.如權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,所述待測(cè)樣品經(jīng)過前處理,所述前處理方法為:使用pH為4.6的乙酸銨溶液進(jìn)行蛋白沉淀。

8.如權(quán)利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述標(biāo)準(zhǔn)曲線由以下方法獲得:

將所述的標(biāo)簽肽稀釋不同濃度梯度作為標(biāo)準(zhǔn)品,然后加入內(nèi)標(biāo)肽,再經(jīng)高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè),由標(biāo)簽肽的含量與標(biāo)簽肽、內(nèi)標(biāo)肽檢測(cè)峰面積比值獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線,其中,樣品檢測(cè)與標(biāo)準(zhǔn)曲線制備時(shí)高效液相色譜和質(zhì)譜的檢測(cè)條件相同。

9.如權(quán)利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述高效液相色譜使用BEH300 C18色譜柱,柱溫為35℃,流動(dòng)相為0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水溶液,流速為0.3mL/min。

10.如權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,所述質(zhì)譜使用的毛細(xì)管電壓為3.5kV,脫溶劑溫度375℃,脫溶劑氣流量11.5L/min,所述的標(biāo)簽肽的母離子為442.1m/z,子離子372.4m/z對(duì)應(yīng)的碰撞能量為10eV,子離子568.5m/z對(duì)應(yīng)的碰撞能量為10eV;內(nèi)標(biāo)物特征母離子為446.3m/z,子離子372.2m/z,對(duì)應(yīng)的碰撞能量為15eV,子離子574.5m/z,對(duì)應(yīng)的碰撞能量為10eV。

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