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一種培養(yǎng)基及細(xì)胞培養(yǎng)方法與流程

文檔序號(hào):12248681閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種培養(yǎng)基,其特征在于,包括無血清培養(yǎng)基、bFGF和EGF。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基,其特征在于,所述bFGF的濃度為5~25ng/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)基,其特征在于,所述EGF的濃度為5~25ng/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基在培養(yǎng)細(xì)胞中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用,其特征在于,所述細(xì)胞為間充質(zhì)干細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于,所述細(xì)胞為牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞。

7.一種細(xì)胞培養(yǎng)方法,其特征在于,包括如下步驟:

步驟1:獲得凍存的細(xì)胞;

步驟2:取步驟1獲得的細(xì)胞與無血清培養(yǎng)基混合后洗滌,棄上清,再與權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基混合復(fù)蘇,繼續(xù)培養(yǎng)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法,其特征在于,權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基的加入量為每5×104個(gè)細(xì)胞加入1mL所述培養(yǎng)基。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法,其特征在于,所述復(fù)蘇為取所述凍存的細(xì)胞于37℃水浴中溶解,1~2min液體融化后,用10mL無血清培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞懸液,1000r/min離心5min,棄上清;10ml如權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,按5×104個(gè)/mL密度細(xì)胞接種,在5%CO2的條件下37℃培養(yǎng)。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的細(xì)胞培養(yǎng)方法,其特征在于,所述繼續(xù)培養(yǎng)為待細(xì)胞長(zhǎng)滿80~90%,棄去培養(yǎng)液,加入0.25%胰蛋白酶,消化1~3min,鏡下觀察細(xì)胞收縮變圓時(shí),加入如權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基終止消化,收集細(xì)胞。

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