專利名稱：：酪蛋白磷肽和包含酪蛋白磷肽的酪蛋白以及它們的制備方法發(fā)明所屬領(lǐng)域總的來說，本發(fā)明涉及一種具有新的氨基酸序列的酪蛋白磷肽、一種包含酪蛋白磷肽的β-酪蛋白H以及它們的制備方法。更具體地說，本發(fā)明涉及一種具有新的氨基酸序列的酪蛋白磷肽，在動物的營養(yǎng)方面其能加溶礦物質(zhì)以促進其吸收?，F(xiàn)有技術(shù)描述肥胖癥是威脅人類健康最危險的危害之一，其在很大程度上是因為高熱量食品和缺乏維生素和礦物質(zhì)的飲料造成的。眾所周知，這種不平衡飲食是造成成年人疾病如骨質(zhì)疏松的原因。為了制備平衡的飲食，許多研究者試圖向食品中加入缺乏的礦物質(zhì)。然而，大多數(shù)的嘗試都沒有成功，因為增加一種礦物質(zhì)會導致吸收抑制或者減少動物體內(nèi)其它礦物質(zhì)。因此，需要在沒有加入礦物質(zhì)的情況下增加動物礦物質(zhì)吸收速率。一般的，在動物體內(nèi)礦物質(zhì)處于可吸收的可溶性狀態(tài)。然而，在動物體內(nèi)當?shù)V物質(zhì)成分穿過小腸的時候，其pH由中性變?yōu)閴A性狀態(tài)。按照小腸內(nèi)的pH值的變化，一大部分礦物質(zhì)變成了不能溶解的沉淀。就鈣的吸收而言，當鈣移動到小腸的時候，一部分可溶性的鈣減少了，相反pH值增加了。酪蛋白是一種包含在牛奶或人類乳汁中的蛋白質(zhì)，并且已經(jīng)報道了α、β、γ三種類型。特別是，β酪蛋白具有A1、A2、A3、B、C、D和E變型，已經(jīng)報道了這些變型的一級結(jié)構(gòu)(W.N.Eigcl.等，牛奶蛋白質(zhì)的命名法(第5版)，牛奶制品科學，Vol.67，No.8，PP.1607-8(1984))。并且酪蛋白磷肽(下文稱為“CPP”)包含在牛奶中富含的酪蛋白中。到目前為止，已經(jīng)認識到CPP是一種促進動物礦物質(zhì)吸收率的重要物質(zhì)。由于CPP和包含CPP的酪蛋白具有潛在的在水溶液中加溶礦物質(zhì)(如鈣和鐵)的能力，因此，已經(jīng)進行了很多嘗試，通過利用CPP制備平衡食品或飲料，目的是處理或減輕動物中的礦物質(zhì)營養(yǎng)失調(diào)。無論β-酪蛋白的A1、A2、A3、B、C、D和E變型，產(chǎn)生的CPP結(jié)構(gòu)和氨基酸序列都是相同的，其序列如下所示Arg-Glu-Leu-Glu-Glu-Leu-Asn-Val-Pro-Gly-Glu-Ile-Val-1510Glu-Ser(P)-Leu-Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu-Ser-Ile-Thr-Arg15162025其中Ser(P)代表磷酸化絲氨酸。以上表明，常規(guī)的CPP具有25個氨基酸；三個連續(xù)的磷酸化絲氨酸和隨后的兩個谷氨酸殘基形成很強的負電區(qū)，進而提供了鈣的活性位點(Naito，“在酪蛋白消化過程中磷肽的腸鈣吸收的促進機制”，日本營養(yǎng)和食品雜志，Vol.39，No.6，pp.433-439，(1986))。Naito已經(jīng)指出，CPP能促進動物小腸對鐵和鈣的吸收。已知將含有CPP的酪蛋白和鈣一起施用給動物，和鈣單獨施用相比，動物小腸中可溶性鈣明顯增加。在鈣吸收過程中活性運輸主要發(fā)生在小腸道的上部，以濃度平衡為基礎(chǔ)的被動運輸主要發(fā)生在小腸道的下部。已表明維生素D和乳糖能進一步促進動物對鈣的吸收。盡管小腸的上部(即動物的十二指腸)鈣的吸收率很高，但組分的潴留時間很短以致于鈣吸收的總體積相對很低。相反，由于食物的潴留時間較長，位于小腸下部的回腸是吸收大部分鈣的重要部位。事實上，62％或88％的鈣在大鼠的回腸中吸收；而在切除回腸的人體中鈣的吸收明顯下降。因此，可以認為CPP在鈣吸收過程中具有重要的作用(Sato等“酪蛋白磷肽對乳制品中鈣吸收的作用”，化學和生物學，Vol.23，No.7，P.418(1985))。Sato等還報道了為了確定酪蛋白中磷酸殘基的作用進行的一系列實驗。在這些實驗中用分別含有磷酸化的酪蛋白、去磷酸化的酪蛋白、谷膠和凝膠的食物喂養(yǎng)四組大鼠。結(jié)果用磷酸化的酪蛋白喂養(yǎng)的一組在動物小腸中表現(xiàn)出大量的可溶性鈣和最高的鈣吸收率。而且CPP可以從牛奶中通過胰蛋白酶消化產(chǎn)生(Sato等，“酪蛋白分子的磷酸鹽部分的對促進小腸對鈣的吸收的必要性”，農(nóng)業(yè)生物化學，vol.47，No.10，pp.2415-7(1983))。為了從牛奶中提取酪蛋白，Gordon描述的方法包括從牛奶中除去脂肪；向生成物中加入鹽酸使pH達到4.6；離心沉淀的酪蛋白；將生成物脫水并冷凍干燥(W.G.Gordon等，乳制品化學基礎(chǔ)，第2版，AVI出版公司，(1974))。Spellacy提出從牛奶中沉淀酪蛋白的方法，通過加入從乳鏈球菌中產(chǎn)生的乳酸J.R.Spellacy酪蛋白，干燥和濃縮的乳清，Lithotypeprocess公司(1953))。Fox提出了一種加入粗制凝乳酶以沉淀牛奶中酪蛋白的方法(K.K.Fox牛奶的副產(chǎn)品，第2版，AVI出版公司(1970))。已經(jīng)報道了從上述得到的酪蛋白中產(chǎn)生常規(guī)的CPP的各種方法。Peterson提出的方法包括將酪蛋白進行胰蛋白酶水解；將水解液的pH控制在4.7；除去未反應(yīng)的酪蛋白；向水解物的上清液加入BaCl2和乙醇并回收CPP(R.F.Peterson等，美國化學學會雜志，vol.80，p.95(1958))。Nito提出的產(chǎn)生CPP的方法包括通過消化酶消化酪蛋白；經(jīng)SephadexG-25的凝膠過濾分離CPP的粗提物；并通過將粗制混合物經(jīng)過離子交換樹脂而純化CPP(Naito等，農(nóng)業(yè)生物化學，vol.38，P.1543(1974))。另外，美國專利4,361,587公開的產(chǎn)生磷肽的方法包括將酪蛋白進行酶水解；回收得到的水解液；將所說的水解液進行第1次膜超濾；回收保留物；解聚包含在其中的磷肽；將包含解聚的磷肽的保留物進行第2次膜超過濾。日本專利出版物昭59-159793公開的產(chǎn)生的CPP的方法包括將酪蛋白進行胰蛋白酶水解以產(chǎn)生CPP；向得到的水解液中加入二價鐵離子以沉淀CPP并回收CPP。并且韓國的公開專利出版物93-10190說明了由糞鏈球菌變種liquefaciens得到的蛋白酶的用途。酪蛋白或CPP已經(jīng)廣泛地用于各種目的。通過利用它的加溶礦物質(zhì)的效果，日本公開的專利出版物Hei.5-336894公開了增加了CPP的健康食品。日本公開的專利出版物平5-176712也提出了包含CPP和堿性的磷酸酯酶的食品。而且，日本公開的專利出版物平4-299942闡述了一種改進的含有CPP的家禽飼料。PCT出版物WO94/00146和美國專利5,015,628也提出了一種含有CPP的口服組合物，其能防止或減輕牙齒結(jié)石或牙質(zhì)過敏。另外，日本公開的專利出版物平1-269499提出了一種產(chǎn)生含有CPP的皮膚和頭發(fā)保護品。這里所有參考文獻的內(nèi)容本文一并參考。發(fā)明概述本發(fā)明發(fā)明人致力于提高與CPP有關(guān)的腸內(nèi)礦物質(zhì)吸收，并且最后發(fā)現(xiàn)了一種新的和常規(guī)CPP的結(jié)構(gòu)和氨基酸序列不同的CPP。本發(fā)明的具有新的氨基酸序列(本文稱為SEQ.IDNO1)的CPP具有28個氨基酸，其中由半胱氨酸替代了常規(guī)氨基酸中的從N-末端開始的第25位精氨酸。在相應(yīng)的DNA序列中由胸腺嘧啶代替了胞嘧啶，結(jié)果導致了精氨酸(Arg)向半胱氨酸(Cys)變化的氨基酸取代。另外，本發(fā)明提供了一種新的含有速溶的(instant)CPP的酪蛋白，本發(fā)明發(fā)明人把它命名為β-酪蛋白H。因此，本發(fā)明的目的是提供一種具有SEQ.IDNO.1的氨基酸序列的新的CPP。本發(fā)明的另一個目的是提供一種包含具有SEQ.IDNO.1的氨基酸序列的本發(fā)明的CPP的新β-酪蛋白H。本發(fā)明的另一個目的是提供一種產(chǎn)生本發(fā)明的CPP和β-酪蛋白的方法。而且本發(fā)明的另一個目的是提供含有本發(fā)明的CPP和β-酪蛋白H并且具有各種用途的組合物。附圖簡要描述從以下和伴隨的附圖相聯(lián)系的參考實施例的描述中，本發(fā)明的其它目的、特點和優(yōu)點會變得明了。圖1為本發(fā)明的β-酪蛋白H的電泳圖。圖2(a)是顯示所述酪蛋白通過離子交換柱后β-酪蛋白峰的色譜圖。圖2(b)是顯示圖2(a)的β-酪蛋白通過第一陽離子交換柱后特定的β-酪蛋白H峰的色譜圖。圖2(c)為顯示圖2(b)的β-酪蛋白H經(jīng)過第二陽離子交換柱后特定的β-酪蛋白峰的色譜圖。圖3為顯示本發(fā)明的CPP特定的峰的HPLC色譜圖。圖4是顯示本發(fā)明的CPP的部分DNA序列的圖。參考實施方案的詳盡描述一般地，蛋白質(zhì)和礦物質(zhì)易于相互結(jié)合，同時這種結(jié)合物質(zhì)的類型和強度很大程度上取決于它們的高級結(jié)構(gòu)，即二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)(Naito，“在酪蛋白消化過程中磷肽的腸鈣吸收的促進機制”，日本營養(yǎng)和食品雜志，Vol.39，No.6，pp.433，436，(1986))。由于氨基酸序列和主要的結(jié)構(gòu)的不同，本發(fā)明的CPP和含有CPP的β-酪蛋白H表現(xiàn)出在小腸中提高了加溶含鈣礦物質(zhì)的能力；因此，它自然地增強了動物對礦物質(zhì)吸收的能力。按照本發(fā)明，本發(fā)明提供了一種具有SEQ.IDNO.1新的氨基酸序列的新CPP。在本發(fā)明中，常規(guī)的CPP的25位精氨酸由半胱氨酸代替。另外，新CPP在第25位半胱氨酸后具有3個氨基酸，它們是異亮氨酸(Ile)、天冬酰胺(Asn)和賴氨酸(Lys)。因此，本發(fā)明的CPP具有28個氨基酸。由于半胱氨酸的存在，新的CPP間易于通過二硫鍵形成二聚物。已經(jīng)提出，三個連續(xù)的磷酸化絲氨酸(第17至19位)和兩個谷氨酸殘基(第20和21位)形成很強的負電區(qū)，其提供了鈣的活性位點(Naito見上文)?？梢哉J為，新CPP的二聚物保護了上述的磷酸化絲氨酸和兩個谷氨酸殘基活性區(qū)域。因此，發(fā)明的CPP具有提高的加溶礦物質(zhì)的能力。本發(fā)明的CPP具有28個氨基酸殘基，其易于被蛋白酶水解，特別是在N-末端的三位亮氨酸和四位谷氨酸及六位亮氨酸和七位天冬酰胺之間。因此，在動物小腸中可以產(chǎn)生兩種片斷，即一種具有除去了Arg-Glu-Leu的25個殘基，另外一種具有從N-末端除去了Arg-Glu-leu-Clu-Glu-Leu的22個殘基。然而，通過水解產(chǎn)生的任何-種片斷，只要其具有活性位點(第17到21個殘基)，它就有在小腸中加溶礦物質(zhì)的CPP功能。因此，可以估計，在SEQ.IDNO.1中的肽序列中任何包含活性位點(第17到21位殘基)和25位半胱氨酸的片斷都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明提供包含本發(fā)明的CPP的β-酪蛋白H，其對于礦物質(zhì)具有活性位點，因此β-酪蛋白H在動物的小腸中也能加溶礦物質(zhì)?？梢哉J為本發(fā)明的CPP或β-酪蛋白H可以通過如堿金屬、堿土金屬和過渡金屬鹽等形式來應(yīng)用。典型的例子是鈉、鈣、磷酸鈣、氟化磷酸鈣、鐵、鋅、鉀和鎂鹽等。在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了產(chǎn)生具有SEQ.IDNO.1序列的包含CPP的β-酪蛋白H的方法，其包括以下步驟選擇包含β-酪蛋白H的牛奶；把一種酸或粗制凝乳酶加入牛奶中以形成沉淀；和回收沉淀的β-酪蛋白H。在這種方法中，選擇包含β-酪蛋白H的牛奶通過圖1中顯示特性帶的電泳進行?？梢詢?yōu)選地加入到牛奶中的酸的代表性的例子包括鹽酸和乳酸?？梢酝ㄟ^色譜法回收沉淀的β-酪蛋白H。優(yōu)選的是連續(xù)地進行離子交換色譜和陽離子交換色譜。在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還提供了產(chǎn)生具有SEQ.IDNO.1序列的酪蛋白磷肽的方法，其包括以下步驟選擇β-酪蛋白H；加入一種或多種蛋白酶水解β-酪蛋白H；把一種和多種無機離子加入到獲得的水解物中以沉淀出肽；回收沉淀的酪蛋白磷肽?？梢酝ㄟ^圖1所示的作為電泳結(jié)果的特殊帶來鑒定β-酪蛋白H。在以上的方法中，可以利用各種蛋白酶，其典型的例子包括胰蛋白酶、胰酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、番木瓜酶、鏈霉蛋白酶和嗜熱菌蛋白酶。優(yōu)選的是把蛋白酶(加入的量為酪蛋白重量的0.001％至2％)與酪蛋白混合。所述無機離子選自由Fe、Ca、Ba、Cu、Zn、Mn和Co離子組成的組。在這些離子中，鐵離子優(yōu)選的，為此，使用FeCl3為其來源。當無機離子的濃度變高時，沉淀物的量增加；然而，這可能破壞CPP的純度。因此，無機離子優(yōu)選的濃度范圍在5至50mM之間。當把乙醇連同無機離子一起加入時，可以有效地進行CPP的沉淀。如果不加入無機離子，可以把水解物進行色譜，如HPLC或凝膠過濾色譜。另外，可以通過參考SEQ.IDNO.1的氨基酸序列利用化學合成產(chǎn)生本發(fā)明的CPP。而且，可以通過常規(guī)的轉(zhuǎn)化方法制造出包含SEQ.IDNO.1遺傳信息的微生物來產(chǎn)生CPP。此外，通過把SEQ.IDNO.1的遺傳信息導入到非牛動物(如綿羊和山羊)中可以產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動物。因為本發(fā)明的CPP或β-酪蛋白H是從包含β-酪蛋白H的牛奶中產(chǎn)生的，因此必需大量地制造含有β-酪蛋白H的牛奶。為此，本發(fā)明提供了一種產(chǎn)生包含β-酪蛋白H的方法，其包括以下步驟選擇能產(chǎn)生含有β-酪蛋白H之牛奶的牛；使所說的牛和大量分泌牛奶的另一品種的牛雜交以獲得F1代；在所說的F1代中選擇能產(chǎn)生含有β-酪蛋白H之牛奶的母牛；和從所說的母牛提取含有β-酪蛋白H的牛奶。為了選擇能產(chǎn)生含有β-酪蛋白H之牛奶的牛，分析從牛中提取的包含DNA材料(如血液、組織和精液)的DNA序列，然后和本文參考的SEQ.IDNO.1的序列相比較。作為一種替代方法，可以對牛奶進行電泳以發(fā)現(xiàn)圖1所示的帶。把選擇的能產(chǎn)生含有β-酪蛋白H之牛奶的牛同另外一種大量產(chǎn)牛奶的牛(如Holstein種)交配。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)獲得的后代(F1)具有β-酪蛋白H的遺傳信息，其能產(chǎn)生包含所需的β-酪蛋白H的牛奶。這樣，選擇的改進的牛產(chǎn)生了含有β-酪蛋白H的牛奶，并且產(chǎn)量很高，這正適合大量產(chǎn)生本發(fā)明的β-酪蛋白H。因此，本發(fā)明提供了一種健康食品和飲料組合物，其包含CPP或β-酪蛋白H和食物載體。此組合物可以進一步包含能促進礦物質(zhì)吸收的維生素D和乳糖。此組合物可以優(yōu)選地包含礦物質(zhì)如鐵、鈣等以補充動物的礦物質(zhì)。組合物的例子包括牛奶、嬰兒或病人食用的奶粉、酸乳酪(液體、乳脂狀的或凍干型)、干酪、斷奶食物、糕餅、面包、冰激琳、豆腐、糖果、冰糖、蜜脂餡餅、巧克力、焦糖糖果、天然或人工果汁、熟魚膏、解渴飲料(等滲運動飲料)、粉末狀茶、蛋黃醬或調(diào)味汁等。特別地，本發(fā)明的CPP或β-酪蛋白H優(yōu)選地加入不包含嬰兒或成年人過敏的乳糖的食品中。本發(fā)明的另一個方面還提供了一種藥物組合物，其包含防止、減輕或解除由動物礦物質(zhì)營養(yǎng)失調(diào)引起的疾病的有效量的具有SEQ.IDNO.1氨基酸序列的β-酪蛋白H或CPP以及藥學上可接受的載體。通過口服以上的藥物組合物可以治療或減輕由礦物質(zhì)營養(yǎng)失調(diào)引起的疾病(如骨質(zhì)疏松癥或貧血)。可以每天施用0.1g至100g藥物組合物中CPP或β-酪蛋白H。優(yōu)選地，組合物可以包含礦物質(zhì)，如鐵和等。本發(fā)明還提供了一種含有CPP或β-酪蛋白H和食物載體的口服組合物。該口服的組合物包括水溶液、水-酒精溶液、酒精溶液、酪蛋白的分散體或CPP的漱口藥、牙粉(dentifrice)、牙膏、牙粉(toothpowder)、凝膠、錠劑、片劑、口香糖或其它合適的口服組合物的形式。制劑的pH優(yōu)選的范圍在2至10。優(yōu)選的口服組合物也可以含有有效量的磷酸酯酶抑制劑或磷肽穩(wěn)定劑，如角叉菜膠陰離子聚合物。可以以增加動物對礦物質(zhì)的吸收有效的量將本發(fā)明的CPP或包含CPP的酪蛋白加入到組合物(如皮膚或頭發(fā)保健品，或者食品組合物)和食品載體中。由于在動物中加溶礦物質(zhì)的足夠的能力，包含速溶CPP或β酪蛋白-H的本發(fā)明組合物和以前包含常規(guī)CPP或酪蛋白的組合物相比，表現(xiàn)出改進的效果。由于CPP或β酪蛋白-H具有較高的加溶礦物質(zhì)的能力，很自然地其能用于以上提到的每一個目的，使產(chǎn)品具有同樣更好的效果。給出以下實施例只是為了說明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。實施例1制備本發(fā)明的β酪蛋白-H把牛奶在5,000RPM離心20分鐘，之后除去表層的脂肪層。把生成物中加入淀粉凝膠(Connought醫(yī)學研究實驗室)中；利用由850ml去離子水、100ml醋酸和50ml甲酸構(gòu)成的緩沖液(pH1.5)在150伏特下進行12小時電泳。用10％的苯胺黑溶液染色凝膠30分鐘，然后通過加入50％的甲醇destained5小時。產(chǎn)生的電泳圖如圖1所示，通過特定帶來鑒定其中的β酪蛋白-H。把以上發(fā)現(xiàn)含有β酪蛋白-H的牛奶離心，接著除去表層的脂肪層。通過加入鹽酸沉淀出β酪蛋白-H；并且進行冷凍干燥。利用20mM咪唑-HCl緩沖液(pH7.0)把10g酪蛋白通過離子交換柱(型號MonoQ5/5由Pharmaria公司制造)，這樣就得到了純化的β酪蛋白。利用50mM的醋酸鈉緩沖液(pH5.0)使生成的β酪蛋白通過第一陽離子交換柱(型號MonoQ5/5由Pharmaria公司制造)以獲得β酪蛋白H。結(jié)果如圖2(b)所示。把所述β酪蛋白通過第二陽離子交換柱以產(chǎn)生純化形式的β酪蛋白-H。色譜圖如圖2所示。實施例2利用胰蛋白酶水解來制備本發(fā)明的CPP把0.01％胰蛋白酶(Sigma公司制造)加入到實施例1獲得的β酪蛋白-H中。把混合物溶解在磷酸緩沖液中并在37℃水解12小時。反應(yīng)結(jié)束后，把水解物加熱至90℃并保持30分鐘以鈍化其中的酶。把混合物的pH控制在4.6，然后除去未反應(yīng)的沉淀物。利用乙腈緩沖液對水解物進行HPLC(RP-柱由Merk公司制造)以產(chǎn)生純的CPP(純度99％)。圖3所示的色譜圖描述了β酪蛋白-H的特定峰。把純化過的CPP低壓凍干，然后進行蛋白質(zhì)序列分析(序列分析儀為生物應(yīng)用系統(tǒng)公司制造)以便給出SEQ.IDNO1的氨基酸序列。實施例3通過加入鐵離子制備本發(fā)明的CPP把按照實施例1相同的方法得到的10gβ酪蛋白-H和0.1g的胰蛋白酶溶解在100ml的磷酸鹽中，混合物在37℃水解12小時。把FeCl3加入到生成的溶液中，使溶液的Fe3+濃度達到20mM，并且加入50％(v/v)的乙醇以沉淀出肽。把沉淀出來的肽低壓凍干，并且進行凝膠過濾色譜，這樣就獲得了1.2g的CPP(純度90％)。實施例4β酪蛋白-H的DNA分析從KoreanNative牛中提取20ml血液，然后按照Sambrook(Sambrook等，分子克隆，冷泉港實驗室出版社(1989))提出的常規(guī)方法純化DNA。為了擴增在β酪蛋白中包含取代氨基酸的DNA片段，參考Bosing(Bosing等，牛β酪蛋白基因的整個核苷酸序列，Aust，生物科學雜志，Vol.41，p.727(1988))提出的方法制備一段引物。制備的引物的DNA序列如下引物5’-CAACAGCCTTATTCAGAAGAGTGG3’-CAGTGGGATGACAGAAAGTAGTCGTATAGG把0.5μg的純化的DNA、0.5μL的dTNP、5μl的10×緩沖液、1μ的Tag聚合酶(1個單位)和33μl的蒸餾水混合。通過把混合物加熱到94℃并保持5分鐘使DNA變性。此后，重復30個PCR(聚合酶鏈反應(yīng))循環(huán)(94℃60秒，57℃60秒，72℃60秒)。PCR反應(yīng)結(jié)束后，延長5分鐘以形成擴增的DNA片斷的雙螺旋。利用2％的瓊脂糖(Gibo公司)通過電泳法純化擴增的DNA，然后利用自動DNA序列分析儀(應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)分析DNA序列。所分析的具有取代的氨基酸殘基的CPP部分的DNA序列如下內(nèi)含子4外顯子5TTTTTTAATGCTAGACCCTGATTTTATTTTTATTTTTCCAAAGGAATCTATTGluSerIle內(nèi)含子5ACATGCATCAATAAGCTAAAACCCCTCATATTTAAATGTACATTTTTTTAAThrCysIleAsnLysATTTCATGTTTGATTTTTATAAACACCATTTATTTATGTATTTTTTTTTTAACCAG外顯子6AAAATTGAGAAGTTTCAGAGTGAGCAACAGCAGCAALysIleGluLysPheGlnSerGluGluGlnGlnGlnDNA序列圖如圖4所示。如上所述，在外顯子5中的第13個堿基由胸腺嘧啶代替了胞嘧啶，結(jié)果導致本發(fā)明中CPP中的氨基酸由半胱氨酸代替精氨酸。實施例5利用動物分泌大量產(chǎn)生β酪蛋白-H為了通過動物分泌方式大量產(chǎn)生β酪蛋白-H，把具有實施例4所示的方法鑒定的β酪蛋白-H遺傳信息的一個Korear公牛(A1H型)和5個Holstein母牛(2個A1A1型2個A1A2型和1個A2A2型)交配后，生出2個公牛和3個母牛。對2頭母牛進行DNA分析，發(fā)現(xiàn)作為雜合體的具有β酪蛋白-H的一頭母牛(按A1H)和一頭公牛(A2H)。飼養(yǎng)這樣獲得的具有β酪蛋白-H(A1H)遺傳信息的母牛(F1)，從出生到28個月懷孕。發(fā)現(xiàn)這頭母牛產(chǎn)的牛奶含有β酪蛋白-H，每天產(chǎn)牛奶接近4.5kg。也就是母牛(F1)的產(chǎn)牛奶量表明是先前的具有β酪蛋白-H的Korean牛的3倍。實施例6體內(nèi)加溶鈣的效果的檢驗平均重大約120g的40只大鼠供給控制食料，食料的成分為24wt％的粗蛋白，5wt％的粗脂肪，60wt％的淀粉，5wt％的粗纖維，5wt％的礦物質(zhì)和1wt％的維生素，飼喂一周后，24小時不供給食料，把大鼠分成4組。每組包括10只大鼠。第一組大鼠供給含有10wt％的β酪蛋白-H的控制食料，飼喂1.5個小時；第二組大鼠供給含有10wt％的常規(guī)β酪蛋白控制食料，飼喂1.5個小時；第三組大鼠供給含有本發(fā)明的1wt％CPP的控制食料，飼喂1.5個小時；第四組大鼠供給含有1wt％常規(guī)CPP的控制食料，飼喂1.5個小時；允許所用的大鼠自由地吃控制食料。上述飼喂結(jié)束1小時后，把所有的大鼠麻醉，切除它們的小腸。把小腸用鹽溶液洗滌，然后分成2部分，即上部和下部。此后，把小腸中的成分進行分離、均質(zhì)化并離心。利用自動吸收光譜(PerkinElmer公司)測量三次上清液中的鈣。結(jié)果列于下面的表1和表2。表1酪蛋白飼喂情況下小腸中的鈣濃度</tables>*平均ppm±標準差表2CPP飼喂情況下小腸中的鈣濃度</tables>*平均ppm±標準差如上述表1和表2所示。在供給β酪蛋白-H的第一組大鼠的平均可溶性鈣濃度為58.48ppm，比供給先前的酪蛋白的第二組大鼠的量增加約15％。而且供給本發(fā)明的CPP的第三組大鼠的平均可溶性鈣濃度為68.20ppm，比供給先前的CPP的第四組大鼠的量增加約23％。因此，很明顯，本發(fā)明的CPP和β酪蛋白-H具有超過常規(guī)酪蛋白和CPP的意想不到的驚人的鈣加溶作用。由于參照優(yōu)選的實施例描述了本發(fā)明，因此對本領(lǐng)域技術(shù)人員很明顯，在不背離如權(quán)利要求書中所限定的本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以對本發(fā)明進行許多變化和修飾。序列表(1)一般信息(i)申請人HAN.SangKee和SHINYooCheol(ii)發(fā)明名稱酪蛋白磷肽和包含酪蛋白磷肽的酪蛋白以及它們的制備方法(iii)序列數(shù)1(iv)通訊地址(A)地址KON-KUK大學畜牧研究院(B)街道kwangjin-ku(C)城市漢城(E)國家韓國(F)郵政編碼133-701(v)計算機可讀形式(A)介質(zhì)類型軟盤(B)計算機IBM兼容機486(C)操作系統(tǒng)MS-DOS(E)軟件MS-DOSEDITOR(2)SEQ.IDNO1信息(i)序列特征(A)長度28(B)類型氨基酸(D)拓撲結(jié)構(gòu)線性(ix)性質(zhì)(A)關(guān)鍵詞磷酸化絲氨酸(B)位置15(D)其它信息翻譯后磷酸化絲氨酸(ix)性質(zhì)(A)關(guān)鍵詞磷酸絲氨酸(B)位置17(D)其它信息翻譯后磷酸化絲氨酸(ix)性質(zhì)(A)關(guān)鍵詞磷酸絲氨酸(B)位置18(D)其它信息翻譯后磷酸化絲氨酸(ix)性質(zhì)(A)關(guān)鍵詞磷酸絲氨酸(B)位置19(D)其它信息翻譯后磷酸化絲氨酸(xi)序列描述SEQ.ID.NO1Arg-Glu-Leu-Glu-Clu-Leu-Asn-Val-Pro-Gly-Glu-Ile-Val-Glu-Ser151015Leu-Ser-Ser-Ser-Glu-Glu-Ser-Ile-Thr-Cys-Ile-Asn-Lys16202528權(quán)利要求1.一種具有SEQ.IDNO.1的氨基酸序列的酪蛋白磷肽。2.一種包含具有SEQ.IDNO.1的氨基酸序列的酪蛋白磷肽的β酪蛋白H。3.一種產(chǎn)生包含具有SEQ.IDNO.1的氨基酸序列的酪蛋白磷肽的β-酪蛋白H的方法，其包括以下步驟選擇包含β-酪蛋白H的牛奶；把一種酸或粗制凝乳酶加入牛奶中以形成沉淀；和回收沉淀的包含具有SEQ.IDNO.1的氨基酸序列的酪蛋白磷肽的β-酪蛋白H。4.如權(quán)利要求3所述的產(chǎn)生包含具有SEQ.IDNO.1的氨基酸序列的酪蛋白磷肽的β-酪蛋白H的方法，其中所說的選擇包含β-酪蛋白H的牛奶是通過電泳進行的。5.如權(quán)利要求3所述的產(chǎn)生包含具有SEQ.IDNO.1的氨基酸序列的酪蛋白磷肽的β酪蛋白H的方法，其中所說的回收沉淀的β-酪蛋白H是通過連續(xù)地離子交換色譜和陽離子交換色譜來進行的。6.一種產(chǎn)生具有SEQ.IDNO.1氨基酸序列的酪蛋白磷肽的方法，其包括以下步驟按照權(quán)利要求3的方法獲得β-酪蛋白H；經(jīng)加入一種或多種蛋白酶水解β-酪蛋白H；把一種和多種無機離子加入到獲得的水解物中以沉淀出肽；回收沉淀的酪蛋白磷肽。7.如權(quán)利要求6所述的產(chǎn)生具有SEQ.IDNO.1氨基酸序列的酪蛋白磷肽的方法，其中所說的蛋白酶選自由胰蛋白酶、胰酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、鏈霉蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶組成的組。8.如權(quán)利要求6所述的產(chǎn)生具有SEQ.IDNO.1氨基酸序列的酪蛋白磷肽的方法，其中所說的無機離子選自由Fe、Ca、Ba、Cu、Zn、Mn和Co離子組成的組。9.如權(quán)利要求8所述的產(chǎn)生具有SEQ.IDNO.1氨基酸序列的酪蛋白磷肽的方法，其中所說的無機離子是Fe離子，使用的FeCl3為其來源。10.如權(quán)利要求6所述的產(chǎn)生具有SEQ.IDNO.1氨基酸序列的酪蛋白磷肽的方法，該方法還包括與無機離子一起加入乙醇的步驟。11.一種產(chǎn)生包含具有SEQ.IDNO.1氨基酸序列的酪蛋白磷肽的β-酪蛋白H的牛奶的方法，其包括以下步驟選擇一頭能產(chǎn)生含有β-酪蛋白H之牛奶的牛；使所說的牛和能夠分泌大量牛奶的另一牛品種雜交以獲得F1代；和在所說的F1代中選擇產(chǎn)生含有β-酪蛋白H之牛奶的母牛；和從所說的母牛提取含有β-酪蛋白H的牛奶。12.如權(quán)利要求11所述的產(chǎn)生含有β-酪蛋白牛奶的方法，其中所說的雜交是在KoreanNative牛和Holstein牛之間進行的。13.一種健康食品和飲料組合物，其包含增強人體鈣吸收有效量的具有SEQ.IDNO.1氨基酸序列的β-酪蛋白肽H或酪蛋白磷肽和食品載體。14.如權(quán)利要求14所述的組合物，該組合物還包含鈣或鐵。15.如權(quán)利要求14所述的組合物，該組合物還包含維生素D或乳糖。16.如權(quán)利要求16所述的組合物，其包括牛奶、嬰兒或病人食用的奶粉、酸乳酪(液體、乳脂狀的或凍干型)、干酪、斷奶食物、糕餅、面包、冰激琳、豆腐、糖果、冰糖、蜜脂餡餅、巧克力、焦糖糖果、天然或人工果汁、熟魚膏、解渴飲料(等滲運動飲料)、粉末狀茶、蛋黃醬或調(diào)味汁等。17.一種治療牙質(zhì)過敏的口服組合物，其包含減輕或解除牙質(zhì)過敏量的具有SEQ.IDNO.1氨基酸序列的β-酪蛋白H或酪蛋白磷肽和藥學上可接受的載體。全文摘要本發(fā)明涉及了具有新的氨基酸序列的酪蛋白磷肽(CPP)和一種包含酪蛋白磷肽的酪蛋白,其中在常規(guī)CPP中的N－末端的25位精氨酸被半胱氨酸代替,使CPP通過二硫鍵形成二聚物。在相應(yīng)的DNA序列中,由胸腺嘧啶代替胞嘧啶,從而導致氨基酸精氨酸(Arg)替換成半胱氨酸(Cys)。在動物體內(nèi)包含CPP和包含CPP的酪蛋白具有提高的加溶礦物質(zhì)和吸收礦物質(zhì)的能力?？梢砸蕴岣邉游飳ΦV物質(zhì)的吸收有效的量將CPP或包含CPP的β酪蛋白H加入到食物、飲料、藥劑、化妝品和飼料中。一種包含β酪蛋白或本發(fā)明的CPP和藥學上可接受的載體的口服組合物可以減少或解除牙質(zhì)過敏癥。文檔編號A61P1/02GK1182435SQ96193462公開日1998年5月20日申請日期1996年3月22日優(yōu)先權(quán)日1995年3月23日發(fā)明者韓相基,申裕澈申請人:韓相基