1.一種厚樸花低聚糖及多糖的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)厚樸花粗低聚糖提取液的制備
稱取厚樸花藥材,加入藥材重量8~21倍量的石油醚(60~90℃),浸泡25min,70℃水浴回流提取35~90min,過(guò)濾,藥渣揮盡石油醚(60~90℃),晾干,加入80%乙醇(v/v)超聲提取2次,每次加入80%乙醇(v/v)的量為厚樸花藥材重量的8~20倍量,每次提取時(shí)間30~60min,過(guò)濾,藥渣備用,合并濾液,45℃減壓濃縮至比重為1.08~1.16得厚樸花粗低聚糖提取液,備用;
(2)厚樸花粗多糖的制備
取纖維素酶和木瓜蛋白酶按照3.2:1~5.1:1的重量比混合,加蒸餾水溶解制成質(zhì)量濃度為0.4%~1.1%的混合酶溶液;取步驟(1)中提取厚樸花低聚糖后的厚樸花藥渣,按重量加入15~27倍的混合酶溶液,用鹽酸調(diào)pH至4.5~5.7,45~58℃攪拌酶解6~9h,99℃加熱15min滅酶,酶解液放至室溫,得厚樸花粗多糖溶液;厚樸花粗多糖溶液減壓回收溶劑至厚樸花藥材重量的1.3~1.9倍,5000r/m離心15min,取上清液即得厚樸花粗多糖濃縮液,濃縮液在攪拌下加入95%的乙醇(v/v),使?jié)饪s液中含醇量為75%~80%(v/v),靜置12h,濾去上部液體,得底部沉淀物,用無(wú)水乙醇洗去沉淀物中的水分,再用丙酮洗去沉淀物中的無(wú)水乙醇,最后用無(wú)水乙醚洗去沉淀物中的丙酮,22~50℃下減壓干燥,得厚樸花粗多糖;
(3)厚樸花低聚糖及多糖的純化
Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑溶液的配制A組分溶液:稱取A組分1份,加入A組分99倍重量的蒸餾水,配制成質(zhì)量濃度為1%的溶液,即得Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑A組分溶液;B組分溶液:稱取B組分1份,加入B組分99倍重量的1%乙酸(v/v),配制成質(zhì)量濃度為1%的溶液,即得Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑B組分溶液;取步驟(1)所制備的厚樸花粗低聚糖提取液,加入厚樸花低聚糖提取液質(zhì)量1/40的Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑B組分溶液,混勻,80℃水浴加熱40min,每間隔5min攪拌1次,每次攪拌時(shí)間為3min,40min后加入厚樸花低聚糖提取液質(zhì)量1/40的Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑A組分溶液,邊加邊攪拌,1h后攪拌1次,攪拌時(shí)間10min,繼續(xù)80℃水浴加熱1.5h,6000r/min離心10min,傾出上清液,減壓濃縮成比重為1.10~1.20的浸膏,加入95%乙醇(v/v)至含醇量達(dá)75%(v/v),靜置8h,6000r/min離心15min,傾出上清液,棄去沉淀,上清液減壓濃縮成浸膏(比重1.10~1.20),冷凍干燥即得厚樸花低聚糖粉末;
取步驟(1)所制備的厚樸花粗多糖,加厚樸花粗多糖10倍重量的蒸餾水80℃水浴加熱使溶解,冷卻至室溫,加入30%過(guò)氧化氫(v/v),加入30%過(guò)氧化氫(v/v)的體積為厚樸花粗多糖溶液體積的1/4~1/3,混勻,加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7.5~9.1,70℃水浴下不斷攪拌30min,100℃加熱5~10min,抽濾,濾液減壓濃縮至比重為1.10~1.15的浸膏,過(guò)Sephadex G-200凝膠樹(shù)脂柱,收集多糖部分洗脫液,冷凍干燥即得厚樸花多糖粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的厚樸花低聚糖及多糖的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)厚樸花粗低聚糖提取液的制備
稱取厚樸花藥材,加入藥材重量8倍量的石油醚(60~90℃),浸泡25min,70℃水浴回流提取35min,過(guò)濾,藥渣揮盡石油醚(60~90℃),晾干,加入80%乙醇(v/v)超聲提取2次,每次加入80%乙醇(v/v)的量為厚樸花藥材重量的8倍量,每次提取時(shí)間30min,過(guò)濾,藥渣備用,合并濾液,45℃減壓濃縮至比重為1.08得厚樸花粗低聚糖提取液,備用;
(2)厚樸花粗多糖的制備
取纖維素酶和木瓜蛋白酶按照3.2:1的重量比混合,加蒸餾水溶解制成質(zhì)量濃度為0.4%的混合酶溶液;取步驟(1)中提取厚樸花低聚糖后的厚樸花藥渣,按重量加入15倍的混合酶溶液,用鹽酸調(diào)pH至4.5,45℃攪拌酶解6h,99℃加熱15min滅酶,酶解液放至室溫,得厚樸花粗多糖溶液;厚樸花粗多糖溶液減壓回收溶劑至厚樸花藥材重量的1.3倍,5000r/m離心15min,取上清液即得厚樸花粗多糖濃縮液,濃縮液在攪拌下加入95%的乙醇(v/v),使?jié)饪s液中含醇量為75%(v/v),靜置12h,濾去上部液體,得底部沉淀物,用無(wú)水乙醇洗去沉淀物中的水分,再用丙酮洗去沉淀物中的無(wú)水乙醇,最后用無(wú)水乙醚洗去沉淀物中的丙酮,22℃下減壓干燥,得厚樸花粗多糖;
(3)厚樸花低聚糖及多糖的純化
Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑溶液的配制A組分溶液:稱取A組分1份,加入A組分99倍重量的蒸餾水,配制成質(zhì)量濃度為1%的溶液,即得Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑A組分溶液;B組分溶液:稱取B組分1份,加入B組分99倍重量的1%乙酸(v/v),配制成質(zhì)量濃度為1%的溶液,即得Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑B組分溶液;取步驟(1)所制備的厚樸花粗低聚糖提取液,加入厚樸花低聚糖提取液質(zhì)量1/40的Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑B組分溶液,混勻,80℃水浴加熱40min,每間隔5min攪拌1次,每次攪拌時(shí)間為3min,40min后加入厚樸花低聚糖提取液質(zhì)量1/40的Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑A組分溶液,邊加邊攪拌,1h后攪拌1次,攪拌時(shí)間10min,繼續(xù)80℃水浴加熱1.5h,6000r/min離心10min,傾出上清液,減壓濃縮成比重為1.10的浸膏,加入95%乙醇(v/v)至含醇量達(dá)75%(v/v),靜置8h,6000r/min離心15min,傾出上清液,棄去沉淀,上清液減壓濃縮成浸膏(比重1.10),冷凍干燥即得厚樸花低聚糖粉末;
取步驟(1)所制備的厚樸花粗多糖,加厚樸花粗多糖10倍重量的蒸餾水80℃水浴加熱使溶解,冷卻至室溫,加入30%過(guò)氧化氫(v/v),加入30%過(guò)氧化氫(v/v)的體積為厚樸花粗多糖溶液體積的1/4,混勻,加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7.5,70℃水浴下不斷攪拌30min,100℃加熱5min,抽濾,濾液減壓濃縮至比重為1.10的浸膏,過(guò)Sephadex G-200凝膠樹(shù)脂柱,收集多糖部分洗脫液,冷凍干燥即得厚樸花多糖粉末。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的厚樸花低聚糖及多糖的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)厚樸花粗低聚糖提取液的制備
稱取厚樸花藥材,加入藥材重量21倍量的石油醚(60~90℃),浸泡25min,70℃水浴回流提取90min,過(guò)濾,藥渣揮盡石油醚(60~90℃),晾干,加入80%乙醇(v/v)超聲提取2次,每次加入80%乙醇(v/v)的量為厚樸花藥材重量的20倍量,每次提取時(shí)間60min,過(guò)濾,藥渣備用,合并濾液,45℃減壓濃縮至比重為1.16得厚樸花粗低聚糖提取液,備用;
(2)厚樸花粗多糖的制備
取纖維素酶和木瓜蛋白酶按照5.1:1的重量比混合,加蒸餾水溶解制成質(zhì)量濃度為1.1%的混合酶溶液;取步驟(1)中提取厚樸花低聚糖后的厚樸花藥渣,按重量加入27倍的混合酶溶液,用鹽酸調(diào)pH至5.7,58℃攪拌酶解9h,99℃加熱15min滅酶,酶解液放至室溫,得厚樸花粗多糖溶液;厚樸花粗多糖溶液減壓回收溶劑至厚樸花藥材重量的1.9倍,5000r/m離心15min,取上清液即得厚樸花粗多糖濃縮液,濃縮液在攪拌下加入95%的乙醇(v/v),使?jié)饪s液中含醇量為80%(v/v),靜置12h,濾去上部液體,得底部沉淀物,用無(wú)水乙醇洗去沉淀物中的水分,再用丙酮洗去沉淀物中的無(wú)水乙醇,最后用無(wú)水乙醚洗去沉淀物中的丙酮,50℃下減壓干燥,得厚樸花粗多糖;
(3)厚樸花低聚糖及多糖的純化
Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑溶液的配制A組分溶液:稱取A組分1份,加入A組分99倍重量的蒸餾水,配制成質(zhì)量濃度為1%的溶液,即得Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑A組分溶液;B組分溶液:稱取B組分1份,加入B組分99倍重量的1%乙酸(v/v),配制成質(zhì)量濃度為1%的溶液,即得Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑B組分溶液;取步驟(1)所制備的厚樸花粗低聚糖提取液,加入厚樸花低聚糖提取液質(zhì)量1/40的Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑B組分溶液,混勻,80℃水浴加熱40min,每間隔5min攪拌1次,每次攪拌時(shí)間為3min,40min后加入厚樸花低聚糖提取液質(zhì)量1/40的Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑A組分溶液,邊加邊攪拌,1h后攪拌1次,攪拌時(shí)間10min,繼續(xù)80℃水浴加熱1.5h,6000r/min離心10min,傾出上清液,減壓濃縮成比重為1.20的浸膏,加入95%乙醇(v/v)至含醇量達(dá)75%(v/v),靜置8h,6000r/min離心15min,傾出上清液,棄去沉淀,上清液減壓濃縮成浸膏(比重1.20),冷凍干燥即得厚樸花低聚糖粉末;
取步驟(1)所制備的厚樸花粗多糖,加厚樸花粗多糖10倍重量的蒸餾水80℃水浴加熱使溶解,冷卻至室溫,加入30%過(guò)氧化氫(v/v),加入30%過(guò)氧化氫(v/v)的體積為厚樸花粗多糖溶液體積的1/3,混勻,加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至9.1,70℃水浴下不斷攪拌30min,100℃加熱10min,抽濾,濾液減壓濃縮至比重為1.15的浸膏,過(guò)Sephadex G-200凝膠樹(shù)脂柱,收集多糖部分洗脫液,冷凍干燥即得厚樸花多糖粉末。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的厚樸花低聚糖及多糖的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)厚樸花粗低聚糖提取液的制備
稱取厚樸花藥材,加入藥材重量14倍量的石油醚(60~90℃),浸泡25min,70℃水浴回流提取68min,過(guò)濾,藥渣揮盡石油醚(60~90℃),晾干,加入80%乙醇(v/v)超聲提取2次,每次加入80%乙醇(v/v)的量為厚樸花藥材重量的14倍量,每次提取時(shí)間45min,過(guò)濾,藥渣備用,合并濾液,45℃減壓濃縮至比重為1.12得厚樸花粗低聚糖提取液,備用;
(2)厚樸花粗多糖的制備
取纖維素酶和木瓜蛋白酶按照4.1:1的重量比混合,加蒸餾水溶解制成質(zhì)量濃度為0.8%的混合酶溶液;取步驟(1)中提取厚樸花低聚糖后的厚樸花藥渣,按重量加入21倍的混合酶溶液,用鹽酸調(diào)pH至5.1,52℃攪拌酶解7.5h,99℃加熱15min滅酶,酶解液放至室溫,得厚樸花粗多糖溶液;厚樸花粗多糖溶液減壓回收溶劑至厚樸花藥材重量的1.6倍,5000r/m離心15min,取上清液即得厚樸花粗多糖濃縮液,濃縮液在攪拌下加入95%的乙醇(v/v),使?jié)饪s液中含醇量為77%(v/v),靜置12h,濾去上部液體,得底部沉淀物,用無(wú)水乙醇洗去沉淀物中的水分,再用丙酮洗去沉淀物中的無(wú)水乙醇,最后用無(wú)水乙醚洗去沉淀物中的丙酮,41℃下減壓干燥,得厚樸花粗多糖;
(3)厚樸花低聚糖及多糖的純化
Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑溶液的配制A組分溶液:稱取A組分1份,加入A組分99倍重量的蒸餾水,配制成質(zhì)量濃度為1%的溶液,即得Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑A組分溶液;B組分溶液:稱取B組分1份,加入B組分99倍重量的1%乙酸(v/v),配制成質(zhì)量濃度為1%的溶液,即得Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑B組分溶液;取步驟(1)所制備的厚樸花粗低聚糖提取液,加入厚樸花低聚糖提取液質(zhì)量1/40的Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑B組分溶液,混勻,80℃水浴加熱40min,每間隔5min攪拌1次,每次攪拌時(shí)間為3min,40min后加入厚樸花低聚糖提取液質(zhì)量1/40的Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑A組分溶液,邊加邊攪拌,1h后攪拌1次,攪拌時(shí)間10min,繼續(xù)80℃水浴加熱1.5h,6000r/min離心10min,傾出上清液,減壓濃縮成比重為1.15的浸膏,加入95%乙醇(v/v)至含醇量達(dá)75%(v/v),靜置8h,6000r/min離心15min,傾出上清液,棄去沉淀,上清液減壓濃縮成浸膏(比重1.15),冷凍干燥即得厚樸花低聚糖粉末;
取步驟(1)所制備的厚樸花粗多糖,加厚樸花粗多糖10倍重量的蒸餾水80℃水浴加熱使溶解,冷卻至室溫,加入30%過(guò)氧化氫(v/v),加入30%過(guò)氧化氫(v/v)的體積為厚樸花粗多糖溶液體積的7/24,混勻,加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8.3,70℃水浴下不斷攪拌30min,100℃加熱7.5min,抽濾,濾液減壓濃縮至比重為1.12的浸膏,過(guò)Sephadex G-200凝膠樹(shù)脂柱,收集多糖部分洗脫液,冷凍干燥即得厚樸花多糖粉末。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的厚樸花低聚糖及多糖的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)厚樸花粗低聚糖提取液的制備
稱取厚樸花藥材,加入藥材重量8倍量的石油醚(60~90℃),浸泡25min,70℃水浴回流提取35min,過(guò)濾,藥渣揮盡石油醚(60~90℃),晾干,加入80%乙醇(v/v)超聲提取2次,每次加入80%乙醇(v/v)的量為厚樸花藥材重量的14倍量,每次提取時(shí)間30min,過(guò)濾,藥渣備用,合并濾液,45℃減壓濃縮至比重為1.12得厚樸花粗低聚糖提取液,備用;
(2)厚樸花粗多糖的制備
取纖維素酶和木瓜蛋白酶按照5.1:1的重量比混合,加蒸餾水溶解制成質(zhì)量濃度為0.8%的混合酶溶液;取步驟(1)中提取厚樸花低聚糖后的厚樸花藥渣,按重量加入21倍的混合酶溶液,用鹽酸調(diào)pH至4.5,58℃攪拌酶解7.5h,99℃加熱15min滅酶,酶解液放至室溫,得厚樸花粗多糖溶液;厚樸花粗多糖溶液減壓回收溶劑至厚樸花藥材重量的1.6倍,5000r/m離心15min,取上清液即得厚樸花粗多糖濃縮液,濃縮液在攪拌下加入95%的乙醇(v/v),使?jié)饪s液中含醇量為75%(v/v),靜置12h,濾去上部液體,得底部沉淀物,用無(wú)水乙醇洗去沉淀物中的水分,再用丙酮洗去沉淀物中的無(wú)水乙醇,最后用無(wú)水乙醚洗去沉淀物中的丙酮,50℃下減壓干燥,得厚樸花粗多糖;
(3)厚樸花低聚糖及多糖的純化
Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑溶液的配制A組分溶液:稱取A組分1份,加入A組分99倍重量的蒸餾水,配制成質(zhì)量濃度為1%的溶液,即得Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑A組分溶液;B組分溶液:稱取B組分1份,加入B組分99倍重量的1%乙酸(v/v),配制成質(zhì)量濃度為1%的溶液,即得Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑B組分溶液;取步驟(1)所制備的厚樸花粗低聚糖提取液,加入厚樸花低聚糖提取液質(zhì)量1/40的Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑B組分溶液,混勻,80℃水浴加熱40min,每間隔5min攪拌1次,每次攪拌時(shí)間為3min,40min后加入厚樸花低聚糖提取液質(zhì)量1/40的Ⅱ型ZTC1+1天然澄清劑A組分溶液,邊加邊攪拌,1h后攪拌1次,攪拌時(shí)間10min,繼續(xù)80℃水浴加熱1.5h,6000r/min離心10min,傾出上清液,減壓濃縮成比重為1.10的浸膏,加入95%乙醇(v/v)至含醇量達(dá)75%(v/v),靜置8h,6000r/min離心15min,傾出上清液,棄去沉淀,上清液減壓濃縮成浸膏(比重1.20),冷凍干燥即得厚樸花低聚糖粉末;
取步驟(1)所制備的厚樸花粗多糖,加厚樸花粗多糖10倍重量的蒸餾水80℃水浴加熱使溶解,冷卻至室溫,加入30%過(guò)氧化氫(v/v),加入30%過(guò)氧化氫(v/v)的體積為厚樸花粗多糖溶液體積的1/4,混勻,加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8.3,70℃水浴下不斷攪拌30min,100℃加熱5min,抽濾,濾液減壓濃縮至比重為1.15的浸膏,過(guò)Sephadex G-200凝膠樹(shù)脂柱,收集多糖部分洗脫液,冷凍干燥即得厚樸花多糖粉末。
6.權(quán)利要求1或2-5中任意一項(xiàng)所述方法制備的厚樸花多糖在制備增強(qiáng)免疫力的藥物或保健品中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1或2-5中任意一項(xiàng)所述方法制備的厚樸花低聚糖在制備抗氧化的藥物、保健品、食品添加劑或化妝品中的應(yīng)用。