一種植物乳桿菌及其在暖季型牧草青貯中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于牧草飼料加工貯藏領(lǐng)域，特別涉及一種植物乳桿菌及其在暖季型牧草 青貯中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著我國畜牧業(yè)的發(fā)展，對動物飼料的需求越來越高。暖季型牧草，如象草、蘇丹 草等，多原產(chǎn)于非洲;產(chǎn)量與營養(yǎng)價值高，且消化率高適口性好，牛、羊、馬均喜食，是我國非 常重要的動物飼料來源。
[0003] 暖季型牧草多種植于我國南方，南方夏季多雨，調(diào)制干草比較困難。青貯能夠解決 在雨季、濕潤多雨地區(qū)的干草不宜調(diào)制的問題，同時能夠降低因干草調(diào)制造成的葉片脫落、 雨淋、霉變等損失;但是暖季型牧草本身含水量高，糖分含量少，常規(guī)青貯很難成功。
[0004] 乳酸菌制劑的使用可增加青貯初期發(fā)酵時的乳酸菌數(shù)量，對保證青貯飼料盡快進(jìn) 入乳酸發(fā)酵階段非常有效，從而使pH值迅速下降，蛋白水解作用減弱，青貯飼料中氨態(tài)氮含 量減少。在美國、加拿大、瑞士、德國、日本等發(fā)達(dá)國家，為了用不同作物調(diào)制出優(yōu)質(zhì)青貯，都 在廣泛研究和使用各種細(xì)菌制劑。添加乳酸菌菌劑可以明顯改善青貯品質(zhì)，提高乳酸含量。 目前市場上，我國乳酸菌劑較少，現(xiàn)有產(chǎn)品中多為國外進(jìn)口，在推廣過程中存在成本高的缺 陷。
[0005] 隨著酶工程技術(shù)的不斷發(fā)展，酶制劑的應(yīng)用也越來越受到人們的重視。目前，青貯 中使用的酶制劑主要是纖維素酶、淀粉酶和木聚糖酶等。這些酶通過降解粗飼料中的纖維 素、半纖維素和淀粉等多糖，成為單糖，可有效解決青貯中可發(fā)酵底物不足、纖維含量過高 的問題，從而達(dá)到促進(jìn)乳酸發(fā)酵，提高飼料利用率及動物生產(chǎn)性能的目的。在實際應(yīng)用中 常是酶與乳酸菌菌劑配合使用，以期發(fā)揮添加劑的最大效應(yīng)。該類添加劑已經(jīng)在豆科牧草， 玉米秸桿等青貯中利用，但目前仍沒有單獨適用于暖季型牧草的類似的生物添加劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供了一種植物乳桿菌及其在暖季型牧草青貯中 的應(yīng)用。
[0007] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：
[0008] -種植物乳桿菌，所述的植物乳桿菌菌株為LP1，分類命名為Lactobacillus plantarum，在中國普通微生物菌種保藏管理中心的保藏號為CGMCC No. 10473。
[0009] 所述植物乳桿菌的16S rDNA基因序列如SEQ ID No.l所示。
[0010] 所述的植物乳桿菌的生物學(xué)特性為：菌株在固體培養(yǎng)基上30°C培養(yǎng)48h，生長良 好，可形成邊緣整齊的乳白色菌落；菌株革蘭氏染色呈陽性，顯微鏡下的細(xì)胞形態(tài)為短桿 狀、無芽孢;氧化酶陰性，具有較強的生長及產(chǎn)酸性能;在起始pH值為3.5-8.0的培養(yǎng)基上能 生長，在10°C條件下呈現(xiàn)微弱生長，在15°C_40°C條件下生長狀況良好，在不大于6.5 %NaCl 的條件下生長狀況良好。
[0011] 所述的植物乳桿菌在制備暖季型牧草青貯飼料中的應(yīng)用。
[0012] -種生物添加劑，所述的生物添加劑包括植物乳桿菌LP1和纖維素酶。
[0013] 所述生物添加劑在制備暖季型牧草青貯飼料中的應(yīng)用。
[0014] 所述暖季型牧草青貯飼料的制備方法為:將植物乳桿菌LP1與纖維素酶加水活化 15-30min后，噴灑在刈割并切短的暖季型牧草上混合均勻，然后將暖季型牧草壓實密封進(jìn) 行發(fā)酵，獲得暖季型牧草青貯飼料。
[0015] 所述植物乳桿菌LP1的添加量不低于109CFU/kg暖季型牧草，纖維素酶的添加量 不低于100U/kg暖季型牧草，所述暖季型牧草壓實后的密度為500kg/m 3以上。
[0016] 獲得的暖季型牧草青貯飼料，其pH小于4，乳酸含量提高，氨態(tài)氮含量下降，丁酸含 量低于檢測限。
[0017] 所述發(fā)酵的條件為:發(fā)酵溫度為15-25°c，發(fā)酵時間為30-60d。
[0018] 本發(fā)明的有益效果為:與自然青貯相比，接種植物乳桿菌LP1與纖維素酶制成的生 物添加劑后，暖季型牧草青貯的pH明顯降低，達(dá)到4.0以下;乳酸含量得到明顯提高，同時氨 態(tài)氮含量下降，丁酸含量低于檢測限，明顯提高了暖季型牧草青貯的發(fā)酵品質(zhì)。所述的生物 添加劑不僅效率高，而且對家畜健康無不良影響，對環(huán)境無污染，添加過程易于掌握，可廣 泛應(yīng)用于暖季型牧草青貯飼料的制備領(lǐng)域。
[0019] 生物材料保藏說明
[0020] 分類命名:植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum);菌株編號:LP1。
[0021]保藏機構(gòu)：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心 [0022] 保藏機構(gòu)簡稱:CGMCC
[0023]地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號
[0024]保藏日期：2015年1月30日
[0025] 保藏中心登記入冊編號：CGMCC No. 10473。
【具體實施方式】
[0026] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明， 但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法;所用的材料、 試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0027] 實施例1:植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)LPl的分離與鑒定
[0028]取河北地區(qū)天然野生牧草青貯20g，加入180mL蒸餾水，用震蕩器震蕩30min，10 一 I ΠΓ6梯度稀釋。分別從各梯度稀釋液中取lmL至培養(yǎng)皿中，加入10-15mL滅菌后的MRS固體培 養(yǎng)基上，搖勻，待其冷卻凝固，靜置厭氧培養(yǎng)48h，挑取菌落形態(tài)、大小、顏色和光澤度有明顯 差別的單菌落，重復(fù)劃線，直至得到純菌落。
[0029]對分離篩選得到的菌株進(jìn)行鑒定，根據(jù)菌株的細(xì)胞形態(tài)、生理生化特征和16S rDNA基因序列進(jìn)行綜合分析，鑒定菌株為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)，命名為 LP1，是一株新的植物乳桿菌。
[0030] 菌株LP1的生物學(xué)特性為:LP1菌株在MRS固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h，菌株生長良好，可 形成邊緣整齊的乳白色菌落;菌株革蘭氏染色呈陽性，顯微鏡下的細(xì)胞形態(tài)為短桿狀、無芽 孢;氧化酶陰性，具有較強的生長及產(chǎn)酸性能。
[0031] 根據(jù)GB4789.35-2010對菌株不同碳源的同化能力進(jìn)行檢測，其對碳源發(fā)酵的實驗 結(jié)果如表1所示；16S rDNA基因序列如SEQ ID N0.1所示。
[0032]表1:LP1菌株的碳源發(fā)酵實驗結(jié)果
[0033]
[0034]
[0035] 注:ATCC 14917τ為植物乳桿菌模式菌株，"+"為陽性；為陰性。
[0036] 實施例2:植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)LPl