技術(shù)特征：

1.一種熱穩(wěn)定性提高的堿性果膠酶突變體，其特征在于，是將氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的堿性果膠酶的第230位的天冬酰胺N突變?yōu)楦彼酨、第231位的甘氨酸G突變?yōu)橘嚢彼酜。

2.編碼權(quán)利要求1所述突變體的基因。

3.攜帶權(quán)利要求2所述基因的載體或細胞。

4.一種獲得權(quán)利要求1所述堿性果膠酶突變體的方法，是通過設(shè)計引物對編碼堿性果膠酶的基因進行定點突變后表達。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，是以質(zhì)粒pET-20b(+)-pgl為模板設(shè)計引物進行突變并將突變后的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進入E.coli JM109進行擴增，然后以E.coli BL21(DE3)表達含突變基因的重組質(zhì)粒，得到熱穩(wěn)定性增強的堿性果膠酶突變體。

6.應(yīng)用基因工程菌發(fā)酵生產(chǎn)權(quán)利要求1所述堿性果膠酶突變體的方法，其特征在于，是將含有突變堿性果膠酶基因的重組菌活化培養(yǎng)后接種到含有100μg mL^-1氨芐青霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中，于37℃，200r min^-1培養(yǎng)；菌體生長到OD₆₀₀＝0.6，加入IPTG進行誘導，同時將溫度調(diào)整為30℃，誘導發(fā)酵48h。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述活化培養(yǎng)是將重組菌E.coli BL21(DE3)(pET-20b(+)-pglS229K/N230P/G231K)接種于含有100μg mL^-1氨芐青霉素的種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度37℃，200rpm搖床上振蕩培養(yǎng)10h。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述種子培養(yǎng)基組成：酵母粉5g/L，胰蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，葡萄糖20g/L，pH 7.0。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成：酵母粉24g/L，胰蛋白胨12g/L，甘油5g/L，K₂HPO₄ 72mmol L^-1，KH₂PO₄ 17mmol L^-1。