本發(fā)明公開了一種適用于牧草青貯的乳酸菌菌劑及其應(yīng)用，屬于家畜飼料中的青貯飼料加工技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

青貯是通過乳酸菌的增殖，將原料中的發(fā)酵底物轉(zhuǎn)化成乳酸等酸性物質(zhì)，維持酸性厭氧環(huán)境，以利于青貯作物長期保存的一種貯藏方式。青貯飼料顏色黃綠、氣味酸香、柔軟多汁、適口性好，在畜牧業(yè)生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用，尤其在反芻動物飼養(yǎng)中，已成為重要的優(yōu)質(zhì)粗飼料來源。與牧草晾曬成干草相比，牧草青貯可以大幅度縮短從收割到貯藏的時間，避免不良天氣造成的飼草損失，使青綠飼草的營養(yǎng)成分得到最大限度的保存。

乳酸菌是近年來正在推廣的青貯微生物添加劑，其主要作用是調(diào)節(jié)青貯物料內(nèi)微生物組成，迅速成為優(yōu)勢菌群，競爭抑制有害微生物生長，快速轉(zhuǎn)化有限的糖分，顯著地降低青貯pH值，從而有效提高青貯飼料的質(zhì)量，具有較大潛力和廣闊的發(fā)展前景。目前，對青貯乳酸菌的研制主要集中在植物乳桿菌等單一菌種。專利文獻(xiàn)《一種植物乳桿菌及其在暖季型牧草青貯中的應(yīng)用(CN2016100121 45.2)》提供了從天然牧草青貯飼料中分離得到的一株植物乳桿菌。但是青貯從前期、中期以及開封后的后期，青貯飼草的微生物組成、理化性質(zhì)及所處環(huán)境都會發(fā)生一系列的變化。單一的乳酸菌產(chǎn)品無法滿足變化的青貯要求。另一方面，乳酸菌按發(fā)酵類型分為同型發(fā)酵乳酸菌和異型發(fā)酵乳酸菌。同型發(fā)酵乳酸菌利用水溶性碳水化合物(WSC)產(chǎn)生較多的乳酸，改善青貯發(fā)酵品質(zhì)，但抑制好氧變質(zhì)的能力普遍較差。異型發(fā)酵乳酸菌利用WSC產(chǎn)生較多的乙酸，抑制了好氧性細(xì)菌、酵母和霉菌及青貯飼料好氧變質(zhì)。專利文獻(xiàn)《一種用于制備青貯飼料的微生物添加劑(CN 201410677476.9)》提供了一種新型植物乳桿菌ZJY-6及包含該菌的微生物添加劑，微生物添加劑還包含布氏乳桿菌、干酪乳桿菌、嗜熱乳桿菌、腸球菌、戊糖片球菌、短小芽孢桿菌、乳酸片球菌中的任意一種。專利文獻(xiàn)《用布氏乳桿菌和植物乳桿菌制備甘蔗尾青貯飼料的方法(CN20141063295 3.X)》公開了用布氏乳桿菌和植物乳桿菌的菌劑組合來青貯甘蔗尾的方法。但是 這兩份專利文獻(xiàn)中，植物乳桿菌、布氏乳桿菌一個分離自青貯玉米，一個購自菌株庫。在微生物菌種資源中，每個菌種都有上百個甚至上千上性能不同的亞種(菌株)。根據(jù)微生物對生境的適應(yīng)性和特異性原理，從牧草物料中分離乳酸菌，將乳酸菌再應(yīng)用于牧草，乳酸菌能更迅速得在牧草青貯中定植，形成優(yōu)勢菌群。因此從牧草中分離乳酸菌，選用功能互補(bǔ)的乳酸菌菌株，制備牧草專屬的乳酸菌菌劑，是提高牧草青貯飼料品質(zhì)的重要保證。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，其目的在于提供一種適用于牧草青貯的乳酸菌菌劑及其應(yīng)用。

本發(fā)明的第一個發(fā)明目的是提供一種適用于牧草青貯的乳酸菌菌劑，所述的乳酸菌菌劑由植物乳桿菌凍干粉和布氏乳桿菌凍干粉組成，所述的植物乳桿菌和布氏乳桿菌均從黑麥草秸稈中分離得到，植物乳桿菌為同型發(fā)酵乳酸菌，布氏乳桿菌為異型發(fā)酵乳桿菌，兩株菌株于2016年5月25日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，所述植物乳桿菌的菌株為L.plantarumZRR,保藏號為CCTCC No:M2016281，所述布氏乳桿菌的菌株為L.buchneriBR2，保藏號為CCTCC No:M2016280；

所述的乳酸菌菌劑中，植物乳桿菌凍干粉和布氏乳桿菌凍干粉的重量比為2：1，植物乳桿菌凍干粉中的活菌數(shù)達(dá)到8×10⁹cfu/g，布氏乳桿菌凍干粉中的活菌數(shù)達(dá)到4×10⁹cfu/g，乳酸菌菌劑的活菌數(shù)達(dá)到1.2×10¹⁰cfu/g；

所述的乳酸菌菌劑在牧草青貯飼料的添加量為2.4×10⁵cfu/g。

所述的適用于牧草青貯的乳酸菌菌劑中，所述植物乳桿菌的16S rDNA基因序列如SEQ ID No.1所示，所述布氏乳桿菌的16S rDNA基因序列如SEQ ID No.2所示。

本發(fā)明的植物乳桿菌(L.plantarum ZRR)是從牧草秸稈上篩選出來的具有產(chǎn)酸速度快、生長能力強(qiáng)、良好耐酸性的乳酸菌；該菌株已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址：湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號武漢大學(xué)校內(nèi)，分類命名：植物乳桿菌Lactobacillus plantarum，保藏號：CCTCC No:M2016281，保藏日期為：2016年5月25日。

所述植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)ZRR的菌落呈乳白色，邊緣整齊； 細(xì)胞顯微形態(tài)為短桿狀，無芽孢，革蘭氏染色陽性；接觸酶陰性，氧化酶陰性；具有較強(qiáng)的生長及產(chǎn)酸性能，在起始pH值為3.0-8.0的培養(yǎng)基上能生長，在10℃條件下呈現(xiàn)微弱生長，在15℃—40℃條件下生長狀況良好，在不大于6.5％NaCl的條件下生長狀況良好。

本發(fā)明的布氏乳桿菌(L.buchneriBR2)是從牧草秸稈上篩選出來的具有產(chǎn)乙酸、良好耐酸性的乳酸菌；該菌株已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址：湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號武漢大學(xué)校內(nèi)，分類命名：布氏乳桿菌Lactobacillus buchneri，保藏號：CCTCC No:M2016280，保藏日期為：2016年5月25日。

所述布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri)BR2的菌落呈灰白色，粘稠、邊緣整齊；細(xì)胞顯微形態(tài)為中桿狀，無芽孢，革蘭氏染色陽性；接觸酶陰性，氧化酶陰性；具有較強(qiáng)的生長及產(chǎn)酸性能，在起始pH值為3.0—7.5的培養(yǎng)基上能生長，在10℃條件下呈現(xiàn)微弱生長，在15℃—40℃條件下生長狀況良好，在不大于6.5％NaCl的條件下生長狀況良好。

本發(fā)明的第二個發(fā)明目的是提供上述乳酸菌菌劑在制備牧草青貯飼料中的應(yīng)用。所述的牧草青貯飼料制備方法如下：

原料準(zhǔn)備：牧草刈割后，保證清潔、無霉?fàn)€變質(zhì)，并將其切斷至2-3cm。

菌株活化：將冷凍保存的L.plantarumZRR、L.buchneriBR2分別接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度37℃下培養(yǎng)18-24h，如此傳代培養(yǎng)2-3次得到所述的活化L.plantarumZRR、L.buchneriBR2菌種；所述的MRS液體培養(yǎng)基組成如下：10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三鈉、1mL吐溫80、0.2g硫酸鎂、0.05g硫酸錳加入1000mL蒸餾水，調(diào)節(jié)pH至6.5，121℃滅菌15min。

菌粉的制備：將上述活化的菌種分別接種發(fā)酵、冷凍干燥、粉碎、輔料混合制成凍干菌粉，L.plantarumZRR、L.buchneriBR2的凍干粉按照2:1的重量比例混合，使乳酸菌菌劑凍干粉的活菌數(shù)達(dá)到1.2×10¹⁰cfu/g。

牧草青貯的調(diào)制：牧草原料青貯時的水分含量控制在65％-70％，稱取200g牧草原料裝入真空包裝塑料袋中，將上述制備的菌粉以2.4×10⁵cfu/g的接種量接種到原料中，采用真空包裝機(jī)真空包裝后，置于儲藏室進(jìn)行發(fā)酵。

所述發(fā)酵的條件為：發(fā)酵溫度為15-25℃，發(fā)酵時間為30-60d。青貯牧草的品質(zhì)檢測：發(fā)酵成熟后，取出部分青貯牧草進(jìn)行微生物組成和發(fā)酵品質(zhì)分析。

本發(fā)明提供的乳酸菌菌劑具有下述的積極效果：

(1)根據(jù)微生物對生境的適應(yīng)性和特異性原理，從牧草中篩選出提高牧草青貯品質(zhì)的專屬菌L.plantarumZRR、L.buchneriBR2。(2)本發(fā)明經(jīng)過創(chuàng)造性勞動，發(fā)現(xiàn)乳酸菌菌劑效果最好的配比是植物乳桿菌和布氏乳桿菌，其重量比為2：1，乳酸菌菌劑在牧草青貯飼料的添加量為2.4×10⁵cfu/g。(3)與現(xiàn)有的單一乳酸菌相比，接種L.plantarumZRR、L.buchneriBR2的乳酸菌菌劑，在發(fā)酵前期可以快速成為優(yōu)勢菌群，降低pH值；乳酸的含量顯著提高，氨態(tài)氮含量下降，有利于改善青貯飼料的適口性，提高了牧草青貯的發(fā)酵品質(zhì)；顯著提高乙酸含量，降低乙醇的含量，開袋后抑制青貯飼料中霉菌、酵母等真菌的生長,提高有氧穩(wěn)定性,從而有利于延長青貯飼料的保存期限。

因此本發(fā)明所述的乳酸菌菌劑具有加速牧草青貯成熟、提高牧草青貯品質(zhì)、提高有氧穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)，可廣泛應(yīng)用于牧草青貯飼料制備領(lǐng)域。

附圖說明

圖1-1為不同添加量青貯象草pH動態(tài)變化；

圖1-2為不同添加量青貯象草乳酸菌動態(tài)變化；

圖1-3為不同添加量青貯象草細(xì)菌動態(tài)變化；

圖1-4為不同添加量青貯象草霉菌動態(tài)變化；

圖2-1為不同菌劑青貯黑麥草pH動態(tài)變化；

圖2-2為不同菌劑青貯黑麥草乳酸菌動態(tài)變化；

圖2-3為不同菌劑青貯黑麥草細(xì)菌動態(tài)變；

圖2-4為不同菌劑青貯黑麥草霉菌動態(tài)變化；

圖3-1為不同菌劑青貯黑麥草青貯時及有氧暴露后的霉菌動態(tài)變化；

圖3-2為不同菌劑青貯黑麥草青貯時及有氧暴露后的酵母動態(tài)變化。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

實施例1植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)ZRR、布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri)BR2的分離與鑒定

1、分離純化

從黑麥草秸稈中分離純化到植物乳桿菌ZRR和布氏乳桿菌BR2，分別是為同型發(fā)酵乳酸菌和異型發(fā)酵乳桿菌，具體如下：稱取10g黑麥草秸稈樣品加入滅菌的90ml蒸餾水中，利用恒溫?fù)u床震蕩1h，然后10倍梯度稀釋，分別取10^-3、10^-4和10^-5倍樣品稀釋液涂布在MRS固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48h，然后將其取出，依據(jù)菌落的大小、形態(tài)和顏色，挑取MRS上生長的單菌落，進(jìn)行過氧化氫酶實驗及革蘭氏染色。將過氧化氫酶陰性及革蘭氏染色陽性者暫定為乳酸菌，于MRS固體培養(yǎng)基上繼續(xù)劃線純化2次。-80℃保存于25％甘油的MRS培養(yǎng)基中，菌株分別命名為ZRR、BR2。

2、生理生化檢測

乳酸菌ZRR在起始pH值為3.0-8.0的培養(yǎng)基上能生長，在10℃條件下呈現(xiàn)微弱生長，在15℃-40℃條件下生長狀況良好，在不大于6.5％NaCl的條件下生長狀況良好。乳酸菌BR2在起始pH值為3.0-7.5的培養(yǎng)基上能生長，在10℃條件下呈現(xiàn)微弱生長，在15℃-40℃條件下生長狀況良好，能夠耐受3.0％的鹽濃度。部分理化特性如表1所示。菌株ZRR、BR2能夠利用的碳源如表2所示。

3、分子鑒定

將固體平板上培養(yǎng)48h的乳酸菌菌株ZRR、BR2，采用菌落PCR擴(kuò)增，進(jìn)行16rRNA基因序列鑒定。引物選用細(xì)菌的16S rRNA基因擴(kuò)增通用引物：27F和1492R。PCR反應(yīng)體系為50μl：Premix Taq25μl，27F和1492R(均為20μM)1μl，補(bǔ)充滅菌蒸餾水至50μl，直接將菌落加入反應(yīng)體系，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR產(chǎn)物。將PCR產(chǎn)物送去測序，結(jié)果為序列表中序列1、2所示。

表1菌株ZRR、BR2的生理生化特性

表2菌株ZRR、BR2的碳源發(fā)酵試驗結(jié)果

注：+代表反應(yīng)為陽性；—代表反應(yīng)為陰性；w代表反應(yīng)為弱陽性

經(jīng)過上述鑒定，乳酸菌菌株ZRR、BR2于2016年5月25日，已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址：湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號武漢大學(xué)校內(nèi)，分類命名：植物乳桿菌Lactobacillus plantarum，保藏號：CCTCC No:M2016281，分類命名：布氏乳桿菌Lactobacillus buchneri，保藏號：CCTCC No:M2016280。

實施例2不同菌株在黑麥草青貯中的應(yīng)用

原料準(zhǔn)備：黑麥草刈割后，保證清潔、無霉?fàn)€變質(zhì)，并將其切斷至2-3cm。

菌株活化：將冷凍保存的L.plantarumZRR、L.buchneriBR2分別接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度37℃下培養(yǎng)18-24h，如此傳代培養(yǎng)2-3次得到所述的活化L.plantarumZRR、L.buchneriBR2菌種；所述的MRS液體培養(yǎng)基組成如下：10g蛋 白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三鈉、1mL吐溫80、0.2g硫酸鎂、0.05g硫酸錳加入1000mL蒸餾水，調(diào)節(jié)pH至6.5，121℃滅菌15min。

菌粉的制備：將上述活化的菌種分別接種發(fā)酵、冷凍干燥、粉碎、輔料混合制成凍干菌粉，植物乳桿菌L.plantarumZRR(以下簡稱ZRR)、布氏乳桿菌L.buchneri BR2(以下簡稱BR2)的凍干粉按照不同的重量比例混合，使乳酸菌凍干粉的活菌數(shù)達(dá)到1.2×10¹⁰cfu/g。

五組不同菌種組的混合重量比例分別是：

試驗組1：100％植物乳桿菌ZRR；

試驗組2：100％布氏乳桿菌BR2；

試驗組3：33％植物乳桿菌ZRR、67％布氏乳桿菌BR2(1:2)；

試驗組4：50％植物乳桿菌ZRR、50％布氏乳桿菌BR2(1:1)；

試驗組5：67％植物乳桿菌ZRR、33％布氏乳桿菌BR2(2:1)；

黑麥草青貯的調(diào)制：黑麥草原料青貯時的水分含量控制在65％-70％，稱取200g牧草原料裝入真空包裝塑料袋中，將上述制備的菌粉按0.04‰(即4.8×10⁵cfu/g)的接種量接種到原料中，采用真空包裝機(jī)真空包裝后，置于儲藏室進(jìn)行發(fā)酵。

在42d發(fā)酵成熟后，取青貯樣品進(jìn)行品質(zhì)分析。青貯樣品加入90ml滅菌水，充分震蕩，取適量液體進(jìn)行pH和有機(jī)酸的測定，并取適量青貯飼料置于65℃烘箱中風(fēng)干至恒重，測定其干物質(zhì)。添加不同菌種對黑麥草青貯品質(zhì)的影響見表3.

由表3可知，試驗組1單獨(dú)添加ZRR，乳酸含量最高，pH和乙醇含量最低，表明篩選的專屬菌ZRR能迅速在牧草中定植，轉(zhuǎn)化糖為乳酸，抑制其他細(xì)菌轉(zhuǎn)化糖為乙醇，快速酸化，提高青貯品質(zhì)，但乙酸含量最低，不利于發(fā)酵后期的有氧穩(wěn)定性。試驗組2單獨(dú)添加BR2，乙酸含量最高，但產(chǎn)乳酸量在試驗組中最低，pH和乙醇含量最高。單獨(dú)添加ZRR或BR2，不能滿足青貯品質(zhì)和有氧穩(wěn)定性兩方面的技術(shù)要求。因此，復(fù)配兩株菌株，篩選不同的添加比例組合。試驗組3,4,5的結(jié)果表明：試驗組5的乳酸含量最高為10.31％，乙醇含量最低為0.81％，且100％、67％、33％的BR2三組間的乙酸含量沒有差異。因此，試驗組5即67％ZRR、33％BR2(2:1)的添加比例組合，可以快速將黑麥草中的可溶性糖轉(zhuǎn)化為乳酸和乙酸， 降低pH，顯著降低乙醇含量，提高有氧穩(wěn)定性。

表3：添加不同菌種對黑麥草青貯品質(zhì)的影響(％/干物質(zhì))

注:同列數(shù)據(jù)上標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)

實施例3不同添加量的乳酸菌菌劑在象草青貯中的應(yīng)用

原料準(zhǔn)備、菌種活化、菌粉制備、象草青貯調(diào)制等實施步驟參照實施例2，在菌粉的制備中按照實施例2的結(jié)果將L.plantarumZRR、L.buchneri BR2的凍干粉按照2:1的比例混合，使乳酸菌菌劑凍干粉的活菌數(shù)達(dá)到1.2×10¹⁰cfu/g。將制備的菌粉分別以0.01‰、0.02‰、0.04‰、0.1‰、0.2‰(即1.2×10⁵、2.4×10⁵、4.8×10⁵、1.2×10⁶、2.4×10⁶cfu/g)的接種量接種到象草中，采用真空包裝機(jī)真空包裝后，置于儲藏室進(jìn)行發(fā)酵。

青貯象草的微生物動態(tài)變化檢測：分別在青貯第0、1、3、5、7、14、21、28、35、42d，取出部分青貯象草，進(jìn)行pH檢測和微生物組成分析。微生物組成分析包括乳酸菌、霉菌、細(xì)菌的計數(shù)。稱取10g青貯飼料，加入90ml滅菌水，充分震蕩，再用滅菌水以10倍稀釋法對樣品進(jìn)行梯度稀釋，分別選取適當(dāng)?shù)南♂屢和坎加贛RS培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂上，并置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別對乳酸菌、霉菌、好氧細(xì)菌進(jìn)行計數(shù)。不同添加量的乳酸菌菌劑青貯象草的微生物動態(tài)結(jié)果如圖1-1、1-2、1-3、1-4所示。

通過圖1-1、1-2、1-3、1-4中微生物組成分析可知，添加乳酸菌的青貯象草和對照組相比，pH顯著下降，乳酸菌數(shù)量顯著增加，細(xì)菌和霉菌的生長菌完全被抑制。與高添加量的0.04‰、0.1‰、0.2‰(即1.2×10⁵、2.4×10⁵、4.8×10⁵、1.2×10⁶、2.4×10⁶cfu/g)相比，0.02‰的(即2.4×10⁵cfu/g)低添加量，乳酸菌菌劑即可在象草青貯體系中成為優(yōu)勢乳酸菌，酸化青貯飼料，抑制青貯飼料中的細(xì)菌、霉菌 的生長。

實施例4乳酸菌菌劑在黑麥草青貯中的應(yīng)用。

原料準(zhǔn)備、菌種活化、菌粉制備、黑麥草青貯調(diào)制等實施步驟參照實施例2，在黑麥草青貯調(diào)制中設(shè)置四個試驗組，分別是對照組，商品菌劑，植物乳桿菌ZRR，乳酸菌菌劑，商品菌劑是從市場上購買，用于牧草、玉米等秸稈青貯，產(chǎn)品標(biāo)示為乳酸菌。三種菌劑的添加量為實施例3中的試驗結(jié)果——0.02‰(即2.4×10⁵cfu/g)。分別在青貯第0、1、3、5、7、14、21、28、35、42d，取出部分青貯黑麥草，進(jìn)行pH檢測和微生物組成分析。微生物的檢測方法參照實施例3。另外在42d發(fā)酵成熟后，取青貯樣品進(jìn)行品質(zhì)分析。青貯樣品加入90ml滅菌水，充分震蕩，取適量液體進(jìn)行有機(jī)酸和氨態(tài)氮的測定，并取適量青貯飼料置于65℃烘箱中風(fēng)干至恒重，測定其干物質(zhì)量。同時測定青貯黑麥草有氧暴露后，不同菌劑的微生物動態(tài)變化。不同菌劑青貯黑麥草的pH及微生物動態(tài)變化如圖2-1、2-2、2-3、2-4所示。不同菌劑青貯黑麥草有氧暴露后的的微生物動態(tài)變化如圖3-1、3-2所示。

圖2-1、2-2、2-3、2-4為不同菌劑青貯黑麥草青貯時及有氧暴露后的微生物動態(tài)變化，分別為對照組、商品菌劑，植物乳桿菌ZRR和乳酸菌菌劑組。商品菌劑，植物乳桿菌ZRR和乳酸菌菌劑組均能快速產(chǎn)酸，迅速降低pH，抑制細(xì)菌及霉菌生長，但商品菌劑在青貯后期乳酸菌呈減少趨勢，乳酸菌菌劑的處理組中乳酸菌能穩(wěn)定存活。表4是添加不同菌劑對黑麥草青貯品質(zhì)的影響。與對照組相比，商品菌劑，植物乳桿菌ZRR和乳酸菌菌劑均能顯著提高青貯飼料的乳酸含量，顯著降低氨態(tài)氮和乙醇、丙酸、丁酸等有機(jī)酸的含量，其中植物乳桿菌ZRR和乳酸菌菌劑組的乳酸含量均高于商品菌劑組。同時乳酸菌菌劑組的乙酸含量最高，顯著高于商品菌劑，植物乳桿菌ZRR組。圖3-1、3-2為不同菌劑青貯黑麥草有氧暴露后的的微生物動態(tài)變化。在有氧暴露后，由于乳酸菌菌劑組產(chǎn)乙酸及大量乳酸菌的存在，能有效抑制霉菌、酵母的生長，提高有氧穩(wěn)定性。

表4添加不同菌劑對黑麥草青貯品質(zhì)的影響(％/干物質(zhì))

注:同列數(shù)據(jù)上標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)

因此，通過圖2-1、2-2、2-3、2-4、圖3-1、3-2與表4的結(jié)果表明，與對照組、商品菌劑，植物乳桿菌ZRR相比，通過在青貯原料中添加本發(fā)明所述的乳酸菌菌劑，能有效提高所得青貯飼料中乳酸的總含量，降低氨態(tài)氮、丙酸、丁酸的含量，從而有利于改善青貯飼料的適口性，提高營養(yǎng)價值；顯著降低乙醇的含量，提高乙酸含量，抑制青貯飼料中霉菌、酵母等真菌的生長，提高其有氧穩(wěn)定性，從而有利于延長青貯飼料的保存期限，取得了意料不到的技術(shù)效果。

<110> OrganizationName : 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院

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<120> Title : 一種適用于牧草青貯的乳酸菌菌劑及其應(yīng)用

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<213> OrganismName : Lactobacillus plantarum

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accagaaagc cacggctaac tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg tggcaagcgt 540

tgtccggatt tattgggcgt aaagcgagcg caggcggttt tttaagtctg atgtgaaagc 600

cttcggctca accgaagaag tgcatcggaa actgggaaac ttgagtgcag aagaggacag 660

tggaactcca tgtgtagcgg tgaaatgcgt agatatatgg aagaacacca gtggcgaagg 720

cggctgtctg gtctgtaact gacgctgagg ctcgaaagta tgggtagcaa acaggattag 780

ataccctggt agtccatacc gtaaacgatg aatgctaagt gttggagggt ttccgccctt 840

cagtgctgca gctaacgcat taagcattcc gcctggggag tacggccgca aggctgaaac 900

tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagctac 960

gcgaagaacc ttaccaggtc ttgacatact atgcaaatct aagagattag acgttccctt 1020

cggggacatg gatacaggtg gtgcatggtt gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt 1080

taagtcccgc aacgagcgca acccttatta tcagttgcca gcattaagtt gggcactctg 1140

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tatgacctgg gctacacacg tgctacaatg gatggtacaa cgagttgcga actcgcgaga 1260

gtaagctaat ctcttaaagc cattctcagt tcggattgta ggctgcaact cgcctacatg 1320

aagtcggaat cgctagtaat cgcggatcag catgccgcgg tgaatacgtt cccgggcctt 1380

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agaagaggac agtggaactc catgtgtagc ggtgaaatgc gtagatatat ggaagaacac 660

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