1.斑重唇魚線粒體基因組全序列擴增方法，其特征在于，具體步驟如下：
（1）斑重唇魚線粒體Cyt b、COI、ND4和16S rRNA四個基因片段的擴增；
（2）斑重唇魚線粒體基因組的LA-PCR擴增。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的斑重唇魚線粒體基因組全序列擴增方法，其特征在于，步驟（1）斑重唇魚線粒體Cyt b、COI、ND4和16S rRNA四個基因片段的擴增，具體包括以下幾個步驟：
（1）用于擴增Cyt b、COI、ND4和16S rRNA四個基因片段引物的篩選，選取了擴增Cyt b、COI、ND4和16S rRNA四個基因的引物分別為：
Cyt b：上游引物為5’-GACTTGAAAAACCACCGTTG-3’，下游引物為5’-CTCCGATCTCCGGATTACAAGAC-3’；
COI：上游引物為5’-TCAACCAACCACAAAGACATTGGCAC-3’下游引物為5’-TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA-3’；
ND4：上游引物為5’-GCKTTTTCTGCKTGTGARGC-3’下游引物為5’–CAAGAGTTTTTGGTTCCTAA-3’；
16S rRNA：上游引物為5’-CGCCTGTTTACCAAAAACATCGCCT-3’，下游引物為5’-CCGGTCTGAACTCAGATCACGT-3’；
（2）四個基因片段擴增的PCR反應：反應總體系為50 μL，其中10×buffer 5.0 μL，Mg2+終濃度為2.0 mM，dNTP（2.5 mM）4 μL，Taq聚合酶2 units，引物（10 μM）各2 μL，斑重唇魚基因組DNA 2 μL（1 μg），加滅菌水至終體積50 μL；
PCR反應條件為：95℃預變性5 min，然后是35個循環(huán)，每個循環(huán)包括94℃變性45 s，57℃（Cyt b和16S rRNA）、54℃（COI）、56℃（ND4）退火45 s，72℃延伸1 min，最后72℃再延伸10 min；
（3）瓊脂糖凝膠電泳檢測：稱量0.7 g瓊脂糖加入70 mL 1×TAE緩沖液的錐形瓶中，微波爐加熱至瓊脂粉完全溶解且無泡沫，冷卻至50-60℃左右加入7 μL核酸染料Gelview，輕輕搖勻避免產(chǎn)生氣泡；待冷卻至不燙手時將膠緩緩倒入膠槽內(nèi)，待瓊脂糖凝膠完全凝固后豎直拔掉梳子，將2 μL斑重唇魚DNA樣本與0.5 μL 6×DNA loading buffer混合后依次上樣，最后點上6μL DL2000 Marker后開始電泳；電泳電壓設定為120V，電流400mA，時間30 min；電泳完畢在凝膠成像系統(tǒng)照相，通過調(diào)節(jié)光圈和曝光時間，選擇合適的濾光片，得到成像清晰、背景較低的照片。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的斑重唇魚線粒體基因組全序列擴增方法，其特征在于，步驟（2）所述的斑重唇魚線粒體基因組的LA-PCR擴增，包括以下幾個步驟：
（1）斑重唇魚線粒體基因組的LA-PCR擴增引物的設計：以獲得的Cyt b、COI、ND4和16S rRNA四個基因序列片段為模板，在其兩端分別設計4對LA-PCR引物，用于擴增斑重唇魚線粒體基因組剩余部分序列；
以16S rRNA基因片段為起點、COI基因片段為終點的環(huán)形區(qū)域設計第一對引物P1，上游引物為5’-GCAACAAGACCAAGTAGAACCCAC-3’，下游引物為5’-CAGGATTGATGATACACCCGCTAG-3’；
以COI基因片段為起點、ND4基因片段為終點的環(huán)形區(qū)域設計第二對引物P2，上游引物為5’-ATTGGAGCCCCAGACATAGCATTC-3’，下游引物為5’-AGCACAAGGAAGCCTCGGACTTTA-3’；
以ND4基因片段為起點、Cyt b基因片段為終點的環(huán)形區(qū)域設計第三對引物P3，上游引物為5’-CGCTGCGGTATGGTGATTCGT-3’，下游引物為5’- ATGATGCTCCGTTGGCGTGTA-3’；
以Cyt b基因片段為起點、16S rRNA基因片段為終點的環(huán)形區(qū)域設計第四對引物P4，上游引物為5’-TGACCTACCAGCACCATCCAACAT-3’，下游引物為5’-GACAGTTAAGCCCTCGTTTAGCCA-3’；
（2）根據(jù)設計的4對LA-PCR引物擴增斑重唇魚線粒體基因組全序列，使用寶生物工程（大連）有限公司的LA Taq聚合酶；
LA-PCR反應：反應總體系為50μL，其中10×LA PCR buffer II 5.0 μL，Mg2+終濃度為2.0 mM，dNTP（2.5 mM）8 μL，LA Taq聚合酶2 units，引物（20 μM）各1 μL，斑重唇魚基因組DNA 2.5 ng（50 ng/μL），加滅菌水至終體積50 μL；
LA-PCR反應條件為：95℃預變性2 min，然后是30個循環(huán)，每個循環(huán)包括94℃變性30 s，57℃（P1）、60℃（P2）、58℃（P3）、59℃（P4）退火30 s，72℃延伸4（P1）、6（P2）、3（P3）、5（P4）min，最后72℃再延伸10 min；
4對LA-PCR引物擴增分別獲得目的序列片段長度分別為4kb、6kb、3.1kb和4.5kb；
（3）采用引物步移法，分別以擴增的4個大片段序列為模板，每隔500 bp，設計一條測序引物對其進行分段擴增，28條測序引物序列信息如下：
以16S rRNA基因片段為起點、COI基因片段為終點的環(huán)形區(qū)域6條測序引物為：
5’-TCAACGAACCAAGTTACCCT-3’
5’-TACGGGCTTCTACAACCTAT-3’
5’-GCCCCTTCGCACTATTTTTC-3’
5’-GGAACCACTTTGACTTTTGC-3’
5’-CCACCTTACACTGCTTGCCC-3’
5’-GTGAAAATCTTCTAGCCCCT-3’
以COI基因片段為起點、ND4基因片段為終點的環(huán)形區(qū)域10條測序引物為：
5’-CGGCAAAAAAGAACCATTCG-3’
5’-GCCTATGCCCTATGAAACAC-3’
5’-GTGAACTATTTTACCAGCCG-3’
5’-AAAGATTGGTGCCTCCCGAC-3’
5’-CCGTGATTATTGGAATGCGA-3’
5’-CGTGACATTATCCGAGAAGG-3’
5’-CCACTTTACATCTGACCACC-3’
5’-AGGGAGTTAGTCCAAAGCAA-3’
5’-CACCCCTCTTTTAGTGCTCT-3’
5’-TAGCAGCGGTCCTACTAAAG-3’
以ND4基因片段為起點、Cyt b基因片段為終點的環(huán)形區(qū)域5條測序引物為：
5’-CACCTCCCTCCTCGTAGTTT-3’
5’-TCGGGTAGGGGACATTGGAT-3’
5’-GTAAGATGGGAGGCTTGTTT-3’
5’-GGCTTCTTTCCCTCAACTAT-3’
5’-GCAAAGACTACCAACATTCC-3’
以Cyt b基因片段為起點、16S rRNA基因片段為終點的環(huán)形區(qū)域7條測序引物為：
5’-TTGGATTGAACTCGGACGCA-3’
5’-AAGCATCGGTCTTGTAATCC-3’
5’-CCAAAGCCAGGATTCTGAAC-3’
5’-GGCTCAAATACTGACTAAGG-3’
5’-GCTCTAACCCGACTTACACA-3’
5’-CCCGTCTAACCTCACCACTT-3’
5’-GTATGGGAGACAGAAAAGGT-3’。