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用于篩選強遷移能力的臍帶間充質(zhì)干細胞的流式試劑盒的制作方法

文檔序號:12412553閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于篩選強遷移能力的臍帶間充質(zhì)干細胞的流式試劑盒,其特征在于:試劑盒組成:具體說明如下:

⑴Standard Mixture:將ZPH-MMA30K型30微米標(biāo)準(zhǔn)微球溶于1.5mL蒸餾水,與F-13838型15微米標(biāo)準(zhǔn)微球相混合,超聲處理30s后振蕩混勻,存放于4℃條件下,得到Standard Mixture;

⑵Isotype Mixture:將350μL的PE-IgG1k抗體、250μL的APC-IgG1k抗體、1150μL的FITC-IgG1k抗體、250μL的PerCP-Cy5.5-IgG1k抗體相混合,避光存放于4℃條件下,得到Isotype Mixture;

⑶Positive Mixture:將295μL的PE-CD105抗體、295μL的APC-CD73抗體、115μL的FITC-CD90抗體、295μL的PerCP-Cy5.5-CD166抗體相混合,避光存放于4℃條件下,得到Positive Mixture;

⑷Negative Mixture:將240μL的FITC-CD11b抗體、952μL的PE-CD34/FITC-HLA-DR抗體、952μL的PE-CD45抗體、952μL的PE-CD19抗體、952μL的PE-CD80抗體、952μL的PE-CD86抗體相混合,避光存放于4℃條件下。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于篩選強遷移能力的臍帶間充質(zhì)干細胞的流式試劑盒,其特征在于:操作步驟如下:

(1)取1.5*106量的臍帶間充質(zhì)干細胞樣本,經(jīng)離心、洗滌,用PBS重懸后制成密度為5*106cells/mL的細胞懸液A;

(2)取4支一次性流式上樣管,分別命名為STD管、ISO管、POS管、NEG管;

(3)向STD管加入0.5mL PBS,向ISO管、POS管、NEG管分別加入100μL細胞懸液A;

(4)向ISO管、POS管、NEG管分別加入20μL Isotype Mixture、10μL Positive Mixture、50μL Negative Mixture,在15℃條件下避光孵育30min;

(5)向ISO管、POS管、NEG管均加入2mL PBS,在15℃條件下200g離心3min后去除上清液,重復(fù)本步驟2次;

(6)將Standard Mixture超聲處理30s后振蕩混勻后取25μL加入至STD管,向ISO管、POS管、NEG管分別加入500μL PBS,將STD管、ISO管、POS管、NEG管振蕩混勻;

(7)依照STD管、ISO管、POS管、NEG管的順序上機檢測。

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