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一種人神經(jīng)生長(zhǎng)因子類似物及其制備方法與流程

文檔序號(hào):12399346閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種人神經(jīng)生長(zhǎng)因子類似物,其特征在于,所述的人神經(jīng)生長(zhǎng)因子類似物含人神經(jīng)生長(zhǎng)因子正常氨基酸序列及其N末端增加一個(gè)甘氨酸殘基。

2.如權(quán)利要求1所述的人神經(jīng)生長(zhǎng)因子類似物,其特征在于,所述人神經(jīng)生長(zhǎng)因子正常氨基酸序列為天然人神經(jīng)生長(zhǎng)因子氨基酸序列,或者具有與天然人神經(jīng)生長(zhǎng)因子氨基酸序列95%以上同源性且具有神經(jīng)生長(zhǎng)因子生物學(xué)活性的氨基酸序列。

3.如權(quán)利要求1所述的人神經(jīng)生長(zhǎng)因子類似物,其特征在于,所述人神經(jīng)生長(zhǎng)因子類似物含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

4.如權(quán)利要求3所述的人神經(jīng)生長(zhǎng)因子類似物,其特征在于,用于編碼所述SEQ ID NO.1的氨基酸序列對(duì)應(yīng)的核苷酸序列如SEQ ID NO.2中第331~693位所示或其互補(bǔ)序列。

5.一種人神經(jīng)生長(zhǎng)因子類似物的制備方法,其特征在于,將改造的人神經(jīng)生長(zhǎng)因子原體cDNA插入原核表達(dá)載體,構(gòu)建成重組表達(dá)載體,采用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)制備;其中,所述改造的人神經(jīng)生長(zhǎng)因子原體cDNA編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO.3中第8~231位所示序列,或者與其氨基酸序列同源性大于90%的序列。

6.如權(quán)利要求5所述的制備方法,其特征在于,所述原核表達(dá)載體為融合蛋白表達(dá)載體,為pMAL載體、pGEX載體或pET載體。

7.如權(quán)利要求6所述的制備方法,其特征在于,所述pMAL載體為pMAL-p5x、pMAL-p5E、pMAL-p5G,所述pET載體為pET39b或pET32a。

8.如權(quán)利要求6所述的制備方法,其特征在于,所述的融合蛋白表達(dá)載體經(jīng)過了改造,其消除了載體自身的凝血酶酶切識(shí)別位點(diǎn)。

9.如權(quán)利要求5所述的制備方法,其特征在于,所述改造的人神經(jīng)生長(zhǎng)因子原體cDNA含如SEQ ID NO.2中第22~693位所示序列或其互補(bǔ)序列。

10.如權(quán)利要求5-9任一所述的制備方法,其特征在于,所述大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)制備的表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)純化后,采用凝血酶酶切,再次純化獲得人神經(jīng)生長(zhǎng)因子類似物純品。

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