本發(fā)明涉及
技術領域：
。具體而言，本發(fā)明涉及ATM基因突變體及其應用。
背景技術：
：共濟失調(diào)毛細血管擴張癥(ataxia-telangiectasia,AT)是一種罕見的常染色體隱性遺傳(autosomalrecessiveinherited,AR)病，又叫Louis-Bar綜合征，于1941年由Louis-Bar首先報道。AT發(fā)病率約1/4萬～1/10萬，多于兒童期起病，臨床主要表現(xiàn)為進行性發(fā)展的小腦性共濟失調(diào)，眼球結(jié)膜和面部皮膚的毛細血管擴張，反復發(fā)作的呼吸道感染；同時還具有對射線的殺傷作用異常敏感，染色體不穩(wěn)定性，易患惡性腫瘤，免疫缺陷和抗射線的DNA復制合成等特征。Savitsky和Uziel等率先克隆AT的疾病基因(ATM)，并將其定位于11q22.3。ATM是AT唯一的致病基因，全長約150kb，而編碼序列只有12kb，共有66個外顯子，編碼一個有3056個氨基酸殘基，分子質(zhì)量為350000的蛋白質(zhì)。ATM基因產(chǎn)物ATM編碼蛋白作為直接感受DNA雙鏈斷裂(DSBs)損傷信號的上游分子，以其激酶活性，催化多種重要功能底物蛋白的磷酸化，使受損的DNA停止于細胞周期檢測點并對其進行修復，對維持染色體的穩(wěn)定性起重要作用。ATM基因的克隆為AT的基因診斷和癥狀前診斷奠定了基礎，并且很大程度上解決了該病臨床診斷困難的問題。ATM蛋白在胎兒和成人組織內(nèi)均有廣泛表達，其功能域包括磷酯酰肌醇3-激酶(phosphoinositide-3kinase,PI3K)、Rad3、亮氨酸拉鏈(leucinezipper,LZ)、局部的連接區(qū)域(focaladhesiontarget,FAT)、局部的連接區(qū)域C端(FATC)等。PI3K蛋白家族成員和具有Rad3結(jié)構(gòu)域的蛋白家族成員參與了激活細胞周期關卡，控制端粒長度和應答DNA損傷等重要的生物學過程。AT最顯著的病理學表現(xiàn)是基因組的不穩(wěn)定性，主要反應在高頻率的染色體斷裂，自發(fā)染色體末端融合和染色體內(nèi)同源重組及染色體易位，以及體內(nèi)、外染色體自發(fā)畸變率和輻射誘發(fā)染色體畸變率的異常增加。作為DNA損傷信號傳導通路中最早的傳感和中樞調(diào)控基因，ATM編碼的ATM蛋白在電離輻射的誘導下被激活，并磷酸化其下游蛋白，通過調(diào)控細胞周期關卡、DNA損傷修復、細胞凋亡等維持基因組穩(wěn)定性。AT細胞由于ATM基因突變，缺失了ATM蛋白，喪失了對下游基因的調(diào)控作用，使受損的DNA的合成受抑，阻礙DNA的修復過程，從而導致染色體的斷裂和基因組不穩(wěn)定。ATM基因的突變具有極高的異質(zhì)性，突變方式和突變檢測都極為復雜。到目前為止，國外已經(jīng)報道了400余種ATM基因突變，絕大多數(shù)AT患者為復合性雜合突變，突變形式有錯義突變、無義突變、剪切位點突變、小片段插入突變、小片段缺失突變、大片段缺失和同義突變等，突變位點遍布基因全長，無突變熱點。因而，目前對共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的致病基因ATM突變基因的研究仍有待深入。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決上述技術問題之一。為此，本發(fā)明的一個目的在于提出一種能夠有效篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的方法。本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列工作完成的：發(fā)明人通過高通量外顯子組測序聯(lián)合候選基因突變驗證的方法確定了共濟失調(diào)毛細血管擴張癥新的致病基因突變位點(ATM基因的c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del突變)。根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種分離的編碼ATM基因突變體的核酸。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述核酸與SEQIDNO：1相比，具有選自下列的至少一種突變：c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)。即相對于野生型ATM基因，本發(fā)明的ATM基因具有c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)的至少一種。根據(jù)本發(fā)明的實施例，發(fā)明人確定了ATM基因的新突變體，該突變體與共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的發(fā)病密切相關，從而通過檢測該新突變體在生物樣品中是否存在，可以有效地檢測生物樣品是否易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥。根據(jù)本發(fā)明的第二個方面，本發(fā)明提出了一種分離的多肽，該多肽與SEQIDNO：2相比，具有選自下列的至少一種突變：p.Cys1899X、p.Glu2950fs、p.Trp1026Cys、p.Val2662del、p.Ile159fs和p.2951_2995del，通過檢測生物樣品中是否表達該多肽，可以有效地檢測生物樣品是否易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該多肽是由上述核酸編碼的。根據(jù)本發(fā)明的地三個方面，本發(fā)明提出了一種篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的方法，該方法包括以下步驟：從所述生物樣品提取核酸樣本；確定所述核酸樣本的核酸序列；所述核酸樣本的核酸序列與SEQIDNO：1相比，具有選自c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)的至少一種突變是所述生物樣品易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的指示，任選地，所述生物樣品為選自人體血液，任選地，所述核酸樣本為全基因組DNA，任選地，所述共濟失調(diào)毛細血管擴張癥是常染色體隱性遺傳疾病。通過根據(jù)本發(fā)明實施例的篩選易感共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的方法，可以有效地篩選易感共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品。根據(jù)本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明提出了一種篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括：核酸提取裝置，所述核酸提取裝置用于從所述生物樣品提取核酸樣本；核酸序列確定裝置，所述核酸序列確定裝置與所述核酸提取裝置相連，用于對所述核酸樣本進行分析，以便確定所述核酸樣本的核酸序列；判斷裝置，所述判斷裝置與所述核酸序列確定裝置相連，以便基于所述核酸樣本的核酸序列與SEQIDNO：1相比，是否具有c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)的至少一種突變，判斷所述生物樣品是否易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥；任選地，所述共濟失調(diào)毛細血管擴張癥是常染色體隱性遺傳疾病。利用該系統(tǒng)，能夠有效地實施前述篩選易感共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的方法，從而可以有效地篩選易感共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品。根據(jù)本發(fā)明的第五方面，本發(fā)明提出了一種用于篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的試劑盒，該試劑盒含有：適于檢測ATM基因突變體的試劑，其中與SEQIDNO：1相比，所述ATM基因突變體具有選自下列的至少一種突變：c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)，任選地，所述試劑為核酸探針或引物，任選地，所述核酸探針或引物具有如SEQIDNO：7-16所示的核苷酸序列，任選地，所述是常染色體隱性遺傳疾病。根據(jù)本發(fā)明的第六方面，本發(fā)明還提出了一種構(gòu)建體。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該構(gòu)建體包含前面所述的分離的編碼ATM基因突變體的核酸。需要說明的是，“構(gòu)建體包含前面所述的分離的編碼ATM基因突變體的核酸”表示，本發(fā)明的構(gòu)建體包含與SEQIDNO：1相比具有c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)至少一種突變。由此，利用本發(fā)明的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化受體細胞獲得的重組細胞，能夠有效地用作共濟失調(diào)毛細血管擴張癥相關研究的模型。根據(jù)本發(fā)明的第七方面，本發(fā)明還提出了一種重組細胞。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該重組細胞是通過前面所述的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化受體細胞而獲得的。根據(jù)本發(fā)明的一些實施例，本發(fā)明的重組細胞，能夠有效地用作共濟失調(diào)毛細血管擴張癥相關研究的模型。對于本發(fā)明中所述核酸，本領域技術人員應當理解，實際包括互補雙鏈的任意一條，或者兩條。為了方便，在本發(fā)明的實施例中，雖然多數(shù)情況下只給出了一條鏈，但實際上也公開了與之互補的另一條鏈。例如，提及SEQIDNO:1，實際包括其互補序列。本領域技術人員還可以理解，利用一條鏈可以檢測另一條鏈，反之亦然。本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。附圖說明本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點從結(jié)合下面附圖對實施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中：圖1：顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的系統(tǒng)及其組成部分的示意圖，其中，A為根據(jù)本發(fā)明實施例的篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥患者的生物樣品的系統(tǒng)的示意圖，B為根據(jù)本發(fā)明實施例的核酸提取裝置的示意圖，C為根據(jù)本發(fā)明實施例的核酸序列確定裝置的示意圖。圖2：顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的共濟失調(diào)毛細血管擴張癥患者的家系圖譜。圖3：顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的AT家系1的ATM基因突變體的Sanger法測序結(jié)果。圖4：顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的AT家系2的ATM基因突變體的Sanger法測序結(jié)果。圖5：顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的AT家系3的ATM基因突變體的Sanger法測序結(jié)果。圖6：顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的AT家系1的ATM基因突變體的QPCR的結(jié)果圖。圖7：顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的AT家系2的ATM基因突變體的Sanger法測序結(jié)果。具體實施方式下面詳細描述本發(fā)明的實施例，所述實施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標號表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附圖描述的實施例是示例性的，旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。ATM基因突變體根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種分離的編碼ATM基因突變體的核酸。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述核酸與SEQIDNO：1相比，具有選自下列的至少一種突變：c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)。即相對于野生型ATM基因，本發(fā)明的ATM基因具有c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)突變的至少一種。根據(jù)本發(fā)明的實施例，發(fā)明人確定了ATM基因的新突變體，該突變體與共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的發(fā)病密切相關，從而通過檢測該新突變體在生物樣品中是否存在，可以有效地檢測生物樣品是否易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥。在本文中所使用的表達方式“編碼ATM突變體的核酸”，是指與編碼ATM突變體的基因相對應的核酸物質(zhì)，即核酸的類型不受特別限制，可以是任何包含與ATM突變體的編碼基因相對應的脫氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于DNA、RNA或cDNA。根據(jù)本發(fā)明的一個具體示例，前面所述的編碼ATM突變體的核酸為DNA。根據(jù)本發(fā)明的實施例，發(fā)明人確定了ATM基因的新突變體，這些新突變體與共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的發(fā)病密切相關，從而通過檢測該新突變體在生物樣品中是否存在，可以有效地檢測生物樣品是否易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥，也可以通過檢測這些突變體在生物體中是否存在，可以有效地預測生物體是否易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥。該編碼ATM突變體的核酸，是本申請的發(fā)明人通過高通量外顯子組測序聯(lián)合候選基因突變驗證的方法確定的共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的致病基因上的新突變。該突變位點在現(xiàn)有技術中并未被提到。其中，野生型ATM基因的cDNA具有如下所示的核苷酸序列：ATGAGTCTAGTACTTAATGATCTGCTTATCTGCTGCCGTCAACTAGAACATGATAGAGCTACAGAACGAAAGAAAGAAGTTGAGAAATTTAAGCGCCTGATTCGAGATCCTGAAACAATTAAACATCTAGATCGGCATTCAGATTCCAAACAAGGAAAATATTTGAATTGGGATGCTGTTTTTAGATTTTTACAGAAATATATTCAGAAAGAAACAGAATGTCTGAGAATAGCAAAACCAAATGTATCAGCCTCAACACAAGCCTCCAGGCAGAAAAAGATGCAGGAAATCAGTAGTTTGGTCAAATACTTCATCAAATGTGCAAACAGAAGAGCACCTAGGCTAAAATGTCAAGAACTCTTAAATTATATCATGGATACAGTGAAAGATTCATCTAATGGTGCTATTTACGGAGCTGATTGTAGCAACATACTACTCAAAGACATTCTTTCTGTGAGAAAATACTGGTGTGAAATATCTCAGCAACAGTGGTTAGAATTGTTCTCTGTGTACTTCAGGCTCTATCTGAAACCTTCACAAGATGTTCATAGAGTTTTAGTGGCTAGAATAATTCATGCTGTTACCAAAGGATGCTGTTCTCAGACTGACGGATTAAATTCCAAATTTTTGGACTTTTTTTCCAAGGCTATTCAGTGTGCGAGACAAGAAAAGAGCTCTTCAGGTCTAAATCATATCTTAGCAGCTCTTACTATCTTCCTCAAGACTTTGGCTGTCAACTTTCGAATTCGAGTGTGTGAATTAGGAGATGAAATTCTTCCCACTTTGCTTTATATTTGGACTCAACATAGGCTTAATGATTCTTTAAAAGAAGTCATTATTGAATTATTTCAACTGCAAATTTATATCCATCATCCGAAAGGAGCCAAAACCCAAGAAAAAGGTGCTTATGAATCAACAAAATGGAGAAGTATTTTATACAACTTATATGATCTGCTAGTGAATGAGATAAGTCATATAGGAAGTAGAGGAAAGTATTCTTCAGGATTTCGTAATATTGCCGTCAAAGAAAATTTGATTGAATTGATGGCAGATATCTGTCACCAGGTTTTTAATGAAGATACCAGATCCTTGGAGATTTCTCAATCTTACACTACTACACAAAGAGAATCTAGTGATTACAGTGTCCCTTGCAAAAGGAAGAAAATAGAACTAGGCTGGGAAGTAATAAAAGATCACCTTCAGAAGTCACAGAATGATTTTGATCTTGTGCCTTGGCTACAGATTGCAACCCAATTAATATCAAAGTATCCTGCAAGTTTACCTAACTGTGAGCTGTCTCCATTACTGATGATACTATCTCAGCTTCTACCCCAACAGCGACATGGGGAACGTACACCATATGTGTTACGATGCCTTACGGAAGTTGCATTGTGTCAAGACAAGAGGTCAAACCTAGAAAGCTCACAAAAGTCAGATTTATTAAAACTCTGGAATAAAATTTGGTGTATTACCTTTCGTGGTATAAGTTCTGAGCAAATACAAGCTGAAAACTTTGGCTTACTTGGAGCCATAATTCAGGGTAGTTTAGTTGAGGTTGACAGAGAATTCTGGAAGTTATTTACTGGGTCAGCCTGCAGACCTTCATGTCCTGCAGTATGCTGTTTGACTTTGGCACTGACCACCAGTATAGTTCCAGGAACGGTAAAAATGGGAATAGAGCAAAATATGTGTGAAGTAAATAGAAGCTTTTCTTTAAAGGAATCAATAATGAAATGGCTCTTATTCTATCAGTTAGAGGGTGACTTAGAAAATAGCACAGAAGTGCCTCCAATTCTTCACAGTAATTTTCCTCATCTTGTACTGGAGAAAATTCTTGTGAGTCTCACTATGAAAAACTGTAAAGCTGCAATGAATTTTTTCCAAAGCGTGCCAGAATGTGAACACCACCAAAAAGATAAAGAAGAACTTTCATTCTCAGAAGTAGAAGAACTATTTCTTCAGACAACTTTTGACAAGATGGACTTTTTAACCATTGTGAGAGAATGTGGTATAGAAAAGCACCAGTCCAGTATTGGCTTCTCTGTCCACCAGAATCTCAAGGAATCACTGGATCGCTGTCTTCTGGGATTATCAGAACAGCTTCTGAATAATTACTCATCTGAGATTACAAATTCAGAAACTCTTGTCCGGTGTTCACGTCTTTTGGTGGGTGTCCTTGGCTGCTACTGTTACATGGGTGTAATAGCTGAAGAGGAAGCATATAAGTCAGAATTATTCCAGAAAGCCAAGTCTCTAATGCAATGTGCAGGAGAAAGTATCACTCTGTTTAAAAATAAGACAAATGAGGAATTCAGAATTGGTTCCTTGAGAAATATGATGCAGCTATGTACACGTTGCTTGAGCAACTGTACCAAGAAGAGTCCAAATAAGATTGCATCTGGCTTTTTCCTGCGATTGTTAACATCAAAGCTAATGAATGACATTGCAGATATTTGTAAAAGTTTAGCATCCTTCATCAAAAAGCCATTTGACCGTGGAGAAGTAGAATCAATGGAAGATGATACTAATGGAAATCTAATGGAGGTGGAGGATCAGTCATCCATGAATCTATTTAACGATTACCCTGATAGTAGTGTTAGTGATGCAAACGAACCTGGAGAGAGCCAAAGTACCATAGGTGCCATTAATCCTTTAGCTGAAGAATATCTGTCAAAGCAAGATCTACTTTTCTTAGACATGCTCAAGTTCTTGTGTTTGTGTGTAACTACTGCTCAGACCAATACTGTGTCCTTTAGGGCAGCTGATATTCGGAGGAAATTGTTAATGTTAATTGATTCTAGCACGCTAGAACCTACCAAATCCCTCCACCTGCATATGTATCTAATGCTTTTAAAGGAGCTTCCTGGAGAAGAGTACCCCTTGCCAATGGAAGATGTTCTTGAACTTCTGAAACCACTATCCAATGTGTGTTCTTTGTATCGTCGTGACCAAGATGTTTGTAAAACTATTTTAAACCATGTCCTTCATGTAGTGAAAAACCTAGGTCAAAGCAATATGGACTCTGAGAACACAAGGGATGCTCAAGGACAGTTTCTTACAGTAATTGGAGCATTTTGGCATCTAACAAAGGAGAGGAAATATATATTCTCTGTAAGAATGGCCCTAGTAAATTGCCTTAAAACTTTGCTTGAGGCTGATCCTTATTCAAAATGGGCCATTCTTAATGTAATGGGAAAAGACTTTCCTGTAAATGAAGTATTTACACAATTTCTTGCTGACAATCATCACCAAGTTCGCATGTTGGCTGCAGAGTCAATCAATAGATTGTTCCAGGACACGAAGGGAGATTCTTCCAGGTTACTGAAAGCACTTCCTTTGAAGCTTCAGCAAACAGCTTTTGAAAATGCATACTTGAAAGCTCAGGAAGGAATGAGAGAAATGTCCCATAGTGCTGAGAACCCTGAAACTTTGGATGAAATTTATAATAGAAAATCTGTTTTACTGACGTTGATAGCTGTGGTTTTATCCTGTAGCCCTATCTGCGAAAAACAGGCTTTGTTTGCCCTGTGTAAATCTGTGAAAGAGAATGGATTAGAACCTCACCTTGTGAAAAAGGTTTTAGAGAAAGTTTCTGAAACTTTTGGATATAGACGTTTAGAAGACTTTATGGCATCTCATTTAGATTATCTGGTTTTGGAATGGCTAAATCTTCAAGATACTGAATACAACTTATCTTCTTTTCCTTTTATTTTATTAAACTACACAAATATTGAGGATTTCTATAGATCTTGTTATAAGGTTTTGATTCCACATCTGGTGATTAGAAGTCATTTTGATGAGGTGAAGTCCATTGCTAATCAGATTCAAGAGGACTGGAAAAGTCTTCTAACAGACTGCTTTCCAAAGATTCTTGTAAATATTCTTCCTTATTTTGCCTATGAGGGTACCAGAGACAGTGGGATGGCACAGCAAAGAGAGACTGCTACCAAGGTCTATGATATGCTTAAAAGTGAAAACTTATTGGGAAAACAGATTGATCACTTATTCATTAGTAATTTACCAGAGATTGTGGTGGAGTTATTGATGACGTTACATGAGCCAGCAAATTCTAGTGCCAGTCAGAGCACTGACCTCTGTGACTTTTCAGGGGATTTGGATCCTGCTCCTAATCCACCTCATTTTCCATCGCATGTGATTAAAGCAACATTTGCCTATATCAGCAATTGTCATAAAACCAAGTTAAAAAGCATTTTAGAAATTCTTTCCAAAAGCCCTGATTCCTATCAGAAAATTCTTCTTGCCATATGTGAGCAAGCAGCTGAAACAAATAATGTTTATAAGAAGCACAGAATTCTTAAAATATATCACCTGTTTGTTAGTTTATTACTGAAAGATATAAAAAGTGGCTTAGGAGGAGCTTGGGCCTTTGTTCTTCGAGACGTTATTTATACTTTGATTCACTATATCAACCAAAGGCCTTCTTGTATCATGGATGTGTCATTACGTAGCTTCTCCCTTTGTTGTGACTTATTAAGTCAGGTTTGCCAGACAGCCGTGACTTACTGTAAGGATGCTCTAGAAAACCATCTTCATGTTATTGTTGGTACACTTATACCCCTTGTGTATGAGCAGGTGGAGGTTCAGAAACAGGTATTGGACTTGTTGAAATACTTAGTGATAGATAACAAGGATAATGAAAACCTCTATATCACGATTAAGCTTTTAGATCCTTTTCCTGACCATGTTGTTTTTAAGGATTTGCGTATTACTCAGCAAAAAATCAAATACAGTAGAGGACCCTTTTCACTCTTGGAGGAAATTAACCATTTTCTCTCAGTAAGTGTTTATGATGCACTTCCATTGACAAGACTTGAAGGACTAAAGGATCTTCGAAGACAACTGGAACTACATAAAGATCAGATGGTGGACATTATGAGAGCTTCTCAGGATAATCCGCAAGATGGGATTATGGTGAAACTAGTTGTCAATTTGTTGCAGTTATCCAAGATGGCAATAAACCACACTGGTGAAAAAGAAGTTCTAGAGGCTGTTGGAAGCTGCTTGGGAGAAGTGGGTCCTATAGATTTCTCTACCATAGCTATACAACATAGTAAAGATGCATCTTATACCAAGGCCCTTAAGTTATTTGAAGATAAAGAACTTCAGTGGACCTTCATAATGCTGACCTACCTGAATAACACACTGGTAGAAGATTGTGTCAAAGTTCGATCAGCAGCTGTTACCTGTTTGAAAAACATTTTAGCCACAAAGACTGGACATAGTTTCTGGGAGATTTATAAGATGACAACAGATCCAATGCTGGCCTATCTACAGCCTTTTAGAACATCAAGAAAAAAGTTTTTAGAAGTACCCAGATTTGACAAAGAAAACCCTTTTGAAGGCCTGGATGATATAAATCTGTGGATTCCTCTAAGTGAAAATCATGACATTTGGATAAAGACACTGACTTGTGCTTTTTTGGACAGTGGAGGCACAAAATGTGAAATTCTTCAATTATTAAAGCCAATGTGTGAAGTGAAAACTGACTTTTGTCAGACTGTACTTCCATACTTGATTCATGATATTTTACTCCAAGATACAAATGAATCATGGAGAAATCTGCTTTCTACACATGTTCAGGGATTTTTCACCAGCTGTCTTCGACACTTCTCGCAAACGAGCCGATCCACAACCCCTGCAAACTTGGATTCAGAGTCAGAGCACTTTTTCCGATGCTGTTTGGATAAAAAATCACAAAGAACAATGCTTGCTGTTGTGGACTACATGAGAAGACAAAAGAGACCTTCTTCAGGAACAATTTTTAATGATGCTTTCTGGCTGGATTTAAATTATCTAGAAGTTGCCAAGGTAGCTCAGTCTTGTGCTGCTCACTTTACAGCTTTACTCTATGCAGAAATCTATGCAGATAAGAAAAGTATGGATGATCAAGAGAAAAGAAGTCTTGCATTTGAAGAAGGAAGCCAGAATACAACTATTTCTAGCTTGAGTGAAAAAAGTAAAGAAGAAACTGGAATAAGTTTACAGGATCTTCTCTTAGAAATCTACAGAAGTATAGGGGAGCCAGATAGTTTGTATGGCTGTGGTGGAGGGAAGATGTTACAACCCATTACTAGACTACGAACATATGAACACGAAGCAATGTGGGGCAAAGCCCTAGTAACATATGACCTCGAAACAGCAATCCCCTCATCAACACGCCAGGCAGGAATCATTCAGGCCTTGCAGAATTTGGGACTCTGCCATATTCTTTCCGTCTATTTAAAAGGATTGGATTATGAAAATAAAGACTGGTGTCCTGAACTAGAAGAACTTCATTACCAAGCAGCATGGAGGAATATGCAGTGGGACCATTGCACTTCCGTCAGCAAAGAAGTAGAAGGAACCAGTTACCATGAATCATTGTACAATGCTCTACAATCTCTAAGAGACAGAGAATTCTCTACATTTTATGAAAGTCTCAAATATGCCAGAGTAAAAGAAGTGGAAGAGATGTGTAAGCGCAGCCTTGAGTCTGTGTATTCGCTCTATCCCACACTTAGCAGGTTGCAGGCCATTGGAGAGCTGGAAAGCATTGGGGAGCTTTTCTCAAGATCAGTCACACATAGACAACTCTCTGAAGTATATATTAAGTGGCAGAAACACTCCCAGCTTCTCAAGGACAGTGATTTTAGTTTTCAGGAGCCTATCATGGCTCTACGCACAGTCATTTTGGAGATCCTGATGGAAAAGGAAATGGACAACTCACAAAGAGAATGTATTAAGGACATTCTCACCAAACACCTTGTAGAACTCTCTATACTGGCCAGAACTTTCAAGAACACTCAGCTCCCTGAAAGGGCAATATTTCAAATTAAACAGTACAATTCAGTTAGCTGTGGAGTCTCTGAGTGGCAGCTGGAAGAAGCACAAGTATTCTGGGCAAAAAAGGAGCAGAGTCTTGCCCTGAGTATTCTCAAGCAAATGATCAAGAAGTTGGATGCCAGCTGTGCAGCGAACAATCCCAGCCTAAAACTTACATACACAGAATGTCTGAGGGTTTGTGGCAACTGGTTAGCAGAAACGTGCTTAGAAAATCCTGCGGTCATCATGCAGACCTATCTAGAAAAGGCAGTAGAAGTTGCTGGAAATTATGATGGAGAAAGTAGTGATGAGCTAAGAAATGGAAAAATGAAGGCATTTCTCTCATTAGCCCGGTTTTCAGATACTCAATACCAAAGAATTGAAAACTACATGAAATCATCGGAATTTGAAAACAAGCAAGCTCTCCTGAAAAGAGCCAAAGAGGAAGTAGGTCTCCTTAGGGAACATAAAATTCAGACAAACAGATACACAGTAAAGGTTCAGCGAGAGCTGGAGTTGGATGAATTAGCCCTGCGTGCACTGAAAGAGGATCGTAAACGCTTCTTATGTAAAGCAGTTGAAAATTATATCAACTGCTTATTAAGTGGAGAAGAACATGATATGTGGGTATTCCGACTTTGTTCCCTCTGGCTTGAAAATTCTGGAGTTTCTGAAGTCAATGGCATGATGAAGAGAGACGGAATGAAGATTCCAACATATAAATTTTTGCCTCTTATGTACCAATTGGCTGCTAGAATGGGGACCAAGATGATGGGAGGCCTAGGATTTCATGAAGTCCTCAATAATCTAATCTCTAGAATTTCAATGGATCACCCCCATCACACTTTGTTTATTATACTGGCCTTAGCAAATGCAAACAGAGATGAATTTCTGACTAAACCAGAGGTAGCCAGAAGAAGCAGAATAACTAAAAATGTGCCTAAACAAAGCTCTCAGCTTGATGAGGATCGAACAGAGGCTGCAAATAGAATAATATGTACTATCAGAAGTAGGAGACCTCAGATGGTCAGAAGTGTTGAGGCACTTTGTGATGCTTATATTATATTAGCAAACTTAGATGCCACTCAGTGGAAGACTCAGAGAAAAGGCATAAATATTCCAGCAGACCAGCCAATTACTAAACTTAAGAATTTAGAAGATGTTGTTGTCCCTACTATGGAAATTAAGGTGGACCACACAGGAGAATATGGAAATCTGGTGACTATACAGTCATTTAAAGCAGAATTTCGCTTAGCAGGAGGTGTAAATTTACCAAAAATAATAGATTGTGTAGGTTCCGATGGCAAGGAGAGGAGACAGCTTGTTAAGGGCCGTGATGACCTGAGACAAGATGCTGTCATGCAACAGGTCTTCCAGATGTGTAATACATTACTGCAGAGAAACACGGAAACTAGGAAGAGGAAATTAACTATCTGTACTTATAAGGTGGTTCCCCTCTCTCAGCGAAGTGGTGTTCTTGAATGGTGCACAGGAACTGTCCCCATTGGTGAATTTCTTGTTAACAATGAAGATGGTGCTCATAAAAGATACAGGCCAAATGATTTCAGTGCCTTTCAGTGCCAAAAGAAAATGATGGAGGTGCAAAAAAAGTCTTTTGAAGAGAAATATGAAGTCTTCATGGATGTTTGCCAAAATTTTCAACCAGTTTTCCGTTACTTCTGCATGGAAAAATTCTTGGATCCAGCTATTTGGTTTGAGAAGCGATTGGCTTATACGCGCAGTGTAGCTACTTCTTCTATTGTTGGTTACATACTTGGACTTGGTGATAGACATGTACAGAATATCTTGATAAATGAGCAGTCAGCAGAACTTGTACATATAGATCTAGGTGTTGCTTTTGAACAGGGCAAAATCCTTCCTACTCCTGAGACAGTTCCTTTTAGACTCACCAGAGATATTGTGGATGGCATGGGCATTACGGGTGTTGAAGGTGTCTTCAGAAGATGCTGTGAGAAAACCATGGAAGTGATGAGAAACTCTCAGGAAACTCTGTTAACCATTGTAGAGGTCCTTCTATATGATCCACTCTTTGACTGGACCATGAATCCTTTGAAAGCTTTGTATTTACAGCAGAGGCCGGAAGATGAAACTGAGCTTCACCCTACTCTGAATGCAGATGACCAAGAATGCAAACGAAATCTCAGTGATATTGACCAGAGTTTCAACAAAGTAGCTGAACGTGTCTTAATGAGACTACAAGAGAAACTGAAAGGAGTGGAAGAAGGCACTGTGCTCAGTGTTGGTGGACAAGTGAATTTGCTCATACAGCAGGCCATAGACCCCAAAAATCTCAGCCGACTTTTCCCAGGATGGAAAGCTTGGGTGTGA(SEQIDNO：1)，其編碼的蛋白質(zhì)具有如下所示的氨基酸序列：MSLVLNDLLICCRQLEHDRATERKKEVEKFKRLIRDPETIKHLDRHSDSKQGKYLNWDAVFRFLQKYIQKETECLRIAKPNVSASTQASRQKKMQEISSLVKYFIKCANRRAPRLKCQELLNYIMDTVKDSSNGAIYGADCSNILLKDILSVRKYWCEISQQQWLELFSVYFRLYLKPSQDVHRVLVARIIHAVTKGCCSQTDGLNSKFLDFFSKAIQCARQEKSSSGLNHILAALTIFLKTLAVNFRIRVCELGDEILPTLLYIWTQHRLNDSLKEVIIELFQLQIYIHHPKGAKTQEKGAYESTKWRSILYNLYDLLVNEISHIGSRGKYSSGFRNIAVKENLIELMADICHQVFNEDTRSLEISQSYTTTQRESSDYSVPCKRKKIELGWEVIKDHLQKSQNDFDLVPWLQIATQLISKYPASLPNCELSPLLMILSQLLPQQRHGERTPYVLRCLTEVALCQDKRSNLESSQKSDLLKLWNKIWCITFRGISSEQIQAENFGLLGAIIQGSLVEVDREFWKLFTGSACRPSCPAVCCLTLALTTSIVPGTVKMGIEQNMCEVNRSFSLKESIMKWLLFYQLEGDLENSTEVPPILHSNFPHLVLEKILVSLTMKNCKAAMNFFQSVPECEHHQKDKEELSFSEVEELFLQTTFDKMDFLTIVRECGIEKHQSSIGFSVHQNLKESLDRCLLGLSEQLLNNYSSEITNSETLVRCSRLLVGVLGCYCYMGVIAEEEAYKSELFQKAKSLMQCAGESITLFKNKTNEEFRIGSLRNMMQLCTRCLSNCTKKSPNKIASGFFLRLLTSKLMNDIADICKSLASFIKKPFDRGEVESMEDDTNGNLMEVEDQSSMNLFNDYPDSSVSDANEPGESQSTIGAINPLAEEYLSKQDLLFLDMLKFLCLCVTTAQTNTVSFRAADIRRKLLMLIDSSTLEPTKSLHLHMYLMLLKELPGEEYPLPMEDVLELLKPLSNVCSLYRRDQDVCKTILNHVLHVVKNLGQSNMDSENTRDAQGQFLTVIGAFWHLTKERKYIFSVRMALVNCLKTLLEADPYSKWAILNVMGKDFPVNEVFTQFLADNHHQVRMLAAESINRLFQDTKGDSSRLLKALPLKLQQTAFENAYLKAQEGMREMSHSAENPETLDEIYNRKSVLLTLIAVVLSCSPICEKQALFALCKSVKENGLEPHLVKKVLEKVSETFGYRRLEDFMASHLDYLVLEWLNLQDTEYNLSSFPFILLNYTNIEDFYRSCYKVLIPHLVIRSHFDEVKSIANQIQEDWKSLLTDCFPKILVNILPYFAYEGTRDSGMAQQRETATKVYDMLKSENLLGKQIDHLFISNLPEIVVELLMTLHEPANSSASQSTDLCDFSGDLDPAPNPPHFPSHVIKATFAYISNCHKTKLKSILEILSKSPDSYQKILLAICEQAAETNNVYKKHRILKIYHLFVSLLLKDIKSGLGGAWAFVLRDVIYTLIHYINQRPSCIMDVSLRSFSLCCDLLSQVCQTAVTYCKDALENHLHVIVGTLIPLVYEQVEVQKQVLDLLKYLVIDNKDNENLYITIKLLDPFPDHVVFKDLRITQQKIKYSRGPFSLLEEINHFLSVSVYDALPLTRLEGLKDLRRQLELHKDQMVDIMRASQDNPQDGIMVKLVVNLLQLSKMAINHTGEKEVLEAVGSCLGEVGPIDFSTIAIQHSKDASYTKALKLFEDKELQWTFIMLTYLNNTLVEDCVKVRSAAVTCLKNILATKTGHSFWEIYKMTTDPMLAYLQPFRTSRKKFLEVPRFDKENPFEGLDDINLWIPLSENHDIWIKTLTCAFLDSGGTKCEILQLLKPMCEVKTDFCQTVLPYLIHDILLQDTNESWRNLLSTHVQGFFTSCLRHFSQTSRSTTPANLDSESEHFFRCCLDKKSQRTMLAVVDYMRRQKRPSSGTIFNDAFWLDLNYLEVAKVAQSCAAHFTALLYAEIYADKKSMDDQEKRSLAFEEGSQNTTISSLSEKSKEETGISLQDLLLEIYRSIGEPDSLYGCGGGKMLQPITRLRTYEHEAMWGKALVTYDLETAIPSSTRQAGIIQALQNLGLCHILSVYLKGLDYENKDWCPELEELHYQAAWRNMQWDHCTSVSKEVEGTSYHESLYNALQSLRDREFSTFYESLKYARVKEVEEMCKRSLESVYSLYPTLSRLQAIGELESIGELFSRSVTHRQLSEVYIKWQKHSQLLKDSDFSFQEPIMALRTVILEILMEKEMDNSQRECIKDILTKHLVELSILARTFKNTQLPERAIFQIKQYNSVSCGVSEWQLEEAQVFWAKKEQSLALSILKQMIKKLDASCAANNPSLKLTYTECLRVCGNWLAETCLENPAVIMQTYLEKAVEVAGNYDGESSDELRNGKMKAFLSLARFSDTQYQRIENYMKSSEFENKQALLKRAKEEVGLLREHKIQTNRYTVKVQRELELDELALRALKEDRKRFLCKAVENYINCLLSGEEHDMWVFRLCSLWLENSGVSEVNGMMKRDGMKIPTYKFLPLMYQLAARMGTKMMGGLGFHEVLNNLISRISMDHPHHTLFIILALANANRDEFLTKPEVARRSRITKNVPKQSSQLDEDRTEAANRIICTIRSRRPQMVRSVEALCDAYIILANLDATQWKTQRKGINIPADQPITKLKNLEDVVVPTMEIKVDHTGEYGNLVTIQSFKAEFRLAGGVNLPKIIDCVGSDGKERRQLVKGRDDLRQDAVMQQVFQMCNTLLQRNTETRKRKLTICTYKVVPLSQRSGVLEWCTGTVPIGEFLVNNEDGAHKRYRPNDFSAFQCQKKMMEVQKKSFEEKYEVFMDVCQNFQPVFRYFCMEKFLDPAIWFEKRLAYTRSVATSSIVGYILGLGDRHVQNILINEQSAELVHIDLGVAFEQGKILPTPETVPFRLTRDIVDGMGITGVEGVFRRCCEKTMEVMRNSQETLLTIVEVLLYDPLFDWTMNPLKALYLQQRPEDETELHPTLNADDQECKRNLSDIDQSFNKVAERVLMRLQEKLKGVEEGTVLSVGGQVNLLIQQAIDPKNLSRLFPGWKAWV(SEQIDNO：2)。與野生型ATM基因的cDNA相比，c.477_481delATCTC突變基因的cDNA具有如下所示的核苷酸序列：ATGAGTCTAGTACTTAATGATCTGCTTATCTGCTGCCGTCAACTAGAACATGATAGAGCTACAGAACGAAAGAAAGAAGTTGAGAAATTTAAGCGCCTGATTCGAGATCCTGAAACAATTAAACATCTAGATCGGCATTCAGATTCCAAACAAGGAAAATATTTGAATTGGGATGCTGTTTTTAGATTTTTACAGAAATATATTCAGAAAGAAACAGAATGTCTGAGAATAGCAAAACCAAATGTATCAGCCTCAACACAAGCCTCCAGGCAGAAAAAGATGCAGGAAATCAGTAGTTTGGTCAAATACTTCATCAAATGTGCAAACAGAAGAGCACCTAGGCTAAAATGTCAAGAACTCTTAAATTATATCATGGATACAGTGAAAGATTCATCTAATGGTGCTATTTACGGAGCTGATTGTAGCAACATACTACTCAAAGACATTCTTTCTGTGAGAAAATACTGGTGTGAAATAGCAACAGTGGTTAGAATTGTTCTCTGTGTACTTCAGGCTCTATCTGAAACCTTCACAAGATGTTCA(SEQIDNO：3)，上述c.477_481delATCTC突變基因編碼的氨基酸序列如下：MSLVLNDLLICCRQLEHDRATERKKEVEKFKRLIRDPETIKHLDRHSDSKQGKYLNWDAVFRFLQKYIQKETECLRIAKPNVSASTQASRQKKMQEISSLVKYFIKCANRRAPRLKCQELLNYIMDTVKDSSNGAIYGADCSNILLKDILSVRKYWCEIATVVRIVLCVLQALSETFTRCS(SEQIDNO：4)。與野生型ATM基因的cDNA相比，c.4777-2A>T的突變基因的cDNA具有如下所示的核苷酸序列：ATGAGTCTAGTACTTAATGATCTGCTTATCTGCTGCCGTCAACTAGAACATGATAGAGCTACAGAACGAAAGAAAGAAGTTGAGAAATTTAAGCGCCTGATTCGAGATCCTGAAACAATTAAACATCTAGATCGGCATTCAGATTCCAAACAAGGAAAATATTTGAATTGGGATGCTGTTTTTAGATTTTTACAGAAATATATTCAGAAAGAAACAGAATGTCTGAGAATAGCAAAACCAAATGTATCAGCCTCAACACAAGCCTCCAGGCAGAAAAAGATGCAGGAAATCAGTAGTTTGGTCAAATACTTCATCAAATGTGCAAACAGAAGAGCACCTAGGCTAAAATGTCAAGAACTCTTAAATTATATCATGGATACAGTGAAAGATTCATCTAATGGTGCTATTTACGGAGCTGATTGTAGCAACATACTACTCAAAGACATTCTTTCTGTGAGAAAATACTGGTGTGAAATATCTCAGCAACAGTGGTTAGAATTGTTCTCTGTGTACTTCAGGCTCTATCTGAAACCTTCACAAGATGTTCATAGAGTTTTAGTGGCTAGAATAATTCATGCTGTTACCAAAGGATGCTGTTCTCAGACTGACGGATTAAATTCCAAATTTTTGGACTTTTTTTCCAAGGCTATTCAGTGTGCGAGACAAGAAAAGAGCTCTTCAGGTCTAAATCATATCTTAGCAGCTCTTACTATCTTCCTCAAGACTTTGGCTGTCAACTTTCGAATTCGAGTGTGTGAATTAGGAGATGAAATTCTTCCCACTTTGCTTTATATTTGGACTCAACATAGGCTTAATGATTCTTTAAAAGAAGTCATTATTGAATTATTTCAACTGCAAATTTATATCCATCATCCGAAAGGAGCCAAAACCCAAGAAAAAGGTGCTTATGAATCAACAAAATGGAGAAGTATTTTATACAACTTATATGATCTGCTAGTGAATGAGATAAGTCATATAGGAAGTAGAGGAAAGTATTCTTCAGGATTTCGTAATATTGCCGTCAAAGAAAATTTGATTGAATTGATGGCAGATATCTGTCACCAGGTTTTTAATGAAGATACCAGATCCTTGGAGATTTCTCAATCTTACACTACTACACAAAGAGAATCTAGTGATTACAGTGTCCCTTGCAAAAGGAAGAAAATAGAACTAGGCTGGGAAGTAATAAAAGATCACCTTCAGAAGTCACAGAATGATTTTGATCTTGTGCCTTGGCTACAGATTGCAACCCAATTAATATCAAAGTATCCTGCAAGTTTACCTAACTGTGAGCTGTCTCCATTACTGATGATACTATCTCAGCTTCTACCCCAACAGCGACATGGGGAACGTACACCATATGTGTTACGATGCCTTACGGAAGTTGCATTGTGTCAAGACAAGAGGTCAAACCTAGAAAGCTCACAAAAGTCAGATTTATTAAAACTCTGGAATAAAATTTGGTGTATTACCTTTCGTGGTATAAGTTCTGAGCAAATACAAGCTGAAAACTTTGGCTTACTTGGAGCCATAATTCAGGGTAGTTTAGTTGAGGTTGACAGAGAATTCTGGAAGTTATTTACTGGGTCAGCCTGCAGACCTTCATGTCCTGCAGTATGCTGTTTGACTTTGGCACTGACCACCAGTATAGTTCCAGGAACGGTAAAAATGGGAATAGAGCAAAATATGTGTGAAGTAAATAGAAGCTTTTCTTTAAAGGAATCAATAATGAAATGGCTCTTATTCTATCAGTTAGAGGGTGACTTAGAAAATAGCACAGAAGTGCCTCCAATTCTTCACAGTAATTTTCCTCATCTTGTACTGGAGAAAATTCTTGTGAGTCTCACTATGAAAAACTGTAAAGCTGCAATGAATTTTTTCCAAAGCGTGCCAGAATGTGAACACCACCAAAAAGATAAAGAAGAACTTTCATTCTCAGAAGTAGAAGAACTATTTCTTCAGACAACTTTTGACAAGATGGACTTTTTAACCATTGTGAGAGAATGTGGTATAGAAAAGCACCAGTCCAGTATTGGCTTCTCTGTCCACCAGAATCTCAAGGAATCACTGGATCGCTGTCTTCTGGGATTATCAGAACAGCTTCTGAATAATTACTCATCTGAGATTACAAATTCAGAAACTCTTGTCCGGTGTTCACGTCTTTTGGTGGGTGTCCTTGGCTGCTACTGTTACATGGGTGTAATAGCTGAAGAGGAAGCATATAAGTCAGAATTATTCCAGAAAGCCAAGTCTCTAATGCAATGTGCAGGAGAAAGTATCACTCTGTTTAAAAATAAGACAAATGAGGAATTCAGAATTGGTTCCTTGAGAAATATGATGCAGCTATGTACACGTTGCTTGAGCAACTGTACCAAGAAGAGTCCAAATAAGATTGCATCTGGCTTTTTCCTGCGATTGTTAACATCAAAGCTAATGAATGACATTGCAGATATTTGTAAAAGTTTAGCATCCTTCATCAAAAAGCCATTTGACCGTGGAGAAGTAGAATCAATGGAAGATGATACTAATGGAAATCTAATGGAGGTGGAGGATCAGTCATCCATGAATCTATTTAACGATTACCCTGATAGTAGTGTTAGTGATGCAAACGAACCTGGAGAGAGCCAAAGTACCATAGGTGCCATTAATCCTTTAGCTGAAGAATATCTGTCAAAGCAAGATCTACTTTTCTTAGACATGCTCAAGTTCTTGTGTTTGTGTGTAACTACTGCTCAGACCAATACTGTGTCCTTTAGGGCAGCTGATATTCGGAGGAAATTGTTAATGTTAATTGATTCTAGCACGCTAGAACCTACCAAATCCCTCCACCTGCATATGTATCTAATGCTTTTAAAGGAGCTTCCTGGAGAAGAGTACCCCTTGCCAATGGAAGATGTTCTTGAACTTCTGAAACCACTATCCAATGTGTGTTCTTTGTATCGTCGTGACCAAGATGTTTGTAAAACTATTTTAAACCATGTCCTTCATGTAGTGAAAAACCTAGGTCAAAGCAATATGGACTCTGAGAACACAAGGGATGCTCAAGGACAGTTTCTTACAGTAATTGGAGCATTTTGGCATCTAACAAAGGAGAGGAAATATATATTCTCTGTAAGAATGGCCCTAGTAAATTGCCTTAAAACTTTGCTTGAGGCTGATCCTTATTCAAAATGGGCCATTCTTAATGTAATGGGAAAAGACTTTCCTGTAAATGAAGTATTTACACAATTTCTTGCTGACAATCATCACCAAGTTCGCATGTTGGCTGCAGAGTCAATCAATAGATTGTTCCAGGACACGAAGGGAGATTCTTCCAGGTTACTGAAAGCACTTCCTTTGAAGCTTCAGCAAACAGCTTTTGAAAATGCATACTTGAAAGCTCAGGAAGGAATGAGAGAAATGTCCCATAGTGCTGAGAACCCTGAAACTTTGGATGAAATTTATAATAGAAAATCTGTTTTACTGACGTTGATAGCTGTGGTTTTATCCTGTAGCCCTATCTGCGAAAAACAGGCTTTGTTTGCCCTGTGTAAATCTGTGAAAGAGAATGGATTAGAACCTCACCTTGTGAAAAAGGTTTTAGAGAAAGTTTCTGAAACTTTTGGATATAGACGTTTAGAAGACTTTATGGCATCTCATTTAGATTATCTGGTTTTGGAATGGCTAAATCTTCAAGATACTGAATACAACTTATCTTCTTTTCCTTTTATTTTATTAAACTACACAAATATTGAGGATTTCTATAGATCTTGTTATAAGGTTTTGATTCCACATCTGGTGATTAGAAGTCATTTTGATGAGGTGAAGTCCATTGCTAATCAGATTCAAGAGGACTGGAAAAGTCTTCTAACAGACTGCTTTCCAAAGATTCTTGTAAATATTCTTCCTTATTTTGCCTATGAGGGTACCAGAGACAGTGGGATGGCACAGCAAAGAGAGACTGCTACCAAGGTCTATGATATGCTTAAAAGTGAAAACTTATTGGGAAAACAGATTGATCACTTATTCATTAGTAATTTACCAGAGATTGTGGTGGAGTTATTGATGACGTTACATGAGCCAGCAAATTCTAGTGCCAGTCAGAGCACTGACCTCTGTGACTTTTCAGGGGATTTGGATCCTGCTCCTAATCCACCTCATTTTCCATCGCATGTGATTAAAGCAACATTTGCCTATATCAGCAATTGTCATAAAACCAAGTTAAAAAGCATTTTAGAAATTCTTTCCAAAAGCCCTGATTCCTATCAGAAAATTCTTCTTGCCATATGTGAGCAAGCAGCTGAAACAAATAATGTTTATAAGAAGCACAGAATTCTTAAAATATATCACCTGTTTGTTAGTTTATTACTGAAAGATATAAAAAGTGGCTTAGGAGGAGCTTGGGCCTTTGTTCTTCGAGACGTTATTTATACTTTGATTCACTATATCAACCAAAGGCCTTCTTGTATCATGGATGTGTCATTACGTAGCTTCTCCCTTTGTTGTGACTTATTAAGTCAGGTTTGCCAGACAGCCGTGACTTACTGTAAGGATGCTCTAGAAAACCATCTTCATGTTATTGTTGGTACACTTATACCCCTTGTGTATGAGCAGGTGGAGGTTCAGAAACAGGTATTGGACTTGTTGAAATACTTAGTGATAGATAACAAGGATAATGAAAACCTCTATATCACGATTAAGCTTTTAGATCCTTTTCCTGACCATGTTGTTTTTAAGGATTTGCGTATTACTCAGCAAAAAATCAAATACAGTAGAGGACCCTTTTCACTCTTGGAGTTCTCAGGA(SEQIDNO：5)，上述c.4777-2A>T的突變基因編碼的氨基酸序列如下：MSLVLNDLLICCRQLEHDRATERKKEVEKFKRLIRDPETIKHLDRHSDSKQGKYLNWDAVFRFLQKYIQKETECLRIAKPNVSASTQASRQKKMQEISSLVKYFIKCANRRAPRLKCQELLNYIMDTVKDSSNGAIYGADCSNILLKDILSVRKYWCEISQQQWLELFSVYFRLYLKPSQDVHRVLVARIIHAVTKGCCSQTDGLNSKFLDFFSKAIQCARQEKSSSGLNHILAALTIFLKTLAVNFRIRVCELGDEILPTLLYIWTQHRLNDSLKEVIIELFQLQIYIHHPKGAKTQEKGAYESTKWRSILYNLYDLLVNEISHIGSRGKYSSGFRNIAVKENLIELMADICHQVFNEDTRSLEISQSYTTTQRESSDYSVPCKRKKIELGWEVIKDHLQKSQNDFDLVPWLQIATQLISKYPASLPNCELSPLLMILSQLLPQQRHGERTPYVLRCLTEVALCQDKRSNLESSQKSDLLKLWNKIWCITFRGISSEQIQAENFGLLGAIIQGSLVEVDREFWKLFTGSACRPSCPAVCCLTLALTTSIVPGTVKMGIEQNMCEVNRSFSLKESIMKWLLFYQLEGDLENSTEVPPILHSNFPHLVLEKILVSLTMKNCKAAMNFFQSVPECEHHQKDKEELSFSEVEELFLQTTFDKMDFLTIVRECGIEKHQSSIGFSVHQNLKESLDRCLLGLSEQLLNNYSSEITNSETLVRCSRLLVGVLGCYCYMGVIAEEEAYKSELFQKAKSLMQCAGESITLFKNKTNEEFRIGSLRNMMQLCTRCLSNCTKKSPNKIASGFFLRLLTSKLMNDIADICKSLASFIKKPFDRGEVESMEDDTNGNLMEVEDQSSMNLFNDYPDSSVSDANEPGESQSTIGAINPLAEEYLSKQDLLFLDMLKFLCLCVTTAQTNTVSFRAADIRRKLLMLIDSSTLEPTKSLHLHMYLMLLKELPGEEYPLPMEDVLELLKPLSNVCSLYRRDQDVCKTILNHVLHVVKNLGQSNMDSENTRDAQGQFLTVIGAFWHLTKERKYIFSVRMALVNCLKTLLEADPYSKWAILNVMGKDFPVNEVFTQFLADNHHQVRMLAAESINRLFQDTKGDSSRLLKALPLKLQQTAFENAYLKAQEGMREMSHSAENPETLDEIYNRKSVLLTLIAVVLSCSPICEKQALFALCKSVKENGLEPHLVKKVLEKVSETFGYRRLEDFMASHLDYLVLEWLNLQDTEYNLSSFPFILLNYTNIEDFYRSCYKVLIPHLVIRSHFDEVKSIANQIQEDWKSLLTDCFPKILVNILPYFAYEGTRDSGMAQQRETATKVYDMLKSENLLGKQIDHLFISNLPEIVVELLMTLHEPANSSASQSTDLCDFSGDLDPAPNPPHFPSHVIKATFAYISNCHKTKLKSILEILSKSPDSYQKILLAICEQAAETNNVYKKHRILKIYHLFVSLLLKDIKSGLGGAWAFVLRDVIYTLIHYINQRPSCIMDVSLRSFSLCCDLLSQVCQTAVTYCKDALENHLHVIVGTLIPLVYEQVEVQKQVLDLLKYLVIDNKDNENLYITIKLLDPFPDHVVFKDLRITQQKIKYSRGPFSLLEFSG(SEQIDNO：6)。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)的ATM基因突變體與SEQIDNO：1相比，本發(fā)明的ATM基因具有一個c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC、exon65del突變的至少一種。具體地，ATM基因突變體的c.5697C>A突變相對于野生型ATM基因的cDNA的第5697位的C突變?yōu)锳，由此，導致其編碼的蛋白發(fā)生p.Cys1899X無義突變。c.4777-2A>T突變后的基因序列為SEQIDNO：5，p.Glu2950fs突變蛋白的序列為SEQIDNO：6。c.3078G>T突變相對于野生型ATM基因的cDNA的第3078位的G突變?yōu)門，由此，導致其編碼的蛋白發(fā)生了p.Trp1026Cys錯義突變。c.7983_7985delTGT突變相對于野生型ATM基因cDNA的第7983_7985位的TGT缺失了，因而導致其編碼的蛋白發(fā)生了p.Val2662del的缺失突變。c.477_481delATCTC突變相對于野生型ATM基因的cDNA的第477_481位的ATCTC缺失了，因而發(fā)生了移碼突變p.Ile159fs，其突變后的基因以及蛋序列為SEQIDNO：3和SEQIDNO：4。c.8851_8987del(exon65del)突變相對于野生型ATM基因的cDNA的第8851-8987位的基因序列：GTCCTTCTATATGATCCACTCTTTGACTGGACCATGAATCCTTTGAAAGCTTTGTATTTACAGCAGAGGCCGGAAGATGAAACTGAGCTTCACCCTACTCTGAATGCAGATGACCAAGAATGCAAACGAAATCTCAG缺失了，在缺失序列后即是終止密碼子TGA，突變的cDNA包含8853個堿基；由此導致編碼的蛋白在第2951-2995位的VLLYDPLFDWTMNPLKALYLQQRPEDETELHPTLNADDQECKRNL缺失，并隨即翻譯終止，突變蛋白包含2950個氨基酸，即p.2951_2995del。因此根據(jù)本發(fā)明的具體實施例，共濟失調(diào)毛細血管擴張癥是常染色體隱性遺傳病，具有上述至少一種突變?yōu)楣矟д{(diào)毛細血管擴張癥疾病的攜帶者或者患者。根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，通過檢測是否具有c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC、c.8851_8987del的至少一種突變，可以準確有效地預測生物體是否患常染色體隱性遺傳型共濟失調(diào)毛細血管擴張癥。根據(jù)本發(fā)明的第二個方面，本發(fā)明提出了一種分離的多肽。根據(jù)本發(fā)明的實施例，與SEQIDNO：2相比，該多肽具有選自下列的至少一種突變：p.Cys1899X、p.Glu2950fs、p.Trp1026Cys、p.Val2662del、p.Ile159fs、p.2951_2995del。根據(jù)本發(fā)明的具體實施例，該多肽是由前述分離的編碼ATM基因突變體的核酸編碼的。通過檢測生物樣品中是否表達該多肽，可以有效地檢測生物樣品是否易感共濟失調(diào)毛細血管擴張癥，也可以通過檢測這些多肽在生物體中是否存在，可以有效地預測生物體是否易感共濟失調(diào)毛細血管擴張癥。篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的方法根據(jù)本發(fā)明的第三個方面，本發(fā)明提出了一種篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的方法。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的方法可以包括以下步驟：首先，從所述生物樣品提取核酸樣本。根據(jù)本發(fā)明的實施例，生物樣品的類型并不受特別限制，只要從該生物樣品中能夠提取到反映生物樣品ATM是否存在突變的核酸樣本即可。根據(jù)本發(fā)明的實施例，生物樣品可以為選自人體血液。由此，可以方便地進行取樣和檢測，從而能夠進一步提高篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的效率。根據(jù)本發(fā)明的實施例，這里所使用的術語“核酸樣本”應做廣義理解，其可以是任何能夠反映生物樣品中ATM是否存在突變的樣本，例如可以是從生物樣品中直接提取的全基因組DNA，也可以是該全基因組中包含ATM編碼序列的一部分，可以是從生物樣品中提取的總RNA，也可以是從生物樣品中提取的mRNA。根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，所述核酸樣本為全基因組DNA。由此，可以擴大生物樣品的來源范圍，并且可以同時對生物樣品的多種信息進行確定，從而能夠提高篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的效率。另外，根據(jù)本發(fā)明的實施例，針對采用RNA作為核酸樣本，從生物樣品提取核酸樣本可以進一步包括：從生物樣品提取RNA樣本，優(yōu)選RNA樣本為mRNA；以及基于所得到的RNA樣本，通過反轉(zhuǎn)錄反應，獲得cDNA樣本，所得到的cDNA樣本構(gòu)成核酸樣本。由此，可以進一步提高利用RNA作為核酸樣本篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的效率。接下來，在得到核酸樣本之后，可以對核酸樣本進行分析，從而能夠確定所得到核酸樣本的核酸序列。根據(jù)本發(fā)明的實施例，確定所得到核酸樣本的核酸序列的方法和設備并不受特別限制。根據(jù)本發(fā)明的具體實施例，可以通過測序方法，確定核酸樣本的核酸序列。根據(jù)本發(fā)明的實施例，可以用于進行測序的方法和設備并不受特別限制。根據(jù)本發(fā)明的實施例，可以采用第二代測序技術，也可以采用第三代以及第四代或者更先進的測序技術。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，可以利用選自Hiseq2000、SOLiD、454和單分子測序裝置的至少一種對核酸序列進行測序。由此，結(jié)合最新的測序技術，針對單個位點可以達到較高的測序深度，檢測靈敏度和準確性大大提高，因而能夠利用這些測序裝置的高通量、深度測序的特點，進一步提高對核酸樣本進行檢測分析的效率。從而，能夠提高后續(xù)對測序數(shù)據(jù)進行分析時的精確性和準確度。由此，根據(jù)本發(fā)明的實施例，確定核酸樣本的核酸序列可以進一步包括：首先，針對所得到的核酸樣本，構(gòu)建核酸測序文庫；以及對所得到的核酸測序文庫進行測序，以便獲得由多個測序數(shù)據(jù)構(gòu)成的測序結(jié)果。根據(jù)本發(fā)明的一些實施例，可以采用選自Hiseq2000、SOLiD、454和單分子測序裝置的至少一種對所得到的核酸測序文庫進行測序。另外，根據(jù)本發(fā)明的實施例，可以對核酸樣本進行篩選，富集ATM外顯子，該篩選富集可以在構(gòu)建測序文庫之前，構(gòu)建測序文庫過程中，或者構(gòu)建測序文庫之后進行。根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，針對核酸樣本，構(gòu)建核酸測序文庫進一步包括：利用ATM基因外顯子特異性引物，對核酸樣本進行PCR擴增；以及針對所得到的擴增產(chǎn)物，構(gòu)建核酸測序文庫。由此，可以通過PCR擴增，富集ATM基因外顯子，從而能夠進一步提高篩選易感共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的效率。根據(jù)本發(fā)明的實施例，ATM基因外顯子特異性引物的序列不受特別限制，根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施例，這些ATM基因外顯子特異性引物具有如下表所示的核苷酸序列，即SEQIDNO：7-16所示的核苷酸序列。發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過采用這些引物，可以在PCR反應體系中顯著有效地完成對ATM外顯子尤其是c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)突變所在的外顯子序列的擴增。需要說明的是，這些SEQIDNO：7-16所示的核苷酸序列是本發(fā)明的發(fā)明人在付出了艱苦的勞動后，意外獲得的。根據(jù)本發(fā)明的具體實施例，上述的共濟失調(diào)毛細血管擴張癥是常染色體隱性遺傳疾病。關于針對核酸樣本，構(gòu)建測序文庫的方法和流程，本領域技術人員可以根據(jù)不同的測序技術進行適當選擇，關于流程的細節(jié)，可以參見測序儀器的廠商例如Illumina公司所提供的規(guī)程，例如參見Illumina公司MultiplexingSamplePreparationGuide(Part#1005361；Feb2010)或Paired-EndSamplePrepGuide(Part#1005063；Feb2010)，通過參照將其并入本文。根據(jù)本發(fā)明的實施例，從生物樣品提取核酸樣本的方法和設備，也不受特別限制，可以采用商品化的核酸提取試劑盒進行。需要說明的是，在這里所使用的術語“核酸序列”應作廣義理解，其可以是在對核酸樣本進行測序得到的測序數(shù)據(jù)進行組裝后，得到的完整的核酸序列信息，也可以是直接采用通過對核酸樣本進行測序所得到的測序數(shù)據(jù)(reads)作為核酸序列，只要這些核酸序列中含有對應ATM基因的編碼序列即可。最后，在確定核酸樣本的核酸序列之后，將所得到的核酸樣本的核酸序列與SEQIDNO：1的序列相比對。如果在所得到的核酸序列中具有c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)突變的至少一種，則指示生物樣品易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥。由此，通過根據(jù)本發(fā)明實施例的篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的方法，可以有效地篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品。根據(jù)本發(fā)明的實施例，對核酸序列與SEQIDNO：1進行比對的方法和設備并不受特別限制，可以采用任意常規(guī)的軟件進行操作，根據(jù)本發(fā)明的具體實例，可以采用SOAP軟件進行比對。需要說明的是，根據(jù)本發(fā)明實施例的“篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的方法”的用途不受特別限制，例如可以用作非診斷目的的篩選方法。篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的系統(tǒng)和試劑盒根據(jù)本發(fā)明的第四個方面，本發(fā)明提出了一種篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的系統(tǒng)。參考圖1，根據(jù)本發(fā)明的實施例，該篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的系統(tǒng)1000包括核酸提取裝置100、核酸序列確定裝置200以及判斷裝置300。根據(jù)本發(fā)明的實施例，核酸提取裝置100用于從生物樣品提取核酸樣本。如前所述，根據(jù)本發(fā)明的實施例，核酸樣本的類型并不受特別限制，對于采用RNA作為核酸樣本，則核酸提取裝置進一步包括RNA提取單元101和反轉(zhuǎn)錄單元102，其中，提取單元101用于從生物樣品提取RNA樣本，反轉(zhuǎn)錄單元102與RNA提取單元101相連，用于對RNA樣本進行反轉(zhuǎn)錄反應，以便獲得cDNA樣本，所得到的cDNA樣本構(gòu)成核酸樣本。根據(jù)本發(fā)明的實施例，核酸序列確定裝置200與核酸提取裝置100相連，用于對核酸樣本進行分析，以便確定核酸樣本的核酸序列。如前所示，可以采用測序的方法確定核酸樣本的核酸序列。由此，根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，所述核酸序列確定裝置200可以進一步包括：文庫構(gòu)建單元201以及測序單元202。文庫構(gòu)建單元201用于針對核酸樣本，構(gòu)建核酸測序文庫；測序單元202與文庫構(gòu)建單元201相連，用于對核酸測序文庫進行測序，以便獲得由多個測序數(shù)據(jù)構(gòu)成的測序結(jié)果。如前所述，可以通過PCR擴增，富集ATM外顯子，進一步提高篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的效率。由此，文庫構(gòu)建單元201可以進一步包括PCR擴增模塊(圖中未示出)，在該PCR擴增模塊中設置有ATM外顯子特異性引物，以便利用ATM外顯子特異性引物，對所述核酸樣本進行PCR擴增，根據(jù)本發(fā)明的具體實施例，ATM基因外顯子特異性引物具有如SEQIDNO：7-16所示的核苷酸序列。根據(jù)本發(fā)明的實施例，測序單元202可以包括選自HISEQ2000、SOLiD、454和單分子測序裝置的至少一種。由此，結(jié)合最新的測序技術，針對單個位點可以達到較高的測序深度，檢測靈敏度和準確性大大提高，因而能夠利用這些測序裝置的高通量、深度測序的特點，進一步提高對核酸樣本進行檢測分析的效率。從而，提高后續(xù)對測序數(shù)據(jù)進行分析時的精確性和準確度。根據(jù)本發(fā)明的實施例，判斷裝置300與核酸序列確定裝置200相連，適于將核酸樣本的核酸序列進行比對，以便基于核酸樣本的核酸序列與SEQIDNO：1的區(qū)別判斷生物樣品是否易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥。具體地，基于核酸樣本的核酸序列與SEQIDNO：1相比，是否具有c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)的至少一種突變，判斷生物樣品是否易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥。如前所述，根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，核酸樣本的核酸序列與SEQIDNO：1相比，具有c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)的至少一種突變，是生物樣品易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的指示。如前所述，根據(jù)本發(fā)明的實施例，對核酸序列與SEQIDNO：1進行比對的設備并不受特別限制，可以采用任意常規(guī)的軟件進行操作，根據(jù)本發(fā)明的具體實例，可以采用SOAP軟件進行比對。由此，利用該系統(tǒng)，能夠有效地實施前述篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的方法，從而可以有效地篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品。根據(jù)本發(fā)明的第五方面，本發(fā)明提出了一種用于篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該用于篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的試劑盒包括：適于檢測ATM基因突變體的試劑，其中與SEQIDNO：1相比，該ATM基因突變體具有c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)的至少一種突變。利用根據(jù)本發(fā)明的實施例的試劑盒，能夠有效地篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品。在本文中，所使用的術語“適于檢測ATM基因突變體的試劑”應做廣義理解，即可以是檢測ATM編碼基因的試劑，也可以是檢測ATM突變體多肽的試劑，例如可以采用識別特異性位點的抗體。根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，所述試劑為核酸探針，由此，可以高效地篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品。根據(jù)本發(fā)明的具體實施例，上述共濟失調(diào)毛細血管擴張癥為常染色體隱性遺傳疾病。需要說明的是，在本文前面篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的方法部分中所描述的特征和優(yōu)點，同樣適用于篩選易患共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的生物樣品的系統(tǒng)或者試劑盒，在此不再贅述。構(gòu)建體及重組細胞根據(jù)本發(fā)明的第六方面，本發(fā)明還提出了一種構(gòu)建體。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該構(gòu)建體包含前面所述的分離的編碼ATM基因突變體的核酸。需要說明的是，“構(gòu)建體包含前面所述的分離的編碼ATM基因突變體的核酸”表示，本發(fā)明的構(gòu)建體包含與SEQIDNO：1相比具有c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)至少一種突變。由此，利用本發(fā)明的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化受體細胞獲得的重組細胞，能夠有效地用作共濟失調(diào)毛細血管擴張癥相關研究的模型。其中，所述受體細胞的種類不受特別限制，例如可以為大腸桿菌細胞、哺乳動物細胞，優(yōu)選該受體細胞來源于哺乳動物。在本發(fā)明中所使用的術語“構(gòu)建體”是指這樣的一種遺傳載體，其包含特定核酸序列，并且能夠?qū)⒛康暮怂嵝蛄修D(zhuǎn)入宿主細胞中，以獲得重組細胞。根據(jù)本發(fā)明的實施例，構(gòu)建體的形式不受特別限制。根據(jù)本發(fā)明的實施例，其可以為質(zhì)粒、噬菌體、人工染色體、粘粒(Cosmid)、病毒的至少一種，優(yōu)選質(zhì)粒。質(zhì)粒作為遺傳載體，具有操作簡單，可以攜帶較大片段的性質(zhì)，便于操作和處理。質(zhì)粒的形式也不受特別限制，既可以是環(huán)形質(zhì)粒，也可以是線性質(zhì)粒，即可以是單鏈的，也可以是雙鏈的。本領域技術人員可以根據(jù)需要進行選擇。在本發(fā)明中所使用的術語“核酸”可以是任何包含脫氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于經(jīng)過修飾的或者未經(jīng)修飾的DNA、RNA，其長度不受任何特別限制。對于用于構(gòu)建重組細胞的構(gòu)建體，優(yōu)選所述核酸為DNA，因為DNA相對于RNA而言，其更穩(wěn)定，并且易于操作。根據(jù)本發(fā)明的第七方面，本發(fā)明還提出了一種重組細胞。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該重組細胞是通過前面所述的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化受體細胞而獲得的。從而，本發(fā)明的重組細胞能夠有效表達構(gòu)建體所攜帶的ATM基因突變體。根據(jù)本發(fā)明的一些實施例，本發(fā)明的重組細胞，能夠有效地用作共濟失調(diào)毛細血管擴張癥相關研究的模型。根據(jù)本發(fā)明的實施例，受體細胞的種類不受特別限制，例如可以為大腸桿菌細胞、哺乳動物細胞，優(yōu)選所述受體細胞來源于非人哺乳動物。對于本發(fā)明中所述核酸，本領域技術人員應當理解，實際包括互補雙鏈的任意一條，或者兩條。為了方便，在本發(fā)明的實施例中，雖然多數(shù)情況下只給出了一條鏈，但實際上也公開了與之互補的另一條鏈。例如，提及SEQIDNO:1，實際包括其互補序列。本領域技術人員還可以理解，利用一條鏈可以檢測另一條鏈，反之亦然。下面參考具體實施例，對本發(fā)明進行說明，需要說明的是，這些實施例僅僅是說明性的，而不能理解為對本發(fā)明的限制。若未特別指明，實施例中所采用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規(guī)手段，可以參照《分子克隆實驗指南》第三版或者相關產(chǎn)品進行，所采用的試劑和產(chǎn)品也均為可商業(yè)獲得的。未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規(guī)方法，所用試劑的來源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現(xiàn)時標明，其后所用相同試劑如無特殊說明，均與首次標明的內(nèi)容相同。實施例1確定共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的致病基因1、樣本收集發(fā)明人收集到了三個兩代的共濟失調(diào)毛細血管擴張癥(本文中也可以稱將共濟失調(diào)毛細血管擴張癥簡稱為AT)的患者家系，以及隨即收集的該家系外的500名正常人的基因。圖2顯示了AT家系1、AT家系2以及AT家系3的家系圖譜。如圖2所示，其中，□表示正常男性，○表示正常女性，■表示男性患者，●表示女性患者。由圖2可知，每個家系共有3名成員，其中第二代子女為AT患者，第一代的父母為正常成員。三個家系中的三名患者均表現(xiàn)為兒童期出現(xiàn)行走不穩(wěn)癥狀，同時伴有眼球結(jié)膜處血絲，面部和關節(jié)多處色素沉著及皮膚結(jié)節(jié)形成。體檢發(fā)現(xiàn)體態(tài)偏瘦，多處明顯色素沉著，尤其在耳后和雙肘關節(jié)等處可見結(jié)痂形成；明顯的眼球結(jié)膜毛細血管擴張和面頰部毛細血管擴張，并且對頭部進行核磁共振檢查(MRI)發(fā)現(xiàn)小腦萎縮。1、DNA提取采用OMEGABloodDNAMidiKit全血DNA提取試劑盒從外周血樣品中提取DNA,提取步驟如下：1)取2ml全血樣本，加入150ulOBProtease，2.1mlBufferBL和20ulRNaseA，最大速度漩渦1分鐘，徹底混勻。2)65攝氏度水浴15-20分鐘，并在水浴過程中漩渦5次。3)加入2.2ml無水乙醇，最大速度漩渦30秒，徹底混勻。4)將3.5ml裂解液移入帶過濾柱的15ml離心管，4000轉(zhuǎn)離心5分鐘，取出過濾柱，倒掉過濾液體，放回過濾柱。5)將第3步剩余裂解液加入帶過濾柱的15ml離心管，4000轉(zhuǎn)離心5分鐘，取出過濾柱，倒掉過濾液體，放回過濾柱。6)加入3mlHBBuffer，洗滌過濾柱，4000轉(zhuǎn)離心5分鐘，取出過濾柱，倒掉過濾液體，放回過濾柱。7)加入3mlDNAWashBuffer，4000轉(zhuǎn)離心5分鐘，取出過濾柱，倒掉過濾液體，放回過濾柱。8)再次加入3mlDNAWashBuffer，4000轉(zhuǎn)離心5分鐘，取出過濾柱，倒掉過濾液體，放回過濾柱。9)4000轉(zhuǎn)離心15分鐘，甩干過濾柱。10)將過濾柱移至新的15ml離心管，加入500ul70攝氏度的ElutionBuffer，室溫靜置5分鐘，4000轉(zhuǎn)離心5分鐘，收集含有DNA的過濾液。11)再次將過濾柱移至新的15ml離心管，加入500ul70攝氏度的ElutionBuffer，室溫靜置5分鐘，4000轉(zhuǎn)離心5分鐘，收集含有DNA的過濾液。2、外顯子捕獲與測序我們挑選了三名患者進行外顯子組測序及數(shù)據(jù)分析，具體做法如下。隨后，發(fā)明人用AgilentSureSelectHumanAllExonKit結(jié)合Solexa高通量測序技術對病例AT家系1-II：1、AT家系2-II：1、AT家系3-II：1的外顯子組序列進行了測序，具體如下：1)將基因組DNA隨機打斷成150-200bp左右的片段，隨后在片段兩端分別連接上接頭制備雜交文庫(參見http://www.illumina.com/提供的Illumina/Solexa標準建庫說明書)。2)文庫經(jīng)純化后經(jīng)過ligation-mediatedPCR(LM-PCR)的線性擴增與SureSelectBiotinylatedRNALibrary(BAITS)進行雜交富集，再經(jīng)過LM-PCR的線性擴增后進行上機測序。測序平臺為IlluminaHiseq2000，讀取長度為90bp,每個樣本的平均測序深度最少為80×。3)測序后獲得的原始數(shù)據(jù)由IlluminabasecallingSoftware1.7進行處理，經(jīng)過過濾去污染、使用SOAPaligner2.20比對參考基因組，獲得比對到基因組上的Uniquemappedreads。靶區(qū)域的基因型由SOAPsnp。3、結(jié)論在病例AT家系1-II：1中均發(fā)現(xiàn)有60711個單核苷酸多態(tài)性(SNPs)和3916處的插入/缺失。在病例AT家系2-II：1中發(fā)現(xiàn)了62518個單核苷酸多態(tài)性(SNPs)和4118處的插入/缺失，病例AT家系3-II：1中發(fā)現(xiàn)了58283個單核苷酸多態(tài)性(SNPs)和3687處的插入/缺失，將結(jié)果與dbSNP數(shù)據(jù)庫(http://hgdownload.cse.ucsc.edu/goldenPath/hg19/database/snp132.txt.gz)，HapMap數(shù)據(jù)庫(ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/hapmap)，千人基因組數(shù)據(jù)庫(ftp://ftp.1000genomes.ebi.ac.uk/vol1/ftp)，炎黃數(shù)據(jù)庫(http://yh.genomics.org.cn/)等公共數(shù)據(jù)庫進行比較，過濾掉所有已知變異。利用SIFT軟件進行SNP功能預測.分別發(fā)現(xiàn)患者AT家系1-II：1在ATM基因存在一個復合雜合的突變c.5697C>A(p.Cys1899X，無義突變)、exon65del，其中患者父親攜帶雜合突變c.5697C>A，患者母親攜帶雜合缺失exon65del。AT家系2-II：1在ATM基因存在一個復合雜合的突變c.477_481delATCTC(移碼突變)、c.4777-2A>T(剪切位點突變)，其中患者父親攜帶雜合缺失c.477_481delATCTC，患者母親攜帶雜合突變c.4777-2A>T。AT家系3-II：1在ATM基因存在一個復合雜合的突變c.3078G>T(p.Trp1026Cys，錯義突變)、c.7983_7985delTGT，其中患者父親攜帶雜合突變c.3078G>T，患者母親攜帶雜合缺失c.7983_7985delTGT。研究表明，通過家族中疾病共分離和正常人SNP篩查，這三個復合雜合位點突變可引起常染色體隱性遺傳性的AT疾病，因此可能是致病位點。實施例2Sanger法測序驗證共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的致病基因采集3例AT患者及其父母外周血，利用常規(guī)酚-氯仿法抽提外周血白細胞中的基因組DNA，利用分光光度計測量DNA的濃度及純度，所得的每個標本基因組DNA的OD260/OD280均位于1.7-2.0之間，濃度不少于200ng/ul，總量不少于30μg。分別對3名患者(即圖2中的患者II：1)、6名家系內(nèi)正常人(即該3例患者的父母，均未發(fā)病)和500名家系外正常人(即與表中所有患者無血緣關系的對照)基因進行檢測，針對ATM基因所有外顯子序列設計引物，通過PCR擴增，產(chǎn)物純化，測序的方法獲得ATM有關序列，根據(jù)序列測定結(jié)果屬于突變型還是野生型，驗證ATM與AT疾病之間相關性。具體方法步驟如下：1、DNA提取：分別采取3名家系內(nèi)患者、6名家系內(nèi)正常人和500名家系外正常人外周靜脈血按照上述方法提取基因組DNA，分光光度計測DNA含量。2、引物設計及PCR反應引物設計參考人類基因組序列數(shù)據(jù)庫hg19/build37.1，具體見下。引物序列：b)反應體系：10μL試劑體積2×GCBufferⅠ5.0μldNTPs(10mM)0.4μlLATaq酶(5U/μl)0.1μlPrimers(100ng/μl)0.2μl/個gDNA模板(50ng/μl)1.0μlddH2OAddto10.0μlc)反應條件：3)將步驟2中獲得的獲自3例AT患者、6名家系內(nèi)正常人和500名家系外正常人PCR擴增產(chǎn)物直接進行DNA測序。表1AT家系中的患者情況在患者家族成員中對ATM基因突變位點所在編碼序列及側(cè)翼序列進行突變排查，分別發(fā)現(xiàn)患者AT家系1-II：1在ATM基因存在一個復合雜合的突變c.5697C>A(p.Cys1899X，無義突變)、exon65del，其中患者父親攜帶雜合突變c.5697C>A，患者母親攜帶雜合缺失exon65del。AT家系2-II：1在ATM基因存在一個復合雜合的突變c.477_481delATCTC(移碼突變)、c.4777-2A>T(剪切位點突變)，其中患者父親攜帶雜合缺失c.477_481delATCTC，患者母親攜帶雜合突變c.4777-2A>T。AT家系3-II：1在ATM基因存在一個復合雜合的突變c.3078G>T(p.Trp1026Cys，錯義突變)、c.7983_7985delTGT，其中患者父親攜帶雜合突變c.3078G>T，患者母親攜帶雜合缺失c.7983_7985delTGT。(見表2及圖3-5)。同時，我們在500個家族外無關正常對照中排查未檢測到的突變位點。表2AT家系成員的基因突變情況本發(fā)明的ATM基因中的是否具有c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)突變的至少一種，可判斷此家族中未發(fā)病的人群患病的可能性，同時可用于家族后代患病幾率的評估與診斷，為患者及家庭提供遺傳咨詢及產(chǎn)前診斷避免攜帶該突變的下一代出生。研究證實ATM基因突變可以引起共濟失調(diào)毛細血管擴張癥。我們的研究表明：ATM基因中的c.5697C>A、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT、c.477_481delATCTC和c.8851_8987del(exon65del)突變是引起常染色體隱性遺傳性AT疾病的突變。本發(fā)明公開了六種已知耳聾基因(ATM)的新突變，證實了其為常染色體隱性遺傳性的分子病因，在500例中國正常人群中進行該位點的篩查，均為陰性。本研究豐富了ATM基因突變譜，為開展遺傳性AT疾病的分子診斷提供了基因?qū)W依據(jù)。實施例3檢測試劑盒制備檢測試劑盒，其中含有檢測突變的c.5679C>A、c.477_481delATCTC、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT的引物對見下表：按照實施例1所述的方法提取待測者DNA，以所提取的DNA為模板與上述引物進行PCR反應，按照本領域常規(guī)方法對PCR產(chǎn)物純化，將純化的產(chǎn)物測序。觀察測序所得到的序列是否有c.5679C>A、c.477_481delATCTC、c.4777-2A>T、c.3078G>T、c.7983_7985delTGT突變。實施例4分別對AT家系1內(nèi)1個患者樣本和1個患者的母親(非患者)樣本進行QPCR。具體方法步驟如下：1、DNA提?。翰杉颊吆推淠赣H的外周靜脈血用QIAampDNABloodMiNiKit(Qiagen,Hilden,Germany)方法提取基因組DNA。2、引物設計及PCR反應1)QPCR引物：2)QPCR實驗儀器及條件：ABI7500熒光定量PCR儀3)實驗用量及試劑：模板為1ul每個做三個平行樣。3、最低循環(huán)數(shù)值(Ct)比較法計算ATM基因的65號外顯子的相對拷貝數(shù)應用vvCt法，與內(nèi)對照ALB基因比較可以得出ATM基因的65號外顯子的相對拷貝數(shù)(圖6)。在患者家族成員中對ATM基因突變位點所在編碼序列及側(cè)翼序列進行突變排查，分別發(fā)現(xiàn)患者AT家系1-II：1在ATM基因存在exon65del，其中患者父親無該突變，患者母親攜帶雜合缺失exon65del。實施例5c.4777-2A>T的驗證分別對AT家系2內(nèi)1個患者樣本和2個非患者樣本進行PCR。具體方法步驟如下：1、RNA提取以CDNA制備：采集患者和其父母親的外周靜脈血，使用QIAGEN公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒提取總RNA，并反轉(zhuǎn)錄為cDNA。2、引物設計及PCR反應a)AT家系2剪切位點變異位點驗證引物b)反應體系：10μL試劑體積2×GCBufferⅠ5.0μldNTPs(10mM)0.4μlLATaq酶(5U/μl)0.1μlPrimers(100ng/μl)0.2μl/個gDNA模板(50ng/μl)1.0μlddH2OAddto10.0μlc)反應條件：3、將步驟1所得的cDNA進行PCR擴增然后直接進行DNA測序，發(fā)現(xiàn)患者及母親的cDNA序列發(fā)生了雜合的改變，患者父親未有改變(圖7)，由此認為該突變會造成cDNA序列的改變從而影響氨基酸的改變。在本說明書的描述中，參考術語“一個實施例”、“一些實施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點包含于本發(fā)明的至少一個實施例或示例中。在本說明書中，對上述術語的示意性表述不一定指的是相同的實施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點可以在任何的一個或多個實施例或示例中以合適的方式結(jié)合。盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，可以理解的是，上述實施例是示例性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領域的普通技術人員在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述實施例進行變化、修改、替換和變型。當前第1頁1 2 3